专利名称：一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法
技术领域：
本发明属于微藻开发利用领域，特别是涉及一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法。
背景技术：
海洋微藻是水体生态系统中主要的初级生产者，占海洋生物物种的40. 86%，有体积小、数量大、细胞结构简单、生长周期短、生物量大、光合效率高、适应力强、不受气候限制、易培养等优点，因此受到了人们的广泛关注，微藻中所含有的微藻油脂、多糖、色素等在水产养殖饵料、能源、医药、保健品、化工和环保等方面具有重要经济价值，因此开发和利用海洋微藻具有重要的意义。微藻中脂肪酸含量和组成不仅影响微藻的医药和营养价值，而且还决定利用微藻生产的生物柴油的性能。微藻中的二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸不仅对防治哮喘、动脉硬化、心脏疾病以及糖尿病等疾病有明显的效果，而且还是许多鱼类、虾类和双壳类等幼体的必需脂肪酸。另外，脂肪酸组成决定脂肪酸甲酯的碳链长短、不饱和的程度等特性，而脂肪酸甲酯的这些特性决定生物柴油的十六烷值、低温流动性、氧化稳定性、碘值等性能。因此，脂肪酸的测定对优良藻种的选育、微藻营养价值的评价，以及微藻油脂是否适合生产生物柴油的评估是十分必要的。目前脂肪酸大多采用气相色谱-质谱仪测定，其性能高并配置了高效的石英毛细管色谱柱，对脂肪酸样品的分析快速、准确。微藻油脂含有的脂肪酸大多为12碳以上的脂肪酸，其极性大、沸点高、不易挥发、高温不稳定。因此，气相色谱分析脂肪酸的组成时，一般都需要进行样品的前处理。样品的前处理方法对测定的准确性和可靠性非常关键。目前微藻脂肪酸样品测定的前处理一般包括脂类的抽提、皂化、甲酯化、脂肪酸甲酯的萃取等几个步骤，操作步骤繁琐、需要时间较长，目前缺乏一种简便、快速、效果好的制备微藻脂肪酸甲酯的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法，制备步骤简便、快速、省时省力，能满足现有技术的上述需求。一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于首先制备乙酰氯和无水甲醇的混合溶液，两者的体积比为1 18 23 ；其次称取冷冻干燥的藻粉放入具盖玻璃试管中，重量为(5 30)mg ；再向具盖玻璃试管加入上述混合溶液，藻粉的重量与混合溶液体积的比例范围为(1.67 6)mg/ml，拧紧盖子，摇勻；将该玻璃试管插入试管架中，该试管架放入温度为75V 85°C水浴锅中，加热25 35分钟；最后将玻璃试管取出，降温至室温后，再加入(1 :3)ml正己烷，振荡，分层萃取得到微藻脂肪酸甲酯。本发明不需要进行脂类的抽提和皂化等步骤，而是直接对干燥的微藻样品进行甲酯化处理而得到微藻脂肪酸甲酯，操作步骤简便、快速、效果好。
具体实施例方式下面对本发明快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法做进一步说明。一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法，首先制备乙酰氯和无水甲醇混合溶液，乙酰氯和无水甲醇体积比为1 18 23，制备时，先用量筒量取无水甲醇放入棕色广口瓶中，再用移液枪按照上述体积比取乙酰氯慢慢一滴滴加入到装有无水甲醇的棕色广口瓶中，边加边摇勻。在该操作中使用的量筒、移液枪头、棕色广口瓶等使用前必须放入烘箱中充分烘干，如果这些容器带有水珠，在制备乙酰氯和无水甲醇混合液时，容易引起轻微爆炸，因为乙酰氯遇水剧烈分解，故必须干燥无水。其次称取重量为(5 30)mg冷冻干燥的藻粉放入具盖玻璃试管中，具盖玻璃试管必须清洗干净，且烘干无水珠，加入的藻粉可以轻轻研磨，会加快微藻脂肪酸甲酯的抽提；用移液枪将上述乙酰氯和无水甲醇的混合溶液加入到装有藻粉的具盖玻璃试管中，藻粉的重量与混合溶液体积的比例范围为(1. 67 6)mg/ ml，摇勻。在盖子里垫一层保鲜膜后拧紧具盖玻璃试管盖子，加入一层保鲜膜是为了防止样品加热时带有微藻脂肪酸甲酯的有机溶剂挥发，可以充分密封具盖玻璃试管不漏气。再次向水浴锅中放入铝制试管架，是为了随后将放藻粉的具盖玻璃试管插入其内进行加热， 一次性可以插入多支具盖玻璃试管，大大提高了处理样品的效率。水浴锅型号的大小可根据实验需要定制即可；之后向水浴锅内加水到一定高度，如果加入水太满再放入玻璃试管容易使水溢出来；打开水浴锅开关调节温度为75°C 85°C。将拧紧盖子的玻璃试管放入恒温75°C 85°C的水浴锅中，是为了促进甲酯化反应，加热25 35分钟是多次实验总结得出的结论。最后将玻璃试管取出来放置在试管架上，降温到室温后再打开具盖玻璃试管盖子，过早打开盖子有机溶剂容易挥发，损失制得的微藻脂肪酸甲酯；再用移液枪取(1 3)ml正己烷加入到玻璃试管中，摇勻拧紧盖子等待萃取分层清晰，该分层过程需要多个小时，时间越长分层越清晰，且萃取的微藻脂肪酸甲酯纯度高含杂质量少；再用移液枪慢慢吸取最上层黄色液体放入样品瓶中，该过程吸取微藻脂肪酸甲酯时可用小量程移液枪慢慢吸取，到达分层界面时就不要再吸取，否则容易吸取到下层杂质；如果不是立刻进行微藻脂肪酸组分和含量的测定，可将样品瓶放入-20°C冰箱中保存，以防止不饱和微藻脂肪酸甲酯被氧化，影响气相色谱-质谱仪测定的微藻脂肪酸各组分的含量。本发明实施例，首先制取乙酰氯和无水甲醇混合溶液，用移液枪吸取乙酰氯 0. 14ml和无水甲醇2. 86ml加入到棕色广口瓶中，摇勻；其次称取IOmg冷冻干燥的藻粉放入具盖玻璃试管中，用移液枪取3ml的乙酰氯和无水甲醇混合液加入到装有藻粉的玻璃试管中摇勻，在盖子里垫一层保鲜膜后拧紧盖子；再次向水浴锅中放入铝制试管架后加水，打开水浴锅开关调节温度为80°C，水温恒定后，将上述玻璃试管放入水浴锅中加热30分钟后，将其取出来放置试管架上降温到室温；最后用移液枪取2ml的正己烷加入到具盖玻璃试管中，摇勻等待分层清晰，该分层过程要10小时左右，再用移液枪吸取最上层黄色液体即微藻脂肪酸甲酯放入样品瓶中，立即在气相色谱-质谱仪的进样孔里加入制得的微藻脂肪酸甲酯测定微藻脂肪酸各组分和含量即可；如果不能立刻进行微藻脂肪酸甲酯的测定， 可将微藻脂肪酸甲酯样品瓶放入_20°C冰箱中保存。
权利要求
1. 一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于首先制备乙酰氯和无水甲醇的混合溶液，两者的体积比为1 18 23 ；其次称取冷冻干燥的藻粉放入具盖玻璃试管中，重量为(5 30)mg ；再向具盖玻璃试管加入上述混合溶液，藻粉的重量与混合溶液体积的比例范围为(1.67 6)mg/ml，拧紧盖子，摇勻；将该玻璃试管插入试管架中，该试管架放入温度为75°C 85°C水浴锅中，加热25 35分钟；最后将玻璃试管取出，降温至室温后， 再加入(1 3)ml正己烷，振荡，分层萃取得到微藻脂肪酸甲酯。
全文摘要
一种快速高效的微藻脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于首先制备乙酰氯和无水甲醇的混合溶液，两者的体积比为1∶18～23；其次称取冷冻干燥的藻粉放入具盖玻璃试管中，重量为(5～30)mg；再向具盖玻璃试管加入上述混合溶液，藻粉的重量与混合溶液体积的比例范围为(1.67～6)mg/ml，拧紧盖子，摇匀；将该玻璃试管插入试管架中，该试管架放入温度为75℃～85℃水浴锅中，加热25～35分钟；最后将玻璃试管取出，降温至室温后，再加入(1～3)ml正己烷，振荡，分层萃取得到微藻脂肪酸甲酯。本发明不需要进行脂类的抽提和皂化等步骤，而是直接对干燥的微藻样品进行甲酯化处理而得到微藻脂肪酸甲酯，操作步骤简便、快速、效果好。
文档编号C11C3/10GK102517156SQ20111045654
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月31日 优先权日2011年12月31日
发明者刁永芳, 刘春强, 梁英, 石伟杰, 范丽敏, 许梨花 申请人:中国海洋大学