专利名称：一种精制银杏黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及总黄酮的提取制备方法，尤其是使用环糊精包合和两步超滤相结合从银杏叶中提取得到总黄酮的方法。
背景技术：
银杏(ginkgo biloba)又名白果，属裸子植物，是世界上最为古老的树种之一，被誉为“活化石”。银杏是我国的特产之物，我国银杏种质资源极其丰富，全国银杏叶产量在2万吨(以干重计)以上，占世界总量的70％左右。银杏叶中含有黄酮化合物(flavonoids)、萜类化合物(terpenoids)等生物活性成分。这些成分具有相当强烈的抗氧化作用，能清除生物体内过剩的自由基、防止组织体内脂质过氧化、提高人体机体的免疫力等，是首选的治疗心脑血管疾病的天然药物。据报道，银杏叶中主要的黄酮类化合物槲皮素、山奈素和异鼠李素等对于改善心、脑血液循环，降低血清胆固醇，松弛支气管有很好的疗效。上个世纪60年代初，德国Willamar Schwabe首次从银杏叶中获得银杏叶提取物(EGb761)并用于治疗心血管疾病以来，它已成为国际近代植物药学研究开发的主要热点之一。目前，中国、德国和法国等已将银杏制剂列为治疗药物，而其他许多国家也将其列为保健食品或非处方用药。美国开发出的银杏保健食品已经获得FDA的批准，使人们对银杏叶的保健药用价值更加重视。
现在银杏叶黄酮苷生产工艺主要有溶剂萃取法、超临界萃取法和树脂吸附法。其中溶剂萃取法成本高，超临界萃取法设备投入大，目前尚未工业化。国内银杏叶提取物(GBE)的生产基本采用树脂吸附法，但是该工艺过程同样存在操作时间长，对有机溶剂消耗较多的缺点。
由于黄酮类物质的水溶性较差，采用乙醇等有机溶剂的消耗量大，产品中易残留有机溶剂，以上问题都使得黄酮的生产和应用受到了很大的限制。因此，积极开发简便易行、快速高效的新提取制备方法以生产高纯度、高水溶性的银杏黄酮产品显得至关重要。
超滤膜分离技术也已用于研究银杏黄酮的纯化过程，其特点是可以有效地去除各种杂质，提高了产物的澄清度，储存稳定性好；分离过程在常温下进行，因而产物中有效成分的生物活性和理化性质稳定；生产工艺流程简单，生产周期短；在密闭空间中操作，节省了有机溶剂，不会引入新的杂质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用环糊精及其衍生物对银杏黄酮进行包合，从而改变黄酮分子量的大小，实现超滤过程中的分子量差异，并通过两步超滤过程提高产物中黄酮含量的方法。同时环糊精包合后也能够有效的增加黄酮的水溶性及药效。
本发明的技术方案如下一种精制银杏黄酮的方法，它基本上由下列步骤组成步骤1.将1份质量的银杏叶提取物(GBE)溶于200份质量的乙醇质量分数为60％的乙醇-水中；步骤2.将步骤1中的GBE溶液在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第一次超滤，超滤膜为截留分子量为5000，10000或30000dalton的超滤膜，收集透过液；步骤3.将步骤2收集的透过液减压浓缩，再将1份质量的蒸干后的残留物溶于50份质量的无水乙醇；步骤4.在步骤3所得的溶液中加入β-环糊精或改性β-环糊精，使溶液中黄酮与β-环糊精或改性β-环糊精的物质的量之比为1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反应15min～5h，再在常温下反应30min～24h；步骤5.将步骤4中反应后的产物在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第二次超滤，超滤膜为截留分子量为5000，10000或30000dalton的超滤膜，收集截留的浓缩后的液体，即得到精制的银杏黄酮乙醇溶液。
上述的精制银杏黄酮的方法，步骤4中所述的改性β-环糊精可以是甲基化β-环糊精或羟丙基化β-环糊精。
本发明的优点是增加了银杏黄酮的水溶性，其分子量也增大数倍，因此可以用更加经济环保的溶剂来溶解，并且使超滤膜对银杏黄酮具有更强的选择性。该制备方法不仅可节省大量的有机和无机试剂，使得产物中银杏黄酮的含量增高，品质稳定，工艺流程简单，生产周期短，减小了传统有机溶剂提取法中残存的溶剂给产品质量带来的危害，从而大大增加了经济效益。
具体实施例方式
实施例1将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的聚偏氟乙烯(PVDF)超滤膜(上海市新亚净化器件厂提供，下同)。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将1份质量的蒸干后的粉末溶于50份质量的无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到38.4wt.％，回收率为63％。
实施例2将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶9。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到40wt.％，回收率为64％。
实施例3将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶6。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.4wt.％，回收率为63.2％。
实施例4将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶1。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到34.6wt.％，回收率为55％。
实施例5将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在20℃水浴中反应15min，再在常温下反应30min。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。采集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到32.5wt.％，回收率为53％。
实施例6将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在40℃水浴中反应30min，再在常温下反应2h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到35.1wt.％，回收率为54％。
实施例7将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在90℃水浴中反应5h，再在常温下反应24h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.1wt.％，回收率为65％。
实施例8将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入羟丙基化β-环糊精，使溶液中黄酮与羟丙基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到34.8wt.％，回收率为53％。
实施例9将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入β-环糊精，使溶液中黄酮与β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到32.6wt.％，回收率为50％。
实施例10将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.05MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到31.4wt.％，回收率为58％。
实施例11将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.2MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.2wt.％，回收率为65％。
实施例12将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收采集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.3MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到40.1wt.％，回收率为66％。
实施例13将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa压力和10℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.05MPa压力和10℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到30.3wt.％，回收率为56％。
实施例14将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和10℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和10℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到37.7wt.％，回收率为62％。
实施例15将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和10℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.2MPa压力和10℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到38.7wt.％，回收率为64％。
实施例16将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和10℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.3MPa压力和10℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.5wt.％，回收率为65％。
实施例17将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa压力和20℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.05MPa压力和20℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到30.9wt.％，回收率为57％。
实施例18将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和20℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和20℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到37.9wt.％，回收率为62％。
实施例19将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和20℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.2MPa压力和20℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到38.8wt.％，回收率为64％。
实施例20将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和20℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.3MPa压力和20℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.8wt.％，回收率为65％。
实施例21将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa压力和40℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.05MPa压力和40℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到32.7wt.％，回收率为59％。
实施例22将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和40℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和40℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到38.8wt.％，回收率为63％。
实施例23将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和40℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.2MPa压力和40℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.8wt.％，回收率为66％。
实施例24将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和40℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.3MPa压力和40℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到40.7wt.％，回收率为67％。
实施例25将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.05MPa压力和50℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.05MPa压力和50℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到33.2wt.％，回收率为60％。
实施例26将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和50℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和50℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39.1wt.％，回收率为65％。
实施例27将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和50℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.2MPa压力和50℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到40.1wt.％，回收率为66％。
实施例28将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和50℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.3MPa压力和50℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到41.3wt.％，回收率为68％。
实施例29将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收采集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到32.4wt.％，回收率为36％。
实施例30将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到25.4wt.％，回收率为42％。
实施例31将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到32.8wt.％，回收率为53％。
实施例32将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为30000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到34.2wt.％，回收率为71％。
实施例33将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为30000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收采集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到28wt.％，回收率为59％。
实施例34将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的聚砜(PS)超滤膜(杭州水处理中心提供，下同)。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PS超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到35.7wt.％，回收率为56％。
实施例35将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.15MPa压力和30℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的聚丙烯腈(PAN)超滤膜(杭州水处理中心提供，下同)。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶3。先在60℃水浴中反应2h，再在常温下反应4h。反应后的产物在0.15MPa压力和30℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PAN超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到29.3wt.％，回收率为72％。
实施例36将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.3MPa压力和50℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为30000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶9。先在90℃水浴中反应5h，再在常温下反应24h。反应后的产物在0.3MPa压力和50℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到44.2wt.％，回收率为69％。
实施例37将20g银杏叶提取物(GBE)溶于5000mL乙醇质量分数为60％的乙醇-水中。溶液在0.2MPa压力和40℃温度下进行第一次超滤。选择截留分子量为10000dalton的PVDF超滤膜。收集透过液。将收集的透过液蒸干，再将蒸干后的粉末溶于无水乙醇中。逐渐加入甲基化β-环糊精，使溶液中黄酮与甲基化β-环糊精的物质的量之比为1∶6。先在70℃水浴中反应3h，再在常温下反应8h。反应后的产物在0.2MPa压力和40℃温度下进行第二次超滤。选择截留分子量为5000dalton的PVDF超滤膜。收集浓缩后的液体，即得到最终产品。经测定，最终产品中的黄酮百分含量从原来的24wt.％提高到39wt.％，回收率为65％。
权利要求
1.一种精制银杏黄酮的方法，其特征是它基本上由下列步骤组成步骤1.将1份质量的银杏叶提取物溶于200份质量的乙醇质量分数为60％的乙醇-水中；步骤2.将步骤1中的GBE溶液在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第一次超滤，超滤膜为截留分子量为5000，10000或30000dalton的超滤膜，收集透过液；步骤3.将步骤2收集的透过液减压浓缩，再将1份质量的蒸干后的残留物溶于50份质量的无水乙醇；步骤4.在步骤3所得的溶液中加入β-环糊精或改性β-环糊精，使溶液中银杏黄酮与β-环糊精或改性β-环糊精的物质的量之比为1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反应15min～5h，再在常温下反应30min～24h；步骤5.将步骤4中反应后的产物在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第二次超滤，超滤膜为截留分子量为5000，10000或30000dalton的超滤膜，收集截留的浓缩后的液体，即得到精制的银杏黄酮乙醇溶液。
2.根据权利要求1所述的精制银杏黄酮的方法，其特征是步骤4中所述的改性β-环糊精是甲基化β-环糊精或羟丙基化β-环糊精。
全文摘要
一种精制银杏黄酮的方法，它是将1份质量的银杏叶提取物(GBE)溶于200份质量的乙醇质量分数为60％的乙醇—水中，GBE溶液在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第一次超滤，收集透过液，收集的透过液减压浓缩，再将1份质量的蒸干后的残留物溶于50份质量的无水乙醇，在所得的溶液中加入β－环糊精或改性β－环糊精，使溶液中黄酮与β－环糊精或改性β－环糊精的物质的量之比为1∶9～1∶1，先在20～90℃水浴中反应15min～5h，再在常温下反应30min～24h，将反应后的产物在0.05～0.3MPa压力和10～50℃温度下进行第二次超滤，收集截留的浓缩后的液体，即得到精制的银杏黄酮乙醇溶液。本发明方法可节省大量的有机和无机试剂，产物中银杏黄酮的含量增高，品质稳定，工艺流程简单，生产周期短。
文档编号C07H17/00GK1817875SQ20061003879
公开日2006年8月16日 申请日期2006年3月13日 优先权日2006年3月13日
发明者张志炳, 徐志红, 李磊, 武法文, 谭淑娟, 杨奕 申请人:南京大学