为正电。粒径均匀，分散性好。
[0033] 有益效果
[0034] 本发明设及的可组装的抑响应性蛋白质-高分子结合体有益效果包括；制备的 牛血清白蛋白炬SA)-聚甲基丙締酸二异丙基氨基己醋（PDPA)结合体生物相容性好，毒性 低。牛血清白蛋白炬SA)具有很好的亲水性，聚甲基丙締酸二异丙基氨基己醋（PDPA)具有 很好的疏水性，使得BSA-PDPA结合体具有双亲性和抑响应性，且可进行自组装和负载药 物。本发明中制备BSA-PDPA结合体的制备方法可实现PDPA的定点键接和数目可控。组装 的BSA-PDPA结合体有效粒径在80~140nm，粒径更均匀；在抑值由7下降5时Zeta电位 由负电变为正电，具有良好抑响应性；稳定性好，可在水溶液中保存至少两个月；制备产率 高，适合大批量生产。
[0035] 本发明的目的是设计并制备一种可组装的抑响应性蛋白质-高分子结合体。与 现有技术相比，本制备方法可W实现疏水高分子PDPA的定点结合W及数目可控，所制得的 自组装药物基因载体保持了均匀较小粒径同时，生物相容性更好，且具有抑响应性，可在 肿瘤微环境或细胞内涵体内抑值较低的环境下PDPA发生强烈质子化，控释负载的药物，有 效提高治疗效果，更高效发挥载体作用。
【附图说明】
[0036] 图1 ;抑响应性蛋白质-高分子即BSA-PDPA自组装体粒度分析图。
[0037] 图2 ;抑响应性蛋白质-高分子即BSA-PDPA自组装体透射照片。
[003引图3 ;抑响应性蛋白质-高分子即BSA-PDPA结合体凝胶电泳谱图。
【具体实施方式】
[0039] W下通过实施例对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。
[0040] 1)制备牛血清白蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂；
[0041] 取质量比12~15:1的BSA;产品D(2-漠代-2-甲基丙酸2-化5-二氧杂-3-二 氨化化咯-1-基）己醋），将BSA溶于PBS缓冲液（pH= 6. 8, 0. 1M)(浓度为22~25g/L) 形成BSA溶液，产品D溶于N，N-二甲基甲酯胺（浓度为6. 5~9g/L)中形成产品D溶液， 产品D溶液滴加至BSA溶液中，氣气保护下室温反应24~36h，反应结束后，纯水透析24~ 4她后冻干得到蛋白质ATRP引发剂。
[0042] 。由牛血清白蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂引发抑响应性高分子聚甲基丙締酸 二异丙基氨基己醋（PDPA)聚合；
[0043] ①在Schlenk管中，将ATRP引发剂、单体DPA依次溶于溶剂中，引发剂和单体的摩 尔比例为1:10~200 ;
[0044] ②通过抽真空-充氮气各一次作为一个循环，对体系进行除氧，然后加入配体 N，N，N'，N，'N"-五甲基二亚己基S胺（PM邸TA)，再进行抽真空-充氮气一个循环，然后加入 催化剂化(I)Br，再进行抽真空-充氮气一个循环。引发剂与PMEDTAXu(I)化的摩尔比例 为 1:2:1。
[0045] ⑨将Schlenk管置于恒温油浴中，将体系升温至50~70°C反应12~16h。后处 理得到白色固体产品即BSA-PDPA结合体。
[0046] 步骤2)--①中所述反应体系的溶剂为N，N-二甲基甲酯胺值M巧与异丙醇一种或 两种的组合，单体浓度为115~240g/L。
[0047] 步骤2)--⑨所述的后处理具体步骤为反应结束后，将反应体系迅速冷却至室温， 通入空气，终止聚合反应；用四氨快喃稀释产物，然后将体系加入到二氧化娃柱，用四氨快 喃做洗脱剂进行洗脱，得无色溶液；将收集的溶液在旋转蒸发仪上将溶剂蒸出绝大部分，然 后体系转移到透析袋中，先在四氨快喃中进行透析24~48小时，之后转移至水中透析液透 析3~5天。最后通过冻干得到白色固体产品。
[0048] 参貝gDesignandsynthesisofN-maleimido-functionalizedhydrophilic polymersviacopper-mediatedlivingradicalpolymerization:asuitable alternativeto阳G}dationchemist;ry[i]文献中制备方法合成出2-漠代-2-甲基丙酸 2-(2, 5-二氧杂-3-二氨化化咯-1-基）己醋（产品D)。
[0049] 抑响应性蛋白质-高分子纳米载体的组装方法，技术方案如下：
[0050] 抑响应性牛血清白蛋白炬SA)-聚甲基丙締酸二异丙基氨基己醋（PDPA)自组装体 通过乳化-溶剂蒸发法制备。
[CK)5U 取抑响应性BSA-PDPA结合体溶解在去离子水（浓度为1~5g/L)中，将溶液置 于冰浴中。在探头式超声波发生器作用下，用注射器匀速注入二氯甲烧或S氯甲烧（有机 溶剂；离子水体积比为1:1~20)，超声时间为8~10分钟，超声功率为150W。超声结束， 将得到的乳液在25~30°C下通过旋转蒸发仪进行旋蒸10~15分钟，除去有机相，转速为 80~90转/分钟。待有机溶剂完全挥发，得到抑响应性BSA-PDPA结合体的组装体溶液。 [0052] 实施例1 ;
[0化引牛血清白蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂的合成。
[0化4] ①取30g马来酸酢分散在150ml甲苯中，油浴揽拌加热至80°C，33. 3ml快喃用注 射器缓慢注入，冷凝回流反应化。反应结束，降至室温，静置比，减压过滤，用石油離洗3次， 得白色产品A。
[0化5] ②取产品AlOg，分散在100ml甲醇中，冰浴揽拌冷却至0 °C，缓慢滴加己醇胺 3. 6ml至上述溶液，在0°C下揽拌20min，然后室温下揽拌35min，揽拌油浴80°C下回流2化。 反应结束后，冷却重结晶，减压过滤，得白色晶体B。
[0056] ⑨取产品B3g，^己胺2. 16ml，加到0°C170mlTHF中，在55mlTHF中溶2-漠异 了酷漠1. 89ml，并缓慢加入上述溶液，0°C揽拌化，随后室温过夜。反应结束后，减压过滤除 去锭盐，加入大量己離，再将析出的锭盐减压过滤除去，冷却重结晶，减压过滤得白色晶体 C。
[0057] ④取Ig产品C溶于50ml甲苯中，130°C揽拌回流15h，热过滤后冷却重结晶，减压 过滤得脱去快喃保护的白色产品D。
[0化引⑥取牛血清白蛋白炬SA) 332mg溶于12mlPBS缓冲液（pH= 6. 8, 0. 1M)，取产品D18. 15mg溶于2mlDMF滴加至蛋白质溶液中，氣气保护下室温反应2化，反应后纯水透析 2化，冻干得牛血清白蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂。
[0059]
[0060] 实施例2 ;
[0061] 牛血清白蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂的合成。
[006引①取40g马来酸酢分散在180ml甲苯中，油浴揽拌加热至90°C，44. 4ml快喃用注 射器缓慢注入，冷凝回流反应她。反应结束，降至室温，静置化，减压过滤，用石油離洗2次， 得白色产品A。
[0063] ②取产品A20g，分散在80ml甲醇中，冰浴揽拌冷却至0°C，缓慢滴加己醇胺7. 2ml 至上述溶液，在〇°C下揽拌15min，然后室温下揽拌40min，揽拌油浴90°C下回流36h。反应 结束后，冷却重结晶，减压过滤，得白色晶体B。
[0064] ⑨取产品B6g，S己胺 4. 32ml，jra到 0°C170mlTHF中，在 55mlTHF中溶 2-漠异 了酷漠3. 78ml，并缓慢加入上述溶液，0°C揽拌化，随后室温过夜。反应结束后，减压过滤除 去锭盐，加入大量己離，再将析出的锭盐减压过滤除去，冷却重结晶，减压过滤得白色晶体 C。
[0065] ④取2g产品C溶于50ml甲苯中，140°C揽拌回流1化，热过滤后冷却重结晶，减压 过滤得脱去快喃保护的白色产品D。
[0066] ⑥取BSA664mg溶于 30mlPBS缓冲液（抑=6. 8, 0. 1M)，取产品D36. 3mg溶于 5ml DMF滴加至蛋白质溶液中，氣气保护下室温反应2她，反应后纯水透析36h，冻干得牛血清白 蛋白炬SA)大分子ATRP引发剂。
[0067] 实施例3 ;
[0068] 牛血清白蛋白炬SA)大分子ATR