二甲双胍联合黄酮治疗乳腺癌的应用及其产品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种二甲双胍联合黄酮治疗乳腺癌的应用及 其广品。
【背景技术】
[0002] 乳腺癌是女性最常见的癌症之一，乳腺癌的发病率占女性恶性肿瘤的第一位。90 年代以来，中国乳腺癌发病率的增长速度是全球平均速度的两倍以上。每年，中国乳腺癌新 发确诊病例及死亡病例分别占世界的12. 2%和9. 6% (Fan等，2014)。
[0003] 二甲双胍是包含两个甲基的双胍类药物，是广泛使用的抗高血糖药物之一，安全 廉价。越来越多的报道指出，二甲双胍具有治疗乳腺癌的作用。二甲双胍的抗癌机制主要 涉及以下几个方面：1、二甲双胍激活AMPK (腺苷酸活化蛋白激酶）信号通路，进而激活抑 癌基因 LKBl ;2、抑制mTOR蛋白（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）合成；3、诱导细胞周期阻断； 4、抑制原癌基因 HER2表达。依据目前的报道，二甲双胍在24小时处理条件下对乳腺癌细 胞增殖没有抑制作用，二甲双胍发挥抗癌的作用时间为48小时以上，时间较长；5、二甲双 胍和抗癌药紫杉醇联合导致AMPK信号分子增强，随后抑制下游mTOR信号转导途径，促进细 胞凋亡；6、二甲双胍诱导口腔鳞状癌细胞的凋亡，显著下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL，并 上调促凋亡蛋白 Bax 的表达（Rocha et al.，2011 ;Luo et al.，2012 ;Gong et al.，2014 ; Hatoum et al·，2015 ;Rggo et al·，2015)。因此，为了开发以二甲双胍为基础的抗癌药物 或疗法，降低二甲双胍发挥作用的时间至关重要。
[0004] 黄酮类化合物是一系列广泛存在于植物界的天然产物，目前已发现超过9000种 黄酮类化合物。黄酮（flavone，2-phenyl-4H-1-benzopyran_4-〇ne)，即2_苯基色原酮，是 黄酮类化合物的母核结构，也是一种天然存在的植物多酸，已发现其具有抗癌功能（Wenzel et al.，2000 ;朱文振等，2012)。黄酮抗癌作用的相关机制涉及：1、抑制癌细胞增殖，调 控p21、p53等基因表达；2、诱导癌细胞凋亡，调控Bcl-2、Bax等基因表达；3、诱导细胞 周期阻断，调控周期蛋白表达；4、通过抑制一氧化氮合酶活力抑制一氧化氮水平，进而抑 制细胞亚硝基化水平。黄酮在乳腺癌、肝癌及结肠癌细胞中发挥抗癌作用的有效浓度为 150-200 μ M，处理时间为 48-72 小时（Wenzel et al.，2000 ;Ullmannova et al.，2007 ;Zhu et al.，2015)。我们之前的研究表明，在本发明所述的24小时处理条件下，100 μ M黄酮没 有显著的抑制乳腺癌细胞增殖的作用（Zhu et al.，2015)。
[0005] 当前二甲双胍作为抗癌药物，要发挥显著的抑制癌细胞增殖的作用，需要较高的 浓度和较长的处理时间（48小时或更长）。黄酮作为抗癌药物时同样存在药物处理时间过 长的问题（48小时或更长）。抗癌药物的有效浓度过高，导致以该药物进行抗癌治疗时，为 了保证患者体内的药物浓度达到有效浓度，患者需摄入高剂量药物，由此带来一些副作用。 此外大量服药不仅提高了药物治疗成本，也给患者造成不便。人体是一个复杂的动态环境， 新陈代谢一直在进行。药物处理时间过长，也就是药物发挥作用需要较长的时间，待药物进 入人体后，如果发挥作用需要较长的时间，药物可能还未能发挥抗癌作用，即与体内的复杂 成分发生反应导致失效，或经新陈代谢排出体外。
[0006] 专利CN104971067A公开了一种含有盐酸二甲双胍和gdc0941的口服胶囊制剂，活 性成分为盐酸二甲双胍和gdc0941。药品gdc0941是一种PI3K抑制剂，二甲双胍的主要抗 癌机理之一就是通过激活AMPK来抑制mTOR，该发明通过盐酸二甲双胍和gdc0941相同的作 用机理的出发，将两种药物联用，但是对作用机理不同的药物联用没有教导作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的就是为了提供一种二甲双胍联合黄酮治疗乳腺癌的应用及其产品， 同时降低了药物发挥抗癌作用的时间。
[0008] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0009] -种治疗乳腺癌的组合物，以二甲双胍和黄酮为主要活性成分。
[0010] 优选：二甲双胍与黄酮类化合物的浓度比例为IOmM :200 μΜ-20πιΜ :100 μΜ。
[0011] 优选：二甲双胍与黄酮的浓度比例为 IOmM: 100 μΜ、10πιΜ:200 μΜ、20πιΜ: IOOyMS 20mM:200 μΜ〇
[0012] 优选：所述癌为乳腺癌。
[0013] 上述的组合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。
[0014] 本发明还提供了一种治疗乳腺癌的制剂，由本发明提供的组合物和药学上可接受 的辅料组成。
[0015] 作为优选，上述剂型为注射剂、丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂。在本发明提供的制剂 中，药学上可接受的辅料为药物制剂中的常规辅料，为本领域技术人员认为可行的常规辅 料均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
[0016] 本发明的有益效果：
[0017] 本发明开发了二甲双胍与黄酮联合用药在治疗乳腺癌中的应用。本发明提供了以 二甲双胍作为抗癌药物的过程中使用天然产物黄酮作为辅助剂的药物组合方式。通过加入 辅助剂黄酮，降低二甲双胍发挥抗癌作用的浓度或时间，为发展二甲双胍为抗癌药物提供 新途径。所述方法为，在使用浓度为20mM的二甲双胍处理体外培养的乳腺癌细胞过程中， 加入浓度为100 μΜ的黄酮，可提高二甲双胍抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞凋亡的能力。
[0018] 本领域的技术人员没有将二甲双胍和黄酮联合用药是因为在现有的技术条件及 研究进展下，二甲双胍与黄酮联合用药尚未引起相关研究者的关注，对于二甲双胍与黄酮 联合用药的分子机制，更是未见报道。本发明排除了二甲双胍与黄酮联合用药会发生相互 作用进而降低二甲双胍药物作用的可能性，发现二甲双胍与黄酮联合用药会产生有益效 果，提高了二甲双胍的抗癌功能。本研究发现了二甲双胍与黄酮联合用药涉及的两种分子 机制：1、调控PI3K/Akt/p53信号通路；2、通过下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达水 平，调控Bcl蛋白家族。
[0019] 本发明公开了以细胞增殖为指标的二甲双胍与黄酮联合用药浓度的筛选数据，本 发明筛选了四种二甲双胍与黄酮的浓度比例：IOmM: 100 μ M、IOmM: 200 μ M、20mM: 100 μ M以 及20mM: 200 μ Μ，优选的二甲双胍与黄酮的浓度比例为20mM: 100 μ Μ。本文公开了二甲双胍 与黄酮联合用药的分子机制，通过实验发现，黄酮作为辅助剂，显著增强了二甲双胍抑制乳 腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的能力，上调抑癌基因 Ρ53和促凋亡因子Bax的蛋白表达水 平，下调PI3K和p-Akt和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。
[0020] 为了降低二甲双胍发挥抗癌作用的时间，本发明在二甲双胍处理乳腺癌的过程中 联合使用黄酮。黄酮类化合物广泛存在用于饮食的天然植物中，包括浆果、豆类、柑橘类水 果、茶、芹菜和洋葱等。黄酮是黄酮类化合物的母核结构，其功能可以反映黄酮类化合物的 功效。黄酮也是天然植物多酚，可安全服用。因此，本发明提供了一种相对安全的借助天然 产物提高二甲双胍抗癌功能的途径。
【附图说明】
[0021] 图1显示了二甲双胍与黄酮联合用药组与二甲双胍处理组相比，显著抑制乳腺癌 细胞存活率；
[0022] 图2显示了药物处理24小时乳腺癌细胞的凋亡水平；其中，A :对照组，B :20mM 二甲双胍处理，C:20mM二甲双胍：100μΜ黄酮联合用药，D:细胞凋亡的量化数据，对照 组、20mM二甲双胍处理组、20mM二甲双胍：100 μ M黄酮联合用药处理组的凋亡率分别为 4· 23±0· 90%、6· 43±0· 78%和 9. 96±0· 94 ;