用于鼓膜或外耳道再生的试剂的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是基于申请日为2009年6月26日、申请号为200980133310. 8、发明名称为 "用于鼓膜或外耳道再生的试剂"的申请所提交的分案申请。
[0002]
技术领域
[0003] 本发明设及鼓膜或耳道再生试剂，其包括明胶海棉和被覆材料的组合，所述明胶 海棉载有碱性成纤维细胞生长因子化FGF)。
【背景技术】
[0004] 鼓膜穿孔是造成诸如鼓膜中破裂和穿孔的缺陷的症状；其存在多种原因，在鼓室 中肉眼可见干燥而无活动性炎症的情况下，似乎可期望尽可能早地闭合穿孔。鼓膜闭合的 最大优点是听力的提高。只要内耳没有失调且中耳不存在特别的病变，则在所有情况下，在 鼓膜闭合之后通常都实现了听力的改善，运显著地有助于患者Q0L的提高。 阳〇化]鼓膜中存在穿孔时，不仅鼓膜不能够捕捉足够的声音，而且听觉（听单词）也会由 于消除效应而被进一步干扰，其中直接进入鼓室的声音会穿过圆窗进入耳蜗，并与经由正 常路线进入耳蜗的声音冲突。另外，中耳直接暴露于耳道侧，结果运导致对感染耐受性减弱 并可能造成中耳炎。长期持续的感染状态会由于内耳机能减退而造成感觉神经的听觉损失 和受损的迷路功能。由于运些原因，优选尽量闭合鼓膜。
[0006] 对于鼓膜闭合，多种治疗根据穿孔的尺寸进行，目前可利用的大部分疗法基本上 是基于外科手术的。通常，进行鼓膜成形术和鼓室成形术。在前者中，耳后部的皮肤切口与 自体组织的收集/移植是必要的；在后者中，除运些程序之外，耳道磨损也是必要的。当鼓 膜的穿孔尺寸增加时，作为鼓膜替代品的自体组织（颠筋膜）的移植作为外科技术变得更 难进行。因此，甚至在进行了外科手术的情况下，听力并不总是得到改善。可能出现许多后 遗症，如术后鼓膜再穿孔、耳周部异感W及耳鸣。此外，在术后，鼓膜由于潜伏化作用、肥大 等而与完整鼓膜相距甚远，并且听力降低。运些手术通常伴随住院护理约一天至几个星期， 而造成缺点，如患者的屯、理、生理和经济负担的增加。
[0007] 同样地，对于伴随骨露出的耳道软组织缺陷，外科手术治疗已经成为唯一常规疗 法；处置如耳后部外切开和自体组织采集已必不可少。
[000引近年来，提出了使用载有生长因子的生物相容性支架材料的再生医学性鼓膜再生 方法（例如，参见专利文献1)。特别地，已报道了一些治疗案例，其中碱性成纤维细胞生长 因子化FG巧用作生长因子，片状薄膜如胶原蛋白膜或几下质膜用作支架材料（非专利文献 1-3)。此外，还记载了由含bFGF的胶原蛋白的圆柱状元件制成的用于耳道重建的成型品 (专利文献2)。
[0009] 作为另一个不依赖于外科手术的鼓膜再生方法，已报道了下述方法，其中鼓膜的 穿孔部分用羊膜被覆并与纤维蛋白胶粘合（非专利文献2)。
[0010] 然而，常规再生医学性疗法的效力限于相对小的鼓膜穿孔与耳道缺陷；运些疗法 不适于大于一定尺寸的鼓膜缺陷，w及耳小骨相关的缺陷，因为不能修复。
[0011] 同时，明胶海绵在耳病的治疗中用作外科手术止血剂，并且还用作药物的持续释 放载体（专利文献3)。 阳〇1引[现有技术文献]
[专利文献] 专利文献1:国际专利公开No. 2006/007417的小册子 专利文献 2:JP-A-2007-125252 专利文献3:美国专利申请公开No. 2007/0160648的说明书 [非专利文献] 非专利文南犬 1:Hakubaetal. ,JournalofOtolaryngologyofJapan,Vol. 110,No. 4,p. 261, 2007 非专利文献 2:Hakubaetal.,HeadandNeckSurgery,Vol. 16,No. 1,p. 9-13, 2006 非专利文南犬 3:Fut曰iet曰 1. ,JournalofOtolaryngologyofJapan,Vol. 110,No. 4，p. 299，2007。
【发明内容】
[0013] 发明所要解决的问题 对于基于再生医疗技术的鼓膜和耳道再生方法的开发存在强烈需求，其甚至能够修复 传统上不可避免地依赖于外科手术的大的鼓膜穿孔与耳道软组织缺陷。因此，本发明的目 的是提供不管缺陷部分的尺寸与位置如何均能够修复缺陷的新型鼓膜/耳道再生试剂。
[0014] 解决问题的手段 本发明人进行了广泛的研究W完成上述的目的，并注意到下述事实，即全部传统方法 都意图通过允许周围组织沿着结合至鼓膜穿孔或耳道软组织缺陷的板状支架材料的基底 延伸来修复缺陷部分。因为旨在本质上再生膜组织，所W使用片状材料作为支架的想法似 乎显得合理。然而，只有鼓膜穿孔或耳道软组织缺陷仅位于平坦的部分，修复才会是可能 的；然而，鼓膜在形状上复杂并具有附着其上的小骨，因此随着鼓膜缺陷尺寸的增加，将愈 加难于用平坦的片状材料被覆整个表面。不能完全被覆缺陷部分将无法修复鼓膜，或者将 导致与周围组织粘连，留下后遗症。耳道软组织的情况也如此。
[0015] 基于W上原因，本发明人改变了使用片状材料的常规想法，随着集中于使用能够 立体地被覆整个缺陷部分的材料，而采用明胶海绵作为支架材料。具体地，W海绵被覆鼓膜 或耳道的缺陷部分的方式留置浸溃了bFGF溶液的明胶海绵。因为明胶海绵是通过分解胶 原蛋白获得的材料，与胶原蛋白相比具有更大数目的间隙与更高的自由度，因此它的特征 在于，尽管作为细胞生长用支架发挥作用，但它不会妨碍细胞延伸的方向。因此，明胶海绵 旨在使再生组织进入明胶海绵并在其中延伸，而不是如常规那样使再生组织沿片状材料的 基底延伸。
[0016] 此外，在该操作中，纤维蛋白胶或海藻酸或它们的盐被施加于海绵表面，且将该海 绵被覆并固定在缺陷部分上。尽管已知使用生物粘附材料将组织再生用基材固定于周围组 织的技术，但是本发明人用被覆材料被覆海绵表面，不仅是作为粘合剂，还是为了使再生部 分与外部隔绝w形成适于体内培养环境的目的。出于相同观点，当鼓膜穿孔与耳道软组织 缺陷的边缘老旧时，则使用手术刀或蛋白质变性剂等使其新鲜化。
[0017] 其结果，即使是常规方法不适用的、缺陷设及大于膜的2/3的鼓膜穿孔和伤口直 径超过2cm的耳道软组织缺陷，在所有病例中也都观察到缺陷的闭合与听力的改善，而没 有观察到后遗症。
[0018] 由上可知，本发明人证实通过组合使用载有bFGF的明胶海绵与被覆材料，即使是 对于常规不可避免地依赖于外科手术的、具有严重鼓膜穿孔或耳道软组织缺陷的患者，也 可W廉价、便利且安全地再生鼓膜与耳道，从而开发了本发明。
[0019] 因此，本发明如下所述：
[1]鼓膜或耳道再生试剂，其包括明胶海棉和被覆材料的组合，其中所述明胶海棉载 有碱性成纤维细胞生长因子。
[0020] [2] [1]所述的试剂，其中所述被覆材料是纤维蛋白胶或者水溶性高分子多糖或 它们的衍生物。
[0021] [3] [2]所述的试剂，其中所述水溶性高分子多糖是几下质、壳聚糖或海藻酸或它 们的盐。
[0022] [4] [1]-[3]中任一项所述的试剂，其中鼓膜穿孔和耳道软组织缺陷的边缘已被 新鲜化。
[0023][引鼓膜或耳道的再生方法，其包括将载有治疗有效量的碱性成纤维细胞生长因 子的明胶海绵留置在患有鼓膜穿孔或耳道软组织缺陷的患者的鼓膜穿孔或耳道软组织缺 陷部分中，并用被覆材料被覆所述海绵。
[0024] [6][引所述的再生方法，其中所述被覆材料是纤维蛋白胶或者水溶性高分子多 糖或它们的衍生物。
[00巧][7] [6]所述的再生方法，其中所述水溶性高分子多糖是几下质、壳聚糖或海藻酸 或它们的盐。
[0026] 閒[5]- [7]中任一项所述的再生方法，其中所述鼓膜穿孔和耳道软组织缺陷的 边缘被预先新鲜化。
[0027] [9]被覆材料和明胶海绵所载有的碱性成纤维细胞生长因子用于制备鼓膜或耳 道再生试剂的用途。
[0028] [10] [9]所述的用途，其中所述被覆材料是纤维蛋白胶或者水溶性高分子多糖或 它们的衍生物。
[0029] [11] [10]所述的用途，其中所述水溶性高分子多糖是几下质、壳聚糖或海藻酸或 它们的盐。
[0030] [12]巧]-[11]中任一项所述的用途，其中鼓膜穿孔和耳道软组织缺陷的边缘已 被新鲜化。 阳0川发明效果 通过使用明胶海绵作为支架材料，可W立体地被覆鼓膜或耳道的整个缺陷部分W实现 缺陷部分的完全被覆。另外，鼓膜组织在明胶海绵中前进的同时再生其本身。因此，根据本 发明，鼓膜或耳道的修复即使在大的或者复杂缺陷的情况下也是可能的。
[0032]用被覆材料被覆明胶海绵表面防止干燥与感染，使得可W形成与外部隔离的良好 培养环境。
[0033] 此外，明胶海绵在1个月内在体内经历水解并消失，有利于鼓膜与耳道软组织的 再生。
[0034] 附图简述
[图1]显示使用本发明鼓膜再生试剂的鼓膜再生治疗的实例的图。A.指出了设及鼓膜 的约2/3的大穿孔。B.使用鼓膜切开刀擦伤鼓膜穿孔的边缘W在周围形成新鲜伤口。C.将 载有bFGF的明胶海绵留置在穿孔部分中并用纤维蛋白胶固定。化在治疗