Creg蛋白的医药用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及CREG蛋白的医药用途，具体涉及CREG蛋白在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中)的药物或医用器械中的用途。本发明还涉及表达CREG蛋白的重组载体、含有该重组载体的重组细胞、能够抑制血管壁内CREG蛋白表达下调或者能够上调血管壁内CREG蛋白表达水平的制剂在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中)的药物或医用器械中的用途。
【背景技术】
[0002]动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是硬化性血管病中最常见的类型。随着人民生活水平的提高、生活方式的改变及寿命的延长，AS的发病率逐年上升。根据受累血管的不同，AS可表现为心肌梗死、脑卒中等多种形式，是致死致残的主要疾病之一。研究表明，AS是一个复杂的、多因素参与的慢性炎症过程。它包括脂质聚集、单核-巨噬细胞的侵入、血管平滑肌细胞(VSMC)的增生、泡沫细胞的形成、纤维组织增生、炎症及抗原抗体反应等等。到目前为止，AS的发生机制仍未完全阐明。寻找影响AS发生发展的关键内源性分子、并以此分子为祀点治疗AS是目前研究的热点。
[0003]人E1A 激活基因阻遏子(human cellular repressor of ElA-stimulatedgene, hCREG)基因是1998年哈佛大学医学院Gill教授首先克隆的一个细胞分化调控基因(Veal Ε,ΜοΙ Cell B1l，1998 ; 18 (9): 5032-5041)。前期研究证实，在 VSMC 由收缩表型向合成表型转化的过程中，CREG蛋白及mRNA的表达水平显著降低(Han Ya-Ling, ZhonghuaYi Xue Za Zhi,2005 ；85 (1):49-53 ；Han Ya-Ling, J Mol Cell Card1l, 2011 ；50(4):723-30 ；Han Ya-Ling, J Mol Cell Card1l, 2010 ;48 (6): 1225-35)，表明其参与VSMC表型调控过程。体外研究发现，过表达CREG蛋白能明显抑制VSMC的增殖并促进其分化(Han Ya-Ling, Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 2005 ；21 (5):570-574；Han Ya-Ling, Prog B1chem B1phys, 2004 ；31 (12):1099-1105 ；HanYa-Ling, Prog B1chem B1phys, 2005 ;32 (6): 517—522)。在体研究发现，在球囊损伤后的大鼠颈动脉血管中，血管中膜的CREG基因的表达明显下降，且过表达CREG可以抑制VSMC 的增殖和新生内膜的形成(Han Ya-Ling, Card1vasc Res, 2008 ；78 (3): 597-604 ；Han Ya-Ling, J Vase Surg, 2008 ;48 (1): 201-9)，同时，经外膜包裹导入的 pLNCX2_hCREG逆转录病毒有效抑制了球囊拉伤后小鼠颈动脉狭窄的发生(Han Ya-Ling, ChineseJournal of Pathophys1logy, 2007 ；23(10):1873-1877)。除了 VSMC, CREG 对血管内皮细胞(EC)也有调控作用。过表达CREG可以促进EC增殖(Tao Jie, Int J Mol Sci, 2013 ；14(9):18437-18456),并对抗炎症引起的 EC 凋亡(Wang Na, Astherosclerosis, 2011 ；218(2):543-551)及屏障功能障碍(Duan Yan, Mol B1l Rep, 2013 ；40 (6):3891-3900)。上述研究提示，CREG是维持血管稳态重要的内源性调控因子。但尚没有研究表明，CREG蛋白可做为AS治疗的靶点。
【发明内容】
[0004]本发明的发明人经过大量实验和反复摸索，发现通过提高血管壁内CREG蛋白表达水平，可以缩小动脉粥样硬化斑块面积，减轻动脉粥样硬化中的炎症反应，由此完成了本发明。
[0005]本发明第一方面涉及CREG蛋白在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)的药物或医用器械中的用途。
[0006]本发明第二方面涉及表达CREG蛋白的重组载体或含有该重组载体的重组细胞在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)的药物或医用器械中的用途；其中所述重组载体含有编码CREG蛋白的核苷酸序列。
[0007]根据本发明第二方面任一项的用途，其中所述的重组载体为重组腺病毒载体。
[0008]在本发明的实施方案中，其中所述的重组腺病毒载体为人腺病毒5型Ad5 - CREG,其于2008年1月2日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC，武汉，武汉大学)，保藏号为CCTCC - V200801。该保藏信息已在中国专利CN101475961A中公开。
[0009]本发明第三方面涉及能够抑制血管内CREG蛋白表达下调或者能够上调血管内CREG蛋白表达水平的制剂在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)的药物或医用器械中的用途。
[0010]本发明第四方面涉及组合物，其包含CREG蛋白、表达CREG蛋白的重组载体、含有该重组载体的重组细胞、能够抑制血管内CREG蛋白表达下调或者能够上调血管内CREG蛋白表达水平的制剂，以及任选的药学上可接受的载体或赋形剂，所述组合物用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等);其中所述重组载体含有编码CREG蛋白的核苷酸序列。
[0011]本发明第五方面涉及医用器械，其包含CREG蛋白、表达CREG蛋白的重组载体、含有该重组载体的重组细胞、能够抑制血管内CREG蛋白表达下调或者能够上调血管内CREG蛋白表达水平的制剂，所述医用器械用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)；其中所述重组载体含有编码CREG蛋白的核苷酸序列。
[0012]本发明还涉及预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)的方法，所述方法包括给有需要的受试者有效量的CREG蛋白、表达CREG蛋白的重组载体、含有该重组载体的重组细胞、能够抑制血管内CREG蛋白表达下调或者能够上调血管内CREG蛋白表达水平的制剂的步骤。
[0013]本发明还涉及本发明第四方面任一项的组合物或第五方面任一项的医用器械在制备用于预防和/或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化相关疾病(例如冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤、外周动脉疾病等)的产品中的用途。
[0014]在本发明中，所述CREG蛋白(即E1A激活基因阻遏子，cellular repressor ofElA-stimulated gene)既包括具有完整序列的CREG蛋白，也包括具有CREG蛋白功能的只含有部分序列的CREG蛋白。
[0015]在本发明的实施方案中，所述CREG蛋白的氨基酸序列号为NP_003842.1。
[0016]在本发明的实施方案中，所述CREG基因的Genbank号为NM003851。
[0017]在本发明的实施方案中，所述CREG蛋白为人CREG(hCREG)蛋白。
[0018]在本发明中，所述动脉粥样硬化包括动脉粥样硬化血管狭窄期的各个阶段，但不包括动脉粥样硬化严重时的血管梗塞期。
[0019]在本发明中，所述动脉粥样硬化包括冠状动脉粥样硬化，主动脉粥样硬化以及外周动脉粥样硬化。
[0020]在本发明中，所述动脉粥样硬相关疾病包括冠心病、脑卒中、腹主动脉瘤或外周动脉疾病(例如动脉血栓)。
[0021]在本发明中，所述载体为原核表达载体、真核表达载体或病毒载体。在本发明的实施方案中，所述载体为病毒载体，例如为腺病毒载体或腺相关病毒载体。在本发明的具体实施方案中，所述载体为腺病毒载体。
[0022]在本发明中，所述细胞为原核细胞或真核细胞，所述原核细胞例如为大肠杆菌、沙门氏菌，所述真核细胞例如为酵母细胞或哺乳动物细胞。
[0023]在本发明中，所述医用器械为用于治疗动脉粥样硬化的器械，通常为介入血管的器械，例如为血管支架等。
[0024]在本发明中，所述C