聚乙二醇化的氧化石墨烯-卟啉二聚体盐复合物及其用图_3

文档序号:9819279阅读:来源:国知局
将由研究人员或临 床医师根据合理医学判断来确定。具体的有效量将取决于许多因素,例如,所治疗的疾病的 种类和严重程度;所用的具体复合物;所用的治疗光波长、光能流率和照射时间;患者的年 龄、体重、一般健康状况;治疗的持续时间;合并用药;以及医学领域中众所周知的其它因 素。在某些情况下,有效量可能高于上述范围的上限或低于上述范围的下限。 实施例
[0084] 下文提供了本发明的复合物的一些实例及其制备方法、活性测试。提供这些实施 例的目的在于使本领域技术人员能够更加清楚地理解和实施本发明,而不是限制本发明的 范围。
[0085] 下列实施例中所使用的DVDMS-1、DVDMS-2和DVDMS-3是按照中国专利 200910179116. 5中所公开的方法制备的。
[0086] 实施例1
[0087] (l)GO-PEG-DVDMS-l 的合成
[0088] 按照文献(Yang K, Feng L, Hong H, Cai W, Liu Z. Preparation and functionalization of graphene nanocomposites for biomedical applications. Nat Protoc. 2013 ;8:2392-403 ;Hummers Jr WS,Offeman RE.Preparation of graphitic oxide. J Am Chem Soc. 1958 ;80:1339)中报道的改良的Hummers方法合成GO。简言之, 将2-5g石墨粉(国药集团化学试剂北京有限公司,分子量12. 01,粒度为多95%的颗粒 彡30 μm,碳含量彡99. 85% )加入到在冰浴中冷却着的37. 5ml浓硫酸(95% )中,搅拌并 逐渐加入6. 25gKMn0jP 3g NaNO 3, 35°C搅拌lh。加入去离子水并将温度升高至90°C搅拌 lh。用去离子水和30% H202混合物终止反应。所得产物用HC1水溶液和去离子水洗涤,用 100kD超滤管超滤离心(3000rpm) 3次,得到横径20_200nm、厚度0· 5_5nm范围内的氧化石 墨烯,将终产物溶于去离子水中备用。
[0089] 在25ml玻璃瓶中,向上述步骤获得的G0溶液(lmg/ml,5ml)中加入25mg PEG2000(Sigma)。将该混合物超声10-20min,加入羧基活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐水溶液(EDC, Sigma)(终浓度为10mg/ml)。于室温搅拌过夜,通过于 lOOOrpm离心去除聚集物,收集上清液。所得PEG化的G0溶液用100kD超滤管(Millipore Inc)纯化,用去离子水清洗。利用GO在230nm处的吸光度测定GO-PEG的浓度。光谱测定 结果显示在所生成的GO-PEG中G0与PEG的重量比为1:3。
[0090] 将10mg DVDMS-1溶解于1ml水中作为备用溶液。按照G0-PEG:DVDMS-1的重量比= 0. 5:1的比例,将DVDMS-1水溶液(0. 4mg/ml)和磷酸盐缓冲盐水(PBS) (0. 02M) (pH 7. 4)缓 慢加入到上面得到的GO-PEG水溶液(0. lmg/ml)中,反应6-12小时,生成G0-PEG-DVDMS-1。 用100kD超滤管(Millipore Inc)离心,从而获得G0-PEG-DVDMS-1复合物,将其用纯水清 洗6-8次。在所得的G0-PEG-DVDMS-1中GO-PEG与DVDMS-1的重量比是0. 5:1。
[0091] (2)G0-PEG-DVDMS 的表征
[0092] 利用原子力显微镜(AFM, Veeco Instruments, Inc, Multimode 8)测定了如上所述 合成的G0-PEG-DVDMS-1的形貌。根据DVDMS-1在516nm处的特征性吸收峰测定了 GO-PEG 上装载的DVDMS-1的浓度。使用F-7000荧光分光光度计测定DVDMS-1和G0-PEG-DVDMS-1 在385nm波长激发下的荧光光谱,并且根据光学吸收和荧光光谱分析GO-PEG和DVDMS-1之 间的相互作用。结果如图2和图3所示。
[0093] 图2是如上所述合成的GO-PEG(A)和G0-PEG-DVDMS-1 (B)的AFM图,其显示反应 前GO-PEG的厚度为1. 5nm,反应后得到的产物G0-PEG-DVDMS-1的厚度增加到了 2nm,由此 可见DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面,导致其增厚。
[0094] 图 3 显示了 G0-PEG-DVDMS-1 (a)、DVDMS-1 (b)和 GO-PEG (c)的吸收光谱,其中 GO-PEG在230nm处有一个明显的峰;DVDMS-1在385nm处有很强的吸收峰,Q带在500nm至 700nm之间;G0-PEG-DVDMS-1的紫外-可见光吸收光谱是DVDMS-1和GO-PEG二者的重叠。 然而,G0-PEG-DVDMS-1的特征性吸收峰与DVDMS-1的吸收峰并不完全一致,在430nm处有 一个新的峰出现,这很可能是由于DVDMS-1分子上的两个卟啉环之间空间的阻隔作用使其 中一个环吸附在G0表面而另一个环与G0隔离所造成的。此外,在反应后超滤液体的吸收 光谱中并没有检测到游离的DVDMS-1的特征性吸收峰,表明游离的DVDMS-1在该比例反应 下完全装载在GO-PEG纳米复合物上。
[0095] 实施例2
[0096] 按照实施例1(1)中所述的方法,用DVDMS-2替换DVDMS-1,制备了 G0-PEG-DVDMS-2,并且按照实施例1(2)中所述的方法对G0-PEG-DVDMS-2进行了表征。
[0097] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-2 中 GO-PEG 与 DVDMS-2 的重量比是 0· 5:1。
[0098] G0-PEG-DVDMS-2的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM 图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-2的厚度为2nm,DVDMS-2成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0099] 实施例3
[0100] 按照实施例1(1)中所述的方法,用DVDMS-3替换DVDMS-1,制备了 G0-PEG-DVDMS-3,并且按照实施例1(2)中所述的方法对G0-PEG-DVDMS-3进行了表征。
[0101] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-3 中 GO-PEG 与 DVDMS-3 的重量比是 0. 5:1。
[0102] G0-PEG-DVDMS-3的AFM图和吸收光谱与实施例1制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM 图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-3的厚度为2nm,DVDMS-3成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0103] 实施例4
[0104] 按照实施例1(1)中所述的方法制备了 G0-PEG-DVDMS-1,不同之处在于反应中所 使用的G0-PEG:DVDMS-1的重量比=0. 1:1,并且按照实施例1 (2)中所述的方法对所制备的 G0-PEG-DVDMS-1 进行了 表征。
[0105] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-1 中 GO-PEG 与 DVDMS-1 的重量比是 0. 1:1。
[0106] 本实施例中所制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-1的厚度为2nm, DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0107] 实施例5
[0108] 按照实施例1(1)中所述的方法制备了 G0-PEG-DVDMS-1,不同之处在于反应中所 使用的G0-PEG:DVDMS-1的重量比=1:1,并且按照实施例1(2)中所述的方法对所制备的 G0-PEG-DVDMS-1 进行了 表征。
[0109] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-1 中 GO-PEG 与 DVDMS-1 的重量比是 1:1。
[0110] 本实施例中所制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-1的厚度为2nm, DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0111] 实施例6
[0112] 按照实施例1(1)中所述的方法制备了 G0-PEG-DVDMS-1,不同之处在于反应中所 使用的G0-PEG:DVDMS-1的重量比=2:1,并且按照实施例1(2)中所述的方法对所制备的 G0-PEG-DVDMS-1 进行了 表征。
[0113] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-1 中 GO-PEG 与 DVDMS-1 的重量比是 2:1。
[0114] 本实施例中所制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-1的厚度为2nm, DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0115] 实施例7
[0116] 按照实施例1 (1)中所述的方法制备了 G0-PEG-DVDMS-1,不同之处在于将PEG2000 替换为PEG6000 (Sigma),并且按照实施例1 (2)中所述的方法对所制备的G0-PEG-DVDMS-1 进行了表征。
[0117] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-1 中 GO-PEG 与 DVDMS-1 的重量比是 0. 5:1。
[0118] 本实施例中所制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-1的厚度为2nm, DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0119] 实施例8
[0120] 按照实施例1 (1)中所述的方法制备了 G0-PEG-DVDMS-1,不同之处在于将PEG2000 替换为PEG10000 (Sigma),并且按照实施例1 (2)中所述的方法对所制备的G0-PEG-DVDMS-1 进行了表征。
[0121] 在所得的 G0-PEG-DVDMS-1 中 GO-PEG 与 DVDMS-1 的重量比是 0. 5:1。
[0122] 本实施例中所制备的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱与实施例1中制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图和吸收光谱基本相同,其显示G0-PEG-DVDMS-1的厚度为2nm, DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表面(未重复提供相关图片)。
[0123] 实施例9
[0124] (1)单线杰氣检测:
[0125] 使用单线态氧检测试剂盒(Life Technology, MP36002)检测实施例1和4-6中 所制备的各种G0-PEG-DVDMS-1和游离的DVDMS-1所产生的单线态氧。将G0-PEG-DVDMS-1 或游离的DVDMS-1水溶液与检测试剂水溶液(终浓度为1. 0 μ M)混合。按照DVDMS-1的 量计算,每个样品中的DVDMS-1浓度均为0. 5 μ g/ml。然后用630nm激光器照射上述溶 液。用 F-7000 焚光分光光度计测定 S0SG(Singlet Oxygen Sensor Green)在 485nm 波 长激发下的发生光谱。通过S0SG焚光增强评价样品的单线态氧生成(singlet oxygen generation, S0G)〇
[0126] ⑵结果:
[0127] 单线态氧检测实验的结果如图4所示。随着GO-PEG所占比例的变化(以重量计, G0-PEG:DVDMS-1 = 0. 1:1 ~2:1),实施例 1 和 4-6 中所制备的 G0-PEG-DVDMS-1 的荧光强 度比游离的DVDMS-1 ( 即,图4中所示的G0-PEG:DVDMS-1 = 0:1的情况)的荧光强度高3-5 倍。这种荧光增强使得可以实时监测DVDMS-1在体内的运输和分布情况,并且使得荧光成 像指导下的TOT的效果被增强。
[0128] 另外,通过单线态氧试剂盒检测G0-PEG-DVDMS-1所产生的单线态氧还可确认 G0-PEG-DVDMS-1的光动力学效果。在该实验中还发现S0SG的荧光强度随着时间逐渐增 强,这说明G0-PEG-DVDMS-1在激光照射下产生了单线态氧。当G0-PEG-DVDMS-1中所含 的DVDMS-1与游离的DVDMS-1的
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