α7烟碱性乙酰胆碱受体的调节剂和其治疗用途的制作方法

专利名称：α7烟碱性乙酰胆碱受体的调节剂和其治疗用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有α7烟碱性乙酰胆碱受体(α7 nAChR)激动剂活性的化合物、其制备方法、包含其的药物组合物以及其用于治疗神经病学和精神病学疾病的用途。
背景技术：
许多最近的观察都指向于烟碱在各种动物和培养细胞的神经变性模型中的可能的神经保护作用，所述模型涉及兴奋毒性损伤(excitotoxic insult)(1-5)、营养缺乏(6)、局部缺血(7)、创伤(8)、Aβ-介导的神经元死亡(9-11)和蛋白-聚集介导的神经元变性(9；12)。在烟碱显示出神经保护作用的许多情况中，已经借助了包含α7亚型的受体的直接参与(7；11；13-16)，这表明含有α7亚型的烟碱性乙酰胆碱受体的活化可能在介导烟碱的神经保护作用中起作用。可获得的数据表明，对于作为神经保护分子的激动剂/正调节剂的开发而言，α7烟碱性乙酰胆碱受体代表有效的分子靶标。实际上，已经确定了一些α7烟碱性受体激动剂并将其作为开发神经保护药物的可能先导进行了评价(18-22)。最近还描述了α7烟碱性乙酰胆碱受体对炎性过程的参与(23)。因此，开发该受体的新调节剂应当可产生神经病学、精神病学和炎性疾病的新疗法。
发明概述本发明提供了作为α7烟碱性乙酰胆碱受体(α7 nAChR)完全或部分激动剂的化合物、包含所述化合物的药物组合物以及其用于治疗可由α7烟碱性乙酰胆碱受体的活化获益的疾病如神经病学和精神病学障碍、特别是阿尔茨海默病和精神分裂症的用途。
发明详述第一方面，本发明提供了式I的化合物 其中Y是基团-CONH-；-NHCONH-；-NHCO-；-SO2NH-；-NHSO2-；-NHSO2NH-；-OCONH；-NHCOO-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R是氢；卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基或酰基；羟基；氰基；硝基；单-或二-(C1-C6)烷基氨基、酰基氨基或烷基氨基羰基；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-氨磺酰基；5至10-元的芳族或杂芳族环，其任选地被以下基团取代卤素；直链、支链或环状的(C1-C3)烷基、卤代烷基、烷氧基或酰基；羟基；氰基；硝基；氨基；单-或二-(C1-C6)烷基氨基、酰基氨基或烷基氨基羰基；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-氨磺酰基；X是下式的基团 其中
R′表示(C1-C6)酰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基；-(CH2)j-R基团，其中j＝0、1且R是5至10-元的芳族或杂芳族环，其任选地被以下基团取代卤素；羟基；氰基；硝基；(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基、酰基、酰基氨基；Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；n是0或1；s是1或2；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地表示氢；卤素；羟基；氰基；硝基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基、酰基；-(CH2)j-R基团，其中n和R的定义如上所述；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C3)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C3)烷基-氨磺酰基；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基。
优选的式I化合物的第一个组(Ia)是其中各基团定义如下的那些Y是-CONH-；-NHCO-；-NHCONH-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自氢；卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基或烷基氨基；三卤代烷基；苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
特别优选的化合物Ia是其中各基团定义如下的那些Y是-CONH(Q)-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 其中Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
另一组特别优选的化合物Ia是其中各基团定义如下的那些Y是-NHCONH(Q)-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基或烷基氨基；卤代烷基；苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；
p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
另一组特别优选的化合物Ia是其中各基团定义如下的那些Y＝-NHCO(Q)-；Q是苯基；R选自苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 其中Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
优选的式(I)化合物的另一个组(Ib)是其中各基团定义如下的那些Y是-CONH(Q)；Q是苯基、吲哚基；R选自卤素；苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的5-10-元的芳族或杂芳族环。
优选的式(I)化合物的另一个组(Ic)是其中各基团定义如下的那些Y是-NHCONH(Q)；Q是苯基、吲哚基；R选自卤素；苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的6-元的芳族或杂芳族环。
优选的式I化合物的另一个组(Id)是其中各基团定义如下的那些Y是-NHCO(Q)；Q是苯基、吡啶基；R选自苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；嘧啶基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如上文式(I)化合物所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的苯环。
特别优选的是其中各基团定义如下的化合物(Id)Y是-NHCO(Q)；Q是苯基；R选自苯基；吡啶基；吲哚基；嘧啶基；任选地被以下基团取代卤素；直链、支链或环状的(C1-C3)烷基、烷氧基或酰基；氰基；(C1-C6)烷基氨基；酰基氨基；烷基氨基羰基；氨基甲酰基；X是基团
其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的苯环。
本发明的化合物可以为游离碱或酸加成盐的形式，优选与可药用酸的盐。本发明还包括式I化合物的分开的异构体和非对映体或者其混合物(例如外消旋混合物)。
式(I)化合物可以通过许多合成途径来制备，其中一些如流程图1、2和3所示(也可参考Bioorg.Med.Chem.Lett.1995，5(3)，219-222)。
a)流程图1 根据流程图1，将被适宜活化的丁基邻苯二甲酰亚胺(化合物2)与胺(化合物1)在有机溶剂中在存在碱的情况下进行反应。例如，将1(或其盐酸盐)与2的混合物在甲基乙基酮中在存在碱性碳酸盐的情况下进行回流，直至反应完全，然后冷却反应混合物，通过过滤除去不溶性物质，用CHCl3洗涤滤液，将滤液和洗涤液浓缩至干。
在下一步中，将N-(4-氨基丁基)邻苯二甲酰亚胺3转化成(4-氨基丁基)胺4，例如通过将3与水合肼的混合物在乙醇中进行回流来进行转化。然后，将4与活化的物质5如例如(但不限于)酰氯或异氰酸酯在有机溶剂中在存在碱的情况下进行反应。例如，向4和5在CH2Cl2的混合物中加入三乙胺和催化量的DMAP，得到化合物I。或者，将4、5、碳二亚胺或羰基二咪唑和DMAP的混合物进行反应，得到化合物I。
b)流程图2
根据流程图2，将氨基丁醇与活化的酸类或异氰酸酯-例如(但不限于)被取代的酰氯6在存在碱的情况下-在有机溶剂如二氯甲烷中进行反应，直至反应完全。然后将由此获得的醇7在标准条件下进行氧化(例如Swern氧化)，然后将醛8与被适宜取代的胺1在标准条件下-例如用三乙酰氧基硼氢化钠-进行反应，得到化合物Iα。在R是卤素的情况下，可以进一步对Iα进行处理-例如通过与烃基代硼酸进行交叉偶联反应来进行处理，得到化合物Iβ。
c)流程图3 根据流程图3，将5-溴戊酰氯与(杂)芳族胺9在存在有机碱的情况下进行反应，得到5-溴戊酰胺10。将其与胺1进行反应以置换卤素并生成化合物Iα。在R是卤素的情况下，可以进一步对Iα进行处理-例如通过与羟基代硼酸进行交叉偶联反应来进行处理，得到化合物Iβ。
式I化合物、其旋光异构体或非对映体可以按照众所周知的方法进行纯化或分离，包括但不限于使用手性基质的色谱法和分级结晶。
在利用用α7烟碱性乙酰胆碱受体稳定转染的细胞进行的体外测定法中证明了代表性式I化合物组的药理学活性，在所述测定法中用表达α1和α3烟碱性乙酰胆碱受体以及5HT3受体的细胞作为对照来证明选择性。在利用原代神经元细胞培养物进行的以细胞为基础的兴奋毒性测定法中证明了这些化合物的神经保护作用。
因此，根据另一方面，本发明涉及治疗神经病学和精神病学障碍的方法，其包括给需要其的个体、优选人类个体施用有效量的式I化合物。可以由用本发明的化合物进行的治疗获益的神经病学和精神病学障碍包括但不限于老年性痴呆、注意力缺陷障碍(attention deficit disorder)、阿尔茨海默病和精神分裂症。一般而言，式I化合物可用于治疗可由α7烟碱性乙酰胆碱受体的活化获益的任何疾病情况、障碍或功能障碍，包括但不限于帕金森病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、多发性硬化、癫痫、记忆或学习能力缺失、惊恐症、认知障碍、抑郁、脓毒症、关节炎、免疫学和炎性障碍。
用于治疗的化合物剂量可以根据例如施用途径、疾病的性质和严重程度而变化。一般而言，用0.01至200mg/kg的日剂量可以在人中获得可接受的药理学作用。
另一方面，本发明涉及包含一种或多种式I化合物和可药用载体和赋形剂的药物组合物。药物组合物可以为固体、半固体或液体制剂的形式，优选地为溶液、混悬液、粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖浆、栓剂、气雾剂或控释系统的形式。组合物可以通过各种途径施用，包括口服、经皮、皮下、静脉内、肌内、直肠和鼻内，组合物优选地被配制成单位剂量形式，每个剂量含有约1至约1000mg、优选1至600mg活性成分。本发明的化合物可以为游离碱或酸加成盐的形式，优选与可药用酸的盐。本发明还包括化合物I的分开的异构体和非对映体或者其混合物(例如外消旋混合物)。制备药物组合物的原则和方法例如在Remington′s Pharmaceutical Science，Mack Publishing Company，Easton(PA)中有描述。


图1得自实施例64的化合物对大鼠皮质神经元中NMDA-诱导的毒性的影响。在加入NMDA前24小时将大鼠皮质神经元用所示浓度的化合物进行预处理，通过在24小时后进行乳酸脱氢酶(LDH)测量来测定毒性。将所有实验的数据均归一化至100％NMDA毒性。统计学分析*与NMDA处理相比p＜0.05；将单向ANOVA和Tukey post检验值归一化至NMDA的水平(＝100％)。
图2用得自实施例1的化合物或烟碱进行亚慢性处理对注射了使君子氨酸的动物的基底核中ChAT-阳性神经元数量的影响。在注射使君子氨酸前24小时和1小时施用化合物并且在损害后施用7天。剂量每天腹膜内注射化合物3mg/kg或每天腹膜内注射烟碱0.3mg/kg。根据文献数据和行为学研究中可比较的作用来选择剂量。将神经元的数量表示为与未注射半球相比的％变化。统计学分析ANOVA和Fisher Post-Hoc检验F(3，21)＝13.00P＜0.001*与注射使君子氨酸的大鼠相比P＜0.05 #与烟碱处理的大鼠相比P＜0.05。
图3图3a-被动回避试验的结果得自实施例1的化合物的急性施用对被动回避实验中年轻大鼠的东茛菪碱-诱导的遗忘的影响和选择性α-7拮抗剂MLA的逆转作用。在训练试验前20分钟通过腹膜内注射东莨菪碱0.5mg/kg诱导遗忘并在注射东茛菪碱后5分钟注射化合物(3mg/kg，腹膜内注射)。在施用东茛菪碱和化合物前10分钟施用MLA(5mg/kg，腹膜内注射)。将结果表示为训练试验后24小时的复测潜伏期。
统计学分析ANOVA和Tukey Post-Hoc检验*与盐水和东莨菪碱-处理的大鼠相比P＜0.05 #与盐水处理的大鼠相比P＜0.05。
图3b-物体识别试验的结果得自实施例1的化合物的急性施用对年轻大鼠的东茛菪碱-诱导的遗忘的影响。在训练试验前20分钟通过腹膜内注射东茛菪碱0.2mg/kg诱导遗忘并在注射东茛菪碱后5分钟注射化合物(3mg/kg，腹膜内注射)。将结果如下表示为根据训练试验2小时后进行的测试试验期间对新的(N)和熟悉的(F)物体的探察时间计算获得的分辨指数(discrimination index)分辨指数N-F/N+F。统计学分析ANOVA和Tukey Post-Hoc检验*与东茛菪碱处理的大鼠相比P＜0.05。
实验操作-化合物的合成一般说明除非另有规定，否则所有核磁共振光谱均是用Bruker AC200(200MHz)或装配有PFG ATB Broadband探针的Varian Mercury Plus 400Mhzspectrometer记录的。
对于2.5分钟方法，HPLC-MS分析是用与大气压API-ES MS偶联的Agilent 1100仪器进行的，使用Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6×150mm、Zorbax CN 4.6×150mm柱或Zorbax Extend C18 2.1×50mm柱。5和10分钟方法是用装配有Waters Micromass ZQ(ES电离)和Waters PDA 2996的waters 2795分离模块进行的，使用Waters XTerra MS C18 3.5μm 2.1×50mm柱。
制备型HLPC是用具有二元Gradient Module Waters 2525泵并与Waters Micromass ZQ(ES)或Waters 2487 DAD偶联的Waters 2767系统进行的，使用Supelco Discovery HS C18 5.0μm 10×21.2mm柱。
梯度洗脱是用0.1％甲酸/水和0.1％甲酸/乙腈进行的，在所示运行时间中使用5/95至95/5的梯度。
所有柱色谱法均是按照Still，C；J.Org Chem 43，2923(1978)的方法来进行的。所有TLC分析均是在硅胶(Merck 60 F254)上进行的并且通过在254nm下UV显像和KmnO4或茚三酮染色使斑点显现出来。
所有微波反应均是在CEM Discover炉中进行的。
N-(4-(芳基哌嗪-1-基)-丁基)邻苯二甲酰亚胺类这些化合物是按照Nishikawa，Y.等人；Chem.Pharm.Bull.，1989，37(1)，100-105中所述的一般操作来制备的。
将N-(4-溴丁基)-邻苯二甲酰亚胺(0.00135mol)、盐酸1-(芳基)-哌嗪(0.00135mol)、K2CO3(0.00270mol)、NaI(0.00186mol)和甲基乙基酮(7mL)的混合物在搅拌下回流20小时。将混合物冷却后，通过过滤除去不溶性物质并用CHCl3洗涤。将滤液和洗涤液真空浓缩至干。
将残余物用硅胶色谱法进行处理，用CHCl3/MeOH 95/5作为洗脱剂。
4-[4-(芳基-哌嗪-1-基)]-丁基胺类将N-(4-(芳基哌嗪-1-基)-丁基)邻苯二甲酰亚胺(0.236mmol)和水合肼(0.478mmol)在乙醇(2mL)中的溶液在搅拌下回流2小时。将溶液冷却后，通过过滤除去不溶性物质并用EtOH洗涤。将滤液和洗涤液真空浓缩至干。将残余物用CHCl3吸收。将CHCl3层用水洗涤，干燥并浓缩，得到标题胺。
4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺a)按照一般操作，将2-甲氧基苯基-哌嗪(3.4mL，17.7mmol)加入到N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(5g，17.7mmol)、碘化钠(1.33g，8.85mmol)和碳酸钾(3.67g，26.6mmol)在2-丁酮(70mL)中的混悬液中。将所得混悬液在100℃下搅拌18小时，然后进行LC-MS检查。将反应过滤并通过真空蒸馏除去溶剂；将所得油状物溶解于5％MeOH的二氯甲烷溶液中，用水和饱和NaCl洗涤，用Na2SO4干燥。在减压下除去溶剂，得到所需产物，为浓稠的黄色油状物。将残余物萃取到乙酸乙酯中，用水、然后用饱和盐水洗涤并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，得到5.01g 2-{4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-异吲哚-1，3-二酮，将其不经进一步纯化直接用于下面的步骤b)中(72％)。
将2-{4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-异吲哚-1，3-二酮(5.01g，12.7mmol)溶解于无水EtOH(60mL)中，滴加一水合肼(2.54mL，26mmol)。将反应在100℃下加热1小时。将反应过滤，减压浓缩并转化成其盐酸盐。将该盐溶解于15％NaOH中并萃取到乙酸乙酯中，得到2.04g 4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺，为蜡状固体(7.8mmol，61％)。
C15H25N3O质量(计算值)[263.39]；(实测值)[M+H+]＝264.39LC Rt＝0.45，92％(5分钟方法)NMR(400MHz，CDCl3)1.48(2H，m)；1.57(2H，m)；2.42(2H，m)；2.65(4H，bs)；2.72(2H，m)；3.1(4H，bs)；3.86(3H，s)；6.85(1H，d)；6.97(3H，m)。
4-[4-(2，4-二氟-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺向N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(5g，17.73mmol)和1-(2，4-二氟-苯基)-哌嗪(1 7.73mmol)在2-丁酮(100mL)中的溶液中加入碳酸钾(26.6mmol)和碘化钾(13.3mmol)。将所得混合物在90℃下加热过夜。冷却后，将溶液过滤并蒸发至干。将残余物溶解于二氯甲烷(100mL)中并用水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥并蒸发。将该物质溶解于乙醇(100mL)中并加入肼(2eq)。将溶液回流4小时，这时形成大量沉淀。然后加入浓HCl(5mL)，将混合物再加热1小时。冷却后，蒸发掉溶剂并将残余物溶解于2M HCl(100mL)中。将该溶液过滤并再水性滤液蒸发至干。将所得残余物用异丙醇(30mL)吸收并过滤，得到所需产物的盐酸盐。通过溶解于NaOH(15％w/w)中并用二氯甲烷萃取而将该盐转化成游离胺(2.6g，54％)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.3(brs，2H)，1.46-1.58(m，4H)，2.41(t，2H)，2.62(s，4H)，2.73(t，2H)，3.05(brs，4H)，6.77-6.83(m，2H)，6.87-6.94(m，1H)(M+1)e/z 2704-吗啉-4-基-丁基胺a)按照一般操作，将吗啉(1.7mL，20mmol)加入到N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(5.36g，20mmol)、碘化钠(1.5g，10mmol)和碳酸钾(5.53g，40mmol)在2-丁酮(80mL)中的混悬液中。将所得混悬液在100℃下搅拌18小时，然后进行LC-MS检查。将反应过滤并通过真空蒸馏除去溶剂；将所得油状物溶解于5％MeOH的二氯甲烷溶液中，用水和饱和NaCl洗涤，用Na2SO4干燥。在减压下除去溶剂，得到所需产物，为浓稠的黄色油状物。将残余物萃取到乙酸乙酯中，用水、然后用饱和盐水洗涤，用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，得到5.7g 2-(4-吗啉-4-基-丁基)-异吲哚-1，3-二酮，将其不经进一步纯化直接用于下面的步骤b)中。
C16H20N2O3质量(计算值)[288.35]；(实测值)[M+H+]＝289.36Lc Rt＝0.83，95％(3分钟方法)b)将4-吗啉-4-基-丁基-异吲哚-1，3-二酮(5.69g，19mmol)溶解于无水EtOH(95mL)中并滴加一水合肼(3.8mL，80mmol)。将反应在100℃下加热1小时。LC-MS表明反应完全。将反应过滤，减压浓缩，用甲苯和二氯甲烷吸收以除去过量的邻苯二甲酰肼；将粗品胺用SCX柱纯化，用MeOH∶二氯甲烷1∶1、然后用2M NH3的MeOH溶液进行洗脱，得到1.46g(9.2mmol，48％)。
C8H18N2O质量(计算值)[158.25]；(实测值)[M+H+]＝159.27LC Rt＝0.29，96％(3分钟方法)NMR(400MHz，CD3OD)1.51(4H，m)；2.36(2H，m)；2.46(4H，s)；2.64(2H，m)；3.68(4H，m)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.26(brs，2H)，1.44-1.57(m，4H)，2.35(t，2H)，2.44(brs，4H)，2.71(t，2H)，3.72(m，4H)4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丁基胺以与4-[4-(2，4-二氟-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺相似的方式制备并且以25％的收率获得该化合物。
1H-NMR(dmso-d6+D2O)δ1.53-1.61(m，2H)，1.66-1.74(m，2H)，2.80(t，2H)，2.85(s，3H)，3.17(m，2H)，3.38(brs，4H)，3.67(brs，4H)；(M+1)e/z172。
4-哌啶-1-基-丁基胺a)按照一般操作，将N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(5.96g，20mmol)加入到哌啶(1.98mL，20mmol)、碘化钠(1.5g，10mmol)和碳酸钾(4.15g，21mmol)在2-丁酮(100mL)中的混悬液中。将所得混悬液在85℃下搅拌18小时。将反应过滤并通过真空蒸馏除去溶剂；将所得油状物用水洗涤并用二氯甲烷回收。在减压下除去溶剂，得到3.7g所需产物，为白色固体(收率65％)。
C17H22N2O2质量(计算值)[286.38]；(实测值)[M+H+]＝287Lc Rt＝0.97，95％(5分钟方法)NMR(400MHz，CDCl3)1.41(2H，m)，1.49-1.59(6H，m)，1.65-1.72(2H，m)，2.15-2.35(6H，m)，3.69-3.73(6H，m)，7.69-7.74(2H，m)，7.80-7.85(2H，m)。
b)将2-(4-哌啶-1-基-丁基)-异吲哚-1，3-二酮(3.7g，13mmol)溶解于EtOH(50mL)中并滴加一水合肼(1.26mL，26mmol)。将该混合物在80℃下加热4小时。将反应过滤，减压浓缩，用甲苯和二氯甲烷吸收以通过过滤除去过量的邻苯二甲酰肼；将粗品胺用SCX柱纯化，用MeOH∶二氯甲烷1∶1、然后用2M NH3的MeOH溶液进行洗脱，得到g(410mg，35％)。
C9H20N2质量(计算值)[156.27]；(实测值)[M+H+]＝157LC Rt＝0.31(5分钟方法)NMR(400MHz，CD3OD)1.45-1.62(10H，m)，2.30-2.43(10H，m)，2.64-2.67(2H，m)。
1-(4-氨基-丁基)-哌啶-3-甲酸二乙基酰胺a)按照一般操作，将可商购获得的3-哌啶甲酸N，N-二乙基酰胺(N，N-diethylnipecotamide)(3.4g，40mmol)称重，放置到烧瓶中并溶解于150mL 2-丁酮。向该N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(11.3g，40mmol)中加入NaI(3g，20mmol)和K2CO3(8.28g，60mmol)。将所得混合物在85℃下加热20小时。将该溶液真空干燥，将该粗品溶液用水和二氯甲烷洗涤两次。将有机层用快速色谱法进行纯化，用二氯甲烷/MeOH 96/4进行洗脱。
C22H31N3O3质量(计算值)[385.50]；(实测值)[M+H+]＝386LC Rt＝2.63，94％(10分钟方法)NMR(400MHz，CDCl3)1.08-1.12(2H，m)，1.14-1.21(2H，m)，1.52-1.76(8H，m)，2.1(1H，m)，2.23(1H，m)，2.44(1H，m)，2.79(1H，m)，2.94(2H，m)，3.29-3.35(4H，m)，3.69-3.73(2H，m)，7.71-7.82(2H，m)，7.82-7.86(2H，m)。
b)用前面实施例所述的一般方法将该邻苯二甲酰亚胺去保护，以38％的收率得到所需产物。
C14H29N3O质量(计算值)[255.23]；(实测值)[M+H+]＝256LC Rt＝0.35(10分钟方法)NMR(400MHz，CDCl3)1.09(3H，m)；1.21(3H，m)；1.50-1.60(1H，m)；1.62-1.84(6H，m)，2.13-2.19(1H，m)；2.35-2.40(1H，m)；2.46-2.50(2H，m)；2.79-3.02(5H，m)；3.27-3.47(4H，m)；5.20-5.31(3H，m)。
合成联芳基羧酸的一般操作根据Gong，Y.和Pauls，H.W.Synlett，2000，6，829-831所述的操作方法来进行制备。
将催化量的Pd(PPh3)4加入到脱气的4-羧基苯基硼酸(0.001mol)和芳基溴(0.001mol)在0.4M碳酸钠溶液(5mL)和乙腈(5mL)中的溶液中。
将该混合物在90℃、N2下加热15-20小时。将该热混悬液过滤。将滤液浓缩至初始体积的大约一半，然后用CH2Cl2洗涤。将水层用浓HCl酸化并收集所得沉淀。
2′-氨基-联苯-4-甲酸收率80％1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)8.10(d，1H)；7.50(d，2H)；6.94(m，4H)质量(ES)m/z％214(M+1，100％)。
4-(吡啶-2-基)-苯甲酸收率70％；1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)8.63(d，1H)；8.05(m，4H)；7.90(m，2H)；7.51(m，1H)。
质量(ES)m/z％200(M+1，100％)。
4-(1-氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸质量(ES)m/z％216(M+1，100％)。
2′-甲基联苯-4-甲酸根据Leadbeater，N.E.；Marco，M；Org.Lett.2002，4917)2973-2976所述的操作方法的变体来进行制备在一个10mL的玻璃管中放入4-羧基苯基硼酸(166mg，1.0mmol)、2-溴甲苯(120μl，1.0mmol)、Na2CO3(315mg，3mmol)、Pd(OAc)2(1mg，0.004mmol)、2mL水和一根磁力搅拌棒。将该容器用一个隔膜密封并放置到微波腔中。用微波辐射(最大发射功率200W)使温度增加至150℃；然后将反应混合物在该温度下保持5分钟。
使混合物冷却至室温，将反应混合物过滤，用少量CHCl3洗涤。将水层酸化并收集沉淀。将产物用硅胶色谱法进行纯化，用石油醚/AcOEt 50/50作为洗脱剂，得到67.8mg 12，收率为32％。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)8.05(m，2H，芳族)；7,41(m，2H，芳族)；7,21(m，4H，芳族)；2,22(s，3H，C-CH3)。
质量(ES)m/z％424(2M，100％)。
2′-硝基联苯-4-甲酸在0℃下，向搅拌着的2′-氨基联苯-4-甲酸(213mg，0.001mol)在己烷/水/丙酮(6.7∶5∶1，6mL)中的溶液中加入NaHCO3(400mg)和Oxone(1.050g)。20分钟后，加入第二份NaHCO3(400mg)和Oxone(1050mg)，20分钟后，加入最后一份NaHCO3(400mg)和Oxone(1050mg)。6小时后，将该混悬液用水稀释并用CH2Cl2萃取有机层。将合并的有机层蒸发，得到2′-硝基-联苯-4-甲酸(138.5mg，0.00057mol)，收率为57％。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.80(m，8H)质量(ES neg)m/z％242(M-1，100％)；226(M-1-16，70％)2′-甲氧基-联苯-4-甲酸向4-羧基苯基硼酸(3.32g，20mmol)、Fibrecat1007(2g)和碳酸钾(3.03g，22mmol)在乙醇/水(20mL/20mL)中的溶液中加入1-溴-2-甲氧基-苯(4.11g，22mmol)。将反应混合物加热至回流达3小时。冷却后，过滤并在减压下蒸发溶液。将残余物混悬于柠檬酸水溶液(10％w/v)中，过滤并用水和乙醚洗涤。将所得固体真空干燥，得到标题化合物(4.02g，88％)。
1H-NMR(dmso-d6)δ3.79(s，3H)，7.08(m，1H)，7.34(m，1H)，7.58(d，1H)，7.96(d，1H)2′-氯-联苯-4-甲酸将4-羧基苯基硼酸(3.32g，20mmol)、Fibrecat1007(1g)、碳酸钾(3.03g，22mmol)和1-溴-2-氯-苯(4.2g，22mmol)的混合物在CEM DiscoveryMicrowave中暴露于微波辐射15分钟高至120℃的最高温度。冷却后，将混合物过滤并在减压下蒸发溶液。将残余物混悬于1M HCl溶液中，过滤并用水和乙醚洗涤。将所得固体真空干燥，得到标题化合物(4.0g，86％)。
1H-NMR(dmso-d6)δ7.38-7.45(m，3H)，7.50-7.59(m，3H)，7.98-8.02(m，2H)；(M+1)e/z 2332′，4′-二氟-联苯-4-甲酸如制备2′-氯-联苯-4-甲酸所述的那样进行制备并且以49％的收率获得该化合物。
1H-NMR(dmso-d6)δ7.24(m，1H)，7.42(m，1H)，7.62-7.60(m，3H)，8.04(d，2H)；(M+1)e/z 2352′-氨基甲酰基-联苯-4-甲酸如制备2′-氯-联苯-4-甲酸所述的那样进行制备并且以29％的收率获得该化合物。
1H-NMR(dmso-d6)δ7.33(s，1H)，7.40-7.52(m，6H)，7.70(s，1H)，7.95(d，2H)；(M+1)e/z 2422-甲基-联苯-4-甲酸如制备2′-氯-联苯-4-甲酸所述的那样进行制备并且以59％的收率获得该化合物。
1H-NMR(dmso-d6)δ2.29(s，3H)，7.31-7.50(m，6H)，7.83(dd，1H)，7.89(s，1H)；(M+1)e/z 2136-苯基-烟酸如制备2′-氯-联苯-4-甲酸所述的那样制备该化合物1H-NMR(dmso-d6)δ7.47-7.55(m，3H)，8.1(d，1H)，8.11-8.16(m，2H)，8.32(dd，1H)，9.13(s，1H)，13.39(brs，1H)；(M+1)e/z 2004-(5-氧代-4，5-二氢-[1，2，4]二唑-3-基)-苯甲酸a)4-(N-羟基亚氨基氨基甲酰基(carbamimidoyl))-苯甲酸甲酯将4-氰基-苯甲酸甲酯(16.5g，102mmol)、盐酸羟胺(102mmol)、NaHCO3(110mmol)在甲醇(200mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟并将其加热至回流达另外3小时。冷却后，加入水(400mL)，通过过滤收集沉淀，洗涤并在50℃下在真空干燥箱中干燥8小时，得到标题化合物，为白色固体(16,5g，83％)。
(M+1)e/z 195b)4-(5-氧代-4，5-二氢-[1，2，4]二唑-3-基)-苯甲酸向4-(N-羟基亚氨基氨基甲酰基)-苯甲酸甲酯(5.7g，29.4mmol)在二烷(30mL)中的溶液中加入CDI(1.2eq)。将反应混合物加热至110℃达30分钟。冷却后，蒸发掉溶剂，将残余物混悬于水中并用HCl水溶液(3M)将pH调至pH＝2。通过过滤收集沉淀，用水洗涤，混悬于NaOH水溶液(30mL，10％w/w)和甲醇(50mL)中，在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂后，将残余物用水(30mL)吸收，加入HCl水溶液(3M)将pH调至pH＝2。通过过滤收集沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物，为白色固体(4.1g，68％)。
1H-NMR(dmso-d6)δ2.29(s，3H)，7.31-7.50(m，6H)，7.83(dd，1H)，7.89(s，1H)；(M+1)e/z 2134-(3-甲基-[1，2，4]二唑-5-基)-苯甲酸a)N-(4-甲氧基羰基苯甲酰基)氧基)乙脒向对苯二甲酸单甲酯(5g，27.7mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入CDI(27.7mmol)。搅拌10分钟后，加入N-羟基-乙脒(27.7mmol)并将所得混合物在室温下搅拌3小时。将溶液过滤并减压蒸发，得到标题化合物，为白色固体(4.9g，75％)。
(M+1)e/z 237b)4-(3-甲基-[1，2，4]二唑-5-基)-苯甲酸将N-(4-甲氧基羰基苯甲酰基)氧基)乙脒(4.9g，20.7mmol)和乙酸钠(20.7mmol)在甲醇(70mL)和水(20mL)中的混合物加热至90℃达8小时。冷却后，从溶液中结晶出固体。滤出固体，混悬于NaOH水溶液(10％w/w，30mL)和甲醇(30mL)中并将其在室温下搅拌过夜。然后将溶液减压蒸发，加入HCl水溶液(6M)将pH调至pH＝3。形成沉淀，通过过滤收集沉淀，用水、乙醚洗涤并真空干燥，得到标题化合物，为白色固体(2.5g，44％)。
1H-NMR(dmso-d6)δ2.44(s，3H)，8.17(m，4H)；(M+1)e/z 2054-(1H-四唑-5-基)-苯甲酸将4-氰基-苯甲酸甲酯(4.02g，25mmol)、叠氮化钠(32.5mmol)和盐酸三乙胺(32.5mmol)在甲苯(40mL)中的混合物在97℃下加热7小时。冷却溶液后，加入水(100mL)。分离出水相并向该溶液中加入浓HCl(7g)。形成沉淀，将其滤出并用水洗涤。将所得固体混悬于NaOH水溶液(20mL，10％w/w)和甲醇(20mL)中并在室温下搅拌2小时。然后蒸发掉溶剂，向残余物中加入水并用HCl(6M)将pH酸化。形成白色沉淀，将其滤出，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物(4.5g，95％)。
1H-NMR(dmso-d6)δ8.09-8.17(m，4H)；(M+1)e/z 1914-(5-甲基-[1，2，4]二唑-3-基)-苯甲酸向4-(N-羟基亚氨基氨基甲酰基)-苯甲酸甲酯(3.88g，20mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入乙酸酐(40mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。16小时后，蒸发掉溶剂，加入吡啶(30mL)并将反应混合物在95℃下加热2天。冷却溶液后，从溶液中结晶出固体。向该溶液中加入水(20mL)，在室温下搅拌2小时后，过滤并收集固体。将固体混悬于NaOH水溶液(30mL，10％w/w)和甲醇(50mL)中并在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂后，将残余物用水(30mL)吸收，加入HCl水溶液(3M)将pH调至pH＝2。形成沉淀，通过过滤收集沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物，为白色固体(3.8g，93％)。(M+1)e/z 205。
合成联芳基-甲酰氯的一般操作在回流下，将联芳基甲酸(0.00057mol)用5mL SOCl2处理5小时。通过蒸馏除去过量的SOCl2，将粗品酰氯不经进一步纯化直接用于下一反应。
使用酰氯的酸-胺偶联方法的一般操作将(4-芳基-哌嗪-1-基)-烷基胺(0.3mmol)、联芳基甲酰氯(0.3mmol)、三乙胺(0.56mmol)和催化量的DMAP在CH2Cl2中的混合物在0℃下搅拌10分钟，然后在室温下搅拌4小时。
将CH2Cl2层用水洗涤，干燥并浓缩。将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用CHCl3/MeOH 95/5作为洗脱剂，得到标题化合物。
使用碳二亚胺的酸-胺偶联方法的一般操作将(4-芳基-哌嗪-1-基)-烷基胺(0.00014mol)在5mL干燥CH2Cl2中的溶液冷却至0℃。加入羧酸(0.0002mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(0.0002mol)和催化量的DMAP，将反应混合物在室温下搅拌16小时。
然后用水洗涤CH2Cl2层，干燥并真空浓缩，将残余物用色谱法进行纯化，用CHCl3/MeOH 99∶1至95∶5梯度洗脱。
使用N，N′-羰基二咪唑(CDI)的酸-胺偶联方法的一般操作向预先称重的酸(0.55mmol)中加入二甲基甲酰胺(2mL)以使其溶解，然后加入N，N′-羰基二咪唑(CDI)(0.55mmol)。然后将溶液放置60分钟，然后加入胺(0.6mmol)，将反应再搅拌16小时。在减压下除去溶剂，将粗品混合物用5％MeOH的二氯甲烷溶液(2mL)进行处理，用10％氢氧化钠溶液(2mL)洗涤。使该混合物通过一根用5克硅藻土填充的柱，用二氯甲烷洗脱产物。将收集的含有所需产物的有机层用快速色谱法进行进一步纯化，用10％MeOH的二氯甲烷溶液进行洗脱。将含有产物的级分合并，在减压下除去溶剂。
对于反应性较低的羧酸，通过将反应在60℃下加热2小时来完成活化，然后在冷却后向反应混合物中加入胺(1eq)(1M在二甲基甲酰胺中的溶液)；然后将反应在室温下振摇18-24小时。
或者，在10分钟后向羧酸(0.3mmol)和CDI(0.3mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中加入胺(0.3mmol)。将反应混合物在100℃下暴露于微波辐射10分钟。冷却后，将反应混合物吸收在SCX柱上，用二氯甲烷、甲醇和甲醇/氨水溶液洗脱。蒸发后，将残余物用二氧化硅柱进行纯化，用乙酸乙酯/环己烷(1∶1)→乙酸乙酯→乙酸乙酯/甲醇(9∶1)梯度洗脱。将含有产物的级分合并，蒸发掉溶剂。
通过还原烷基化进行的4-氧代-丁基-苯甲酰胺类的偶联的一般操作a)4-溴-N-(4-羟基丁基)苯甲酰胺将4-氨基丁-1-醇(20.71g，232mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入到搅拌着的4-溴苯甲酰氯(51g，232mmol)在二氯甲烷(250mL)中的溶液中。加入二异丙基乙基胺(40.4mL，232mmol)并将无色溶液在室温下进行搅拌。50分钟后LC/MS表明反应完全。将溶液转移到一个分液漏斗中并用水洗涤。沉淀出白色固体，将其滤出并用二氯甲烷洗涤，得到产物纯品。将滤液用H2O处理，产生另外的沉淀。将有机层用1M HCl和NaHCO3(饱和)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到另一批产物(总收率为57.99g)。
MS(ES)m/z 272/274(Br)b)4-溴-N-(4-氧代丁基)-苯甲酰胺将草酰氯(4.1 5mL，47.6mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液在N2流下在-60℃下进行搅拌。小心加入DMSO(6.76mL，95.2mmol)，确保温度保持在-50℃以下。15分钟后，加入4-溴-N-(4-羟基丁基)苯甲酰胺(10g，36.6mmol)在二氯甲烷(20mL)、THF(40mL)和DMSO(5mL)的混合物中的溶液。30分钟后，温度已经升至-50℃。1小时后，加入三乙胺(1.637g，16.18mmol)。使混合物温热至室温并搅拌过夜。LC/MS表明反应完全。向反应混合物中加入H2O(200mL)。将有机层用1M HCl、NaHCO3(饱和)和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到橙色油状物(9.93g)。
MS(ES)m/z 270/272(Br)；252/254(Br)a)3-溴-N-(4-羟基丁基)苯甲酰胺将4-氨基丁-1-醇(20.3g，228mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入到搅拌着的3-溴苯甲酰氯(50g，228mmol)在二氯甲烷(250mL)中的溶液中。加入DIPEA(39.6mL，228mmol)，将无色溶液在室温下进行搅拌。50分钟后LC/MS表明反应完全。将溶液转移到一个分液漏斗中并用水洗涤。沉淀出白色固体，将其滤出并用二氯甲烷洗涤，得到产物纯品。将滤液用H2O处理，产生另外的沉淀。将有机层用1M HCl和NaHCO3(饱和)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到另一批产物(总收率为46.82g，76％，LC/MS表明纯度为97％)。Rt＝1.09；MS(ES)m/z 272/274(Br)b)3-溴-N-(4-氧代-丁基)-苯甲酰胺将草酰氯(20.85mL，239mmol)在二氯甲烷(900mL)中的溶液在N2流、-60℃下进行搅拌。小心加入DMSO(33.9mL，478mmol)，确保温度保持在-50℃以下。15分钟后，加入3-溴-N-(4-羟基丁基)苯甲酰胺1(50g，184mmol)在二氯甲烷(100mL)、THF(400mL)和DMSO(50mL)的混合物中的溶液。30分钟后，温度已经升至-50℃。1小时后，加入三乙胺(96.7g，956mmol)。使混合物温热至室温并搅拌过夜。LC/MS表明反应完全。向反应混合物中加入H2O(1L)。将有机层用1M HCl、NaHCO3(饱和)和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到橙色油状物(9.93g，＞100％，LC/MS表明纯度为97％)。
Rt＝1.18；MS(ES)m/z 252/254，270/272(Br)在N-(4-氧代-丁基)苯甲酰胺类上进行的还原烷基化向预先称重的胺(1当量)中加入溶解于无水二氯甲烷(1.2eq，二氯甲烷)中的醛。将溶液混合90分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.5当量)。将反应再混合16小时。然后将该粗品反应用饱和NaHCO3(2mL溶液/反应)洗涤并萃取有机层。使二氯甲烷粗品溶液通过一根SCX柱，用20％氨的甲醇溶液洗脱所需产物。将含有化合物的级分合并，用制备型HPLC进一步对产物进行纯化。
N-(4-氨基)丁基-3-或4-溴苯甲酰胺类的Suzuki偶联的一般操作-用N-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)丁基)-4-溴苯甲酰胺和2-乙基苯基硼酸作为实例详细说明将N-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)丁基)-4-溴苯甲酰胺(86mg，0.225mmol)溶解于DME∶EtOH 1∶1(20mL)中并将其加入到含有2-乙基苯基硼酸(34mg，0.225mmol)的微波试管中。加入1M Na2CO3的H2O溶液(300μl，0.3mmol)，然后加入Pd(PPh3)4(26mg，0.0225mmol)。将该试管盖上盖，用手振摇并将其放入微波中在150℃下放置10分钟。将反应用硅藻土过滤并用MeOH洗涤。真空浓缩滤液，用反相制备型HPLC进行纯化。使产物直接形成HCl盐向标题化合物中加入200μl 1.25M HCl的MeOH溶液和800μl二氯甲烷，将溶液振摇并真空浓缩，得到盐酸盐(38.7mg)。
MS(ES)m/z 408从5-溴戊酰氯开始制备5-烷基氨基戊酸芳基酰胺的一般操作在二氯甲烷中在0℃-室温下将芳族胺(1eq)和三乙胺(1eq)在二氯甲烷(0.2mmol/mL)中的溶液在0℃、氮气氛下进行冷却。缓慢加入在二氯甲烷(0.3mmol/mL)中的5-溴戊酰氯(1eq)，将混合物在室温下搅拌1.5小时。一次性加入胺(5eq)和三乙胺(1eq)并将反应在室温下搅拌40小时。然后将有机溶液用盐水洗涤，干燥并除去溶剂。将产物用己烷∶乙醚1∶1结晶或用快速色谱法进行纯化。
用于大批量合成的经修改的室温条件在室温下，向苯胺(1eq)和三乙胺(1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中缓慢加入5-溴-戊酰氯(1eq)，将该混合物搅拌1.5小时。将该溶液加入到预先制备的含有胺(5eq)和三乙胺(1eq)的小瓶中，将反应在室温下振摇40小时。将有机溶液用盐水洗涤，干燥并除去溶剂。将产物用快速色谱法或用制备型HPLC进行纯化。
在二氯乙烷/二甲基甲酰胺中在55℃下将被取代的芳族胺(1eq)和三乙胺(1eq)称重到一个玻璃小瓶中，加入1，2-二氯乙烷，得到1.2M的溶液；然后以在二甲基甲酰胺(1.2M)中的溶液的形式滴加5-溴戊酰氯(0.95eq)，将反应在室温下振摇1小时30分钟。然后以在DCE中的溶液(胺浓度为1.8M)的形式加入胺(3eq)和三乙胺(1eq)，将反应混合物在55℃下振摇4小时。其后，将反应混合物冷却并在水和二氯甲烷之间进行分配；将有机层用饱和NaCl洗涤，用Na2SO4干燥。减压蒸发掉溶剂后获得酰胺粗品，将其用制备型HPLC进行纯化。
5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-戊酸(4-溴-苯基)-酰胺根据在室温下在二氯甲烷中进行的一般操作进行制备，得到3.7g(70％)标题化合物。
C16H24N3OBr质量(计算值)[354.29]；实测值[M+H+]＝354/356(Br)，Lc Rt＝0.58，93％NMR(400MHz，DMSO)1.43(2H，m)；1.55(2H，m)；2.23(3H，s)；2.27-2.50(12H，m)；7.44(2H，d，J＝9Hz)；7.55(2H，d，J＝9Hz)；10.05(1H，s)。
合成芳基酰胺的一般Suzuki交叉偶联操作向脱气的5-烷基氨基-戊酸溴芳基-酰胺(0.1g，1eq)和被取代的苯硼酸(1.1eq)在乙腈/碳酸钠0.4M溶液1/1(4mL)中的混合物中加入催化量的Pd[(PPh3)]4(5mmol％)。将反应混合物在90℃下在微波辐射(150Watt)下加热20分钟，然后再次加热另外20分钟。分离出有机层并用SCX柱进行纯化。在减压下除去溶剂，得到相应的产物。
从异氰酸酯开始合成脲的一般操作向冷却的0.2M胺(1eq)在二氯甲烷中的溶液中加入1eq异氰酸溴苯基酯。将该混合物在0℃下进行搅拌，约1小时后，当形成白色沉淀时停止搅拌。通过过滤回收产物，为白色固体，将其不经进一步纯化直接使用。
合成脲的一般Suzuki交叉偶联操作微波辐射向脱气的0.067M溴化物(1eq，按照上述合成脲的操作方法制备)在乙腈/水(1/1)中的溶液中加入适宜的硼酸(1eq)和Na2CO3(3eq)，然后加入Pd[(PPh3)]4(10％mol)。将溶液在微波条件下进行辐射，使用以下参数功率＝200watt；升温时间(ramp time)＝1分钟；停留时间(hold time)＝20分钟；温度＝90℃；压力＝200psi。分离出乙腈层，将粗品混合物用SCX柱进行纯化，用二氯甲烷/MeOH、然后用MeOH、然后用NH3/MeOH进行洗脱以洗脱产物。将含有所需产物的级分合并并在减压下进行干燥。
热加热(thermal heating)称取脲(1eq，按照上述制备脲的操作制备)，放入一个2-颈烧瓶中并使其溶解于脱气的乙腈/水溶液(4/1，0.04M)中。向该溶液中加入硼酸(1.1eq)、Na2CO3(3eq)和Pd[(PPh3)]4(10％mmol)。将该混合物在80℃下加热并搅拌20小时。将该溶液在硅藻土层上过滤并用SCX或制备型HPLC进行纯化。
实施例1N-{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-4-(吡啶-2-基)-苯甲酰胺a)1-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪盐酸盐用Pascal，J.C等人，Eur.J.Med.Chem.，1990，25，291-293的方法的修改变体进行制备将1.48g(0.0097mol)2，4-二甲氧基苯胺、1.89g(0.0160mol)盐酸双-2-氯乙基胺和2.00g K2CO3在25mL 1-丁醇中的溶液回流24小时，然后热过滤。
在减压下除去溶剂并将残余物用丙酮进行研磨。将所得粉末过滤并干燥，得到1.25g标题化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.21(brs，1H)；6.82(d，1H)；6.52(s，1H)；6.42(d，1H)；3.74(s，3H)；3.68(s，3H)；3.12(s，4H)；3.07(s，4H)。
b)2-{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-异吲哚-1，3-二酮按照Nishikawa，Y.等人；Chem.Pharm.Bull.，1989，37(1)，100-105所述的一般操作进行制备。
将N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺(0.00135mol)、1-(2′，4′-二甲氧基苯基)-哌嗪盐酸盐(0.00135mol)、K2CO3(0.00270mol)、NaI(0.00186mol)和甲基乙基酮(7mL)的混合物在搅拌下回流20小时。在混合物已经冷却后，过滤除去不溶性物质并用CHCl3洗涤。将滤液和洗涤液真空浓缩至干。
将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用CHCl3/MeOH 95/5作为洗脱剂。
收率68％。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.73(m，4H)；6.82(d，1H)；6.40(m，2H)；3.79(s，3H)，3.73(s，3H)，3.65(m，2H)；2.98(m，4H)；2.61(m，4H)；2.41(t，2H)；1.66(m，4H)。
c)4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺将2-{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基)-异吲哚-1，3-二酮(0.000236mol)和水合肼(0.000478mol)在乙醇(2mL)中的溶液在搅拌下回流2小时。在该溶液已经冷却后，过滤除去任何不溶性物质并用EtOH洗涤。将滤液和洗涤液真空浓缩至干。将残余物用CHCl3吸收。将CHCl3层用水洗涤，干燥并浓缩，得到标题胺。收率50％。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)6.85(d，1H)；6.41(m，2H)；3.81(s，3H)；3.75(s，3H)；3.01(m，4H)；2.63(m，4H)；2.40(t，2H)；1.35(m，6H)。
d)N-{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-4-(吡啶-2-基)-苯甲酰胺按照一般操作(酰氯方法)通过与4-(吡啶-2-基)-苯甲酸反应进行制备。
收率35％。
Mp 154.5-156℃(游离碱)；212-216℃(HCl盐)1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)8.66(d，1H)；8.02(d，2H)；7.85(d，2H)；7.75(m，2H)；7.23(m，1H)；6.96(brs，1H)；6.76(d，1H)；6.42(d，1H)；6.36(dd，1H)；3.78(s，3H)；3.72(s，3H)；3.47(m，2H)；2.97(m，4H)；2.65(m，4H)；2.47(t，2H)；1.70(m，4H)质量(ES)m/z％475(M+1，100％)；497(M+Na，19％)HPLC柱Zorbax C8 MeOH 80％/H2O 20％，1.0mL/min；Rt 6.54；面积＝99％实施例2联苯-4-甲酸{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-酰胺按照一般操作(酰氯方法)由4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺和4-联苯甲酸进行制备。
收率35％1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.82(d，2H)；7.5-7.6(m，4H)；7.48-7.5(m，3H)；6.89(brs，1H)；6.77(d，1H)；6.45(d，1H)；6.34(dd，1H)；3.80(s，3H)；3.73(s，3H)；3.49(m，2H)；2.96(m，4H)；2.64(m，4H)；2.45(t，2H)；1.68(m，4H)。
质量(ES)m/z％474(M+1，100％)；496(M+Na，6％)。
HPLC柱Zorbax CN AcCN 40％/H2O(CF3COOH pH＝2，3)60％，0.8mL/min；Rt＝5.396；面积98％实施例32′-硝基-联苯-4-甲酸{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-酰胺按照一般操作(酰氯方法)由4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺和2′-硝基联苯-4-甲酸进行制备。
收率17％1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.7-7.9(m，3H)；7.45-7.55(m，2H)；7.3-7.4(m，3H)；6.84(brs，1H)；6.80(d，1H)；6.44(d，1H)；6.37(dd，1H)；3.80(s，3H)；3.74(s，3H)；3.49(m，2H)；2.97(m，4H)；2.63(m，4H)；2.46(t，2H)；1.68(m，4H)质量(ES)m/z％519(M+1，100％)；541(M+Na，11％)HPLC柱Zorbax CN MeOH 50％/H2O(CF3COOH pH＝2)50％，0.4mL/min；Rt＝17.209；面积88％实施例42′-氟-联苯-4-甲酸{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-酰胺按照一般操作(酰氯方法)由4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺和2′-氟联苯-4-甲酸进行制备。
收率20％Mp＝124-125.5℃Rt(CHCl3/]MeOH 95/5)0.211H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.81(d，2H)；7.56(d，2H)；7.1-7.4(m，4H)；6.99(sbr，1H)；6.76(d，1H)；6.43(d，1H)；6.33(dd，1H)；3.78(s，3H)；3.71(s，3H)；3.46(m，2H)；2.94(m，4H)；2.60(m，4H)；2.44(t，2H)；1.66(m，4H)质量(ES)m/z％492(M+1，100％)；HPLC柱Zorbax CN AcCN 50％/H2O(CF3COOH pH＝2，3)50％，0.4mL/min；Rt＝13.525；面积96％
实施例52′-甲基-联苯-4-甲酸{4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-酰胺按照一般操作(酰氯方法)由4-[4-(2，4-二甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺和2′-甲基联苯-4-甲酸进行制备。
收率21％1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.80(d，2H)；7.35(d，2H)；7.2-7.4(m，4H)；6.88(brs，1H)；6.79(d，1H)；6.46(d，1H)；6.36(m，1H)；3.82(s，3H)；3.76(s，3H)；3.50(m，2H)；2.98(m，4H)；2.66(m，4H)；2.47(m，2H)；2.25(s，3H)；1.70(m，4H)质量(ES)m/z％488(M+1，100％)HPLC柱Zorbax C8 AcCN 40％/H2O(CF3COOH pH＝2，3)60％，1.0mL/min；Rt＝11.748；面积96％实施例6N-{4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-4-(吡啶-2-基)-苯甲酰胺a)2-{4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-异吲哚-1，3-二酮按照一般操作进行制备收率80％1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.72(m，4H)；6.89(m，4H)；3.81(s，3H)；3.69(t，2H)；3.15(m，4H)；2.60(4H，m)；2.40(t，2H)；1.66(m，4H)。
b)4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺按照一般操作进行制备收率53％1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)6.90(m，4H)；3.83(s，3H)；3.05(m，4H)；2.79(t，2H)；2.66(4H，m)；2,43(m，2H)；1.60(m，4H)。
质量(ES)m/z％264(M+1，100％)。
c)N-{4-[4-(2-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-4-(吡啶-2-基)-苯甲酰胺按照一般操作-碳二亚胺方法通过与4-(吡啶-2-基)-苯甲酸反应进行制备。
收率41％Mp＝152.3-154.6℃Rt(CHCl3/MeOH 95/5)＝0.151H-NMR(CDCl3)δ(ppm)8.66(d，1H)；8.00(d，2H)；7.84(d，2H)；7.70(m，2H)；7.21(m，1H)；6.8-7.0(m，5H)；3.80(s，3H)；3.44(m，2H)；3.03(m，4H)；2.62(m，4H)；2.43(m，2H)；1.65(m，4H)。
质量(ES)m/z％445(M+1，100％)；467(M+Na，78％)。
HPLC柱Zorbax C8 MeOH 80％/H2O 20％，0.8mL/min；Rt＝4.72；面积99.9％。
实施例71H-吲哚-6-甲酸{4-[4-(2，4-二氟-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基}-酰胺按照一般操作，将6-吲哚甲酸(44mg，0.27mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1mL)中，加入1，1’-羰基二咪唑(44mg，0.27mmol)。然后加入溶解于二甲基甲酰胺(0.25mL)中的4-[4-(2，4-二氟-苯基)-哌嗪-1-基]-丁基胺(73mg，0.27mmol)，使混合物反应18小时。用制备型HPLC进行后处理，得到甲酸盐形式的标题化合物(51mg，41％，纯度＞95％)。
C23H26F2N4O质量(计算值)[412.49]；(实测值)[M+H+]＝413LC Rt＝3.02，100％(10分钟方法)NMR(400MHz，CDCl3)1.51(4H，m)；2.34(2H，t)；2.47(4H，bs)；2.93(4H，bs)；3.26(2H，m)；6.49(1H，s)；6.95-7.01(2H，m)；7.12-7.17(1H，m)；7.40(2H，m)；7.6(1H，dd，J＝8.4，1.2)，8.09(1H，s)；8.17(1H，HCOOH，s)；8.26(1H，t)；11.27(1H，s)。
实施例8N-(4-氮杂环庚烷-1-基-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺a)N-(4-羟基-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺将CDI(4.07g，25mmol)加入到4-吡啶-2-基-苯甲酸(5.0g，25mmol)在二氯甲烷中的溶液中，将反应混合物搅拌4小时。加入4-氨基丁醇(3.0mL，30mmol)并将反应混合物搅拌4小时，其后，将溶液用饱和Na2CO3溶液洗涤。分离出有机层，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将产物用柱色谱法进行纯化(二氯甲烷，二氯甲烷/MeOH 1％)，得到2.4g标题中的醇。
LC Rt＝0.98min(运行5分钟)(M+1＝271)1H NMR(400MHz，DMSO)8.71-8.66(1H，m)，8.53-8.46(1H，m)，8.78(2H，d，8.1Hz)，8.12(1H，d，8.3Hz)，7.94(2H，d，8.1Hz)，7.92-7.83(1H，m)，7.46-7.36(1H，m)，4.38(1H，t，6.6Hz)，3.42(2H，dd，6.6Hz，12.0Hz)，3.35-3.25(2H，m)，1.60-1.42(4H，m)。
b)N-(4-氧代-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺将草酰氯(42μL，0.48mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在N2、-60℃下进行搅拌。加入DMSO(34μl，0.48mmol)，15分钟后加入醇(100mg，0.37mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液。2小时后加入三乙胺(106μl，0.74mmol)。然后使该混合物温热至室温并搅拌过夜。LC/MS表明反应完全。将有机层用饱和NH4Cl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到100mg白色粉末(LC/MS表明纯度为92％，Rt＝0.98，M+1＝269)，将其不经进一步纯化直接用于下一步。
c)N-(4-氮杂环庚烷-1-基-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺将氮杂环庚烷(50μl，0.45mmol)称重到一个干净的玻璃小瓶中。向其中加入溶解于2mL无水二氯甲烷的N-(4-氧代-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺粗品(100mg，0.37mmol)。将反应混合90分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(118mg，0.56mmol)，其后在室温下搅拌16小时，然后将该粗品反应用饱和NaHCO3(2mL溶液)洗涤并萃取有机层。使二氯甲烷粗品溶液通过一根SCX柱，用20％氨的甲醇溶液洗脱所需产物。将含有化合物的级分合并并用制备型HPLC对产物进一步进行纯化，得到甲酸盐形式的N-(4-氮杂环庚烷-1-基-丁基)-4-吡啶-2-基-苯甲酰胺(47mg，收率为36％)。
1H NMR(CDCl3)8.08(m，4H)，7.77(m，3H)，7.27(m，1H)，3.54(m，2H)，3.10(m，6H)，1.89(m，6H)，1.73(m，6H)
实施例95-哌啶-1-基-戊酸(3-氯-笨基)-酰胺按照在二氯乙烷/二甲基甲酰胺中在55℃下进行的一般操作，将3-氯苯胺(76mg，0.6mmol)和三乙胺(60mg，0.6mmol)溶解于二甲基甲酰胺(0.5mL)中，滴加在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的5-溴戊酰氯(113mg，0.57mmol)。1小时30分钟后，加入在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的哌啶(153mg，1.8mmol)和三乙胺(60mg，0.6mmol)并将反应混合物在+55℃下加热4小时。用制备型HPLC进行后处理，得到标题化合物(118mg，67％)，为白色固体，为甲酸盐形式。
C16H23C1N2O质量(计算值)[294.82]；(实测值)[M+H+]＝295LC Rt＝1.78，100％(10分钟方法)NMR(400MHz，dmso-d6)1.48(2H，m)；1.52(6H，m)；2.31(2H，t)；2.48(6H，m)；7.05(1H，dd，J＝8，1.2)；7.30(1H，m)；7.41(1H，dd，J＝8.4，0.8)；7.80(1H，s)；8.21(1H，HCOOH，s)；10.1(1H，bs)。
实施例105-吗啉-4-基-戊酸(4-溴-苯基)-酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作进行制备，得到6.4g(93％)标题化合物。
C15H21N2O2Br质量(计算值)[341.24]；实测值[M+H+]＝341/343(Br)Lc Rt＝2.30，100％NMR(400MHz，DMSO)1.44(2H，m)；1.57(2H，m)；2.29(8H，m)，3.54(4H，m)，7.44(2H，d，J＝7Hz)，7.54(2H，d，J＝7Hz)。
实施例115-哌啶-1-基-戊酸(3-溴-苯基)-酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作进行制备，得到1.7g(33％)标题化合物。
C16H23N2OBr质量(计算值)[339.28]；实测值[M+H+]＝339/341(Br)，Lc Rt＝1.86，98％
NMR(400MHz，DMSO)1.51-1.64(10H，m)；2.34(2H，m)；2.23(2H，m)；2.76(4H，m)；2.97(2H，m)；7.12-7.264(2H，m)；7.48(2H，brd，J＝8Hz)；7.97(1H，s)。
实施例125-吗啉-4-基-戊酸(2′-三氟甲基-联苯-4-基)-酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作、然后进行Suzuki偶联来进行制备，得到0.1g(92％)标题化合物。
C22H25N2O2F3质量(计算值)[406.44]；(实测值)[M+H+]＝407Lc Rt＝3.36，98％NMR(400MHz，DMSO)1.45(2H，m)；1.6(2H，m)；2.3(8H，m)；3.55(4H，m)；7.21(2H，d，J＝8.4Hz)；7.36(1H，d，J＝7.3Hz)；7.56(1H，m)；7.63(2H，d，J＝8.4Hz)；7.68(1H，m)；7.79(1H，d，J＝7.7Hz)实施例134′-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-戊酰基氨基]-联苯-3-甲酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作、然后进行Suzuki偶联来进行制备，得到0.07g(63％)标题化合物。
C23H30N4O2质量(计算值)[394.51]；(实测值)[M+H+]＝395Lc Rt＝1.06，100％NMR(400MHz，DMSO)1.43(2H，m)；1.58(2H，m)；2.10(3H，s)；2.12-2.44(12H，m)；7.40(1H，s)；7.49(1H，m)；7.68(4H，m)；7.78(2H，m)；8.06(1H，s)；8.11(1H，s)；9.97(1H，s)。
实施例145-(4-乙酰基-哌嗪-1-基)-戊酸(2′-甲氧基-联苯-4-基)-酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作、然后进行Suzuki偶联来进行制备，得到46mg(51％)标题化合物。
C24H31N3O3质量(计算值)[409.53]；(实测值)[M+H+]＝410LC Rt＝2.21，100％(10分钟方法)NMR(400MHz，CD3OD)1.62(2H，m)；1.74(2H，m)；2.07(3H，s)；2.41-2.49(8H，m)；3.53(2H，m)；3.58(2H，m)；3.78(3H，s)；6.98(1H，m)；7.04(1H，d，J＝8)；7.27(2H，m)；7.43(2H，d，J＝8.8)；7.56(2H，d，J＝8.8)实施例154-乙酰基-1-[4-(2′，3′-二氟-联苯-4-基氨基甲酰基)-丁基]-[1，4]二氮杂环庚烷-1-鎓甲酸盐按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作、然后进行Suzuki偶联来进行制备，得到0.04g(37％)标题化合物。
C24H29N3O2F2HCO2H质量(计算值)[429.51/46.01]；(实测值)[M+H+]＝430.28Lc Rt＝2.98，100％NMR(400MHz，DMSO)1.44(2H，m)；1.58(2H，m)；1.66(1H，m)；1.75(1H，m)；1.96(3H，s)，2.32(2H，m)；2.42(2H，m)；2.52(3H，m)；2.62(1H，m)；3.54(4H，m)，7.24-7.42(3H，m)；7.5(2H，d，J＝9Hz)；7.7(2H，d，J＝9Hz)；8.16(1H，s)；10.03(1H，s)实施例165-哌啶-1-基-戊酸(3′-羟基-联苯-3-基)-酰胺按照在二氯甲烷中在室温下进行的一般操作、然后进行Suzuki偶联来进行制备，得到0.06g(58％)标题化合物。
C22H28N2O2质量(计算值)[352.47]；(实测值)[M+H+]＝353.32Lc Rt＝1.90，99％NMR(400MHz，DMSO)1.34(2H，m)；1.40-1.47(6H，m)；1.57(2H，m)；2.19-2.33(8H，m)；6.73(1H，d，J＝8Hz)；6.95(1H，s)；6.99(1H，d，J＝7Hz)；7.23(2H，m)；7.32(1H，m)；7.51(1H，d，J＝9Hz)；7.87(1H，s)；9.56(1H，brs)；9.94(1H，s)。
实施例171-(2′-氯-联苯-4-基)-3-(4-吗啉-4-基-丁基)-脲称量1-(4-溴-苯基)-3-(4-吗啉-4-基-丁基)-脲(0.8g，0.22mmol)，放入一个2颈烧瓶中并将其溶解于脱气的乙腈(4mL)和水(1mL)溶液中。然后相继加入2-氯-苯基硼酸(0.33g，0.24mmol)和Na2CO3(0.65g，0.6mmol)以及催化量的Pd[(PPh3)]4，将该混合物在80℃下加热并搅拌20小时。将溶液在硅藻土层上过滤并用制备型HPLC进行纯化。
C21H26C1N3O2质量(计算值)[387.91]；(实测值)[M+H+]＝388Lc Rt3.20(96％)NMR(400MHz，MeOH)1.56-1.58(2H，m)，1.71(2H，m)，2.94-2.98(2H，m)，3.06-3.22(4H，m)，3.22-3.25(2H，m)，3.8(4H，m)，7.24-7.29(5H，m)，7.37-7.42(3H，m)，8.31(1H，s)表1-实施例18-254表1给出了一些合成的化合物，其是根据该表最后一栏中所示的并在实验操作部分用实施例1-17的合成所详细讨论的方法制备的。当化合物被表示是HCl盐形式时，该盐是通过将游离碱溶解于甲醇并加入1eq 1M HCl的乙醚溶液、然后蒸发溶剂而形成的。当化合物被表示是HCOOH(甲酸)盐时，化合物用制备型HPLC进行了纯化。





































生物学活性α7烟碱性乙酰胆碱受体的克隆和表达α7 nAChR的稳定重组细胞系的产生用标准分子生物学技术由大鼠脑cDNA文库克隆编码α7烟碱性乙酰胆碱受体的全长cDNA。然后将大鼠GH4C1细胞用该大鼠受体转染、克隆并利用测量细胞内钙浓度变化的FLIPR测定法来对其功能性α7烟碱性受体表达进行分析。将应用激动剂(烟碱)后表现出最高钙介导的荧光信号的细胞克隆进一步亚克隆并随后用德克萨斯红-标记的α-银环蛇毒素(BgTX)进行染色以用共聚焦显微镜对α7烟碱性乙酰胆碱受体表达的水平和均匀性进行分析。然后将三个细胞系进行扩增并对一个细胞系进行药理学表征(参见下面的表2)，随后将其用于化合物筛选。
表2-用功能性FLIPR测定法进行的在GH4C1细胞中稳定表达的α7nAChR的药理学表征

用于初步筛选的功能性FLIPR测定法的建立建立使用稳定重组GH4C1细胞系的稳健的功能性FLIPR测定法(Z′＝0.68)以筛选α7烟碱性乙酰胆碱受体。该FLIPR系统使得可以用Ca2+敏感性荧光染料(如Fluo4)来测量活细胞中的实时Ca2+-浓度变化。该手段使得能筛选在GH4C1细胞中稳定表达的α7 nAChR通道的激动剂和拮抗剂。
细胞培养使用用大鼠-α7-nAChR稳定转染的GH4C1细胞(见上)。这些细胞粘着性差，因此用聚-D-赖氨酸对烧瓶和板进行预处理。使细胞在填充有30mL培养基的150cm2T-烧瓶中在37℃和5％CO2下进行生长。
数据分析利用S形浓度-响应(可变斜率)方程使用IDBS Xlfit4.1软件包计算EC50和IC50值Y＝底+((顶-底)/(1+((EC50/X)^Hill斜率))测定法验证用α7 nAChR激动剂烟碱、野靛碱、DMPP、地棘蛙素、胆碱和乙酰胆碱对功能性FLIPR测定法进行验证。在0.001至30μM的浓度范围内获得了浓度-响应曲线。在表2中列出了所得的EC50值，所获得的激动剂的强弱次序与公开的数据(Quik等人，1997)一致。
用以1μM至0.01nM的浓度使用的特定α7 nAChR拮抗剂MLA(甲基牛扁亭)和10μM的竞争性烟碱浓度一起进一步对该测定法进行了验证。在9个独立的实验中算得IC50值为1.31±0.43nM。
用于选择性试验的功能性FLIPR测定法的建立建立功能性FLIPR测定法以试验化合物对α1(肌肉)和α3(神经节)nACh受体以及在结构上相关的5-HT3受体的选择性。为了测定对在横纹肌肉瘤源的TE 671细胞系中天然表达的α1受体的活性，使用一种利用膜电位敏感性染料的测定法，而通过使用天然SH-SY5Y细胞系的监测钙的测定法来测定对α3的选择性。为了试验对5-HT3受体的选择性，在HEK293细胞中构建表达人5-HT3A受体的重组细胞系并使用监测钙的FLIPR测定法。
化合物的筛选利用表达α7 nAChR的稳定重组GH4C1细胞系使用功能性FLIPR初步筛选试验对化合物进行试验。通过产生浓度-响应曲线进一步验证所确定的目标(Hits)。发现在功能性FLIPR筛选试验中测得的实施例1-254的化合物的效力为10nM至30μM，其中大多数化合物表现出10nM至10μM的效力。
还证明最佳的实例化合物对α1 nACh、α3 nACh和5HT3受体具有选择性。
以细胞为基础的神经保护试验如之前所述在混合性原代大鼠皮质神经元中用建立的以细胞为基础的NMDA诱导的兴奋毒性试验分析所选择化合物的神经保护活性(Stevens等人，2003)。简言之，在应用NMDA前24小时加入供试化合物。用NMDA进行的培养持续10分钟或24小时并在应用兴奋毒性刺激后24小时对细胞死亡率进行评估(参见图1)。所选择的化合物(浓度为0.1至10μM)使死亡率平均降低50％，在一些实验中观察到最大80％的神经保护作用。
体内神经保护试验在通过注射使君子氨酸诱导的大鼠基底核中的胆碱能变性体内动物模型中分析了化合物的神经保护活性。如通过测定ChAT-阳性神经元的数量(代表性结果如图2所示)所证明的那样，以3mg/kg的剂量每天腹膜内注射化合物达7天进行亚慢性处理导致胆碱能神经元的变性降低60％。
认知行为使用被动回避(PA)和物体识别(ORT)试验针对所选择的来自实施例的化合物研究了认知行为以检验其逆转大鼠的东莨菪碱诱导的遗忘的能力。这些化合物通过在一个或两个试验中均显著逆转东莨菪碱诱导的遗忘而表现出对短期工作记忆和情景记忆的缓和至良好的认知改善(代表性结果如图3所示)。
参考文献1.Prendergast，M.A.，Harris，B.R.，Mayer，S.，Holley，R.C.，Pauly，J.R.，Littleton，J.M.(2001)Nicotine exposure reducesN-methyl-D-aspartate toxicity in the hippocampusrelation to distributionof the alpha7 nicotinic acetylcholine receptor subunit.Med.Sci.Monit.7，1153-1160。
2.Garrido，R.，Mattson，M.P.，Hennig，B.，Toborek，M.(2001)Nicotine protects against arachidonic-acid-induced caspase activation，cytochrome c release and apoptosis of cultured spinal cord neurons.J.Neurochem.76，1395-1403。
3.Semba，J.，Miyoshi，R.，Kito，S.(1996)Nicotine protects against thedexamethasone potentiation of kainic acid-induced neurotoxicity incultured hippocampal neurons.Brain Res.735，335-338。
4.Shimohama，S.，Akaike，A.，Kimura，J.(1996)Nicotine-inducedprotection against glutamate cytotoxicity.Nicotinic cholinergicreceptor-mediated inhibition of nitric oxide formation.Ann.N.Y.Acad.Sci.777，356-361。
5.Akaike，A.，Tamura，Y.，Yokota，T.，Shimohama，S.，Kimura，J.(1994)Nicotine-induced protection of cultured cortical neurons againstN-methyl-D-aspartate receptor-mediated glutamate cytotoxicity.Brain Res.644，181-187。
6.Yamashita，H.，Nakamura，S.(1996)Nicotine rescues PC12 cellsfrom death induced by nerve growth factor deprivation.Neurosci.Lett.213，145-147。
7.Shimohama，S.，Greenwald，D.L.，Shafron，D.H.，Akaika，A.，Maeda，T.，Kaneko，S.，Kimura，J.，Simpkins，C.E.，Day，A.L.，Meyer，E.M.(1998)Nicotinic alpha 7 receptors protect against glutamate neurotoxicity andneuronal ischemic damage.Brain Res.779，359-363。
8.Socci，D.J.，Arendash，G.W.(1996)Chronic nicotine treatmentprevents neuronal loss in neocortex resulting from nucleus basalis lesionsin young adult and aged rats.Mol.Chem.Neuropathol.27，285-305。
9.Rusted，J.M.，Newhouse，P.A.，Levin，E.D.(2000)Nicotinictreatment for degenerative neuropsychiatric disorders such as Alzheimer’sdisease and Parkinson’s disease.Behav.Brain Res.113，121-129。
10.Kihara，T.，Shimohama，S.，Sawada，H.，Kimura，J.，Kume，T.，Kochiyama，H.，Maeda，T.，Akaike，A.(1997)Nicotinic receptorstimulation protects neurons against beta-amyloid toxicity.Ann.Neurol.42，159-163。
11.Kihara，T.，Shimohama，S.，Sawada，H.，Honda，K.，Nakamizo，T.，Shibasaki，H.，Kume，T.，Akaike，A.(2001)alpha 7 nicotinic receptortransduces signals to phosphatidylinositol 3-kinase to block Abeta-amyloid-induced neurotoxicity.J.Biol.Chem.276，13541-13546。
12.Kelton，M.C，Kahn，H.J.，Conrath，C.L.，Newhouse，P.A.(2000)The effects of nicotine on Parkinson’s disease.Brain Cogn 43，274-282。
14.Kem，W.R.(2000)The brain alpha7 nicotinic receptor may be animportant therapeutic target for the treatment of Alzheimier’s diseasestudies with DMXBA(GTS-21).Behav.Brain Res.113，169-181。
15.Dajas-Bailador， F.A.，Lima，P.A.，Wonnacott，S.(2000)The alpha7nicotinic acetylcholine receptor subtype mediates nicotine protectionagainst NMDA excitotoxicity in primary hippocampal cultures through aCa(2+)dependent mechanism.Neuropharmacology 39，2799-2807。
16.Strahlendorf，J.C.，Acosta，S.，Miles，R.，Strahlendorf，H.K.(2001)Choline blocks AMPA-induced dark cell degeneration of Purkinje neuronspotential role of the alpha7 nicotinic receptor.Brain Res.901，71-78。
17.Utsugisawa，K.，Nagane，Y.，Obara，D.，Tohgi，H.(2002)Overexpression of alpha7 nicotinic acetylocholine receptor prevents G1-arrest and DNA fragmentation in PC12 cells after hypoxia.J.Neurochem.81，497-505。
18.Jonnala，R.R.，Terry，A.V.，Jr.，Buccafusco，JJ.(2002)Nicotineincreases the expression of high affinity nerve growth factor receptors inboth in vitro and in vivo.Life Sci.70，1543-1554。
19.Bencherif，M.，Bane，AJ.，Miller，C.H.，Dull，G.M.，Gatto，G.J.(2000)TC-2559a novel orally active ligand selective at neuronalacetylocholine receptors.Eur.J.Pharmacol.409，45-55 Ref TypeJournal。
20.Donnelly-Roberts，D.L.，Xue，LC，Arneric，S.P.，Sullivan，J.P.(1996)In vitro neuroprotecive properties of the novel cholinergic channelactivator(ChCA)，ABT-418.Brain Res.719，36-44。
21.Meyer，E.M.，Tay，E.T.，Zoltewicz，J.A.，Meyers，C，King，M.A.，Papke，R.L.，De Fiebre，CM.(1998)Neuroprotective and memory-relatedactions of novel alpha-7 nicotinic agents with different mixedagonist/antagonist properties.J.Pharmacol.Exp.Ther.284，1026-1032。
22.Stevens，T.R.，Krueger，S.K.，Fizsimonds，R.M.和Picciotto，M.R.(2003)Neuroprotection by nicotine in mouse primary cortical culturesinvolves activation of calcineurin and L-type calcium channel inactivation.J.Neuroscience 23，10093-10099。
23.Wang H，Yu M，Ochani M，Amelia CA，Tanovic M，Susarla S，LiJH，Wang H，Yang H，Ulloa L，Al-Abed Y，Czura CJ，Tracey KJNicotinicacetylcholine receptor alpha7 subunit is an essential regulator ofinflammation.Nature 2003，421384-388。
权利要求
1.通式(I)的化合物、其盐、异构体、非对映体或外消旋混合物 其中Y是基团-CONH-；-NHCONH-；-NHCO-；-SO2NH-；-NHSO2-；-NHSO2NH-；-OCONH；-NHCOO-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R是氢；卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基或酰基；羟基；氰基；硝基；单-或二-(C1-C6)烷基氨基、酰基氨基或烷基氨基羰基；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-氨磺酰基；5至10-元的芳族或杂芳族环，其任选地被以下基团取代卤素；直链、支链或环状的(C1-C3)烷基、卤代烷基、烷氧基或酰基；羟基；氰基；硝基；氨基；单-或二-(C1-C6)烷基氨基、酰基氨基或烷基氨基羰基；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C6)烷基-氨磺酰基；X是选自以下的基团 其中R′表示(C1-C6)酰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基；-(CH2)j-R基团，其中j＝0、1且R是5至10-元的芳族或杂芳族环，其任选地被以下基团取代卤素；羟基；氰基；硝基；(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基、酰基、酰基氨基；Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；n是0或1；s是1或2；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地表示氢；卤素；羟基；氰基；硝基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、卤代烷基、烷氧基、酰基；-(CH2)j-R基团，其中n和R的定义如上所述；氨基甲酰基；(C6-C10)芳基-或(C1-C3)烷基-磺酰基氨基；(C6-C10)芳基-或(C1-C3)烷基-氨磺酰基；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基。
2.权利要求1的化合物，其中Y是-CONH-；-NHCO-；-NHCONH-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自氢；卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基或烷基氨基；三卤代烷基；苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；对于p＝2，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
3.权利要求2的化合物，其中Y是-CONH(Q)-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 其中Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；当p＝2时，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
4.权利要求2的化合物，其中Y是-NHCONH(Q)-；Q是5至10-元的芳族或杂芳族环；R选自卤素；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基或烷基氨基；卤代烷基；苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；当p＝2时，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
5.权利要求2的化合物，其中Y＝-NHCO(Q)-；Q是苯基；R选自苯基；萘基；吡啶基；嘧啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 其中Z是CH2、N或O；m是1至4的整数；p是0、1或2；当p＝2时，R″彼此独立地选自氢；单-或二-[直链、支链或环状的(C1-C6)烷基]氨基羰基；直链、支链或环状的(C1-C6)烷基、烷氧基、酰基。
6.权利要求1的化合物，其中Y是-CONH(Q)；Q是苯基、吲哚基；R选自卤素；苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的5-10元的芳族或杂芳族环。
7.权利要求1的化合物，其中Y是-NHCONH(Q)；Q是苯基、吲哚基；R选自卤素；苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的6元的芳族或杂芳族环。
8.权利要求1的化合物，其中Y是-NHCO(Q)；Q是苯基、吡啶基；R选自苯基；萘基；吡啶基；喹啉基；嘧啶基；异喹啉基；吲哚基；噻吩基；苯并噻吩基；呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；苯并咪唑基；吡咯基；任选地如权利要求1中所述的那样被取代；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的苯环。
9.权利要求8的化合物，其中Y是-NHCO(Q)；Q是苯基；R选自苯基；吡啶基；吲哚基；嘧啶基；任选地被以下基团取代卤素；直链、支链或环状的(C1-C3)烷基、烷氧基或酰基；氰基；(C1-C6)烷基氨基；酰基氨基；烷基氨基羰基；氨基甲酰基；X是基团 其中R′是任选地被卤素或(C1-C6)烷氧基取代的苯环。
10.包含权利要求1-9的化合物和可药用载体或赋形剂的药物组合物。
11.权利要求1-9的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗神经病学、精神病学、认知、免疫学和炎性障碍。
12.权利要求11的用途，所述药物用于治疗阿尔茨海默病。
13.预防或治疗涉及α7 nAChR的疾病、病症或功能障碍的方法，其包括给需要其的个体施用有效量的权利要求1-9的化合物。
14.权利要求13的方法，其用于预防或治疗神经变性疾病，特别是阿尔茨海默病和精神分裂症。
全文摘要
本发明涉及具有α7nAChR激动剂活性的化合物、其制备方法、包含其的药物组合物以及其用于治疗神经病学、精神病学、认知、免疫学和炎性障碍的用途。
文档编号C07D295/14GK101018774SQ200580030521
公开日2007年8月15日 申请日期2005年7月19日 优先权日2004年7月20日
发明者G·加维拉吉, C·吉龙, H·博特曼, R·龙卡拉蒂, G·C·特斯泰帕恩 申请人:锡耶纳生物技术股份公司