一种预防肠粘连膜液及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种用于腹部术后预防腹膜粘连的膜液。
【背景技术】
[0002] 粘连是腹部术后常见的并发症之一，表现为原本分离的脏器或脏器与腹壁之间出 现异常的纤维化粘连条带，易导致炎症、疼痛、肠梗阻甚至女性不孕等病症。剖腹术后腹膜 粘连的发生率约68%~100%。粘连和瘢痕的效应细胞主要是成纤维细胞，该细胞增殖对粘 连组织的形成起了重要的作用。
[0003] 目前预防腹膜粘连的药械包括不可吸收隔离物、可吸收隔离物、粘性溶液等，隔离 物能够起到较好的防粘连作用，但使用不便，溶液使用方便，但是防粘连效果欠佳，不能完 全预防剖腹后腹膜粘连的发生。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种能有效预防术后肠粘 连，且使用方便的膜液。
[0005] 为了达到上述目的，本发明提供了一种预防肠粘连膜液，该膜液包括溶液A和溶 液B ;溶液A为溶解有羧甲基壳聚糖和环孢素A的生理盐水溶液；溶液A中羧甲基壳聚糖 的浓度为10_40mg/ml，环孢素A的浓度为1. 0-1. 8mg/ml ;溶液B为CaCl2的生理盐水溶液， CaCl^浓度为2. 5mg/ml ;溶液A和溶液B的体积比为25:8-25:40。
[0006] 其中，溶液A中羧甲基壳聚糖的优选浓度为20mg/ml，环孢素A的优选浓度为 1.8mg/ml ;溶液A与溶液B的优选体积比为25:10-25:25,最佳采用25:20。
[0007] 本发明还提供了上述预防肠粘连膜液的制备方法，包括以下步骤： (1) 溶液A制备：无菌条件下，取羧甲基壳聚糖溶于生理盐水中，在搅拌条件下，逐渐加 入环孢素A，持续搅拌5-10min后，形成溶液A ; (2) 溶液B制备，取0&(：12溶于生理盐水中，形成溶液B。
[0008] 本发明还提供了上述预防肠粘连膜液在预防剖腹后腹膜粘连方面的应用：在剖腹 术后，将溶液A和溶液B采用钴60辐照消毒后混合摇匀，对创面进行冲洗。
[0009] 本发明相比现有技术具有以下优点： 1、本发明膜液在使用前溶液A和溶液B均为液体，使用时溶液A和溶液B混合在体内 能够形成薄膜，起到物理隔离的作用，即结合了溶液使用方便，又具有物理隔离的优良防粘 连作用。
[0010] 2、本发明膜液具有防防粘连'二相性'，早期能够对环孢素A缓释，起到抑制成纤 维细胞的生长，防止粘连，后期羧甲基壳聚糖能够促进上皮细胞的生长，促进愈合。
【附图说明】
[0011] 图1为成膜重量(干重）随溶液B体积变化的趋势图； 图2为溶液A与溶液B混合成膜的照片； 图3为本发明膜液成膜后在不同pH缓冲溶液中的溶胀系数变化柱状图； 图4为本发明膜液中环孢素A的缓释图； 图5为本发明膜液的生物兼容性柱状图； 图6为本发明膜液的凝血作用柱状图； 图7为本发明膜液对创面冲洗后成膜效果图； 图8为本发明膜液的防粘连效果图。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合附图对本发明进行详细说明。
[0013] 实施例1 制备方法：无菌条件下，取2g羧甲基壳聚糖溶于100mL生理盐水，于磁力搅拌器中，在 搅拌的条件下，逐渐加入180mg环孢素A，持续搅拌IOmin后，形成溶液A ; 取2. 5gCaCl2溶于100mL生理盐水中，形成溶液B ; 成膜实验：将溶液B逐渐加入溶液A中，随着加入溶液B体积的增加，逐渐能够形成 薄膜(溶液A与溶液B的体积比达到25:8时)，到厚度增加（溶液A与溶液B的体积比达到 25:10时，膜具有一定的厚度)，当溶液A与溶液B的体积比为25:20时，膜的重量不再增加 (如图1所示)，所形成膜如图2所示，此时溶液A和溶液B达到完成反应时，成膜的效果最 好，也不会造成浪费。
[0014] 平衡溶胀率实验：取上述形成的膜，将其剪成2 cmX 2 cm大小，放入含有不同pH 值得缓冲溶液的烧杯中，置于恒温振荡仪中，于37 °C恒温，每隔一定时间取出，用滤纸吸干 膜表面水分并记录膜此时质量Ws。膜的溶胀率按下式进行计算：ESR= (Ws -Wt ) /Wt。
[0015] 如图3所示为本发明膜液成膜后在不同pH的缓冲溶液中的溶胀系数变化柱状图。 腹腔手术后，创面的PH值会变小（5-6之间)，这时防粘连膜的平衡溶胀率较小，分解的速度 就较小，会长时间保持膜的状态，起到物理隔绝的作用；当创面逐步愈合，创面的PH值逐步 恢复到正常7. 4,防粘连膜的平衡溶胀率加大，分解速度也加快，促进组织的吸收。在pH为 8.0以上时，膜已溶胀蓬松，易于分解。
[0016] 效果实施例1 溶液A和溶液B的制备方法同实施例1。
[0017] 本发明膜液的制备：取溶液A和溶液B以体积比25:20混合。
[0018] 环孢素A的体外释放实验： 取本发明膜液2ml，静置形成膜后，将膜置于试管中，加入0.184mol /L KH2PO4缓冲盐 溶液10 ml作为释放介质，于37°C恒温摇床上进行释放实验，转速为100转/min，依法操 作，在第0.2511、0511、111、211、411、811、1211、2411、4811、7211、9611取出试管（11 = 3)，高效液相色谱 测定其中的环孢素A。
[0019] 如图4所示，环孢素A在最初的12h从羧甲基壳聚糖中释放出来的速度较快，能够 有效的抑制成纤维细胞的生长，防止粘连。到第2天，释放的速度趋于平稳，缓慢的从羧甲 基壳聚糖中释放出来，能够巩固防粘连效果。
[0020] 效果实施例2 本发明膜液的制备同效果实施例1。
[0021] 细胞毒性实验：采用MTT进行细胞毒性实验。
[0022] 培养大鼠皮肤成纤维细胞（L929细胞)，种于96孔板中，培养24h，加入用DMEM培养 基（Hyclone (美国）)配制的本发明膜液成膜后的24h浸提液，继续培养24h后，加入MTT进 行呈色，4h后吸去液体，加入二甲基亚砜（DMS0)，振荡IOmin后，用酶联免疫检测仪在490nm 处测定吸收值。
[0023] 如图5所示，本发明膜液对L929细胞的相对增殖率在90%以上，说明该预防肠粘连 膜液对细胞无明显毒性，能够应用于防止肠粘连的研宄中。
[0024] 效果实施例3 本发明膜液和溶液A的制备同效果实施例1。
[0025] 凝血作用实验： 手术后纤维蛋白原和血液会从伤口处渗出，纤维蛋白原转变成不溶的纤维蛋白，合并 白细胞、红细胞、血小板等形成凝血，最后进一步机化成永久性组织粘连。因此，材料的凝血 性是预防粘连形成的关键之一，凝血（或止血）速度越快，渗出液的流出越少，粘连生成量 越少，防粘连的效果就越好。
[0026] 方法：实验分组为空白对照组、溶液A组，防粘连膜(溶液A+B)组。每组3支试管， 加入受试样品水溶液ImU生理盐水0. 5mL。由家兔颈动脉取新鲜血液，依次将兔血2mL加 入每支试管内，37°C水浴恒温，计时。定时倾斜第一管，观察到凝血发生后再同样方法观察 第二管，直至第三管凝血，记录该时间为样品的凝血时间。每样重复测定3次，取均值，并与 不加样品的空白组对照。
[0027] 如图6所示，空白对照组的凝血时间为10±0. 5分钟，溶液A的抗凝血时间为 8. 1±0. 2分钟与对照组相比具有差异性（K0. 05)，而本发明膜液的凝血时间为5. 5±0. 6 分钟，与对照组相比，具有显著性差异（K0. 01)，除了羧甲基壳聚糖能够激活凝血外，钙离 子从防粘连液中释放出来，对凝血起到了关键作用。
[0028] 效果实施例4 本发明膜液和溶液A的制备同效果实施例1。
[0029] 粘连效果实验： 1、盲肠刮伤模型的建立： 正常SD大鼠由南通大学实验动物中心提供，雌雄各半，体重约200±20g，禁食12h后腹 腔注射10%水合氯醛（0. 3ml~0. 4ml/100g)，全身麻醉后腹部剃毛，固定于手术台，用75% 的酒精反复擦拭进行消毒。在下腹部中线位置纵向切开约4~5cm的切口，露出大鼠腹壁， 距离切口 1~I. 5cm处去除部分肌层，形成面积约I. 5cmX I. 5cm的方形缺损面，将盲肠从 腹内提出，用酒精擦拭后，用软刷在正对缺损面的一侧轻轻摩擦，直至盲肠表面出现淤血或 瘀斑，擦伤面积约为I. 5cmX I. 5cm。
[0030] 2、分组及给药： 实验分为对照组(生理盐水处理组)、溶液A组，本发明膜液组，每组8只，雌雄各半。
[0031] 本发明膜液组在使用前10-30分钟，将溶液B加到溶液A中，混匀即得到防粘连膜 液。各组均用2ml的药液对腹壁缺口处与盲肠刮伤处冲洗。然后把盲肠刮伤面与腹壁缺损 面相对放置使其完全接触，用手术线将腹部分两层缝合。
[0032] 3、防粘连效果评分标准 按照表1中粘连的评分标准，总分最高为11分，总分最低为0分，总分越少表示粘连程 度越轻微，中位数越少>3分粘连比率越少也表示粘连越轻微。
[0033] 表1粘连的评分标准
【主权项】
1. 一种预防肠粘连膜液，其特征在于，所述预防肠粘连膜液包括溶液A和溶液B ;所述 溶液A为溶解有羧甲基壳聚糖和环孢素 A的生理盐水溶液；所述溶液A中羧甲基壳聚糖的 浓度为10_40mg/ml，环孢素 A的浓度为1. 0-1. 8mg/ml ;所述溶液B为CaCl2的生理盐水溶 液，CaClJ^浓度为2. 5mg/ml ;所述溶液A和溶液B的体积比为25:8-25:40。
2. 根据权利要求1所述的预防肠粘连膜液，其特征在于，所述溶液A中羧甲基壳 聚糖的浓度为20mg/ml，环孢素 A的浓度为I. 8mg/ml ;所述溶液A与溶液B的体积比为 25:10-25:25。
3. 根据权利要求2所述的预防肠粘连膜液，其特征在于，所述溶液A与溶液B的体积比 为 25:20。
4. 权利要求1至3任一所述预防肠粘连膜液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 溶液A制备：无菌条件下，取羧甲基壳聚糖溶于生理盐水中，在搅拌条件下，逐渐加 入环孢素 A，持续搅拌5-10min后，形成溶液A ; (2) 溶液B制备，取0&(：12溶于生理盐水中，形成溶液B。
5. 权利要求1至3任一所述预防肠粘连膜液在预防剖腹后腹膜粘连方面的应用。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在剖腹术后，将溶液A和溶液B采用钴60 辐照消毒后混合摇匀，对创面进行冲洗。
【专利摘要】本发明公开了一种预防肠粘连膜液及其制备方法与应用。本发明膜液包括溶液A和溶液B；溶液A为溶解有羧甲基壳聚糖和环孢素A的生理盐水溶液；溶液A中羧甲基壳聚糖的浓度为10-40mg/ml，环孢素A的浓度为1.0-1.8mg/ml；溶液B为CaCl2生理盐水溶液，CaCl2的浓度为2.5mg/ml；溶液A和溶液B的体积比为25:8-25:40。本发明膜液能有效预防术后肠粘连，且使用方便。
【IPC分类】A61K9-70, A61K33-14, A61P41-00, A61K31-722, A61K38-13
【公开号】CN104826092
【申请号】CN201510269243
【发明人】何红, 李晓东, 夏栋林, 陈超, 王雨飞, 陈燕培, 沈铃玲, 顾海鹰
【申请人】南通大学, 南通大学附属医院, 南通通大化学物安全性评价中心有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月25日