一种两亲性胶束纳米囊及其制备方法和应用

一种两亲性胶束纳米囊及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明提供了一种具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊，并提供了所述两亲性胶束纳米囊的制备方法，以羧基化甲氧基聚乙二醇?b?聚丙交酯?乙交酯和氨基化β?环糊精为原料，在保护气氛中进行反应，得到所述两亲性胶束纳米囊。同时，本发明还提供了所述两亲性胶束纳米囊在制备载药胶束中的应用。本发明提供的两亲性胶束纳米囊具有“外亲水、内疏水”的核壳结构，可以对药物进行有效的包覆，包封率较高；利用载药胶束在给药过程中，能够有效提高药物的载药量和药物输送率，可控制药物的缓慢释放，长时间维持药效，提高药物的生物利用率。
【专利说明】
一种两亲性胶束纳米囊及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医用材料技术领域，特别涉及一种两亲性胶束纳米囊及其制备方 法和应用。
【背景技术】
[0002] 中药是一座巨大的宝库，很多中药的疗效不但经受住了长期医疗实践的检验，而 且也已被现代科学研究所证实，但一些中药的特性却极大地限制了其在临床上的应用。比 如，三七是一种中国的珍稀药材，其主要活性成分为三七总皂苷，具有扩张血管、降低心肌 耗氧量、延长凝血时间、调节免疫和抗癌等功效;但它却存在刺激性强、味道略苦、容易吸 潮、溶解性差、生物利用率低的缺点。以它为原料，传统的口服制剂有三七总皂苷片、三七总 皂苷颗粒剂等，但其药物动力学、体内代谢研究表明：经过这些传统方式处理后，三七总皂 苷吸收率差、消除半衰期较长。
[0003] 纳米技术在不断地促进科技的进步，因而受到越来越多研究者的关注，现已经被 广泛地应用到信息产业、航空航天、军事、化工、冶金、环境保护、生命科学等领域。纳米给药 系统是纳米技术在医学领域的应用成果，是指粒子直径在10~l〇〇〇nm之间的给药系统，这 种药物传递系统能够增强药效、降低药物毒性以及改变药物的体内过程，进而实现药物的 特异靶向性和药物的释放可控性。
[0004] 针对中药临床应用中存在的吸收率差、消除半衰期较长的问题，研究者们尝试以 环糊精或聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，如(PEG) 3-PLA嵌段共聚物，作为药物载体，采用 纳米给药系统实现药物在体内的传递。该种药物传递方式与传统方式相比，具有提高药物 稳定性、药物缓释和控释的优势，但是仍存在包封率和载药量低的问题。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于提供一种两亲性胶束纳米囊及其制备方法和应用，本发明提供 的两亲性胶束纳米囊可以对药物进行有效的包覆，包封率较高；以所述两亲性胶束纳米囊 为载体制备的载药胶束，在给药过程中能够有效提高药物的载药量和药物输送率，可控制 药物的缓慢释放，长时间维持药效，提高药物的生物利用率。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] 本发明提供了一种两亲性胶束纳米囊，具有式I所示结构：
[0008]
[0009] 其中，x = l~1000，y = l~1000，z = l~1000。
[0010] 优选的，所述x = 2~700，y = 2~700，z = 2~700。
[0011] 本发明提供了所述两亲性胶束纳米囊的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (1)将β-环糊精进行氨基化反应，得到氨基化β-环糊精；
[0013] 将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙 二醇-b_聚丙交酯-乙交酯；
[0014] (2)在保护气氛和缓冲溶液中，将所述步骤（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯和氨基化β-环糊精与N-羟基琥珀酰亚胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊。
[0015] 优选的，所述步骤(1)中将β-环糊精进行氨基化反应具体包括以下步骤：
[0016] 将β-环糊精、对甲苯磺酰氯与溶剂I混合反应，得到6-对甲苯磺酰基-β-环糊精；
[0017] 将所述6-对甲苯磺酰基-β_环糊精与氨基化试剂进行氨基化反应，得到氨基化β_ 环糊精；
[0018] 其中，所述溶剂I包括氢氧化钠溶液或吡啶，所述氨基化试剂包括多元胺化合物。
[0019] 优选的，所述步骤（1)中将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应 具体包括以下步骤：
[0020] 在保护气氛中，将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、丁二酸酐、4-二甲氨基吡 啶与二氯甲烷进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯。
[0021] 优选的，所述步骤⑵中羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、氨基化β-环 糊精、Ν-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1: (1.5~3.5):(0.5~2.0):(3.0~7.0)。
[0022]优选的，所述步骤(2)具体为：
[0023] 将所述羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二 甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐和缓冲溶液混合，在保护气氛中进行活化反应；
[0024]调节所述活化反应产物的pH值为6.7~7.3，然后与氨基化β-环糊精混合，在保护 气氛中进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊。
[0025]优选的，所述步骤(2)中缓冲溶液包括磷酸盐缓冲溶液或三羟甲基氨基甲烷盐酸 盐缓冲溶液。
[0026]本发明提供了上述技术方案所述两亲性胶束纳米囊或采用上述技术方案所述方 法制备得到的两亲性胶束纳米囊在制备载药胶束中的应用，其中，所述载药胶束包括所述 两亲性胶束纳米囊载体和被所述载体包覆的药物。
[0027] 优选的，所述药物包括三七皂苷R1、三七皂苷Rgl、阿霉素或穿心莲内酯。
[0028] 本发明提供了一种具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊，并提供了所述两亲性 胶束纳米囊的制备方法，以羧基化甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯和氨基化β_环糊精 为原料，在保护气氛中进行反应，得到所述两亲性胶束纳米囊。本发明还提供了所述两亲性 胶束纳米囊在制备载药胶束中的应用。本发明提供的两亲性胶束纳米囊具有"外亲水、内疏 7Κ"的核壳结构，可以对药物进行有效的包覆，包封率高达41.6%。本发明提供的载药胶束 的载药量达8.6%，在载药胶束给药过程中，能够有效提高药物输送率;同时，本发明提供的 载药胶束可控制药物缓慢释放，维持药效的时间长达48h，能够有效提高药物的生物利用 率;此外，本发明提供的所述两亲性胶束纳米囊的制备方法操作简便，产率高达79.73%。
【具体实施方式】
[0029] 本发明提供了一种两亲性胶束纳米囊，具有式I所示结构：
[0030]
[0031 ]其中，x = l~1000，y = l~1000，z = l~1000。
[0032] 在本发明中，所述X优选为2~700，更优选为3~400，最优选为4~100;所述y优选 为2~700，更优选为3~400，最优选为4~100:所述z优选为2~700，更优选为3~400，最优 选为4~100。
[0033] 本发明提供了所述两亲性胶束纳米囊的制备方法，包括以下步骤：
[0034] (1)将β-环糊精进行氨基化反应，得到氨基化β-环糊精；
[0035]将甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙 二醇-b_聚丙交酯-乙交酯；
[0036] (2)在保护气氛和缓冲溶液中，将所述步骤（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b- 聚丙交酯-乙交酯和氨基化β-环糊精与N-羟基琥珀酰亚胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊。
[0037] 本发明将β_环糊精(β-CD)进行氨基化反应，得到氨基化β-环糊精(6-NH2-i3_CD); 将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA)进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基 聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA-COOH)。
[0038] 在本发明中，所述将β-环糊精进行氨基化反应优选具体包括以下步骤：
[0039]将β_环糊精、对甲苯磺酰氯(TsCl)与溶剂I混合反应，得到6-对甲苯磺酰基-β-环 糊精(6-〇Ts-0-CD);
[0040] 将所述6-〇Ts_f3-⑶与氨基化试剂进行氨基化反应，得到6-ΝΗ2_β-⑶；
[0041 ]其中，所述溶剂I包括氢氧化钠溶液或吡啶，所述氨基化试剂包括多元胺化合物。 [0042] 本发明将β-CTKTsCl与溶剂I混合反应，得到6-〇Ts-0-CD。在本发明中，所述β-CD、 TsCl和溶剂I的质量比优选为1: (4~12): (100~200)，更优选为1: (6~10): (120~140)。
[0043] 在本发明中，所述溶剂I优选包括氢氧化钠溶液或吡啶;所述氢氧化钠溶液的摩尔 浓度优选为〇. 1~〇. 8mol/L。
[0044] 在本发明中，所述将β-⑶、TsCl与溶剂I混合反应优选具体为：
[0045] 将β-⑶溶于溶剂I中，搅拌2~20min溶解后，向得到的混合物料中加入部分TsCl， 搅拌反应1~3h，再加入剩余TsCl，继续搅拌反应2~8h，得到所述6-〇Ts-f3-⑶。
[0046] 本发明对于所述搅拌所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的 搅拌的技术方案即可，本发明优选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转 速优选为20~50rpm，更优选为30~40rpm。
[0047] 在本发明中，按所占 TsCl的质量百分数计，所述部分TsCl优选为40 %~60 %。
[0048] 本发明优选在所述反应完成后，对得到的产物进行后处理，得到6-〇Ts-i3_CD。在本 发明中，所述后处理优选包括以下步骤：
[0049] 反应结束后，过滤，将得到的滤液置于冰水浴中，调节所述滤液的pH值为5.8~ 6.2，搅拌至滤液出现浑浊，于冰箱中1~3°C冷藏12~24h，再次过滤，得到6-〇Ts-f3-⑶粗产 品；
[0050] 将所述e-OTs-β-⑶粗产品与二次水混合，溶解后趁热过滤，将得到的滤液于冰箱 中1~3°C冷藏12~24h进行重结晶，重复操作2~3次，将重结晶得到的产品在25~60°C下真 空干燥12~24h，得到6-〇Ts-0-CD。
[0051] 在本发明中，进行所述后处理时调节所述滤液的pH值为5.8~6.2。本发明对于调 节所述滤液的pH值为5.8~6.2所采用的方式或试剂没有特殊的限定，采用本领域技术人员 熟知的用于调节pH值的技术方案即可。本发明优选采用10%~15%的盐酸溶液调节所述滤 液的pH值为5.8~6.2。
[0052] 在本发明中，将所述滤液的pH值调节为5.8~6.2后，搅拌至滤液出现浑浊。本发明 对于所述搅拌所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的搅拌的技术方案 即可，本发明优选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转速优选为20~ 50rpm，更优选为30~40rpm;所述搅拌的时间优选为4~6h。
[0053]在本发明中，将所述搅拌至出现浑浊后，于冰箱中1~3°C冷藏12~24h。在本发明 中，所述冷藏时间优选为15~20h。
[0054] 在本发明中，得到6-〇Ts-0-CD粗产品后，将所述6-〇Ts-0-CD粗产品与二次水混合。 在本发明中，所述6-〇Ts-0-⑶粗产品与二次水的质量比优选为1:90~110。
[0055]在本发明中，将所述6-〇Ts-i3_CD粗产品与二次水混合后，溶解后趁热过滤。在本发 明中，所述溶解的温度优选为45~55°C。
[0056]在本发明中，完成所述趁热过滤后，将得到的滤液于冰箱中1~3°C冷藏12~24h进 行重结晶。在本发明中，所述进行重结晶时的冷藏时间优选为15~20h。
[0057] 在本发明中，将重结晶得到的产品在25~60°C下真空干燥12~24h，得到e-OTs-β-CD。在本发明中，所述真空干燥的温度优选为35~45 °C ;所述真空干燥的时间优选为15~ 20h;所述真空干燥的真空度优选为8~12Pa。
[0058] 得到6-〇Ts-i3_CD后，本发明优选将所述6-〇Ts-i3_CD与氨基化试剂进行氨基化反 应，得到6-NH 2-f3-CD。在本发明中，所述6-〇Ts-f3-CD和氨基化试剂的质量比优选为1: (50~ 150)，更优选为1:(70~120)。
[0059] 在本发明中，所述氨基化试剂优选包括多元胺化合物。在本发明中，所述多元胺化 合物优选包括乙二胺或三乙胺。
[0060] 在本发明中，所述氨基化反应优选具体为：
[0061 ]将所述6-〇Ts-i3-⑶与氨基化试剂混合，在搅拌条件下，于50~85°C进行氨基化反 应 12 ~36h，得到 6-NH2-0-CD。
[0062]本发明对于所述搅拌所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的 搅拌的技术方案即可，本发明优选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转 速优选为20~50rpm，更优选为30~40rpm。
[0063] 在本发明中，所述氨基化反应的温度优选为60~70°C;所述氨基化反应的时间优 选为18~28h。
[0064] 本发明优选在所述氨基化反应完成后，对得到的产物进行后处理，得到6-ΝΗ2_β-CD。在本发明中，所述氨基化反应后处理优选包括以下步骤：
[0065]将氨基化反应产物冷却到室温，然后于55~65°C下，旋蒸时间25~35min。静置、冷 却到室温，向得到的物料中加入预冷的无水乙醇，在冰水浴中静置，出现白色沉淀，过滤得 到6-ΝΗ2-β-〇)粗产品；
[0066] 将所述6-ΝΗ2_β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀， 过滤，重复操作2~3次，然后在20~50°C下真空干燥2~3天，得到所述6-NH2_0-CD。
[0067] 其中，所述6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水与预冷的无水乙醇的质量比优选为（1.8~ 2.2): (0.8~1.2): (180~220)。在本发明中，进行氨基化反应后处理时，将氨基化反应产物 旋蒸并静置、冷却到室温后得到的物料中加入预冷的无水乙醇，在冰水浴中静置，出现白色 沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。在本发明中，所述冷却到室温后得到的物料与所述预冷 的无水乙醇的质量比优选为1:90~110。
[0068]在本发明中，所述预冷的无水乙醇的温度优选为1~2°C。
[0069]在本发明中，所述在冰水浴中静置的时间优选为2.5~3.5h。
[0070] 在本发明中，得到6-NH2KD粗广品后，将所述6-NH2KD粗广品溶于超纯水中， 再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀，过滤，重复操作2~3次，然后在20~50°C下真空干 燥2~3天，得到所述6-NH2-0-CD。在本发明中，所述6-NH2-0-CD粗产品、超纯水与预冷的无水 乙醇的质量比优选为（1.8~2.2) :(0.8~1.2) :(180~220)。
[0071 ]在本发明中，所述预冷的无水乙醇的温度优选为1~2°C。
[0072] 在本发明中，所述真空干燥的温度优选为28~40 °C;所述真空干燥的真空度优选 为8~12Pa。
[0073] 在本发明中，所述将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应优选具 体包括以下步骤：
[0074]在保护气氛中，将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA)、丁二酸酐、 4_二甲氨基吡啶与二氯甲烷进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙 交酯(mPEG-PLGA-COOH)。
[0075]在本发明中，所述mPEG-PLGA、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶与二氯甲烷的物质的量 比优选为 1:(4.5~5.5) :(0.25~0.5) :(0.075~0.08)。
[0076] 本发明在将mPEG-PLGA进行羧基化反应前，优选对丁二酸酐先进行活化处理。在本 发明中，所述对丁二酸酐进行活化处理的方法，优选包括以下步骤：
[0077] 将丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和二氯甲烷在保护气氛中进行活化反应。
[0078] 本发明对于所述保护气氛所采用的保护气种类没有特殊的限定，采用本领域技术 人员熟知的用于保护气氛的气体即可。本发明优选采用氮气作为保护气。在本发明中，所述 活化反应优选在室温下进行，即无需进行加热或降温;所述活化反应的时间优选为1~5h， 更优选为2~4h。
[0079] 完成所述对丁二酸酐进行活化处理后，本发明优选将所述活化反应产物与mPEG-PLGA在保护气氛中进行反应，得到mPEG-PLGA-COOH。
[0080] 本发明对于所述保护气氛所采用的保护气种类没有特殊的限定，采用本领域技术 人员熟知的用于保护气氛的气体即可。本发明优选采用氮气作为保护气。
[0081 ]在本发明中，所述活化产物与mPEG-PLGA的反应优选在冰水浴中和搅拌条件下进 行。本发明对于所述搅拌所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的搅拌 的技术方案即可，本发明优选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转速优 选为20~50rpm，更优选为30~40rpm。
[0082] 在本发明中，所述活化产物与mPEG-PLGA的反应时间优选为12~48h，更优选为20 ~35h〇
[0083] 本发明优选在所述羧基化反应完成后，对得到的产物进行后处理，得到mPEG-PLGA-C00H。在本发明中，所述羧基化反应后处理优选包括以下步骤：
[0084] 将羧基化反应结束后得到的产物进行离心，得到上清液；
[0085]将所述上清液依次用稀盐酸和饱和氯化钠溶液各洗涤分层2~3次；
[0086] 将所述分层得到的下层液体干燥；
[0087] 将所述干燥后的产物过滤，将得到的滤液与预冷的无水乙醚混合，密封后于冰箱 中1~3 °C冷藏过夜，再次过滤后真空干燥滤饼，得到mPEG-PLGA-COOH。
[0088] 本发明在进行所述羧基化反应后处理时，将羧基化反应结束后得到的产物进行离 心，得到上清液。在本发明中，所述离心的转速优选为8000~lOOOOrpm，更优选为8500~ 9500rpm;所述离心的时间优选为5~10min。
[0089] 在本发明中，得到上清液后，将所述上清液依次用稀盐酸和饱和氯化钠溶液各洗 涤分层2~3次。在本发明中，所述稀盐酸的pH值优选为1.5~2.5。本发明优选使用分液漏斗 进行所述分层，得到下层液体。
[0090] 在本发明中，完成所述分层后，将所述分层得到的下层液体干燥。在本发明中，所 述干燥优选使用无水硫酸钠干燥过夜;其中，所述无水硫酸钠优选加至不结块位置。
[0091] 在本发明中，将所述分层得到的下层液体干燥后，将所述干燥后的产物过滤，将得 到的滤液与预冷的无水乙醚混合，密封后于冰箱中-16~-20°c冷藏过夜，再次过滤后真空 干燥滤饼，得到mPEG-PLGA-COOH。在本发明中，所述滤液与预冷的无水乙醚的体积比优选为 1:(3 ~8)〇
[0092]在本发明中，所述预冷的无水乙醚的温度优选为-16~_20°C。
[0093] 在本发明中，所述真空干燥的温度优选为23~27°C;所述真空干燥的时间优选为 20~28h;所述真空干燥的真空度优选为8~12Pa。
[0094] 得到所述6-ΝΗ2-β-〇)和所述mPEG-PLGA-⑶0H后，本发明在保护气氛和缓冲溶液 中，将所述mPEG-PLGA-COOH和6-ΝΗ 2-β-〇)与N-羟基琥珀酰亚胺以及1 -(3-二甲氨基丙基)- 3-乙基碳二亚胺盐酸盐进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊(mPEG-PLGA-β-CD)。
[0095] 在本发明中，所述mPEG-PLGA-COOH、6-NH2-0-CD、N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲 氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比优选为1:(1.5~3.5) :(0.5~2.0):(3.0~ 7.0)，更优选为 1:(2.0~2.5) :(1.0~1.5) :(4.0~5.5)。
[0096]在本发明中，所述缓冲溶液优选包括磷酸盐缓冲溶液或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 缓冲溶液。在本发明中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值优选为5.8~6.2。在本发明中，所述三 轻甲基氨基甲烧盐酸盐缓冲溶液的pH值优选为6.7~7.3。
[0097] 在本发明中，所述mPEG-PLGA-⑶0H和6-ΝΗ2-β-〇)与N-羟基琥珀酰亚胺以及1-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐的反应具体优选为：
[0098] 将所述mPEG-PLGA-C00H、N_羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺盐酸盐和缓冲溶液混合，在保护气氛中进行活化反应；
[0099]调节所述活化反应产物的pH值为6.7~7.3，然后与6-NH2-f3-CD混合，在保护气氛 中进行反应，得到mPEG-PLGA-0-CD。
[0100] 本发明将所述mPEG-PLGA-C00H、N_羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基 碳二亚胺盐酸盐和缓冲溶液混合，在保护气氛中进行活化反应。本发明对于所述保护气氛 所采用的保护气种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的用于保护气氛的气体即 可。本发明优选采用氮气作为保护气。
[0101] 在本发明中，所述活化反应的时间优选为0.5~3.5h，更优选为1.0~2.5h。
[0102] 在本发明中，所述活化反应优选在室温下搅拌进行反应。本发明对于所述搅拌所 采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的搅拌的技术方案即可，本发明优 选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转速优选为20~50rpm，更优选为 30~40rpm。
[0103] 完成所述活化反应后，本发明调节所述活化反应后产物的pH值为6.7~7.3,然后 与6-NH2-f3-CD混合，在保护气氛中进行反应，得到mPEG-PLGA-f3-CD。本发明优选采用pH值调 节剂调节所述活化反应完成后产物的pH值为6.7~7.3。在本发明中，对于所述pH值调节剂 的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的pH值调节剂即可。本发明优选采用饱 和氢氧化钠溶液作为pH值调节剂。
[0104] 本发明对于所述保护气氛所采用的保护气种类没有特殊的限定，采用本领域技术 人员熟知的用于保护气氛的气体即可。本发明优选采用氮气作为保护气。
[0105] 在本发明中，所述活化反应后产物与6-NH2-i3-CD的反应时间优选为3~9h，更优选 为4~7h。
[0106] 在本发明中，所述活化反应后产物与6-NH2-i3_CD的反应优选在室温下搅拌进行反 应。本发明对于所述搅拌所采用的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的搅拌 的技术方案即可，本发明优选采用磁力搅拌方式进行搅拌。在本发明中，所述搅拌的转速优 选为20~50rpm，更优选为30~40rpm。
[0107] 本发明优选在所述活化反应后产物与6-NH2-i3_CD的反应完成后，对得到的产物进 行后处理，得到mPEG-PLGA-f3-CD。在本发明中，所述活化反应后产物与6-NH 2-f3-CD反应的后 处理优选包括以下步骤：
[0108] 将反应结束后得到的产物采用超纯水透析；
[0109] 将所述透析得到的透析液进行冷冻干燥，得到mPEG-PLGA-β-⑶。
[0110] 在本发明中，进行所述活化反应后产物与6-NH2-i3-CD反应的后处理时，将反应结 束后得到的产物采用超纯水透析。本发明优选将反应产物置于透析袋中进行透析，所述透 析的时间优选为12~48h，更优选为20~35h。在本发明中，所述透析袋的截留分子量优选为 3500Da。在本发明中，所述透析袋在使用前优选用沸水煮制20~40min，更优选为25~ 35min;在所述透析过程中，优选每隔5~7h换一次水。 完成所述透析后，本发明将所述透析得到的透析液进行冷冻干燥，得到所述mPEG-PLGAKD。在本发明中，所述冷冻干燥的温度优选为-45~-55°C ;所述冷冻干燥的真空度 优选为8.0~10.0 Pa。
[0112] 本发明提供了上述技术方案所述两亲性胶束纳米囊或采用上述技术方案所述方 法制备得到的两亲性胶束纳米囊在制备载药胶束中的应用，其中，所述载药胶束包括所述 两亲性胶束纳米囊载体和被所述载体包覆的药物。
[0113] 在本发明中，所述药物和两亲性胶束纳米囊的质量比优选为1:(10~15)。在本发 明中，所述药物优选包括三七皂苷R1、三七皂苷Rgl、阿霉素或穿心莲内酯。
[0114] 本发明对于所述载药胶束的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知 的制备载药胶束的技术方案即可。本发明优选采用透析法制备载药胶束，包括以下步骤：
[0115] 将药物和两亲性胶束纳米囊溶于甲醇中，在超声条件下滴加超纯水，再超声10~ 30min;将得到的溶液置于透析袋内，在室温条件下，透析12~48h;冷冻干燥透析后的溶液， 得到所述载药胶束。
[0116] 在本发明中，所述药物的质量与甲醇和超纯水的体积比优选为1 Omg: (0.5~2.0) mL:(2.0~4.0)mL。
[0117] 在本发明中，所述滴加超纯水的速度优选为0.25~0.35mL/min。
[0118] 在本发明中，所述超声的功率优选为280~320W。
[0119] 在本发明中，所述透析袋的截留分子量优选为3500Da。在本发明中，所述透析袋在 使用前优选用沸水煮制20~40min，更优选为25~35min;在所述透析过程中，优选每隔5~ 7h换一次水。
[0120] 在所述透析过程中优选每隔5~7h换一次水。
[0121] 在本发明中，所述冷冻干燥的温度优选为-45~_55°C ;所述冷冻干燥的真空度优 选为 8.0 ~lO.OPa。
[0122] 下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显 然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实 施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属 于本发明保护的范围。
[0123] 实施例1:
[0124] 载药胶束 mPEG2Q〇()-PLGAi()()()KD/Rl (X = 45，y = 7，z = 7)的制备
[0125] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0126] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0127] ①粗产品的制备:在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.2mol/L氢氧化钠溶液中， 35rpm下磁力搅拌5min后，加入2mmol TsCl，反应2h后，再加入2mmol TsCl，继续反应3h。
[0128] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为13.26,过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中2°C冷藏24h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0129] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中2°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0130] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts_f3-⑶，产率为38.3%。
[0131] 6_NH2_0_CD的制备：
[0132] ①粗产品的制备:将1 .Ommol 6_0TsKD与60mmol乙二胺混合，在60°C下磁力搅 拌反应24h。
[0133] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于50°C下，旋蒸 25min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0134] ③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1:200，将得到的6-NH 2-i3-CD粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀， 过滤，重复操作2次，然后在25 °C下真空干燥2天，得到淡黄色粉末状6-NH2-i3-CD。
[0135] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为80.16%。
[0136] (2)羧基化 mPEG2〇()()-PLGAi()()() (mPEG2〇()()-PLGAi()()()-COOH)的制备
[0137] ①丁二酸酐的活化:将3. Ommol 丁二酸酐和0.015g的4-二甲氨基R比啶溶于5. OmL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应2h。
[0138] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG^-PLGAKxxKffl(购自济南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0139] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中2°C冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG2Q()()-PLGAi_-C00H。
[0140] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2_-PLGA1(xx)-C00H，产率为75.3%。
[0141] (3)两亲性胶束纳米囊mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD的制备
[0142] ① mPEG2_-PLGAi_-C00H的活化：将1 · Ommol mPEG2_-PLGAi_-C00H、1 · Ommol N-羟基琥珀酰亚胺、5.0mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和6.0mL pH=6.0 的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应lh。
[0143] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2.5mmol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应5h。
[0144] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析24h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥12h，得到mPEG 2〇00-PLGAioo〇-e-CD〇
[0145] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD，产率为81 · 35%。
[0146] 将得到的产品进行1HNMR分析，分析结果为：（H-1，3.38，3H)，（H-2，H-3，3.65，4)， (H-4，4·82，2H)，（H-5，5·20，2H)，（H-6，1·55，3H)，（H-7，2·81，2H)，（H-8，2·84，2H)，（H-9， 2 · 00，2H)，（H-10，2 · 31，2H)，证明产品是mPEG2_-PLGAi_-0-CD。
[0147] (4)载药Jj父束 mPEG2〇〇()_PLGAi_-0-CD/Rl 的制备
[0148] 将l〇mg三七皂苷R1 和 150mg mPEG2_-PLGAi_-0-CD溶于l.OmL甲醇中，在300W超声 条件下以〇.25mL/min的速度滴加3mL超纯水，再超声20min。将得到的溶液置于透析袋内，在 室温条件下，透析24h，每隔6h换一次水。最后在-50°C、真空度为9.0Pa的条件下冷冻干燥透 析后的溶液，得到载药胶束mPEG2〇〇()-PLGAi()(x)KD/Rl 〇
[0149] 称量得到的载药胶束mPEG-o-PLGAKXM-e-CD/Rl，产率为57.12%。
[0150] 采用高效液相色谱法测定所述载药胶束mPEG^oo-PLGAnxjo-e-CD/Rl的载药量和包 封率，其中，流动相：有机相为色谱纯乙腈，有机相流速为〇 . 32mL/min ;水相为质量分数 0.05%的磷酸水溶液，水相流速为1.28mL/min。利用外标一点法计算得到所述载药胶束 mPEG2〇()()-PLGAi_-0-CD/Rl的载药量为6.52%，包封率为36.2%。
[0151] 将实施例1制备的载药胶束mPEG^-PLGAKxw-fi-CD/Rl进行体外释放实验，包括以 下步骤：
[0152] 将50mg载药胶束mPEG2_-PLGA1()(x)-0-CD/R 1 溶于lmL磷酸盐缓冲液(pH=7 · 4)中，将 得到的载药胶束溶液转入截留分子量为l〇〇〇Da的透析袋内，然后将透析袋置于磷酸盐缓冲 液(pH=7.4)中，于恒温(T = 36.5 °C)水浴摇床内透析。
[0153] 在0min、5min、15min、30min、45min、lh、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、36h、48h、60h、 72h、84h、96h和108h时，分别取lmL透析液，再补充lmL新配制的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)。将 取出的透析液经冷冻干燥后，用高效液相色谱法测试其中药物的含量。
[0154] 测试结果显示，药物在释放48h时，仍可以检测到。说明该载药胶束可以实现药物 的缓慢释放，长时间维持药效。
[0155] 实施例2:
[0156] 载药胶束11^^2()()()卞11^2()()()^0/1?1(叉=45,7=14,2 = 14)的制备
[0157] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0158] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0159] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0160] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69，过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0161] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0162] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts_f3-⑶，产率为40.5%。
[0163] 6_NH2_0_CD的制备：
[0164] ①粗产品的制备：将1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0165] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0166] ③粗产品的纯化：按6-NH2-f3_CD粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为 1.8:1:180，将得到的6-ΝΗ 2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色 沉淀，过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0167] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为83.70 %。
[0168] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2_ (mPEG2_-PLGA2_-COOH)的制备
[0169] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0170] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG2(xx)-PLGA2_-〇H(购自济南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0171] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_-COOH。
[0172] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-COOH，产率为75.3%。
[0173] (3)两亲性胶束纳米囊 mPEG2Q()()-PLGA2()(X)-0-CD的制备
[0174] ① mPEG2_-PLGA2_-COOH的活化：将1 ·Ommol mPEG2_-PLGA2_-COOH、1 ·5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH=6.0 的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0175] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0176] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGA2〇〇〇-P-CD〇
[0177] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-β-CD，产率为76.31%。
[0178] (4)载药Jj父束 mPEG2__PLGA2_KD/Rl 的制备
[0179] 将l〇mg三七皂苷R1和lOOmg mPEG2_-PLGA2_KD溶于1.5mL甲醇中，在300w超声 条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声lOmin。将得到的溶液置于透析袋 内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷冻 干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEGmoo-PLGAmm-e-⑶/R1。
[0180] 载药胶束mPEG2_-PLGA2_-0-CD/Rl的产率为63 · 7 %，载药量为8 · 6 %，包封率为 41.1%〇
[0181] 实施例3:
[0182] 载药胶束 mPEG2_-PLGAi_KD/Rg l(x = 45，y = 7，z = 7)的制备
[0183] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0184] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0185] ①粗产品的制备:在冰水浴中，将lmm〇lf3-⑶溶于30mL 0.4mol/L氢氧化钠溶液中， 35rpm下磁力搅拌5min后，加入2mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应3h。
[0186] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为13.29,过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏24h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0187] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏24h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在50°C下真空干燥18h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0188] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为45.4%。
[0189] 6-ΝΗ2-β-〇)的制备：
[0190] ①粗产品的制备：将1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD与80mmol乙二胺混合，在65°C下磁力搅 拌反应24h。
[0191] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于65°C下，旋蒸 35min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入30mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0192] ③粗产品的纯化：按6-NH2-i3_CD粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为 2.2:1: 220，将得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，将得到的 6-NH 2-i3-CD粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀，过滤，重复操作2 次，然后在50°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0193] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为84.3 %。
[0194] (2)羧基化 mPEG2_-PLGAi。。。(mPEG2_-PLGAi_-C00H)的制备
[0195] ①丁二酸酐的活化:将3.Ommol丁二酸酐和0.022g 4-二甲氨基吡啶溶于5.OmL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应2h。
[0196] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG^-PLGAKxxKffl(购自济南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌20h。
[0197] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入6倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中_18°C冷藏过夜，过滤并真空干 燥滤饼，得到 mPEGmoQ-PLGAiQQo-COOH。
[0198] 称量得到的干燥纯净产品mPEG^oo-PLGAKXM-COOH，产率为70.6%。
[0199] (3)两亲性胶束纳米囊mPEGwoo-PLGAiooo-e-CD的制备
[0200] ① mPEG2_-PLGAi_-C00H的活化：将l.Ommol mPEG2_-PLGAi_-C00H、2.0mmol N-羟基琥珀酰亚胺、5.0mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH=6.0 的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0201] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0202] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析24h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGAioo〇-e-CD〇
[0203] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD，产率为76.3%。
[0204] (4)载药胶束 mPEG-o-PLGAiooo-e-CD/Rg 1 的制备
[0205] 将 10mg三七皂苷Rgl和 100mg mPEG2_-PLGAi_-0-CD溶于 1 .OmL甲醇中，在300w超 声条件下以〇. 3mL/min的速度滴加3mL超纯水，再超声15min。将得到的溶液置于透析袋内， 在室温条件下，透析24h，每隔6h换一次水。最后在-50°C、真空度为8.0Pa的条件下冷冻干燥 透析后的溶液，得到载药胶束mPEG2〇〇()-PLGAi()()()-0-CD/Rg 1 〇
[0206] 载药胶束mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD/Rgl的产率为59.7%，载药量为8.3%，包封率为 41.2%〇
[0207] 实施例4:
[0208] 载药胶束11^62〇〇〇卞11^2〇〇〇-0-〇)/1^1(叉=45,7=14,2 = 14)的制备
[0209] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0210] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0211] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于35mL 0.45mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌5min后，加入3mmol TsCl，反应2h后，再加入3mmol TsCl，继续反应3h。
[0212] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为13.26,过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏24h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0213] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏24h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在55°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0214] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为46.69%。
[0215] 6_NH2_0_CD的制备：
[0216] ①粗产品的制备:将1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD与lOOmmol乙二胺混合，在65°C下磁力搅 拌反应24h。
[0217] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于65°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入30mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH2-i3-CD粗产品。
[0218] ③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1.8:200，将得到的6-NH 2-f3-CD粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，将得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀，过滤，重复操作2 次，然后在35°C下真空干燥2天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0219] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为85.8%。
[0220] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2_(mPEG2_-PLGA2_-COOH)的制备
[0221] ①丁二酸酐的活化:将3.0mmol丁二酸酐和0.017g 4-二甲氨基吡啶溶于5.0mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0222] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-〇H(购自济南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌20h。
[0223] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中_18°C冷藏过夜，过滤并真空干 燥滤饼，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_-COOH。
[0224] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-COOH，产率为75.3%。
[0225] (3)两亲性胶束纳米囊mPEG2_-PLGA2Q(X)-0-CD的制备
[0226] ① mPEG2_-PLGA2_-COOH的活化：将1 ·Ommol mPEG2_-PLGA2_-COOH、1 ·Ommol N-羟基琥珀酰亚胺、3.Ommol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH=6.0 的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应1. Oh。
[0227] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温30rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0228] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥24h，得到mPEG 2〇00-PLGA2〇〇〇-P-CD〇
[0229] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-β-CD，产率为78.91%。
[0230] (4)载药胶束 mPEG2_-PLGA2_KD/Rg 1 的制备
[0231] 将l〇mg三七皂苷Rgl和lOOmg mPEG2_-PLGA2_-P-CD溶于l.OmL甲醇中，在300w超 声条件下以〇.3mL/min的速度滴加3mL超纯水，再超声20min。将得到的溶液置于透析袋内， 在室温条件下，透析24h，每隔6h换一次水。最后在-50°C、真空度为8.0Pa的条件下冷冻干燥 透析后的溶液，得到载药胶束mPEG2〇〇()-PLGA2()()()-i5-CD/Rg 1 〇
[0232] 载药胶束mPEG2_-PLGA2(xx)-0-CD/Rgl的产率为68 · 7 %，载药量为8 · 1 %，包封率为 41.6%〇
[0233] 实施例5:
[0234] 载药胶束11^65()()^311^1_()-0-〇)/1?1(叉=1〇,7 = 69,2 = 86)的制备
[0235] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0236] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0237] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0238] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69,过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0239] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0240] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为40.51%。
[0241 ] 6-ΝΗ2-β-〇)的制备：
[0242] ①粗产品的制备：将l.Ommol 6-〇Ts-0-CD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0243] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0244] ③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1:200，将得到的6-NH 2-i3-CD粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀， 过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0245] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为83.70 %。
[0246] (2)羧基化 mPEGsQQ-PLGAiQ· (mPEG5M-PLGAi_()-C00H)的制备
[0247] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0248] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEGMo-PLGAKMoo-OH(购自济南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0249] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG5QQ-PLGAi_()-C00H。
[0250] 称量得到的干燥纯净产品ihPEGmo-PLGAkxxm-COOH，产率为75.83%。
[0251] (3)两亲性胶束纳米囊mPEGMo-PLGAioooo-e-CD的制备
[0252] ① mPEG5〇()-PLGAi()_-C00H的活化：将1 · Ommol mPEG5〇()-PLGAi()_-C00H、1 · 5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH=6.0 的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0253] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0254] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 500-PLGAiooooKD 〇
[0255] 称量得到的干燥纯净产品mPEG5(X)-PLGA1(xxx)-β-CD，产率为76.31%。
[0256] (4)载药胶束 mPEG5QQ-PLGAi_()-0-CD/R 1 的制备
[0257] 将l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG5〇()-PLGAi_)-0-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超声 条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声lOmin。将得到的溶液置于透析袋 内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷冻 干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEGsoo-PLGAKjom-e-⑶/R1。
[0258] 载药胶束mPEG5(x)-PLGA1_()-β-CD/Rl的产率为63·74%，载药量为8·6%，包封率为 41.1%〇
[0259] 实施例6:
[0260] 载药胶束 mPEGi_-PLGAi5_KD/Rl (X = 22，y = 104，z = 129)的制备
[0261] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0262] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0263] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌10min后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0264] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69，过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0265] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0266] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为68.55%。
[0267] 6-ΝΗ2-β-〇)的制备：
[0268] ①粗产品的制备：将1 .Ommol 6_0TsKD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0269] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0270]③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1.2:200，将得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉 淀，过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0271 ] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为53.58 %。
[0272] (2)羧基化 mPEGi_-PLGAi5_(mPEGi_-PLGAi5__COOH)的制备
[0273] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0274] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG1Q(x)-PLGA15(xx)-〇H(购自济 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0275] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEGi_-PLGAi5__C00H。
[0276] 称量得到的干燥纯净产品mPEGiooo-PLGAiMoo-COOH，产率为65·72%。
[0277] (3)两亲性胶束纳米囊mPEGiooo-PLGAisooo-e-CD的制备
[0278] ① mPEGi_-PLGAi5__⑶0H的活化：将1 · Ommol mPEGi_-PLGAi5__⑶OH、1 · 5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH = 6.0的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0279] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0280] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEGiooo-PLGAi5〇o『P-CD 〇
[0281] 称量得到的干燥纯净产品mPEG1_-PLGA15(xx)-β-CD，产率为66·87%。
[0282] (4)载药胶束 mPEGiooo-PLGABooo-e-CD/Rl 的制备
[0283] 将l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEGi_-PLGAi5_-P_CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 声条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声10min。将得到的溶液置于透析 袋内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷 冻干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEGKjoo-PLGAismo-e-CD/Rl 〇
[0284] 载药胶束mPEG1_-PLGA15(xx)-β-CD/Rl的产率为79.73%，载药量为8.6%，包封率为 41.1%〇
[0285] 实施例7:
[0286] 载药胶束 mPEG2_-PLGA2〇_KD/Rl (X = 45，y = 139，z = 172)的制备
[0287] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0288] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0289] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌10min后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0290] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69，过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0291] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0292] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为75.15%。
[0293] 6-ΝΗ2-β-〇)的制备：
[0294] ①粗产品的制备：将l.Ommol 6-〇Ts-0-CD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0295] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH2-i3-CD粗产品。
[0296] ③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1:190,将得到的6-NH 2-i3-CD粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉淀， 过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0297] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为63.48%。
[0298] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2〇_(mPEG2_-PLGA2()_-COOH)的制备
[0299] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0300] ②粗产品的制备：将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG2_-PLGA2Q_-〇H(购自济 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0301] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_()-COOH。
[0302] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2_-PLGA2Q_-COOH，产率为70 · 16%。
[0303] (3)两亲性胶束纳米囊mPEG2_-PLGA2_ Q-0-CD的制备
[0304] ① mPEG2_-PLGA2Q_-⑶0H的活化：将1 · Ommol mPEG2_-PLGA2Q_-⑶OH、1 · 5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH = 6.0的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0305] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0306] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGA20000KD 〇
[0307] 称量得到的干燥纯净产品mPEG2_-PLGA2_ Q-0-CD，产率为67 · 56%。
[0308] (4)载药 Jj父束 mPEG2Q〇()_PLGA2()_KD/Rl 的制备
[0309] 将l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG2_-PLGA2Q_KD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 声条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声10min。将得到的溶液置于透析 袋内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷 冻干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEG 2_-PLGA2_Q-f3-CD/Rl 〇
[0310] 载药胶束mPEG2_-PLGA2_()-β-CD/Rl的产率为63.25%，载药量为8.6%，包封率为 41.1%〇
[0311] 实施例8:
[0312 ]载药胶束 mPEGsooo-PLGAisoooKD/Rl (叉=68,7 = 125,2 = 155)的制备
[0313] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0314] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0315] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0316] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69，过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0317] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0318] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为55.32%。
[0319] 6-ΝΗ2-β-〇)的制备：
[0320] ①粗产品的制备：将l.Ommol 6-〇Ts-0-CD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0321] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0322] ③粗产品的纯化：按6-ΝΗ2-β-CD粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为 1.9:1: 200，将得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色 沉淀，过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0323] 称量得到的干燥纯净样品6_见12^0，产率为58.25%。
[0324] (2)羧基化 mPEG3_-PLGAi8_(mPEG3_-PLGAi8_-C00H)的制备
[0325] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0326] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG3_-PLGA18_-〇H(购自济 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0327] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG3_-PLGAi8_-C00H。
[0328] 称量得到的干燥纯净产品mPEG3_-PLGA18_-C00H，产率为66.16%。
[0329] (3)两亲性胶束纳米囊mPEG3_-PLGA18(x)()-0-CD的制备
[0330] ① mPEG3_-PLGAi8_-⑶0H的活化：将1 · Ommol mPEG3_-PLGAi8_-⑶OH、1 · 5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH = 6.0的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0331] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0332] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 3〇00-PLGAl800〇KD 〇
[0333] 称量得到的干燥纯净产品mPEG3_-PLGA18(xx)-0-CD，产率为57 · 56%。
[0334] (4)载药 Jj父束 mPEG3Q〇()_PLGAi8_KD/Rl 的制备
[0335] 将 10mg三七皂苷R1 和 100mg mPEG3_-PLGAi8_-P-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 声条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声lOmin。将得到的溶液置于透析 袋内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷 冻干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEG 3_-PLGA18m〇-i3-CD/Rl 〇
[0336] 载药胶束mPEG3_-PLGAi8(xx)-0-CD/Rl的产率为68.74%，载药量为8.6%，包封率为 41.1%〇
[0337] 实施例9:
[0338] 载药胶束 mPEGsoQQ-PLGAsiQQoKD/Rl (叉=113，丫 = 146,2 = 181)的制备
[0339] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制备
[0340] 6-〇Ts-0_CD 的制备：
[0341] ①粗产品的制备：在冰水浴中，将lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氢氧化钠溶液 中，35rpm下磁力搅拌10min后，加入3mmol TsCl，反应1.5h后，再加入3mmol TsCl，继续反应 2.5h〇
[0342] ②粗产品的分离:反应后的溶液pH值为12.69，过滤掉未反应的TsCl，将滤液置于 冰水浴中，调节pH值至6.0，35rpm下磁力搅拌至溶液出现浑池，在冰箱中3°C冷藏20h，过滤 得到6-〇Ts-0-CD粗产品。
[0343] ③粗产品的纯化:将6-〇Ts-f3_CD粗产品与二次水混合，加热溶解，并趁热过滤，在 冰箱中3°C冷藏12h进行重结晶；重复操作2次，将重结晶得到的产品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末状6-〇TsKD。
[0344] 称量得到的干燥纯净样品6-〇Ts-f3_CD，产率为60.32%。
[0345] 6_NH2_P_CD的制备：
[0346] ①粗产品的制备：将l.Ommol 6-〇Ts-0-CD与65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力搅 拌反应20h。
[0347] ②粗产品的分离：将反应结束后得到的产物冷却到室温，然后于60°C下，旋蒸 30min。静置、冷却到室温，向得到的物料中加入20mL预冷的无水乙醇，体系变浑浊，在冰水 浴中静置，出现白色沉淀，过滤得到6-NH 2-i3-CD粗产品。
[0348] ③粗产品的纯化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗产品、超纯水和预冷的无水乙醇的质量比为2: 1.2:200，将得到的6-ΝΗ 2-β-⑶粗产品溶于超纯水中，再加入预冷的无水乙醇，得到白色沉 淀，过滤，重复操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黄色粉末状6-NH 2-i3-CD。
[0349] 称量得到的干燥纯净样品6-ΝΗ2_β-⑶，产率为51.98%。
[0350] (2)羧基化 mPEGsQQQ-PIi^iQQQUPEGsQQQ-PIi^iQQQ-COOH)的制备
[0351 ] ①丁二酸酐的活化:将2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮气保护下于室温反应3h。
[0352] ②粗产品的制备:将活化后得到的物料与1 .Ommol mPEG5Q(x)-PLGA21(xx)-〇H(购自济 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮气保护下，35rpm磁力搅拌24h。
[0353] ③粗产品的分离纯化:将反应后得到的产物全部转入离心管中，于SOOOrpm下离心 1 Omin，将上清液置于分液漏斗中，依次分别用15mL pH= 2的稀盐酸、15mL饱和氯化钠溶液 各洗涤2次。完成洗涤后，放出下层液体，将无水硫酸钠加至不结块位置，干燥过夜。过滤，向 所得滤液中加入5倍体积预冷的无水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏过夜，过滤并真空干燥 滤饼，得到 mPEG5QQ()-PLGA2i_-COOH。
[0354] 称量得到的干燥纯净产品mPEG5_-PLGA21_-COOH，产率为58 · 63 %。
[0355] (3)两亲性胶束纳米囊mPEG5Q〇()-PLGA2 iqqqKD的制备
[0356] ① mPEG5_-PLGA2i_-⑶0H的活化：将1 · Ommol mPEG5_-PLGA2i_-⑶OH、1 · 5mmol N-羟基琥珀酰亚胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5.5mL pH = 6.0的磷酸盐缓冲液混合，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌反应0.5h。
[0357] ②粗产品的制备：用饱和氢氧化钠溶液调节活化反应后得到的反应体系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮气保护条件下，于室温35rpm磁力搅拌继续反应6h。
[0358] ③粗产品的分离纯化:将反应结束后得到的产物置于经沸水煮制30min的透析袋 中，用超纯水透析20h，每隔6h换一次水；将得到的透析液冷冻干燥18h，得到mPEG 5〇00-PLGA2IOO0KD 〇
[0359] 称量得到的干燥纯净产品mPEG5_-PLGA21(xx)-β-CD，产率为59·63%。
[0360] (4)载药 Jj父束 mPEG5Q〇()_PLGA2i_KD/Rl 的制备
[0361] 将l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG5_-PLGA2i_-P-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 声条件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超纯水，再超声10min。将得到的溶液置于透析 袋内，在室温条件下，透析18h，每隔6h换一次水。最后在-55°C、真空度为8.0Pa的条件下冷 冻干燥透析后的溶液，得到载药胶束mPEG 5QQ()-PLGA21m()-i3-CD/Rl。
[0362] 载药胶束mPEG5_-PLGA21(xx)-β-CD/Rl的产率为45.33%，载药量为8.6%，包封率为 41.1%〇
[0363] 由以上实施例可以看出，本发明提供的具有"外亲水、内疏水"核壳结构的两亲性 胶束纳米囊，可以对药物进行有效的包覆，包封率高达41.6 %。本发明提供的载药胶束的载 药量达8.6%，在载药胶束给药过程中，能够有效提高药物输送率;同时，本发明提供的载药 胶束可控制药物缓慢释放，维持药效的时间长达48h，能够有效提高药物的生物利用率;此 外，本发明提供的所述两亲性胶束纳米囊的制备方法操作简便，产率高达79.73%。
[0364] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种两亲性胶束纳米囊，具有式I所示结构：其中，x=l~1000，y=l~1000，z = l~1000。2. 根据权利要求1所述的两亲性胶束纳米囊，其特征在于，所述X = 2~700，y = 2~700， z = 2 ~700〇3. 权利要求1或2所述两亲性胶束纳米囊的制备方法，包括以下步骤： (1) 将β-环糊精进行氨基化反应，得到氨基化β-环糊精； 将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙二 醇-b_聚丙交酯-乙交酯； (2) 在保护气氛和缓冲溶液中，将所述步骤（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙 交酯-乙交酯和氨基化β-环糊精与N-羟基琥珀酰亚胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳 二亚胺盐酸盐进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中将β-环糊精进行氨基 化反应具体包括以下步骤： 将β-环糊精、对甲苯磺酰氯与溶剂I混合反应，得到6-对甲苯磺酰基-β-环糊精； 将所述6-对甲苯磺酰基-β-环糊精与氨基化试剂进行氨基化反应，得到氨基化β-环糊 精； 其中，所述溶剂I包括氢氧化钠溶液或吡啶，所述氨基化试剂包括多元胺化合物。5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯进行羧基化反应具体包括以下步骤： 在保护气氛中，将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶与 二氯甲烷进行羧基化反应，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯。6. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中羧基化甲氧基聚乙二 醇-b-聚丙交酯-乙交酯、氨基化β-环糊精、N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1:(1.5~3.5) :(0.5~2.0):(3.0~7.0)。7. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为： 将所述羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨 基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和缓冲溶液混合，在保护气氛中进行活化反应； 调节所述活化反应产物的pH值为6.7~7.3，然后与氨基化β-环糊精混合，在保护气氛 中进行反应，得到具有式I所示结构的两亲性胶束纳米囊。8. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中缓冲溶液包括磷酸盐 缓冲溶液或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液。9. 权利要求1或2所述两亲性胶束纳米囊或权利要求3~8任意一项所述方法制备得到 的两亲性胶束纳米囊在制备载药胶束中的应用，其中，所述载药胶束包括所述两亲性胶束 纳米囊载体和被所述载体包覆的药物。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物包括三七皂苷RU三七皂苷Rgl、 阿霉素或穿心莲内酯。
【文档编号】A61K47/34GK105997941SQ201610320365
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月14日
【发明人】门毅, 徐文慧, 张文生
【申请人】北京师范大学