芽孢杆菌生物被膜的处理方法
[0065] 将载有培养24h生物被膜的不锈钢片用无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，加入10mL所制备的酸性电解水在室温下静置15min，迅速将不锈 钢片转入10mL中和剂中作用10min，然后用无菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂洗不锈钢片3次， 加入10mL无菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)，超声处理15min(250W)，对菌悬液进行平板菌落计数， 平行试验3次。超声平板菌落计数法的检测限为0. 541og CFU/cm2(即10CFU/不锈钢片）， 用ND表示实验结果低于检测限。使用Microsoft Office Excel软件和SPSS Statistics 软件对数据进行统计学分析。
[0066] 实施例1。
[0067] 采用CE-7001型酸性氧化电位水发生器，以质量浓度为0. 1 %的氯化钠溶液作为 电解液，电解槽中电解l〇min，在阳极区得到pH 2. 73、ACC为79. 6mg/L，0RP为1179mV的 酸性电解水，然后取新制备的酸性电解水，分装在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞紧瓶塞，放入 35 °C的培养箱中，储存时间不超过9天。
[0068] 实施例2。
[0069] 采用CE-7001型酸性氧化电位水发生器，以质量浓度为0. 1 %的氯化钠溶液作为 电解液，电解槽中电解l〇min，在阳极区得到pH 2. 75、ACC为73. 7mg/L，0RP为1174mV的 酸性电解水，然后取新制备的酸性电解水，分装在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞紧瓶塞，放入 35 °C的培养箱中，储存时间不超过9天。
[0070] 实施例3。
[0071] 采用CE-7001型酸性氧化电位水发生器，以质量浓度为0. 1 %的氯化钠溶液作为 电解液，电解槽中电解lOmin，在阳极区得到pH 2· 78、ACC为71. 3mg/L，ORP为1170mV的 酸性电解水，然后取新制备的酸性电解水，分装在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞紧瓶塞，放入 35 °C的培养箱中，储存时间不超过9天。
[0072] 试验例1 :
[0073] 将实施例1制备的酸性电解水（pH 2. 73、ACC为79. 6mg/L，0RP为1179mV)用去离 子水分别稀释为初始浓度的80 %、60 %、40 %，得到不同ACC的酸性电解水，取100mL稀释后 的酸性电解水，分别向其中加入40、80、100 μ L 1M的盐酸溶液，使其与电解水原液的pH - 致。在此过程中，酸性电解水的0RP基本不变，最后得到ACC分别为51. 3、33. 6、18. 6mg/L 的酸性电解水a、b、c。利用ACC分别为51. 3、33. 6、18. 6mg/L的酸性电解水a、b、c杀灭蜡 样芽孢杆菌生物被膜，步骤同2. 5,电解水作用时间为15min。
[0074] 试验例2 :
[0075] 向100mL实施例1制备的酸性电解水（pH 2. 73、ACC为79. 6mg/L，0RP为1179mV) 分别加入350、375、400 μ L 1M的氢氧化钠溶液，得到pH分别为3. 67、4. 76、5. 82的酸性电 解水d、e、f，在此过程中，酸性电解水的ACC和0RP变化较小。利用pH分别为3. 67、4. 76、 5. 82、6. 66的酸性电解水d、e、f杀灭蜡样芽孢杆菌生物被膜，步骤同2. 5,电解水作用时间 为 15min〇
[0076] 试验例3 :
[0077] 将3%溴水与p实施例1制备的酸性电解水（pH 2. 73、ACC为79. 6mg/L，0RP为 1179mV)分别以1 :9和9 :1的比例调配，得到不同0RP的酸性电解水。取100mL以1 :9调 配的电解水，向其中加入80 μ L次氯酸钠，得到0RP为976mv的酸性电解水g。取100mL以 9 :1调配的电解水，向其中加入lmL次氯酸钠和3mL 1M的氢氧化钠，得到0RP为881mv的酸 性电解水h。利用0RP分别为976、881mv的酸性电解水g、h杀灭蜡样芽孢杆菌生物被膜， 步骤同2. 5,电解水作用时间为15min。
[0078] 试验结果及分析：
[0079] ( -）酸性电解水的贮存稳定性对酸性电解水杀灭蜡样芽孢杆菌生物被膜的影响
[0080] 尽管酸性电解水具有成本低、环境友好、安全等优点，但其缺点是稳定性不好。
[0081] 基于酸性电解水在贮存过程中主要理化性质的变化，取新制备的酸性电解水，分 装在lOOOmL透明和棕色的玻璃瓶中，塞紧瓶塞，分别放入20、35、50 °C的培养箱中贮存28d， 定时取电解水样品，测定其pH、ACC及0RP。
[0082] 将载有培养24h生物被膜的不锈钢片用无菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除 去浮游菌和粘附不牢的菌，加入10mL不同条件下贮存的酸性电解水于室温下静置作用 15min，迅速将不锈钢片转入10mL中和剂中作用10min，然后用无菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂 洗不锈钢片3次，加入10mL无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)，超声处理15min (250W)，对菌悬液进 行平板菌落计数，平行试验3次。
[0083] 结果表明，酸性电解水的ACC和0RP随贮存时间的延长而减小，而pH随贮存时间 的延长而增大；并且在避光、35°C的密闭条件下贮存不超过9天的酸性电解水pH、ORP、ACC 变化很小。随着贮存时间的延长，由于(：12的挥发和H0C1的分解导致ACC显著降低，会大 大削弱了酸性电解水的灭蜡样芽孢杆菌生物被膜的活性。
[0084] (二）酸性电解水对蜡样芽孢杆菌生物被膜的杀灭效果
[0085] 将载有培养24h生物被膜的不锈钢片用无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，分别加入10mL实施例1和试验例所制备的酸性电解水，在室温下 分别静置作用1、3、5、10、15、2〇11^11，迅速将不锈钢片转入1〇1^中和剂中作用1〇1^11，然后 用无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗不锈钢片3次，加入10mL无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)，超声 处理15min (250W)，对菌悬液进行平板菌落计数，平行试验3次。超声平板菌落计数法的 检测限为0. 541og CFU/cm2 (即10CFU/不锈钢片），用ND表示实验结果低于检测限。使用 Microsoft Office Excel软件和SPSS Statistics软件对数据进行统计学分析。实施例1 至3的酸性电解水对蜡样芽孢杆菌生物被膜的杀灭效果如表1所示。
[0086] 表1实施例1至3的酸性电解水对蜡样芽孢杆菌生物被膜的杀灭效果
[0089] 由表1可知，本发明制备的酸性电解水对食源性致病菌生物被膜，特别是蜡样芽 孢杆菌这一类抗性较强的被膜菌的生物被膜具有很强的杀灭效果。
[0090] (三）酸性电解水对蜡样芽孢杆菌生物被膜的杀灭机理的研究
[0091] 1、对比酸性电解水和化学改性水对蜡样芽孢杆菌生物被膜的杀灭效果
[0092] 将载有培养24h生物被膜的不锈钢片用无菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，分别加入10mL去离子水（空白）、实施例1的酸性电解水、0. 05% 次氯酸钠仏0：为78.211^/1)、5%乙酸（?!12.68)、0.0041盐酸（?!12.71)、0.0邡盐酸 +0.05%次氯酸钠（100mL 0.01M盐酸中加入50 μ L次氯酸钠）和10%乙酸+0.05%次氯酸 钠（lOOmLlO%乙酸中加入50yL次氯酸钠）在室温下静置作用15min，迅速将不锈钢片转 入10mL中和剂中作用1