皮肤外用剂组合物及降低来自茶树的皂苷分馏物的毒性的方法_3

文档序号:9797876阅读:来源:国知局
别用于被试者,使用1周, 之后将比较测出的血流量和所述初始值的结果(皮肤血流量变化)示在下表6中。
[0121] 表 6
[0122] 使用化妆品前后的LDPI结果-皮肤血流量
[0124] 在上表6的结果中,与不含本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的比较 剂型例1相比,剂型例1中的皮肤血流量明显增加,因此能够确定通过这种促进血液循环, 会改善气色。这最终表明含有本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的化妆品组合 物能够有效传递皮肤中的营养物质,并且能够抑制且延迟皮肤老化。
[0125] 试验例7
[0126] 肤色改善效果
[0127] 为了了解上述剂型例1和比较剂型例1的肤色改善效果,将20名分成两个组,每 组各10名,并分别使用上述剂型例1和比较剂型例1的两个组(晚上涂抹,1次/天,共1 周)之后,之后采用Facial Stage DM_3(Moritex,日本)评价肤色改善程度。皮肤改善率 采用皮肤的亮度和色彩测定值和皮肤的亮度和色彩变化值来判断,结果见下表7。
[0128] 表 7
[0130] 在表7的结果中确定出如下内容:不含本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分 馏物的比较剂型例1中没有显示出明显的肤色改善效果,与此相反地,含有作为有效成分 的来自茶树根的皂苷分馏物的剂型例1中,使用后的肤色比使用前改善很多。
[0131] 试验例8毛孔收缩效果
[0132] 〈通过促进胶原蛋白合成的毛孔收缩效果〉
[0133] 根据本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物通过与TGF-β做比较而测定 促进胶原蛋白合成的效果。首先,在24孔板的每个孔中播种(seeding) IO5个成纤维细胞 (fibroblast)而进行培养直到细胞成长至90 %的程度。用无血清DMEM培养基培养24小 时之后,将溶于无血清培养基中的上述实施例1中的来自茶树根的皂苷分馏物和TGF- β分 别处理成10 μ g/mL,并在CO2培养箱中培养24个小时。取这些溶液的上层液,采用I型前 胶原ELISA试剂盒(procollagen type(I)),观察前胶原(procollagen)是否增减。表8中 示出了其结果,胶原蛋白的合成性能通过将未处理组定为100而做了对比。
[0134]表 8
[0136] 在上表8的结果中能够确定出根据本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏 物显示出了高效且优异的胶原蛋白合成性能。因此,根据本发明的经酶处理的来自茶树根 的皂苷分馏物能够增加毛孔周围的胶原蛋白生成量,从而能够收缩变大的毛孔。
[0137] 〈毛孔收缩效果〉
[0138] 为了了解剂型例1和比较剂型例1的收缩毛孔的效果,进行了如下评价。选定毛 孔大的被试者男女20人,分成两组,每组各10人,并按每个组在脸上每天涂抹剂型例1和 比较剂型例1的营养霜,共涂抹4周。实验前和4周后分别照相,通过专家的肉眼评价,以 判断毛孔收缩效果。其结果见下表9 (评价等级:0_完全没有收缩;5-收缩很多)
[0139] 表 9
[0141] 从上表9中可知,比较剂型例1中没有毛孔收缩效果,但是剂型例1中显示出用肉 眼都能够确定的程度的毛孔收缩效果,因此,根据本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷 分馏物减少毛孔大小的效果优异。
[0142] 试验例9
[0143] 抑制皮脂分泌的效果
[0144] 〈通过抑制5 α -还原酶活性的抑制皮肤过度分泌的效果〉
[0145] 为了确定抑制5 α -还原酶活性的效果,测定了在ΗΕΚ293-5 a R2细胞中[14C] 睾甾酮转变成[14C]双氢睾酮的比率。在ΗΕΚ293细胞中转染p3XFLAG-CMV-5aR2,并 将其加入24孔板中进行培养,每个孔添加2. 5X IO5个细胞(Park et al.,2003, JDS. Vol. 31,pp. 191-98)。第二天,更换成添加有酶基质和抑制剂的新的培养基。培养基的基质 米用了 0.05yCi[14C]睾留酮(Amersham Pharmacia biotech,英国)。
[0146] 为了确定抑制5α_还原酶活性的效果,作为试验物质加入了上述实施例1中 的来自茶树根的皂苷分馏物,并在37°C、5% 0)2的培养箱中培养2个小时。此时,未添 加经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的培养液用作阴性对照组,将添加有非那雄胺 (finasteride)的培养液作为阳性对照组。之后,提取培养液,通过800 μ 1的乙酸乙酯提取 类固醇,之后分离上部的有机溶剂层并烘干,之后再次采用50 μ 1的乙酸乙酯溶化剩余的 残留物,从而在二氧化娃塑料板硅胶60 F254(Silica plastic sheet kieselgel 60 F254) 上以乙酸乙酯-核酸(1:1)作为溶剂而展开。
[0147] 将塑料样品在空气中进行干燥,之后为了测定同位素的含量,采用巴斯系统,其 中,将干燥的塑料样品和X光胶片一同加入至巴斯盒子中,一周后测定残留在胶片上的睾 甾酮和双氢睾酮的同位素含量,之后根据下述数学式3和数学式4计算出转换率和抑制率, 结果见下表10。
[0148] 数学式3
[0154] 在表10的结果中可以确定出如下内容
:5 α -还原酶使睾甾酮转换成双氢睾酮 而与细胞质内的收容体蛋白质结合,并进入细胞核内而激活皮脂腺细胞并促进分化,从而 5α_还原酶具有在皮脂腺内起到过度分泌皮脂的作用,而根据本发明的经酶处理的来自茶 树根的皂苷分馏物能够有效地抑制5 α _还原酶的活性,因此,能够阻断睾留酮转换成双氢 睾酮。因此,根据本发明的经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物能够有效地抑制5 α _还原 酶的活性,从而抑制皮脂过度分泌。
[0155] 〈抑制皮脂分泌的效果〉
[0156] 为了了解上述剂型例1和比较剂型例1的抑制皮脂分泌的效果,进行了如下评 价。选定自认为皮脂分泌多的被试者男女20人,分成两个组,每个组10人,并按每个组在 指定的部位上每天涂抹剂型例1和比较剂型例1的营养霜,涂抹4周。采用皮脂量测量仪 (Sebumeter SM810,C+K Electronic Co.,德国)分别测定经过2周后和经过4周后的平均 皮脂减少率(% ),从而判断皮脂减少的效果,结果见下表11。
[0157] 表 11
[0158]
[0159] 从上表11的结果中可知,含有作为有效成分的根据本发明的经酶处理的来自茶 树根的皂苷分馏物的剂型例1与不含其的比较剂型例1相比,能够有效地抑制皮脂过度分 泌。
[0160] 试验例10
[0161] 测定增强皮肤保湿能力的效果
[0162] 为了测定经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物对增强皮肤保湿能力的效果,采用 上述剂型例1和比较剂型例1,并做出如下评价。
[0163] 将分类为干燥性皮肤的40-50岁的成人男女20人,每组10人,并在脸上分别按照 剂型例1和比较剂型例1的两个组涂抹营养霜,每天两次,共涂抹4周。在涂抹开始前、涂抹 后经过1周、2周、4周以及终止涂抹后经过2周后(总共经过6周),在恒温、恒湿(24°C、相 对湿度为40% )条件下,采用皮肤水分含量测量仪(Corneometer CM825,C+K Electronic Co.,德国)测定皮肤水分含量。结果见下表12。表12的结果是以刚要开始试验前测定的皮 肤水分含量的测定值为基准,并经过一定时间后的测定值的增加量的百分率进行表示的。
[0164] 表 12
[0166] 见上表12的结果可知,当涂抹比较剂型例1时,涂抹4周时显示出约30%的水分 增加率,但是终止涂抹后,皮肤水分含量急剧减少,与此相反地,当涂抹含有经酶处理的来 自茶树根的皂苷分馏物的剂型例1时,终止涂抹之后,大部分仍显示出30%以上的皮肤水 分增加率。由此可知,含有经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的本发明的组合物的皮肤 保湿效果优异。
[0167] 试验例11
[0168] 测定促进角质形成细胞分化的效果
[0169] 为了 了解经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物的促进角质形成细胞分化的效果, 如下,采用吸光度测定角质形成细胞分化时生成的角质化包膜(CE,Cornified Envelop)的 含量。
[0170] 首先,将从新生儿的表皮上分离而进行一次培养的人的角质形成细胞加入至培养 瓶中,并使角质形成细胞附着在瓶底上,将经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物在培养液 中以5ppm的浓度进行处理后,培养5天直至细胞成长到平底面积的70~80 %的程度。此 时,将低钙(〇.〇3mM)处理组和高钙(1.2mM)处理组分别做为阴性对照组和阳性对照组。之 后,提取上述培养出的细胞,采用磷酸盐缓冲液(PBS,Phophate buffered saline)进行洗 涤,之后添加 ImL含有2%十二烷基硫酸钠(SDS,sodium dodecyl sulfate)和20mM浓度 的二硫苏糖醇(DTT,Dithiothreitol)的IOmM浓度的Tris-盐酸缓冲液(Tris-HCl,pH为 7. 4),并进行超声波(sonication)、煮沸(boiling)、离心,将沉淀物再次在Iml的PBS中进 行沉淀,从而测定340nm中的吸光度。与上述操作单独地,取进行所述超声波后的部分溶 液,测定蛋白质含量,并将其作为细胞分化程度评价时的基准。结果见下表13。
[0171]表 13
[0173] 如上表13所示,能够确定当处理经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物时,促进角 质形成细胞分化的效果优异。
[0174] 试验例12
[0175] 测定恢复皮肤障壁功能的效果
[0176] 为了测定经酶处理的来自茶树根的皂苷分馏物对因皮肤损伤而损坏的皮肤障壁 功能的恢复所给予的效果,进行了如
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