br>[0044] 首先将石墨化碳固相萃取柱（填料200mg)用2mL氯仿活化，上样油脂质量分别为 5. 82、8. 73、IL 64、17. 46mg，分别为石墨化碳填料的 2. 91 %、4. 37 %、5. 82 %、8. 73 %，洗脱 溶剂氯仿的体积为柱体积的10倍。
[0045] (3)色素脱除率计算
[0046] 因为微藻中同时存在叶绿素类和类胡萝卜素类两大类色素所以，而且不同的微藻 两类色素的最大吸收波长存在差异，所以根据微藻的种类全扫描确定两类色素的两个最大 吸收波长，在微拟球藻中叶绿素和类胡萝卜素的最大吸收波长分别为662nm和436nm，并计 算色素脱除率。
[0047]
[0048] 式中A。为脱色前油脂的吸光值；A 脱色后油脂的吸光值
[0049] (4)色素脱结果
[0050] 图2显示上样量对色素脱除率的影响，在上样量2. 91% -8. 73%范围内，石墨化 碳对叶绿素类脱除率达99. 8%以上。上样量增加时类胡萝卜素的脱除率下降，当上样量为 8. 73%时，石墨化碳填料对湛江等鞭金藻中叶绿素类的脱除率达到99. 8%，类胡萝卜素类 的脱除率为96. 1 %。图2显示脱色前后油脂的变化，显示脱色前后油脂基本无变化。
[0051] 实施例3
[0052] 所用微藻为角毛藻（Chaetoceros)，色素脱除步骤如下
[0053] (1)微藻油脂提取
[0054] 称取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶剂氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL进行 超声破碎提取（400w,超声5s，间隔5s，超声5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，离心 分层后，取氯仿层定容于2mL容量瓶。
[0055] (2)色素脱除
[0056] 首先将石墨化碳固相萃取柱（填料200mg)用2mL氯仿活化，上样油脂质量分别为 3. 1、6. 2、9. 3、13. 2mg，分别为石墨化碳填料的I. 55%、3. 10%、4. 65%、6. 58%，洗脱溶剂氯 仿的体积为柱体积的10倍。
[0057] (3)色素脱除率计算
[0058] 因为微藻中同时存在叶绿素类和类胡萝卜素类两大类色素所以，而且不同的微藻 两类色素的最大吸收波长存在差异，所以根据微藻的种类全扫描确定两类色素的两个最大 吸收波长，在角毛藻中叶绿素和类胡萝卜素的最大吸收波长分别为662nm和428nm，并计算 色素脱除率。
[0059]
[0060] 式中A。为脱色前油脂的吸光值；A 脱色后油脂的吸光值
[0061] (4)色素脱结果
[0062] 图4a示上样量对色素脱除率的影响，在上样量1. 55% -6. 58%范围内，石墨化碳 对叶绿素类脱除率达99. 2%以上。上样量增加时类胡萝卜素的脱除率下降，当上样量为 6. 58%时，石墨化碳填料对湛江等鞭金藻中叶绿素类的脱除率达到99. 2%，类胡萝卜素类 的脱除率为98. 2%。图4b示脱色前后油脂的变化，显示脱色前后油脂基本无变化。
[0063] 实施例4
[0064] 所用微藻为螺旋藻（Spirulina platensis)，色素 脱除步骤如下
[0065] (1)微藻油脂提取
[0066] 称取IOOmg微藻藻粉，加入提取溶剂氯仿-甲醇-水（1:2:0. 8 v/v/v) 3. 8mL进行 超声破碎提取（400w,超声5s，间隔5s，超声5次），加入ImL氯仿和ImL水混合均勾，离心 分层后，取氯仿层定容于2mL容量瓶。
[0067] (2)色素脱除
[0068] 首先将石墨化碳固相萃取柱（填料填料200mg)用2mL氯仿活化，上样油脂质量分 别为 2. 7、5. 4、8. 1、10. 8mg，分别为石墨化碳填料的 1. 35 %、2. 70 %、4. 05 %、5. 40 %，洗脱 溶剂氯仿的体积为柱体积的10倍。
[0069] (3)色素脱除率计算
[0070] 因为微藻中同时存在叶绿素类和类胡萝卜素类两大类色素所以，而且不同的微藻 两类色素的最大吸收波长存在差异，所以根据微藻的种类全扫描确定两类色素的两个最大 吸收波长，在螺旋藻中叶绿素和类胡萝卜素的最大吸收波长分别为662nm和428nm，并计算 色素脱除率。
[0071]
[0072] 式中A。为脱色前油脂的吸光值;A 脱色后油脂的吸光值
[0073] (4)色素脱结果
[0074] 图3显示上样量对色素脱除率的影响，当上样量为5. 40%时，石墨化碳填料对湛 江等鞭金藻中叶绿素类的脱除率达到94.9%，类胡萝卜素类的脱除率为92.6%。由于螺旋 藻中油脂含量少，未展示脱色前后的油脂的变化。
【主权项】
1. 一种微藻油脂色素脱除方法，其特征在：利用石墨化碳固相萃取柱对溶于溶剂中的 微藻油脂所含的色素进行吸附脱除。2. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：具体步骤如下：（1)固相萃取柱活化；是 指采用溶剂浸泡石墨化碳固相萃取柱，活化溶剂与溶解油脂的溶剂相同，适用溶剂范围包 括：氯仿、甲醇、丙酮、正己烷、正庚烷、水中的一种或二种以上；（2)上样；（3)洗脱。3. 按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中洗脱溶剂为溶解油脂的 溶剂，洗脱溶剂用量为柱内填料体积的10-15倍。4. 按照权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：溶解油脂的溶剂为氯仿、甲醇、丙 酮、正己烷、正庚烷、水中的一种或二种以上。5. 按照权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2)中，样品上样量为石墨化碳 填料质量的2% -10%。6. 按照权利要求1所述方法，其特征在于：所述微藻包括绿藻、蓝藻、金藻和硅藻中的 一种或二种以上。7. 按照权利要求1所述方法，其特征在于：所述固相萃取柱的填料为石墨化碳，填料平 均粒度：120-400目，比表面积：100m2/g。
【专利摘要】本发明公开了一种微藻油脂色素脱除的方法，该方法以石墨化碳制备的固相萃取柱对微藻油脂中的色素进行吸附脱除，提高油脂品质，可应用于微藻脂质的分离分析纯化过程及微藻高附加值脂质产品(DHA、EPA)食品工艺中色素的脱除。本发明方法适用于绿藻、金藻、硅藻、蓝藻等藻类油脂色素的快速脱除，色素脱除率均达92％以上。该方法操作简单、避免了传统油脂脱色工艺中加热、搅拌、过滤、离心等操作，色素脱除率高。
【IPC分类】C11B3/10
【公开号】CN105542951
【申请号】CN201410606051
【发明人】薛松, 孟迎迎, 曹旭鹏
【申请人】中国科学院大连化学物理研究所
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年10月31日