茶叶中提取茶多酚的新型工艺的制作方法_2

文档序号:9852104阅读:来源:国知局
聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/v) =9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物一。
[0031]②表没食子儿茶素的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、
3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.4584g表没食子儿茶素(EGC),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于O °C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/v) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物二。
[0032]③表儿茶素没食子酸酯的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.4584g表儿茶素没食子酸酯(ECG),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于0°C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/V) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物三。
[0033]④表没食子儿茶素没食子酸酯的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.4584g表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于0°C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/V) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物四。
[0034](5)利用高效液相色谱检测印迹聚合物对儿茶素的吸附能力:分别取10mg分子印迹聚合物一、印迹聚合物二、印迹聚合物三、印迹聚合物四,分别将其悬浮在3mL甲醇中,超声震荡lOmin,然后依次装入自制聚四氟乙稀固相萃取柱(60mmX8mm 1.d.)中,萃取柱下端用多孔性的陶瓷支撑。填装好的萃取柱用15mL V(甲醇):V(乙酸)=1:8溶液清洗,流速控制在0.lmL/min。清洗过的柱子真空干燥备用。配制0.lmg/mL茶多酸溶液加入萃取柱中,以0.lmL/min的流速流过。上载后萃取柱用V(甲醇):V(水)=1:9溶液洗脱,收集液用微滤膜过滤后以HPLC检测,流动相为V(甲醇):V(乙酸):V(水)=24.5:0.5:75,流速为0.8mL/min,进样量为6 μ L,检测波长265nm。
[0035](6)中试试车:按照研究好的小试工艺进行放大试生产,调整中试的工艺参数,确定茶叶中多酚的提取精制工艺。若茶叶总量为100g,洗脱液中的儿茶素的总量为13g,得回收率为13%,儿茶素的纯度为100%。
[0036]实施例1
[0037]一种茶叶中提取茶多酚的新型工艺,包括以下步骤:
[0038](I)茶叶的破碎处理:向茶叶中加入一定量的复合酶对茶叶体细胞进行破碎处理;所述的复合酶包括以下重量组分:0.1?0.3%纤维素酶、0.1?0.3%半纤维素酶、0.1?0.3%果胶酶,步骤(I)生物茶叶的破碎处理的酶解温度50?55°C,酶解时间30?45min0
[0039](2)茶多酚的初步提取:将步骤(I)中处理过的茶叶利用超声波进行辅助提取茶多酸;米用乙醇进行茶多酸的初步提取,初步提取过程中超声波功率为2800?3200W,时间10 ?15min,温度 45 ?55°C。
[0040](3)茶多酚的初步纯化:采用截留分子量在100Da以上的中空纤维膜,将大分子量的蛋白质,核酸等物质与分子量较小的儿茶素等多酚物质进行分离。
[0041](4)采用分子印迹方法合成茶多酚主要成分儿茶素的印迹聚合物:
[0042]①表儿茶素的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.5501g表儿茶素(EC),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于0°C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/v) =9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物一。
[0043]②表没食子儿茶素的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、
3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.550Ig表没食子儿茶素(EGC),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于O °C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(V/V) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物二。
[0044]③表儿茶素没食子酸酯的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.5501g表儿茶素没食子酸酯(ECG),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于0°C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/v) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物三。
[0045]④表没食子儿茶素没食子酸酯的印迹聚合物的制备过程为:称量1.3774ga-甲基丙烯酸、3.9600g乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.5501g表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),然后加入2mL的无水乙醇和2mL的氯仿,向混和溶液中通入N220min后密封于0°C、366nm紫外灯光照射下聚合48h,使聚合物反应完全,得到固体印迹聚合物;将制备好的聚合物粉碎,过筛后进行索氏提取,再用甲醇:乙酸(v/v) = 9:1的溶液进行洗脱,洗脱速度5mL/min,在索氏提取器中回流24h,除去印迹分子,干燥备用,将得到印迹聚合物四。
[0046](5)利用高效液相色谱检测印迹聚合物对儿茶素的吸附能力:分别取10mg分子印迹聚合物一、印迹聚合物二、印迹聚合物三、印迹聚合物四,分别将其悬浮在3mL甲醇中,超声震荡lOmin,然后依次装入自制聚四氟乙稀固相萃取柱(60mmX8mm 1.d.)中,萃取柱下端用多孔性的陶瓷支撑。填装好的萃取柱用15mL V(甲醇):V(乙酸)=1:8溶液清洗,流速控制在0.lmL/min。清洗过的柱子真空干燥备用。配制0.lmg/mL茶多酸溶液加入萃取柱中,以0.lmL/min的流速流过。上载后萃取柱用V(甲醇):V(水)=1:9溶液洗脱,收集液用微滤膜过滤后以HPLC检测,流动相为V(甲醇):V(乙酸):V(水)=24.5:0.5:75,流速为0.8mL/min,进样量为6 μ L,检测波长265nm。
[0047](6)中试试车:按照研究好的小试工艺进行放大试生产,调整中试的工艺参数,确定茶叶中多酚的提取精制工艺。若茶叶总量为100g,洗脱液中的儿茶素的总量为14.6g,得回收率为14.6%,儿茶素的纯度为100%。
[0048]实施例2
[0049]一种茶叶中提取茶多酚的新型工艺,包括以下步骤:
[0050](I)茶叶的破碎处理:向茶叶中加入一定量的复合酶对茶叶体细胞进行破碎处理;所述的复合酶包括以下重量组分:0.1?0.3%纤维素酶、0.1?0.3%半纤维素酶、0.1?0.3%果胶酶,步骤(I)生物茶叶的破碎处理的酶解温度50?55°C,酶解时间30?45min0
[0051](2)茶多酚的初步提取:将步骤(I)中处
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