温度下搅拌直到获得澄清溶液来制备纯固体形式的化合物1。然后在用化合物1晶种接种 澄清溶液之前的一段时间内将此澄清溶液缓慢冷却至约30°C。将此溶液在约30°C下保持 一段时间，之后用几个小时将其冷却至〇°C _5°C并且在该温度下继续搅拌一段时间。然后 在室温下过滤悬浮液以获得纯化合物1。
[0244] 通过在约35°C -40°C下将纯化合物1 (在色谱法纯化之后得到的油）溶解于EtOAc 中并且在该温度下搅拌直到获得澄清溶液，以制备晶种形式的化合物1。然后用几个小时将 此澄清溶液缓慢冷却至约〇°C -5°c，并且然后在该温度下搅拌一段时间。形成白色悬浮液 并且然后在室温下搅拌以获得化合物1的晶种。
[0245] 在开始挤出之前，将聚合物、纯固体形式的化合物1 (如以上所述地制备的）和赋 形剂（如果有的话）共混以确保均匀性。为了在挤出之前均匀地混合植入物组分，精确地 称量化合物1、聚合物和赋形剂（如果存在的话）并且将其转移至具有两个不锈钢球的小 不锈钢容器中。使用Turbula混合器将所述材料共混20至45分钟。在共混之后，用刮铲 再次手动混合粉末共混物。安装DSM双螺杆挤出机并将其预加热至所需的挤出温度（正常 地，在60°C至100°C之间）。然后将共混的材料手动装入到两个转螺杆之间的套筒顶端的开 口处。通过转螺杆将熔化材料传送到套筒并且从500 ym喷嘴挤出。通过连接至所述设备 的Beta Lasermike牵引器控制挤出的长丝的直径。通过改变牵引器速度来调整长丝的直 径。长丝的最终直径的范围通常为0.006英寸至0.025英寸。然后将挤出的长丝切割至5 至10英寸长度并且将其收集至存储管中。将存储管放置于具有干燥剂和氧气吸收剂组合 包的铝箱袋中，将其热封并且存储于-20°C冰箱中。
[0246] 使用活塞式挤出机制备植入物
[0247] 使用溶剂浇铸/热熔挤出法与机械驱动微柱塞式挤出机（活塞式挤出机）制造表 2中植入物5-9。将药物物质（化合物1，以油的形式）、聚合物和赋形剂（如果有的话）一 起溶解于乙酸乙酯中以形成单一溶液。将所述溶液浇入TEFLON?.盘中并且在35°C下在 真空烘箱内干燥过夜以形成薄膜。将薄膜研磨成颗粒，然后将所述颗粒放置于加热的活塞 式挤出机的孔中并且在45°C -85°C的温度范围内使用活塞式挤出机通过200 y m喷嘴并且 以0. 0025的设置速度数来挤出200-250 ym直径长丝。通过使用较小的喷嘴或在较快速度 下牵拉来制造较小的植入物。将挤出的长丝切割至5英寸长度并且收集至存储管中。将存 储管放置于具有干燥剂和氧气吸收剂组合包的铝箱袋中，将其热封并且存储于-20°C冰箱 中。
[0248] 体外释放速度试验
[0249] 为了测量体外释放速度并且测定每种植入物制剂在液体环境中的体外累积释放 曲线，对于每种制剂，由从每批长丝中随机挑选的三个长丝切割三个1. 5mm植入物。将每个 植入物放置于含有3mL 0. 01M磷酸盐缓冲盐水（pH 7. 4)(释放介质）的8mL玻璃小瓶中。 然后将小瓶放置于在设定为37°C和50rpm的振动型恒温水浴中。在不同时间点，从水浴中 取出小瓶并且取出整个体积的释放介质（3mL)并且通过HPLC分析释放的前列腺胺的总量。 紧接着在从小瓶中取出释放介质之后，将3mL新配制的磷酸盐缓冲盐水添加至小瓶中并且 将小瓶放回到水浴中，以进一步孵育直到下一个取样时间点。由从HPLC分析中获得的前列 腺胺含量值构建体外累积释放曲线（或轮廓）。
[0250]累积释放化合物的量被表示为初始存在于植入物中的化合物总量的百分数。为了 测定初始存在于植入物中的化合物的总量，称量约4mg的每个测试的长丝并且将其转移至 5mL容量瓶中。接着，将2. 5mL乙腈添加至每个容量瓶中。将容量瓶涡旋并旋摇以完全溶解 长丝。然后将水添加至容量瓶中以使体积达到5mL。在将容量瓶混合好之后，将约1. 5mL溶 液转移至微量离心管并且以12, OOOrpm离心10分钟。将部分上清液转移至HPLC小瓶中， 以用于分析前列腺胺（例如化合物1)含量。
[0251] 体内降低眼内压（I0P)研究
[0252] 在血压正常的狗中测试植入物1-4的降I0P作用。用每种植入物治疗总共八只血 压正常的狗。在准备体内I0P降低的研究过程中，将每种植入物（具有表2所列出的尺寸、 重量和组成）装载至尖针端递送装置中。然后用20-25kGy的电子束辐射对整个组件（装 置和植入物）进行灭菌。每只狗在右眼前房内接受一种植入物，同时左眼保持未治疗以用 作对照。在给药之前和之后以3次/周的频率持续约5个月的后剂量，从两只眼睛获得I0P 测量值。I0P降低％被计算为在给药之后的测量时间的I0P与基线相比所观察到的差值 百分比。图5-8示出了对于每组八只狗所观察到的治疗和未治疗眼睛的I0P平均降低％。 将体内持续效力与植入物1-4的体外释放曲线相比，清楚的是基于来自体外释放研究的结 果，在血压正常的狗中的降I0P作用持续比预期时间更久，这是一个意外的有利发现。
[0253] 图2-4和图9示出了来自表2所列出的每一种植入物的化合物1的累积释放曲线。 表2中列出了化合物1在体外随着时间从每个植入物中释放的日平均量（ng/天）。如图2 和图9所示的，植入物1-4和9以恒定速率或接近零级速率连续地（具有很小的迟滞期或 无滞后期）释放化合物1，持续连续的时间。在前两个月期间植入物5在释放基质中体外 释放很少的药物（化合物1)并且然后释放等于起始载药量的约80%的急剧爆发量的药物 (图5)。类似地，植入物6甚至在释放介质中孵育整整两个月之后都不能释放任何大量的 药物（图3)。
[0254] 另外，意外发现当植入物中化合物1的量超过8重量％时，植入物产生显著爆发性 的药物释放和/或提供非常快的释放速率，该速率通常被认为不适用于预期的治疗用途。 例如，植入物7在第一天释放其载药量的约55 %，其后仅有适度量的药物释放（图4)。植 入物8在前两周期间在释放基质中释放超过70%的载药量（图4)。
[0255] 当在狗中测试时，根据所述制剂，四种植入物中的每一种（植入物1-4 ;参见表2) 使眼中的眼内压从基线I0P降低了在20%与30%之间的平均值（图5-8)。通过含有前列 腺胺（化合物1)的每种植入物在眼内产生的降I0P作用的持续时间在将植入物放置于眼 睛前房中之后持续了至少120天。
[0256] 化合物1在第3号植入物中的稳定性（如通过在25°C或30°C下存储1. 5个月和3 个月之后形成杂质来测量）通过将抗氧化剂掺入到第3号植入物的制剂（植入物10和11) 中来改善。例如，与具有第3号制剂（表3)的植入物在这些时间段内形成的总杂质％相比， 在25°C或30°C下存储1.5个月和3个月之后三种聚合物（如在第11植入物中）的重量百 分比中包含具有相应调整的2. 0%抗坏血酸降低了植入物中所形成的％总杂质。类似地， 与具有第3号制剂（表3)的植入物在这些相同时间段内形成的总杂质％相比，在存储1.5 个月和3个月之后三种聚合物（如在第10植入物中）的重量百分率中包含具有相应调整 的2. 0%丁基化羟基茴香醚和0. 5% EDTA降低了植入物中所形成的％总杂质。因此，包含 抗氧化剂提高了化合物1的稳定性，从而延长保质期并且保留所制造的植入物的效能。包 含EDTA、金属螯合剂可增加稳定性。（图10)示出了与植入物3中的化合物相比，从植入物 10和11中各自体外释放的化合物累积百分数。
[0257] 表2 :根据实施例2制备并测试挤出植入物。
[0258]
[0259]
[0260]RESOMER? RG755S为具有酯末端基团和约0? 50-0. 70dl/g特性粘度（如 在25°C下对0. 1%氯仿溶液进行测量）以及约75:25D，L-丙交酯：乙交酯摩尔比例的聚 (D，L-丙交酯-共-乙交酯）。
[0261] PEG3350=平均分子量为3, 350的聚乙二醇。
[0262] 十六醇=十六烷-1-醇（鲸蜡醇）
[0263] BHA= 丁基化羟基茴香醚
[0264] EDTA=乙二胺四乙酸
[0265] 化合物1为具有以下结构的前列腺胺：
[0266]
[0267] 表3 :具有和不具有抗氧化剂的挤出植入物的稳定性研究1
[0268]
[0269] 1在制造后，在向密封铝袋充入氮气之后，将植入物存储在含有干燥剂和氧气吸附 剂包的所述密封铝袋中。
【主权项】
1. 一种可生物降解眼内植入物，其包含可生物降解聚合物材料和与所述可生物降解聚 合物材料缔合的治疗剂，其中所述治疗剂包括具有式（ΠΙ)的化合物或其药学上可接受的盐或酯前药，其中X为-OH或-N(R1)2，并且其中R1独立地选 自由氢和C1-C6烷基组成的组，并且其中所述植入物可有效降低哺乳动物眼睛的眼内压 (IOP)〇2. 根据权利要求1所述的可生物降解眼内植入物，其中所述治疗剂包括具有式（IV)的 化合物或其药学上可接受的盐或酯前药，其中X为-OH或-N(R1)2，其中R1独立地选自由氢 和(；-(：6烷基组成的组。3. 根据权利要求2所述的可生物降解眼内植入物，其中所述治疗剂包括具有以下式的 化合物（化合物1)其中所述植入物在放置于哺乳动物眼内之后可有效持续5个月或更长时间降低所述 眼内的IOP。4. 根据权利要求3所述的可生物降解眼内植入物，其中所述可生物降解聚合物材料包 括聚（D，L-丙交酯）、聚（D，L-丙交酯-共-乙交酯）或其组合。5. 根据权利要求4所述的可生物降解眼内植入物，其中所述植入物可有效使哺乳动 物眼睛的IOP相对于在接收所述植入物之前所述眼睛的IOP持续5个月或更长时间降低 20% -30%。6. 如权利要求5所述的植入物，其中所述治疗剂按重量计占所述植入物的至少1 %但 不超过8%。7. 根据权利要求6所述的可生物降解眼内植入物，其中所述植入物通过挤出法产 生，并且其中所述植入物的长度为0. 5至2mm，直径为100至300 μ m并且总重量为10至 200 μ g〇8. -种可生物降解眼内植入物，其包含可生物降解聚合物材料、十六烷-1-醇和8重 量％的具有以下式的化合物其中所述化合物和所述十六烷-1-醇 .， 与所述可生物降解聚合物材料缔合，并且其中所述可生物降解聚合物材料包括i)具有 酯末端基团和0.25-0. 35dl/g特性粘度的聚（D，L-丙交酯）、ii)具有酸末端基团和 0. 16-0. 24dl/g特性粘度的聚（D，L-丙交酯）、以及iii)具有酯末端基团、0. 16-0. 24dl/g 特性粘度和约75:2?，L-丙交酯：乙交酯摩尔比的聚（D，L-丙交酯-共-乙交酯），其中如 上所给出的聚（D，L-丙交酯）和聚（D，L-丙交酯-共-乙交酯）聚合物各自的所述特性粘 度为在25°C下对所述聚合物的0. 1%氯仿溶液测量的。9. 如权利要求8所述的植入物，其中所述植入物还包含抗氧化剂或螯合剂或抗氧化剂 和螯合剂二者。10. -种用于降低患者的眼内压的方法，其包括向所述患者眼睛的前房内直接施用治 疗有效量的治疗剂，从而降低所述眼睛的眼内压，其中所述治疗剂具有以下式Q.11. 一种用于降低患者的眼内压的方法，其包括将根据权利要求3或8所述的可生物 降解眼内植入物放置于所述患者的眼内，从而持续5个月或更长时间降低所述眼睛的眼内 压。12. 如权利要求11所述的方法，其中所述患者患有眼内压升高、高眼压症或青光眼。13. 如权利要求12所述的方法，其中所述眼内植入物被放置于所述患者眼睛的前房 内。14. 如权利要求13所述的方法，其中所述眼内植入物在放置于所述眼睛之后使所述眼 睛的眼内压相对于在接收所述植入物之前所述眼睛的眼内压持续3-5个月或更长时间降 低至少30%。15. -种用于制备可有效降低患者眼内压的可生物降解眼内植入物的方法，所述植入 物包含可生物降解聚合物材料和与所述可生物降解聚合物材料缔合的治疗剂或者由其组 成，其中所述治疗剂具有以下式（化合物1)并且其中所述方法按顺序包括 (I) 获得固体形式的化合物1; (II) 将所述固体形式的化合物1与一种可生物降解聚合物或两种或更多种可生物降 解聚合物共混，以形成混合物； (III) 挤出所述混合物以形成长丝；以及 (IV) 将所述长丝切割至适用于放置于眼睛的眼区域内的长度，从而形成所述眼内植入 物； 其中获得固体形式的化合物1包括 a) 在大约50°C下将油形式的化合物1添加到乙酸乙酯（EtOAc)中，以形成混合物； b) 在50°C下搅拌步骤a)的所述混合物，以形成澄清溶液； c) 将步骤b)的所述澄清溶液冷却至大约30°C，持续1-3小时； d) 将化合物1的晶种添加到步骤c)的所冷却溶液中； e) 将步骤d)的接种的溶液在约30°C下维持1-3小时； f) 在约1-5小时的过程中将来自步骤e)的所述接种的溶液冷却至约0°C _5°C的温度； g) 在约0°C _5°C的温度下将来自步骤f)的所述溶液搅拌1-3小时，以形成悬浮液； h) 在约20°C与25°C之间的温度下过滤来自步骤g)的所述悬浮液，从而产生固体形式 的化合物1 ;以及 其中化合物1的所述晶种通过包括以下各项的方法制备 i) 在约35°C -40°C的温度下将油形式的化合物1溶解于EtOAc中，以形成混合物； ii) 在约35°C _40°C的温度下搅拌步骤i)的所述混合物，以形成澄清溶液； iii) 在约1-5小时的过程中将步骤ii)的所述澄清溶液冷却至约0°C _5°C的温度； iv) 在约0°C _5°C的温度下将来自步骤iii)的所冷却溶液搅拌1-3小时，以形成白色 悬浮液； V)在约20°C与25°C之间的温度下过滤来自步骤iv)的所述白色悬浮液，从而产生化合 物1的晶种。
【专利摘要】本发明描述了含有前列腺胺的可生物降解眼内植入物、前列腺胺化合物、含有前列腺胺的药物组合物以及用于制备此类植入物和组合物并使用它们来即时且持续地降低患者眼睛的眼内压并治疗青光眼的方法。
【IPC分类】A61L27/18, A61K9/00, A61F9/00, A61L27/54, A61L27/58
【公开号】CN105073153
【申请号】CN201480016109
【发明人】P·M·休斯, J·沈, M·R·罗宾逊, D·F·伍德沃, R·M·伯克, 刘辉, J·万, C·杜雷尔杰, G·F·安布鲁斯, 吴科, D·T·迪安
【申请人】阿勒根公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2014年3月14日
【公告号】CA2906123A1, US20140271780, WO2014143754A2, WO2014143754A3