行激光照射的G0-PEG-DVDMS-1处理组和不进行激光照射的游离的 DVDMS-1处理组均不能抑制肿瘤生长，并且这五个对照组的动物存活时间是12天。激光照 射的游离的DVDMS-1处理组的动物寿命期限延长到3周。激光照射的G0-PEG-DVDMS-1处 理组的动物寿命期限超过一个月，并且在观察期间没有观察到明显的细胞毒性，也没有体 重减轻。
[0162] 激光照射24h后，所有组的动物均取肿瘤做苏木精-伊红染色（HE染色）。与激 光照射的游离的DVDMS-1处理组相比，所有激光照射的G0-PEG-DVDMS-1处理组的细胞坏 死更多，表现为例如肿瘤细胞萎缩、与周围组织脱离、出现嗜酸性细胞质、核破裂。各对照 组的肿瘤没有区别。不同组的小鼠的主要脏器HE染色结果表明，实施例1、7、8中制备的 G0-PEG-DVDMS-1注射后进行激光照射均没有毒性损伤和炎症存在。
[0163] 总之，上述实验结果显示，用GO-PEG装载卟啉二聚体盐（例如DVDMS)后，使卟啉 二聚体盐的荧光显著增强，因此本发明的PEG修饰的G0装载的卟啉二聚体盐能够通过增强 的荧光成像更好地指导roT。同时，GO-PEG还能促进卟啉二聚体盐（例如DVDMS)在肿瘤部 位的富集。因此，本发明的GO-PEG-卟啉二聚体盐在整合纳米药物运输、活体成像、光动力 学治疗方面、从而在高效治疗肿瘤方面具有巨大的潜能。
[0164] 实施例13
[0165] GO-PEG-卟啉二聚体盐注射剂的制备
[0166] 称取一定量的GO-PEG-卟啉二聚体盐，置于避光玻璃容器中，加注射用水溶解， 按卟啉二聚体盐的量计浓度为5 μ g/ml。在无菌操作间，经孔径为0. 22 μπι的薄膜过滤器 (Sigma)过滤，将溶液定量分装于10ml的玻璃安瓶中。
【附图说明】
[0167] 图1 (A)是G0-PEG-DVDMS的合成路径示意图，其中通过改良的Hmmers法以片状可 膨胀石墨为原料制备了 G0,然后PEG与G0通过氨基羧基偶联反应相连，形成G0-PEG，从而 提高G0的水溶性、稳定性和生物相容性。随后，通过疏水性相互作用和31-31堆积作用将 DVDMS装载到GO-PEG中G0的表面；图1 (B)是G0-PEG-DVDMS的结构示意图。需要说明的 是，DVDMS分子的两个环中的一个环通过JT-JT共辄连在石墨烯上，处理为黑色之后在图1 中变得不明显。
[0168] 图2 (A)是实施例1中所制备的GO-PEG的AFM图，图2 (B)是实施例1中所制备 的G0-PEG-DVDMS-1的AFM图，其显示反应前GO-PEG的厚度为1. 5nm，反应后得到的产物 G0-PEG-DVDMS-1的厚度增加到了 2nm，由此可见DVDMS-1成功地装载延伸了 GO-PEG的表 面，导致其增厚。
[0169] 图 3 是实施例 1 中制备的 G0-PEG-DVDMS-1 (a)、DVDMS-1 (b)和 GO-PEG(c)的吸收 光谱，其中GO-PEG的浓度为2. 5 μ g/ml，按DVDMS-1的量计算，G0-PEG-DVDMS-1中所含的 DVDMS-1和游离的DVDMS-1的浓度均为5 μ g/ml。
[0170] 图4显示了 DVDMS-1在620nm的荧光强度以及实施例1和4-6中所制备的不同 比例的G0-PEG-DVDMS-1在640nm的荧光强度，横坐标是G0-PEG-DVDMS-1中GO-PEG与 DVDMS-1的重量比，纵坐标是荧光强度。按DVDMS-1的量计算，每个样品中的DVDMS-1浓度 均为 0· 5 μ g/ml。
[0171 ] 图5 (A)是将肿瘤细胞用含实施例1中所制备的G0-PEG-DVDMS-1和游离的 DVDMS-1 (按DVDMS-1的量计算，每个样品中的DVDMS-1浓度均为1 μ g/mL)的培养基避光培 养24h之前和之后的荧光照片，可以清楚地看出用G0-PEG-DVDMS-1处理的细胞比用游离的 DVDMS-1处理的细胞荧光更强。图5 (B)是U87MG肿瘤细胞用G0-PEG-DVDMS-1和DVDMS-1 (按 DVDMS-1的量计算，每个样品中的DVDMS-1浓度均为1 μ g/mL)处理24h的流式细胞仪计数 分析平均荧光强度，其中（a)是处理前的曲线，（b)是用DVDMS-1处理24h的曲线，（c)是用 实施例1中制备的G0-PEG-DVDMS-1处理24h的曲线。
[0172] 图6(A)显示了用不同浓度的游离的G0-PEG、游离的DVDMS-1、实施例1中所制备 的G0-PEG-DVDMS-1孵育的细胞活性；图6(B)显示了用不同浓度的游离的G0-PEG、游离的 DVDMS-1、实施例1中所制备的G0-PEG-DVDMS-1孵育并用630nm激光照射后的细胞活性；图 6 (C)是用钙黄绿素 AM/碘化丙啶染色的照片，显示了实施例7中所制备的G0-PEG-DVDMS-1 杀灭肿瘤细胞的效果，其中最左侧的照片是对照组的染色照片，中间的照片是用实施例7 中所制备的G0-PEG-DVDMS-1 (按DVDMS-1的量计算，所含的DVDMS-1浓度为0. 5 μ g/ml)处 理的细胞的染色照片，最右侧的照片是用实施例7中所制备的G0-PEG-DVDMS-1 (按DVDMS-1 的量计算，所含的DVDMS-1浓度为5 μ g/ml)处理的细胞的染色照片，照片中浅色的斑点是 活的肿瘤细胞。
[0173] 图7显示了使用分子成像系统观察到的实施例1中所制备的G0-PEG-DVDMS-1和 游离的DVDMS-1在注射前、注射后2h、6h、24h的体内分布情况，其中按DVDMS-1的量计算， 静脉注射DVDMS-1的量为2mg/kg体重。
【主权项】
1. GO-阳G-化嘟二聚体盐复合物，其中： GO是氧化石墨締； PEG是聚乙二醇，其分子量为200-20000,优选2000-12000 ;且 化嘟二聚体盐是式（1)、（2)或（3)的化合物，其中 R独立地选自Cl e烷基、C 2 e链締基、C 2 e烘基、C 1 e烷氧基和C 1 e酷基，其任选地被一个 或多个选自面素和径基的取代基取代， M是碱金属、碱±金属或NH/， P是M的化合价数的倒数。2. 如权利要求1所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中R独立地选自任选被一个 或多个径基取代的Cl e烷基、C 2 e链締基、C 2 e烘基和C 1 e酷基，M是碱金属或NH /，且P是1。3. 如权利要求2所述的GO-阳G-化嘟二聚体盐复合物，其中R独立地选自-CH = 邸2、-CH (OH)邸3和-COCH 3, M是碱金属或畑/，且P是1。4. 如权利要求3所述的GO-阳G-化嘟二聚体盐复合物，其中R独立地选自-CH = CH 2 和-CH (OH)邸3, M是碱金属或畑/，且P是1。5. 如权利要求1-4中任意一项权利要求所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中M 是碱金属。6. 如权利要求5所述的GO-阳G-化嘟二聚体盐复合物，其中M是化或K。7. 如权利要求1所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中所述的化嘟二聚体盐选 自： 二[1-[6, 7-二丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基]酸值VDMS-1)， 二[1-[6, 7-二丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基]酸值VDMS-2)， 1-[6, 7-二丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基1-[6'，7' -二丙酸 钢-1'，3'，5'，8' -四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基酸值VDMS-3)， 二[1-[6, 7-二丙酸钟-1，3, 5, 8-四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基]酸， 二[1-[6, 7-二丙酸钟-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基]酸， 1-[6, 7-二丙酸钟-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基1-[6'，7' -二丙酸 钟-1'，3'，5'，8' -四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基酸， 二[1-[6, 7-二丙酸锭-1，3, 5, 8-四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基]酸， 二[1-[6, 7-二丙酸锭-1, 3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基]酸， 1-[6, 7-二丙酸锭-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基1-[6'，7' -二丙酸 锭-1'，3'，5'，8' -四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基酸，和 它们中两种或更多种的混合物。8. 如权利要求1所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中所述的化嘟二聚体盐选 自二[1-[6, 7-二丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-4-乙締基-2-化吩]乙基]酸值VDMS-1)、二 [1-[6, 7-二丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基]酸值VDMS-。、1-[6, 7-二 丙酸钢-1，3, 5, 8-四甲基-2-乙締基-4-化吩]乙基1-[6'，7'-二丙酸钢-1'，3'，5'，8'-四 甲基-4'-乙締基-2'-化吩]乙基酸值VDMS-3) W及它们中两种或S种的混合物。9. 如权利要求1-8中任意一项权利要求所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中GO 与PEG的重量比是1:1 - 1:8,优选1:2 - 1:4,更优选1:3。10. 如权利要求1-9中任意一个实施方案所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中 GO-PEG与化嘟二聚体盐的重量比是0. 1:1、0. 或2:1，优选0. 5:1。11. 如权利要求1-9中任意一个实施方案所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中 所述的GO-PEG与化嘟二聚体盐是通过包括W下步骤的方法制备的：将化嘟二聚体盐的水 溶液与GO-PEG水溶液混合并反应6-12小时（例如在抑5-8、优选抑7. 4下反应），然后用 IOOkD的滤器过滤，获得GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物。12. 如权利要求11所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物，其中反应中加入的GO-PEG与 化嘟二聚体盐的重量比是0. 1:1、〇. 5:1、1:1或2:1，从而分别获得其中GO-PEG与化嘟二聚 体盐的重量比是0. 1:1、〇. 或2:1的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物。13. 药物组合物，其包含权利要求1-12中任意一项权利要求所述的GO-阳G-化嘟二聚 体盐复合物，并且任选地包含可药用的载体。14. 权利要求1-12中任意一项权利要求所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物在制备药 物中的用途，所述药物用在巧光成像和光动力疗法中、特别是用在巧光指导下的光动力疗 法中，用于治疗或诊断恶性肿瘤、癌前病变、良性病变。15. 如权利要求14所述的用途，其中所述的恶性肿瘤是实体瘤。16. 如权利要求15所述的用途，其中所述的实体瘤选自膀脫癌、食管癌、支气管癌、口 腔颂面部癌、鼻咽癌、肋膜间皮瘤、肝癌、膜腺癌、皮肤癌、阴茎癌、宫颈癌、乳腺癌及乳腺癌 切除术后皮下转移结节、肛周肿瘤及肛周肿瘤扩大切除术后癌残留、卡波西肉瘤、肺癌、胃 癌、胆管癌、前列腺癌、黑素瘤和脑肿瘤。17. 如权利要求14所述的用途，其中所述的癌前病变是己雷特氏食管和口腔粘膜白 斑。18. 如权利要求14所述的用途，其中所述的良性病变选自老年性眼底黄斑病变、动脉 粥样硬化斑块、类风湿性关节炎、皮肤微血管崎形、牛皮癖和红斑狼疮皮损。19. 药盒，其包含权利要求1-12中任意一项权利要求所述的GO-PEG-化嘟二聚体盐复 合物；W及将其用于巧光成像或光动力疗法、特别是巧光指导下的光动力疗法的说明书。20. 制备权利要求1-9中任意一项权利要求所述的GO-阳G-化嘟二聚体盐复合物的方 法，其包括W下步骤：将化嘟二聚体盐的水溶液与GO-PEG水溶液混合并反应6-12小时（例 如在抑5-8、优选抑7. 4下反应），然后用IOOkD的滤器过滤，从而获得所述的GO-PEG-化 嘟二聚体盐复合物。21. 如权利要求20所述的方法，其中反应中加入的GO-PEG与化嘟二聚体盐的重量比是 0. 1:1、0. 5:1、1:1或2:1、优选0. 5:1，从而分别获得其中GO-PEG与化嘟二聚体盐的重量比 是0. 1:1、0. 或2:1、优选0. 5:1的GO-PEG-化嘟二聚体盐复合物。
【专利摘要】本发明涉及聚乙二醇化的氧化石墨烯-卟啉二聚体盐复合物及其用途。具体地，本发明涉及新的光敏剂复合物以及其在制备用于光动力疗法的药物中的用途。更具体地，本发明涉及聚乙二醇化的氧化石墨烯与卟啉二聚体盐的复合物、其制备方法、包含其的药物组合物及其在制备用于荧光成像和光动力疗法的药物中用途。
【IPC分类】A61P35/00, A61K41/00, A61K47/34, A61K49/00
【公开号】CN105582541
【申请号】CN201410561479
【发明人】陈小元, 张绍良, 闫雪峰, 黄鹏, 刘刚, 黄超
【申请人】张绍良
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2014年10月21日