一种微藻油脂色素脱除方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及油脂纯化技术领域，具体说一种微藻油脂色素脱除的方法。
【背景技术】
[0002] 微藻具有种类多、光合作用效率高、生物产量高、生长周期短及自身油脂含量高等 优点，被认为是制备生物柴油最佳的生物质能源原料之一，因此在微藻培养及生产过程中 脂质分析对微藻的调控培养及代谢研究都具有重要意义。此外微藻中富含多不饱和脂肪 酸，尤其是二十二碳六烯酸（DHA)和二十碳五烯酸（EPA)在营养和医学领域具有较高的 作用，微藻多不饱和脂肪酸的提取，从纯种培养到精炼都需严格消毒，无菌操作，所生产的 DHA、EPA纯度高、无污染，不含鱼腥味，质量远胜鱼油DHA。但微藻中色素含量高，影响油脂 色泽及品质，因此微藻油脂色素的脱除为油脂分离分析及多不饱和脂肪酸生产工艺中必不 可少的步骤。目前针对于油脂的脱色工艺主要采用物理吸附脱色和漂白剂脱色。吸附剂脱 色是利用某些具有较强选择性吸附作用的物质，在一定条件下吸附色素和其它杂质以进 行净化的方法，相比于漂白剂的脱色，吸附脱色可去除色素及杂质的干扰，从本质上改变油 脂品质与纯度。常用的脱色材料包括活性炭、活性白土、双氧水，且脱色温度一般在60-150 ° C，吸附时间15-40min，搅拌下对色素进行吸附，然后经过过滤、离心等操作进行样品与 吸附剂的分离，此过程较繁琐、耗能、费时，且色素脱除率较低，在50-80%。
[0003] 石墨化碳是由特种碳黑材料经独特的表面活化工艺制备而得，其表面的正六元环 结构，使其对平面分子有极强的亲和力，具有高净化效果，高回收率和高重现性的优良特 性，已应用于农残分析中，特别是蔬菜水果等色素较高的样品的前处理中。本发明以石墨化 碳固相萃取柱为材料，对微藻油脂中色素进行吸附脱除。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种适用于微藻油脂色素脱除的方法。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案内容为：
[0006] (1)色素脱除
[0007] 首先将石墨化碳固相萃取柱（200mg-1000mg)用l-5mL样品溶剂活化，溶剂自然流 出。
[0008] 上样油脂质量为石墨化碳填料的2% -10%，可多次上样，上样量或上样次数以吸 附后所要求的色素脱除率为标准。洗脱液为油脂溶剂，负压抽真空保证洗脱液液约10-20 滴/min流出，洗脱体积为柱体积的10-15倍。
[0009] (2)色素脱除率计算
[0010] 因为微藻中同时存在叶绿素类和类胡萝卜素类两大类色素，且不同的微藻两类色 素的最大吸收波长存在差异，所以根据微藻的种类全扫描确定两类色素的两个最大吸收波 长，并计算色素脱除率。
[0011]
[0012] 式中A。为脱色前油脂的吸光值;A 脱色后油脂的吸光值
[0013] 本发明与现有技术相比具有如下优点：
[0014] 本发明与现有技术相比具有如下优点：
[0015] 1.方法简单：只需固相萃取装置一套，与现有色素脱除工艺相比无需进行加热， 搅拌等操作，无需吸附反应釜和过滤，无色素吸附时间。
[0016] 2.色素脱除率高：色素脱除率高达92%以上，高于双氧水、活性炭和活性白土的 色素脱除率。
[0017] 3.避免多不饱和脂肪酸的氧化：本方法可采用常温或低温操作，避免了加热或使 用氧化性脱色剂引起的多不饱和脂肪酸的氧化。
【附图说明】
[0018] 图1石墨化碳固相萃取对湛江等鞭金藻色素脱除
[0019] 油脂上样量对脱色率的影响（a)和脱色前后油脂的对比（b) 1 :脱色前；2 :脱色后
[0020] 图2石墨化碳固相萃取对微拟球藻色素脱除
[0021] 油脂上样量对脱色率的影响（a)和脱色前后油脂的对比（b) 1 :脱色前；2 :脱色后
[0022] 图3石墨化碳固相萃取对角毛藻色素脱除
[0023] 油脂上样量对脱色率的影响（a)和脱色前后油脂的对比（b) 1 :脱色前；2 :脱色 后。
[0024] 图4石墨化碳固相萃取对螺旋藻色素脱除
[0025] 油脂上样量对脱色率的影响。
【具体实施方式】
[0026] 下面通过具体实施例对本发明的方法和结果进行说明。
[0027] 实施例1
[0028] 所用微藻为湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis)，色素脱除步骤如下
[0029] (1)微藻油脂提取
[0030] 称取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶剂氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL进行 超声破碎提取（400w,超声5s，间隔5s，超声5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，离心 分层后，取氯仿层定容于2mL容量瓶。
[0031] (2)色素脱除
[0032] 首先将石墨化碳固相萃取柱（填料200mg)用2mL氯仿活化，上样油脂质量分别为 4. 86、7. 29、9. 72、12. 15mg，分别为石墨化碳填料的 2. 43%、3. 65%、4. 86%、6. 08%，洗脱溶 剂氯仿的体积为柱体积的10倍。
[0033] (3)色素脱除率计算
[0034] 因为微藻中同时存在叶绿素类和类胡萝卜素类两大类色素所以，而且不同的微藻 两类色素的最大吸收波长存在差异，所以根据微藻的种类全扫描确定两类色素的两个最大 吸收波长，在湛江等鞭金藻中叶绿素和类胡萝卜素的最大吸收波长分别为662nm和466nm， 并计算色素脱除率。
[0035]
[0036] 式中A。为脱色前油脂的吸光值;A 脱色后油脂的吸光值
[0037] (4)色素脱结果
[0038] 图Ia显示上样量对色素脱除率的影响，在上样量2. 43%-6. 08%范围内，石墨化 碳对叶绿素类脱除率达99. 8%以上。上样量增加时类胡萝卜素的脱除率下降，当上样量为 6. 08%时，石墨化碳填料对湛江等鞭金藻中叶绿素类的脱除率达到99. 8%，类胡萝卜素类 的脱除率为92. 4%。图Ib显示脱色前后油脂的变化，显示脱色前后油脂基本无变化
[0039] 实施例2
[0040] 所用微藻为微拟球藻（Nannochloropsis oceanica IMET1)，色素脱除步骤如下
[0041] (1)微藻油脂提取
[0042] 称取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶剂氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL进行 超声破碎提取（400w,超声5s，间隔5s，超声5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，离心 分层后，取氯仿层定容于2mL容量瓶。
[0043] (2)色素脱除<