稳定医药组合物的制作方法【
技术领域：
】[0001]本发明是关于一种含有稳定存在的亚丁基苯酞（n-butylidenephthalide，BP)的稳定医药组合物，尤其关于一种可经由鼻内投药的含有稳定存在的亚丁基苯酞的稳定医药组合物，其有效于治疗恶性脑瘤。【
背景技术：
】[0002]星状细胞瘤（astrocytoma)、退行性星状细胞瘤（anaplasticastrocytoma)、及多型恶性神经胶质瘤（glioblastomamultiforme，GBM)为常见的成人恶性脑瘤，其中又以多型恶性神经胶质瘤最常见、恶性度最高、侵犯能力最强。[0003]恶性脑瘤具有高浸润性及高复发率、高致死率等特性，其治疗至今仍为医学上亟待解决的问题。目前治疗方式包括有外科手术、放射治疗及化学药物治疗等三种。以外科手术切除肿瘤虽可消灭大部分的肿瘤，但会伤害到其他正常脑组织，进而影响病患的行动和语言能力；放射治疗可局部杀死肿瘤，但亦会影响周遭的正常组织细胞；化学药物治疗则常常因血脑障壁（bloodbrainbarrier，BBB)限制、毒性副作用大、或耐药性（drugresistance)等问题，无法获致良好治疗效果。鼻内投药方式为药物治疗中的新兴投药方法，其为非侵入式投药方法，可降低患者感染的风险，且药物经鼻腔吸入后，可经由鼻黏膜快速吸收而产生药效，不会受到肝脏首渡效应（first-passeffect)的代谢排除作用，此外自鼻粘膜吸收的药物能绕行血脑障壁直达中枢神经系统，因而降低药物全身性毒性，效果优于口服投药或静脉注射投药。[0004]亚丁基苯酞（n-butylidenephthalide，BP)为目前治疗恶性肿瘤的潜力新药，其为一种源自当归（Angelicasinensis)萃取物的成分，沸点为139°C至142°C(5毫米萊柱），因此在一般情况下为呈油状液体。目前已知亚丁基苯酞可用于治疗多种恶性肿瘤，包括多型恶性神经胶质瘤及乳腺恶性肿瘤。另有研究显示亚丁基苯酞亦可用于抑制运动神经元的自体吞噬（autophagy)，例如US2014/0045765Al即揭露亚丁基苯酞及其代谢物可用于抑制运动神经元的自体吞，且可用于治疗肌萎缩侧索硬化症（amyotrophiclateralsclerosis，ALS)〇[0005]然而，亚丁基苯酞虽可提供药效，但其为脂溶性物质而非水溶性物质，因此目前在应用上仍多有限制，包括在口服配方、注射配方及鼻内投药配方应用上的限制、临床应用的限制、以及在使用诸如大鼠等小动物的动物研究上的限制。[0006]鉴于此，目前临床上需要一种亚丁基苯酞可稳定存在或溶解于其中的剂型，以提高亚丁基苯酞于生物体的利用率与改善其递送情况，并促进亚丁基苯酞的临床研究。本发明即针对前述需求所为的研发成果，通过一种介质系统以有效稳定亚丁基苯酞，从而更有效应用亚丁基苯酞。【
发明内容】[0007]因此，本发明的一目的，在于提供一种医药组合物，包含：(a)-介质系统，包含第一成分、第二成分、及第三成分，该第一成分为磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline)，该第二成分选自以下群组：植物油、动物油、脂肪酸及其组合，且该第三成分选自以下群组：聚乙二醇、二甲亚砜（DMS0)、乙醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯、聚氧乙基化蔬菜油(polyoxyethylatedvegetableoil)、乙酸乙酯、12-羟基硬酯酸轻乙酯（2-hydroxyethyl12-hydroxyoctadecanoate)、维生素E聚乙二醇琥泊酸酯（tocopherylpolyethyleneglycolsuccinate)、及其组合；以及（b)存在于该（a)介质系统中的亚丁基苯酞(n-butylidenephthalide，BP)〇[0008]本发明的详细技术内容及部分实施态样，将描述于以下内容中，以供本发明所属领域具通常知识者据以明了本发明的特征。【附图说明】[0009]图IA为根据本发明的一实施态样的医药组合物的倒立式显微镜（頂）图（400倍；比例尺：50微米）；[0010]图IB为根据本发明的一实施态样的医药组合物之扫描式场发射电子显微镜(FE-SEM)图（10000倍；比例尺：1微米）；[0011]图IC为根据本发明的一实施态样的医药组合物的穿透式电子显微镜（TEM)图(80000倍；比例尺：200纳米）；[0012]图2A为根据本发明的不同实施态样的医药组合物及比较医药组合物于4°C低温下长时间储存前的照片；[0013]图2B为根据本发明的不同实施态样的医药组合物及比较医药组合物于4°C低温下长时间储存后的照片；[0014]图3显示根据本发明的不同实施态样的医药组合物（其中的介质系统组合不同）及比较医药组合物的活性的统计图，其中，纵轴为GBM8401细胞（S卩，人类恶性肿瘤细胞株）的存活率（以控制组，即不含亚丁基苯酞的态样为100%计），横轴为活性成分亚丁基苯酞的处理浓度；[0015]图4显示储存时间对于根据本发明的医药组合物的活性的影响的统计图，其中，纵轴为GBM8401细胞的存活率（以控制组，即不含亚丁基苯酞之态样为100%计），横轴为亚丁基苯酞的处理浓度；[0016]图5为Franz扩散装置示意图；[0017]图6显示施以不同投药治疗的大鼠存活率统计图；[0018]图7A显示大鼠于种植肿瘤后施以不同治疗，在死亡之日或治疗第37天后的肿瘤生长情形的照片，其中，（A)未经药物处理（大鼠死亡之日所取得）（B)BP原液160毫克/公斤（第37天）（C)BP原液320毫克/公斤（第37天）（D)医药组合物580毫克/公斤(第37天）（E)医药组合物5160毫克/公斤（第37天）；[0019]图7B显示大鼠于种植肿瘤后施以不同治疗，在治疗第37天后的肿瘤重量统计图；以及[0020]图7C显示大鼠于种植肿瘤后施以不同治疗，在治疗第37天后的肿瘤体积统计图。【具体实施方式】[0021]以下将具体地描述根据本发明的部分具体实施态样；但是，在不背离本发明精神下，本发明尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将本发明保护范围解释为限于说明书所陈述者。此外，除非文中有另外说明，于本说明书中（尤其是在后述专利申请范围中）所使用之「一」、「该」及类似用语应理解为包含单数及复数形式；以及在本说明书中「烃基」是指饱和直链或支链烃基，或具有一或多个键的不饱和直链或支链烃基。[0022]对于具有治疗效果的活性成分而言，其一通常应用型态为以液体剂型的方式投药，液体剂型中包含活性成分及介质，活性成分可溶于介质中或稳定存在于介质中。更具体言之，配合不同的投药途径需求（如口服、体细胞导入、或外用），将活性成分溶于介质中(若其可溶）或悬浮于介质中（若其不可溶）而形成一适合投药的溶液、悬浮液或乳化液(emulsion)。此外，就制备含有少量活性成分的固体剂型而言，通常先将活性成分溶解或悬浮于液体介质中，而后再以该溶有或悬浮有活性成分的液体介质进行固体剂型制备，以准确控制最终产物中的活性成分浓度（含量）。[0023]本案发明人研究后发现，亚丁基苯酞对于乙醇之溶解度最高，乙醇为其极佳的溶剂。其中，亚丁基苯酞于乙醇中的溶解度超过222毫克/毫升，但于聚乙二醇400、聚乙二醇300或聚丙二醇中的溶解度则仅为约70至120毫克/毫升。然而，有研究显示，婴幼儿因为醇脱氢酶（alcoholdehydrogenase)尚未成熟，并没有办法如成人般有效的代谢乙醇（可参见ZuccottiGV,FabianoV.Safetyissueswithethanolasanexcipientindrugsintendedforpediatricuse.ExpertOpinDrugSaf2011;10(4):499_502,该文献全文并于此处以供参考）。因此，若能以其他溶剂取代乙醇作为亚丁基苯酞的介质，或者可于介质中减少乙醇的用量，则将可大幅提高亚丁基苯酞的应用范围。[0024]本发明人进一步研究发现，亚丁基苯酞可稳定存在于一特定介质系统中，即使长时间储存（室温下储存三天；4°C下储存三十天）仍可稳定存在于该介质系统中并保持活性，该介质系统进一步还可以提高亚丁基苯酞于生物体中的利用率，从而在相对低的亚丁基苯酞用量下提供所欲治疗效果，减缓或免除不必要的副作用。[0025]因此，本发明提供一种稳定医药组合物，该医药组合物包含（a)-介质系统以及(b)稳定存在于该（a)介质系统中的亚丁基苯酞。[0026]亚丁基苯酞可由商业上购得（例如可购自长弘生物科技股份有限公司，台湾）、化学合成或由天然材料（例如：当归）中萃取分离而得。此外，于使用萃取分离所得的亚丁基苯酞以前，可进一步通过例如骤沸塔层析法（flashcolumnchromatography)、高效液相层析法、或结晶法的纯化方法，以提高亚丁基苯酞的纯度。[0027]于本发明医药组合物中，（a)介质系统包含第一成分、第二成分、及第三成分。该第一成分为磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline)，该第二成分选自以下群组：植物油、动物油、脂肪酸及其组合，且该第三成分选自以下群组：聚乙二醇、二甲亚砜、乙醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯、聚氧乙基化蔬菜油（polyoxyethylatedvegetableoil)、乙酸乙酯、12-羟基硬酯酸轻乙酯（2-hydroxyethyl12-hydroxyoctadecanoate)、维生素E聚乙二醇琥I白酸酯（tocopherylpolyethyleneglycolsuccinate)、及其组合。[0028]作为（a)介质系统的第一成分，磷酸盐缓冲液对细胞而言是等压的且无毒的。可于本发明医药组合物中采用任何合宜的磷酸盐缓冲液，其实例包括NaCl(137mM)与KCl(2.7mM)的组合的水溶液及Na2HPO4(IOmM)、KH2P04(1.8mM)、NaCl(137mM)与KCl(2.7mM)的当前第1页1 2 3 4