1iphor?EL，下称『K-EL』；SIGMA公司；批号： BCBC54780 ;CAS号：61791-12-6)混合，而后将30微升磷酸盐缓冲液（下称『PBS』； [Na2HPO4]=IOmM; [KH2PO4] =I. 8mM; [NaCl] = 137mM与[KC1] = 2. 7mM)滴加至所得混合物中，并 快速振荡混合均匀成乳化液，制得医药组合物1。
[0049] 实施例2
[0050] 以与实施例1相同的方式制备医药组合物2的乳化液，但是改变各成分之用量比 例，如表1所示。
[0051] 实施例3
[0052] 以与实施例1相同的方式制备医药组合物3的乳化液，但是改以二甲亚砜（DMSO) 作为第三成分，并改变各成分的用量比例，如表1所示。
[0053] 实施例4
[0054] 以与实施例1相同的方式制备医药组合物4的乳化液，但是改变各成分的用量比 例，如表1所示。
[0055] 实施例5
[0056] 与实施例1相同的方式制备医药组合物5的乳化液，但是改以PEG与DMSO的组合 作为第三成分，并改变各成分的用量比例，如表1所示。
[0057] 实施例6
[0058] 以与实施例1相同的方式制备医药组合物6的乳化液，但是改以PEG与乙醇之组 合作为第三成分，并改变各成分的用量比例，如表1所示。
[0059] 比较例1
[0060] 以与实施例1相同的方式制备比较医药组合物1的乳化液，但是不添加第二成分 0(-￡1)并改以？￡6与11〇111口11〇1、@邯15(下称『批15』出45?公司；批号：142255161(0; CAS号：61909-81-7)的组合作为第三成分，如表1所示。
[0061] 表1 :不同医药组合物的组成体积百分比
[0062]
[0063] 1. 3稳定性测试结果
[0064] 以第I. 1点所载方法观察医药组合物1至6及比较医药组合物1乳化液的外观并 量测不纯物含量，以评估组合物的稳定性，结果记录于下表2(乳化液外观）及表3-1至3-7 与表4,其中表2显示乳化液外观，表3-1至3-7分别显示医药组合物1至6及比较医药组 合物1中的不纯物浓度（体积百分比）随储存时间的变化情形，表4则为由此计算而得的 各组合物的亚丁基苯酞浓度维持率（体积百分比）变化情形。
[0065] 表2 :室温下储存前后的外观
[0086] 由表2可知，本发明医药组合物在外观上可于室温下保持长达3天仍不会发生分 层，尤其在部分态样中（实施例2至4)甚至可于室温下保存7天而不发生分层；而由表4可 知，本发明医药组合物即使经长时间储存，亚丁基苯酞浓度的变化极小，维持率非常优异。 [0087] 上述结果显示，于本发明医药组合物具有优异的稳定性，活性成分可稳定存在于 介质系统当中。其中，以每毫升介质系统计，医药组合物1、5及6中的活性成分亚丁基苯酞 之浓度相当于约1，〇〇〇毫克/毫升介质系统。
[0088] 2?医药组合物物理性质分析
[0089] 2. 1分析方法
[0090] 2.L1粒径、导电度及界面电位分析
[0091] 将医药组合物乳化液配制成浓度200微克/毫升作为样品，再以高浓度纳米粒径 及界面电位分析仪（MalvernNano-ZSZEN-3600)分析样品的导电度、界面电位及所含乳化 微粒的平均粒径大小。
[0092] 2. 1. 2黏度分析
[0093] 采用40毫米4度的角锥-平板模具，取约1毫升的样品置入平行板间，使用TA仪 器公司之AR2000ex系统（应力控制）的流变仪分析样品的粘度随应变率的变化关系与流 变特性，以判断样品系牛顿流体（粘度不会随着剪应变率的增加而增加或减少）或非牛顿 流体（粘度随着剪应变率的增加而增加或减少）。
[0094] 2. 1. 3显微结构分析
[0095] 以经纯水稀释500倍的医药组合物作为样品，分别以倒立式显微镜（頂)、扫描式 场发射电子显微镜（FE-SEM)及穿透式电子显微镜（TEM)观察其显微结构。
[0096] 2. 2医药组合物的制备
[0097] 实施例7至11
[0098] 以与实施例1相同的方式制备医药组合物7至11，但是调整介质系统及活性成分 的组成如表5所示。其中以每毫升介质系统计，医药组合物7至11中活性成分亚丁基苯酞 的浓度分别约为105毫克/毫升介质系统（医药组合物7)、156毫克/毫升介质系统（医 药组合物8)、208毫克/毫升介质系统（医药组合物9)、163毫克/毫升介质系统（医药组 合物10)及111毫克/毫升介质系统（医药组合物11)。
[0099]表5 :不同医药组合物的组成体积百分比
[0102] 2. 3分析结果
[0103] 2. 3. 1粒径、界面电位及导电度分析结果
[0104] 以第2.I. 1点所载方法分析亚丁基苯酞原液（BP原液）、医药组合物1及5至11 与比较医药组合物1的导电度、界面电位及所含乳化微粒之平均粒径大小，并将结果记录 于下表6。如表6所示，本发明医药组合物中所含之亚丁基苯酞微粒系尺寸介于29. 89纳米 至1. 22微米之间的细小微粒，且界面电位介于-6. 80至-1. 55毫伏（mV)之间，导电度介于 12. 1至14. 93毫西门子/公分（mS/cm)，此显示其为水包油（0/W)型式的乳化液。表6
[0107] 2. 3. 2粘度分析结果
[0108] 以第2. 1. 2点所载方法分析亚丁基苯酞原液、医药组合物1及5至11与比较医药 组合物1的粘度，并计算其平均黏度，结果记录于下表7。如表7所示，亚丁基苯酞原液及 医药组合物的粘度均呈现粘度随着剪应变率的增加而减少的现象，因此均属非牛顿流体中 的剪切变稀流体（shearthinningliquid);此外，各医药组合物的粘度介于0.62X10 2至 10. 89X10 2帕?秒（Pa.s)之间。
[0109]表7
[0112] 2. 3. 3显微结构分析结果
[0113] 以第2. 1.3点所载方法分析医药组合物5之显微结构，结果如图1A、图IB及图IC 所示，其中图IA为医药组合物5的頂图（400倍；比例尺：50微米），图IB为医药组合物5 的FE-SEM图（10, 000倍；比例尺：1微米），且图IC为医药组合物5的TEM图（80, 000倍； 比例尺：200纳米）。由图IA至图IC的结果可知，于本发明医药组合物中，活性成分（亚丁 基苯酞）的颗粒尺寸为纳米级至微米级的微粒，且具有大致为球形的型态。
[0114] 3.医药组合物的体外试验
[0115] 3.1分析对象
[0116] 实验组：医药组合物1、医药组合物5及医药组合物6
[0117] 控制组：比较医药组合物1
[0118] 3. 2分析方法
[0119] 3. 2. 1低温稳定性测试
[0120] 将医药组合物置于4°C冰箱储存30天后，拍照并观察是否出现分层，并与刚制备 完成时的医药组合物作外观比较。
[0121] 3. 2. 2 毒杀试验（IC5。值）
[0122] 将GBM8401细胞（即，人类恶性脑瘤细胞株）以每孔6XIO3的细胞数目培养在 96孔培养盘中，接着以亚丁基苯酞原液或不同医药组合物进行处理，历时24小时。其中，活 性成分亚丁基苯酞的处理浓度分别为〇微克/毫升（控制组）、12. 5微克/毫升、25微克/ 毫升、50微克/毫升、100微克/毫升及200微克/毫升。随后以MTT(3_(4, 5-cimethylthi azol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazoliumbromide)细胞存活测试方法分析各医药组合物对 于GBM8401 细胞的存活的半抑制浓度（halfmaximalinhibitoryconcentration，IC50)， 以评估毒杀效果。
[0123] 3. 2. 3毒杀效果稳定度试验
[0124] 将医药组合物5分批分别于4°C下储存0、7、14、30或60天。将GBM8401细胞以 每孔6XIO3的细胞数目培养在96孔培养盘中，并以经储存不同时间的医药组合物5进行处 理，历时24小时，随后以MTT细胞存活测试方法分析该经不同天数储存的医药组合物5对 于GBM8401细胞的存活的半抑制浓度（IC5。），以评估储存时间对于医药组合物的毒杀效果 的影响。其中，活性成分亚丁基苯酞的处理浓度分别为〇微克/毫升（控制组）、12. 5微克 /毫升、25微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升及200微克/毫升。
[0125] 3. 2. 4体外人工纤维膜穿透试验
[0126] 利用如图5所示的Franz扩散装置（三美玻璃仪器行）估计亚丁基苯酞原液及不 同医药组合物穿透人工纤维膜的能力，以模拟其穿透鼻腔粘膜的情形，其中，此装置之扩散 表面积大约有4. 5平方公分，且接受池的容量约23毫升。
[0127] 具体试验方法包括：（i)将人工纤维膜裁切成适当大小，并置于H印eS(4-(2-hydr oxyethyl)-l_piperazineethanesulfonicacid)缓冲液（118mMNaCl+1.2mMMgS04+4.8mM KC1+5. 5mMD-葡萄糖+2. 5mMCaCl2+20mMH印es)中浸泡10分钟；（ii)于供给池中加入2 毫升的亚丁基苯酞原液或浓度为3毫克/毫升的医药组合物；（iii)于接受池中加入Ifepes 缓冲液，并采用磁力搅拌（转速：300rpm)方式搅拌之；（iv)在温度37°C下进行试验，并每 间隔1小时由接受池的取样管取样1毫升，同时补回已加温的Hepes缓冲液1毫升；（V) 以分光光度计测量取样所得的溶液于310纳米波长下的吸收光谱，并计算亚丁基苯酞的浓 度，共测量10小时；以及（vi)分别利用以下公式1及2计算求得有效穿透值（Permeability coefficient，Peff)与流量（Flux，J) 〇
[0130]V:接受池的容量（毫升）
[0131]C。:初始供给的药物浓