PS注射的影响。
[0105] 组织采集
[0106] 在行为测试后3h于12-lp.m.处死动物。立即取出全脑并迅速冷冻在干冰 (Sigma-Aldrich，UK)上的冷异戊烷中，之后储存在-80°C直至进一步的分子分析。将躯干 血米集到钾EDTA (乙二胺四乙酸）管中并在5000rpm下旋转15min。分离血衆并于_80°C 储存用于进一步的皮质酮分析。在整个研究中从各笼采集粪粒于PBS(磷酸盐缓冲盐水） 中的70%甘油中并于-20°C储存用于进一步的细菌计数。
[0107] 数据分析
[0108] 使用SPSS软件（19版）分析数据。使用柯尔莫哥洛夫一斯米洛夫检验 (Kolmogorov-Smirnov test)来测试数据常态。以双因素方差分析（2-way AN0VA) 评价运动活动，所有其它数据以单因素方差分析（或针对非参数数据的秩和检验 (Kruskal-Wallis))、接着以图基事后检验（Tukey post-hoc test)来评价。所有数据表示 为平均值土标准平均误差（standard error of the mean，SEM)，并将统计显著性的阈值 设定为P〈〇. 05。
[0109] 结果
[0110] BG0S对即刻LPS-诱导的疾病行为的作用：运动活动和埋珠试验
[0111] 水-饲养动物与盐水相比在LPS注射后表现出较低的运动活动（图6A，时间效 应，F(5, 260) = 142. 12, P〈0? 0001 ;LPS 注射效应（F(l，52) = 3. 61，p = 0? 063 ;相互作用 时间XLPS注射F(5, 260) = 5. 12, p〈0. 001)。事后检验揭示了在30和40min时间点时 水-LPS动物行动的距离明显短于其盐水对应组（二者均为p〈0. 05)。BGOS摧毁了 LPS对 自动运动的作用（图6B)，因为仍存在时间效应（F (5, 260) = 113. 01，p〈0. 0001)，但没有 LPS注射效应（F(l，52) = 1. 12, p = 0. 3)，也没有相互作用时间XLPS注射（F(5, 260)= 0. 12, p = 0. 99)。与水-盐水组相比，BGOS并未使盐水动物的运动活动产生任何差别。
[0112] 在埋珠试验中（图7)，LPS对小鼠行为具有显著作用（H(df = 3)= 13. 79, p〈0. 01)，其不会被BGOS反转，因为水（p〈0. 05)和BGOS (p〈0. 05)二者-处理的接受 了 LPS的动物比它们的盐水对应组埋藏的弹珠少。与水-盐水组相比，BG0S并未使盐水动 物的埋珠数产生任何差别。
[0113] BG0S对延迟的LPS-诱导的焦虑行为的作用：明暗箱
[0114] LPS增加了水-饲养动物的焦虑行为（图8)。如对光延迟（图8A，H(df = 3)= 12. 17, p〈0. 01)和光下时间（图 8B，F(3, 106) = 4. 71，p〈0. 01)的评价，该作用被 BGOS 摧 毁。的确，事后分析揭示了水-LPS动物比其盐水对应组（p〈0.01)以及盐水-和BG0S-LPS 动物（二者均为P〈〇. 05)表现出显著2倍高的对光延迟。水-LPS动物也比所有其它组表 现出显著短的在亮部的时间（P〈〇. 05水-LPS vs.所有组）。然而，在暗部和亮部之间的转 换数没有统计学差异（图3C，F (3, 110) = 1.7, p = 0. 17)。与水-盐水动物相比，单独的 BG0S对接受了盐水的对照小鼠的任何参数都不产生任何差别。
[0115] LPS后24h BG0S对免疫参数的作用：额叶皮质和血浆中的细胞因子水平
[0116] 额叶皮质中，LPS诱导水-动物、而非BG0S动物（图9)的TNF-a、IL-I 和 IL-6变化，但不诱导IL-10的变化。事后分析显示，水LPS动物表现出比所有其它组高的 TNF-a (p〈〇. 05)，较高的IL-1 0 (p〈0.0 lvs?水-盐水，和vs. BG0S-盐水，p〈0. 05vs. BG0S LPS)，以及较高的IL-6 (p〈0. 05vs.水-盐水）。因此，用BGOS饲养的、接受了盐水或LPS注 射的动物的细胞因子水平均与对照的水-盐水对应组类似。
[0117] 血浆中，LPS诱导了水-动物、而非BG0S动物（图10)的TNF- a的显著变化，然 而，各组间的IL-6和IL-10、以及IL-1P没有总体的统计学差异，尽管对于后者而言，与盐 水相比，LPS诱导了水动物中非显著性2倍增加。
[0118] 讨论
[0119] 目前的研究试验了益生元（BG0S)摄取对小鼠的LPS-诱导的疾病行为、焦虑和细 胞因子表达的影响，并且基于BGOS(Bimuno)经免疫系统影响脑功能的推测。我们的两个关 键发现是：1)与对照相比，BG0S饲养小鼠在LPS单次注射后未显示自动活动（LMA)不足和 焦虑；和2)LPS-诱导的血浆中促炎介质的表达（粒细胞集落刺激因子（G-CSF);趋化因子 (C-C基序）配体2(CCL2) ;IFNY诱导的单核因子、趋化因子（C-X-C基序）配体9(MIG))和 脑（TNFa)被BG0S摄取所抑制。总之，我们的数据支持现有观点，即BGOS(Bimuno)在维持 脑健康中起到重要作用，并且对免疫应激的应答的改善可巩固该作用。
[0120] 实施例6
[0121] BG0S对健康大鼠认知表现的作用
[0122] 材料&方法
[0123] 给予普通斯普拉道来大鼠水或1. 3 % w/v BG0S的混合物的益生元溶液3周，接 着在注意定势车专移任务（weeksandthentestedontheattentionalset-shifting task,ASST)(参见Bissonette，G. B.等人；BehaviouralBrainResearch;(2013) ：250： 91-101)上使用标准方案进行试验。
[0124] 结果
[0125] 图11示出给予BG0S 3周的大鼠显示出在作为灵活学习的量度的ASST额 外维（extra-dimensional, ED)元素（component)方面改善的表现。如维内相 (intradimensional phase) -样轻松地执行ED元素（ID/ED-变换）暗示了增加的认知灵 活性（老年人受损的参数）。图11中，与对照ID相比，#p〈0. 05,与对照ED相比，*p〈0. 05。
[0126] 结论
[0127] 给予BG0S的大鼠在依赖于通常在精神疾病和衰老中受损的医学前额皮质的任务 中显示出改善的认知表现。
【主权项】
1. 一种低聚半乳糖组合物，其包含二糖Gal ( P 1-3) -Glc ;Gal ( P 1-3) -Gal ; Gal (0 I-6)-Gal ；Gal(al-6)-Gal ；二糖 Gal(0 l_6)_Gal(0 l_4)_Glc ; Gal (0 1-3)-Gal ( P 1-4)-Glc ;四糖 Gal (0 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-4)-Glc 和五糖 Gal (M-6)-Gal ( M-6)-Gal ( M-6)-Gal ( M-4)-Glc，用于预防或治疗神经精神疾病或衰老 中的认知功能障碍和/或情绪紊乱的用途。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述认知功能障碍为由衰老、痴呆或精神分裂 症引起的认知减退或损伤。3. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述神经精神疾病为抑郁症或焦虑症。4. 根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其为粉剂、片剂、胶囊剂、液体制剂如糖浆 剂或软锭剂的形式。5. 根据权利要求4所述的组合物，其中当其为粉剂形式时，在I. 65g至20g的粉剂组合 物中包含1. 35至9. 6g的低聚半乳糖，优选在2. 5g至IOg的粉剂中包含I. 96g至4. 9g的 低聚半乳糖，最优选在3. Og至5. 5g的粉剂中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖。6. 根据权利要求4所述的组合物，其中当其为糖浆剂形式时，在2. Ig至25. 29g的糖浆 剂组合物中包含I. 35g至9. 6g的低聚半乳糖，优选在3. Og至12. 9g的糖浆剂中包含I. 96g 至4. 9g的低聚半乳糖，最优选在4. Ig至7. 25g的糖衆剂中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳 糖。7. -种预防或治疗发生在神经精神疾病中或衰老中的认知功能障碍和/或情绪 紊乱的方法，其包含向个体施用有效量的低聚半乳糖组合物，所述低聚半乳糖组合物 包含二糖 Gal(P l-3)_Glc ;Gal(P l-3)_Gal ;Gal(P l-6)_Gal ;Gal(al-6)_Gal ;三糖 Gal ( P 1-6) -Gal ( P 1-4) -Glc ;Gal ( P 1-3) -Gal ( P 1-4) -Glc ;四糖 Gal ( P 1-6) -Gal ( P 1-6 )-Gal ( P 1-4)-Glc 和五糖 Gal (0 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-4)-Glc。8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述个体为人。9. 根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物口服施用。10. 根据权利要求7所述的方法，其中每日以单剂量施用所述有效量的低聚半乳糖组 合物。11. 根据权利要求7所述的方法，其中每日以间隔4至12小时、优选间隔6至10小时、 最优选间隔8小时的两次分开剂量施用所述有效量的低聚半乳糖组合物。12. 根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物为粉剂、片剂、胶囊剂、液体剂如糖浆 剂或软锭剂的形式。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物为粉剂形式，且在I. 65g至20g的 粉剂组合物中包含1. 35至9. 6g的低聚半乳糖，优选在2. 5g至IOg的粉剂中包含I. 96g至 4. 9g的低聚半乳糖，最优选在3. Og至5. 5g的粉剂中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖。14. 根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物为糖浆剂形式，且在2. Ig至25. 29g 的糖浆剂组合物中包含I. 35g至9. 6g的低聚半乳糖，优选在3. Og至12. 9g的糖浆剂中包 含I. 96g至4. 9g的低聚半乳糖，最优选在4. Ig至7. 25g的糖衆剂中包含2. 7g至2. 75g的 低聚半乳糖。
【专利摘要】一种包含二糖、三糖、四糖和五糖的混合物的低聚半乳糖组合物用于预防或治疗神经精神疾病或衰老中的认知功能障碍和/或情绪紊乱的用途。
【IPC分类】A61P25/28, A61K31/7016, A61P25/24, A61K31/702
【公开号】CN105073120
【申请号】CN201480018975
【发明人】G·塔泽吉斯
【申请人】科拉萨多公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2014年3月17日
【公告号】CA2908230A1, WO2014155056A1