[0055] 将所述100g的处理物在C18硅胶色谱柱（flash column)中，作为洗脱液采用将 H20(分别为4L)中的MeOH从0依次增加10%至100%的溶液，通过层析进行分离，从而获 得了 11个分馏物（A至K)。其中，合并活性分馏物G(使用60% MeOH ;4g)和H(使用70% MeOH ; IOg)，在如上所述的硅胶色谱柱中作为洗脱液采用将H2O (分别为4L)中的MeOH从0 依次增加10 %至100%的溶液，并反复进行层析，最终获得8个分馏物（GH1至GH8)。
[0056] 分馏物中获得了皂苷分馏物GH5(1.02g)，并将其用在以下试验例中。
[0057] 比较例1
[0058] 未经酶处理的来自绿茶根的提取物的皂苷分馏物的制造
[0059] 除了对绿茶根提取物不进行酶处理之外，采用与上述实施例1相同的方法，获得 了皂苷分馏物样品。
[0060] 试验例1
[0061] 细胞毒性的评价
[0062] 采用CCK8试剂盒（同仁，Dojindo)，确定了在所述实施例1和比较例1中获得的 来自绿茶根的皂苷分馏物的细胞毒性程度。
[0063] 图1中不出了其结果。
[0064] 见图1，确定出以下内容：当将未经酶处理的来自绿茶根的皂苷分馏物（比较例1) 处理成浓度为Ippm时，细胞没有毒性，但是当处理成浓度为IOppm时，细胞具有毒性，因此 不宜使用，与此相反地，当将经酶处理的来自绿茶根的皂苷分馏物（实施例1)处理成浓度 为IOppm时，仍显示出细胞毒性不强。
[0065] 试验例2
[0066] 弹性蛋白酶活性抑制效果的测定
[0067] 将本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物通过与表没食子儿茶素没食子 酸酯（EGCG)做比较而测定了其弹性蛋白酶活性抑制效果。采用的弹性蛋白酶和基质（Cat. No. E0127)是从美国西格玛奥德里奇（Sigma-Aldrich)公司购买的，皂苷分馏物采用了从 实施例1中获得的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物。
[0068] 通过以下方法，试验了弹性蛋白酶活性抑制效果。
[0069] 在96孔板中，由10mg/L的Tris-HCL缓冲液（pH为8. 0)配置的溶液中混合了下 表1中示出的50 μ 1的试验物质和50 μ 1的20 μ g/mL第三类弹性蛋白酶溶液。将250 μ M 的EGCG用作阳性对照组，作为阴性对照组的未处理组使用了蒸馏水。之后，添加100 μ 1的 由上述缓冲液配置的浓度为〇. 4514mg/mL的Suc-丙氨酰-丙氨酰-丙氨酰-对硝基苯胺 (N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE)，在 25°C 中反应 15 分钟。反应结束后，测定了 415nm波长中的吸光度。通过相同方法做空白试验以进行补正。
[0070] 弹性蛋白酶活性抑制效果的计算方法如下述数学式1，结果见表1。
[0071] 数学式1
[0072] 弹性蛋白酶活性抑制率（％ ) = { MC-DV(A-B) } XlOO
[0073] A :当未添加试验样品、添加酶时，在415nm波长中的吸光度
[0074] B :当未添加试验样品、未添加酶时，在415nm波长中的吸光度
[0075] C :当添加试验样品、添加酶时，在415nm波长中的吸光度
[0076] D :当添加试验样品、未添加酶时，在415nm波长中的吸光度
[0077] 表 1
[0078]
[0079] 如上表1中所示，经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物与公知的作为弹性蛋白酶 活性抑制剂的EGCG相比，其弹性蛋白酶活性抑制程度明显优异，因此，能够确定的是本发 明的来自茶树根的皂苷分馏物的弹性蛋白酶活性抑制效果优异。
[0080] 试验例3
[0081] 胶原酶（MMP-I)抑制能力
[0082] 本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物通过与视黄酸做比较，测定了其抑 制产生胶原酶的效果。
[0083] 填充有含2. 5%胎牛血清的密理博（DMEM，Dulbecco, s Modified Eagle's Media) 培养基的96微孔板（96-well microtiter plate)中加入人的成纤维细胞，每个孔（well) 加入5000个细胞，并在5%的C02、37°C培养箱（incubator)中进行培养直到细胞成长至 70 %~80 %。将上述实施例1中的来自茶树根的皂苷分馏物以30 μ g/ml的浓度处理24小 时，之后提取细胞培养液。
[0084] 通过采用市售的胶原酶测定装置（美国安玛西亚法玛西亚公司，Catalog#:RPN 2610)测定已提取的细胞培养液中的胶原酶产生程度。首先，在均匀地涂覆有一次胶原酶 抗体的96孔板（96-well plate)中添加已提取的细胞培养液，在恒温槽中进行抗原-抗体 反应3个小时。3个小时后，将结合有显色基团的二次胶原抗体添加至96孔板中再次反应 15分钟。15分钟后，添加显色物质（3, 3'，5, 5' -四甲基联苯胺（3, 3'，5, 5' -tetramethylb enzidine)，西格玛（sigma))而在室温中诱导显色15分钟，再次加入IM的磺酸而终止显色 反应，此时反应液的颜色呈黄色，根据反应进度的不同，显示出的黄色程度不同。
[0085] 采用分光光度计在405nm中测定呈现出黄色的95孔板的吸光度，通过下述数学式 2计算出胶原酶的合成度，结果见下表2。此时，将来自未处理组合物的组的细胞培养液的 反应吸光度作为对照组。
[0086] 数学式2
[0090] 如上表2中所示，通过与作为胶原酶表达抑制剂的视黄酸相比可知，经酶处理的 来自茶树根的皂苷分馏物的胶原酶表达程度显著地优异。
[0091] 通过这种结果，能够确定本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物具有抑制 基质金属蛋白酶（MMP-I)的效果。
[0092] 剂型例1和比较剂型例1
[0093] 根据下表3的组成，采用通常方法制造了营养霜（单位：重量％ )。
[0094] 表 3
[0097] 试验例4
[0098] 确定皮肤弹性增强效果
[0099] 为了确定人的皮肤弹性增强效果，采用上述剂型例1和比较剂型例1的剂型做了 如下的评价。
[0100] 针对各个剂型例1和比较剂型例1的两个组，将30~40岁的健康女性20人分成 两个组，每组10人，并让她们每天在左脸上涂抹一次营养霜，涂抹共12周，之后采用皮肤弹 性测试仪（Cutometer SEM575, CK电子有限公司，德国）测试皮肤弹性。下表4中示出了其 结果。表4中的结果值记载的是Cutometer SEM575的Δ R8 (R8 (左侧）-R8 (右侧））值，R8 值表示皮肤粘弹性（viscoelasticity)的性能。
[0101] 表 4
[0102]
[0103] 如上表4所示，与涂抹比较剂型例1的组相比，含有本发明的经酶处理的来自茶树 根的皂苷分馏物的剂型例1的皮肤弹性显著增强。
[0104] 因此，能够确定的是含有本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的组合物 对增强皮肤弹性非常有效。
[0105] 试验例5
[0106] 确定皮肤皱纹改善效果
[0107] 为了确定根据本发明的组合物对改善人体皱纹的效果，采用了上述剂型例1和比 较剂型例1。
[0108] 为了确定上述剂型例1和比较剂型例1的皱纹改善效果，做出如下的评价。针对各 个剂型例1和比较剂型例1的两个组，将40多岁的健康女性20人分成两个组，每组10人， 并让她们每天在脸上涂抹一次营养霜，涂抹共12周，之后采用皮肤弹性测试仪测试皮肤弹 性。结果见下表4。表4中的结果值记载的是Cutometer SEM575的Δ R8 (R8 (左侧）-R8 (右 侧））值，R8值表示皮肤粘弹性（viscoelasticity)的性能。采用硅胶制作人脸面具，并通 过皮肤测试仪（visiometer，SV600，Courage+Khazaka electronic GmbH,德国）进行测试 后做了图像分析。结果见下表5。下表5中的值为涂抹12周后的各个参数（parameter)值 减去涂抹前参数值的平均值。
[0109] 表 5
[0111] Rl :皱纹等高线的最大值和最小值的差值
[0112] R2 :将皱纹等高线分成任意的五个区间后的Rl值的平均值
[0113] R3 :分成五个区间后的Rl值中的最大值
[0114] R4 :从皱纹等高线的基准线（baseline)中去除各自的峰值和谷值的平均值
[0115] R5 :从皱纹等高线的基准线中去除各自的皱纹轮廓的值的差值
[0116] 如上表5所示可知，剂型例1的外用剂组合物改善皮肤皱纹的效果非常优异。
[0117] 试验例6
[0118] 气色改善效果
[0119] 为了评价根据本发明的化妆品组合物促进皮肤血液循环的效果，采用激光多普勒 血流仪（LDPI，Laser Doppler Perfusion Imager)测定皮肤中的血液循环程度。LDPI是 公知的测定皮肤中的血液循环的设备，并且作为目前常用的装置，是一种不仅能够测定出 皮肤毛细血管中的血液的流速和流量，而且能够测定出小动脉和小静脉中的流动的非常灵 敏的设备。
[0120] 在恒温恒湿室中，用香皂洗脸后适应30分钟，通过采用LDPI测定初始值。首先， 用LDPI测定平时手脚冰凉的20名女性的额头下部的初始血流量。之后，将20名分成两个 组，每组10名，并且将上述剂型例1和比较剂型例1的两个组分