专利名称：糜子抗旱调控基因myb类转录因子基因及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属于植物基因工程技术领域。特别涉及一个来源于糜子的抗旱调控基因MYB类转录因子基因，其编码蛋白及其在培育抗旱和水分高效利用植物中的用途。
背景技术：
目前作物抗旱性与水分利用效率的遗传改良研究主要通过从多种生物(包括微生物、植物和动物)分离与生物水分缺失反应及其调节有关的蛋白质合成酶的相应基因。已成功地将克隆自微生物、昆虫及植物的脯胺酸合成酶基因、海藻糖合成酶基因、传递信号和调控基因表达的转录因子等基因与不同的启动子结合导入植物(如甜菜、烟草、拟楠芥菜等)，获得有效表达，“工程植物”的耐旱性和耐寒性有一定增强，展示了十分诱人的前景，目前仍在进行深入研究。
糜子(Panicum miliaceum L.)属禾本科黍属(Panicum)，是起源于我国的一种古老的禾本科作物，在华夏民族的发展中发挥过重要的作用。具有耐旱、抗逆、水分利用效率高等特点，是禾谷类作物中最抗旱的作物之一，是植物抗旱性改良的优异基因资源，经检索，未发现任何公开或报道糜子抗旱和水分高效利用相关调控基因克隆的相关文献。
发明内容
本发明的目的在于，提供糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因及其用途。本发明采用抑制减法杂交技术分别构建了糜子抗旱种质复水与干旱、复水与正常灌水的cDNA文库，对文库中所获克隆进行了大量的随机测序，从中筛选获得了糜子抗旱调控基因MYB转录因子基因的部分序列，进而利用3’RACE和电子克隆技术相结合，获得该基因的基因组DNA序列和cDNA序列。获得的糜子MYB类转录因子基因的基因组序列为1739bp(见附图1)，该基因包含两个内含子，分别为121bp(347-467bp)和93bp(599-691bp)，三个外显子。获得的糜子MYB类转录因子基因PmMYB的全长cDNA为1525bp(见附图2)，其中3’非翻译区为212bp，5’非翻译区为41bp，编码区为1272bp，共编码424个氨基酸。其C-端存在一个丝氨酸(Ser，S)丰富区，具有转录活性。
本发明的糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的RT-PCR表达分析表明，该基因在在正常情况下有一定量的表达，在干旱胁迫下(土壤相对含水量为36％)诱导表达，重度胁迫下(土壤相对含水量24％)表达受到抑制，复水后2h表达量最高，随后下降到比正常生长还低的水平。说明该基因主要参与干旱胁迫初期信号传导过程，调控相关干旱防御的功能基因。该基因是糜子抗旱与水分高效利用的关键调控基因，利用它转化小麦、玉米等植物，启动相应的下游基因，提高其抗旱性和水分利用效率，具有很大的应用潜力。
图1是糜子MYB类转录因子基因的基因组序列；图2是糜子MYB类转录因子基因的全长cDNA序列；图3是糜子MYB类转录因子基因全长cDNA序列及推导的氨基酸序列，其中阴影部分为R2、R3重复； 为推测的转录激活区；图4是糜子MYB类转录因子基因编码氨基酸序列的疏水性分析；图5是糜子MYB类转录因子基因编码氨基酸序列的结构保守域分析；图6是几种植物MYB类转录因子基因氨基酸序列R2R3重复序列的多重比较；图7是基于氨基酸序列构建的MYB类转录因子基因的系统进化树；
图8是糜子MYB类转录因子基因在不同水分处理和复水条件下表达的RT-PCR分析。
以下结合附图和发明人给出的实施例对本发明作进一步的详细说明。
具体实施例方式
1.糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的克隆MYB类转录因子家族是植物转录因子中最大的家族之一，在植物的转录调控中起着非常重要的作用。MYB类转录因子基因的共同特征是含有1-3个由51-53个氨基酸组成的、不完全重复的MYB结构域(R1，R2，R3)。在每个MYB结构域中一般含有3个保守的色氨酸(W)残基，在植物R2R3-MYB蛋白中R3MYB结构域的第一个色氨酸常被疏水氨基酸(I，L，F)取代。
本发明通过抑制减法杂交(SSH)技术分别构建了糜子复水与干旱、复水与正常灌水的cDNA文库，对文库中所获克隆进行了随机测序，从中筛选获得了糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的部分序列(RS366，GenBank收录号DW177353)，与水稻MYB类转录因子基因(MYB18)具有较高的同源性，根据水稻MYB18的核酸序列，设计了两对引物(eRS366-1正向5-AGTTGCTGCCGTTCTCCCA，反向5-CTGGTGACCTATTGAGCCCTGT；eRS366-2正向5-TTTCCACTGTGATGGCA，反向5-ATCTGGTGCTCTGTTCC)，对糜子抗旱种质的基因组DNA进行扩增，第一对引物扩增出一个1267bp的片段，第二对引物扩增出541bp的片段，两条序列经过拼接，获得糜子MYB基因的基因组序列为1739bp(序列见附图1)，对其结构分析表明，该基因包含有两个内含子，分别为121bp(347-467bp)、93bp(599-619bp)，三个外显子。
20μL反应体系中包括cDNA第一链模板1μL，10×PCR Buffer 2μL，dNTP(2mmol/L)2μL，正向引物(10mmol/L)1μL，反向引物(10mmol/L)1μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.2μL，ddH2O补齐至20μL。
PCR反应程序为95℃预变性3min，接着进行95℃40s，52-55℃(第一对引物55℃，第二对引物52℃)40s，72(90s，共35个循环；最后于72℃延伸8min，反应后于4℃保温。1％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
利用引物(5-AGTTGCTGCCGTTCTCCCA-3和5-ATCTGGTGCTCTGTTCC-3)，采用RT-PCR方法从糜子干旱后复水条件下的cDNA中扩增得到了糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的全长cDNA序列(见附图2)，全长cDNA为1525bp，其中3’非翻译区为212bp，5’非翻译区为41bp，编码区为1272bp，共编码424个氨基酸(见附图3)。
2.糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因编码氨基酸序列的初步分析大多数MYB转录因子具有转录激活功能，转录激活功能域一般存在于蛋白的中间或C-端，常以富含酸性氨基酸，脯氨酸、谷氨酰胺或丝氨酸/苏氨酸为特征。分析糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因，发现在其C-端存在一个丝氨酸(Ser，S)丰富区，推测该MYB基因具有转录活性。
软件预测，该蛋白PI为6.71，MW为47273.90，存在一个小的疏水性区域(70-90位氨基酸，见附图4)。该蛋白被定位在细胞核里，这与其参与基因转录的功能相一致。
该基因编码氨基酸的保守结构域分析显示(见附图5)，该基因具有两个典型的MYB类转录因子基因的DNA结合区(DNA-binding domain)，分别为13-63、66-114位氨基酸，该基因属于典型的R2R3-MYB转录因子。其R3结构域的第一个色氨酸残基(Trp，W)被苯丙氨酸(Phe，F)取代。
对来源于水稻(Oryza sativa)、糜子(Panicum miliaceum)、玉米(Zeamays)、火炬松(Pinus taeda)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、辣椒(Capsicum annuum)、陆地棉(Gossypium hirsutum)、大麦(Hordeumvulgare)及茄子(Lycopersicon esculentum)等九种植物的MYB基因的R2、R3重复区进行了氨基酸的序列多重比较(见附图6)，可以看出在这些物种中R2R3重复序列具有较高的一致性。
基于氨基酸序列的系统进化树分析表明(见附图7)，不同植物的MYB基因遗传分化很大，糜子的MYB基因与水稻的相似程度最高，同是单子叶植物，大麦和玉米与糜子的MYB基因相似性分别只有46％和41％。
3.糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因表达模式的RT-PCR分析根据文献合成了一对扩增珍珠粟(Pennisetum glaucum(L.)R.Br，pearlmillet)组成型表达的肌动蛋白(actin)基因片段的引物，对糜子的mRNA进行RT-PCR扩增，获得一个171bp的产物，测序后的序列比对表明，该片段与水稻肌动蛋白(actin)具有较高的同源性，获得的片段为糜子actin基因片段，以此基因作为内参确定不同处理的模板量。
采用根据该糜子MYB类转录因子基因序列设计的引物(5-CTGGTGACCTATTGAGCCC-3和5-CGGCAGAAAGGCATTGAC-3)，对糜子抗旱种质材料植株分别在土壤相对含水量为75％、36％、24％和复水后2h、6h、12h的叶片样品提取的mRNA进行RT-PCR分析。
20μL反应体系中包括经内参调整的适宜体积的cDNA模板，10×PCRBuffer 2μL，dNTP(2mmol/L)2μL，正向引物(10mmol/L)0.5μL，反向引物(10mmol/L)0.5μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.2μL，ddH2O补齐至20μL。
PCR反应程序为95℃预变性3min，接着进行95℃40s，55℃45s，72℃40s，共35个循环；72℃延伸8min，反应后于4℃保温。1.5％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
RT-PCR表达模式分析表明(见附图8)，该糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因在正常情况下有一定量的表达，在干旱胁迫下(土壤相对含水量为36％)诱导表达，重度胁迫下(土壤相对含水量24％)表达受到抑制，复水后2h表达量最高，随后下降到比正常生长还低的水平。说明该基因主要受干旱胁迫初期和复水初期的信号的诱导，从而调控与干旱防御和复水快速生长相关的功能基因的表达。
本发明的糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因来源于最抗旱的禾本科作物糜子，为改良禾本科作物的抗旱性和水分利用效率提供了更好的选择。且该基因属于调控基因，可以启动下游一系列基因的表达，更便于应用到植物抗旱性和水分利用效率的改良，有效地提高植物的抗旱性和水分利用效率。
以下是发明人给出的实施例实施例1以该基因与含有相应植物启动子(如CaMV 35等)的表达载体连接，构建糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的表达载体，转化大肠杆菌等获得含有该基因的菌株；或者将该基因与含有相应植物启动子(如CaMV 35等)的T-DNA双元载体等连接，构建糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的T-DNA表达载体，转化大肠杆菌等获得含有该基因的菌株，与相应的农杆菌株系进行融合，获得含有该基因的农杆菌菌株。
实施例2对实施例1中获得的大肠杆菌菌株或农杆菌菌株进行繁殖，提取含有糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的表达载体的DNA或直接利用繁殖获得的菌液，采用本领域工作人员共知的方法(如花粉管通道法、基因枪法、农杆菌介导法等)转化小麦、玉米等作物或其它植物；筛选获得该基因恰当表达的转基因植株，改良现有作物或植物品种的抗旱性和水分利用效率。
序列表糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的基因组DNA序列和cDNA序列基因组DNA序列AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA 60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGTATAATCAAAATCC 360TGCACACTTTATTCTTCTCCATAATCAATTTCCACTGCTTCGTGTTCCTCTCCAAGGCAA 420CTTCTTTCTCCCAGTCTTCTCATAACGGCCCAATTAATGGTTGCAGGGCTTCAGAGATGT 480GGAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCA 540TTCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTAA 600ATTTTATCCCAAGTTGCACTGTCAGAATTTTGCACCAATTGCTTTAAAGCAAGCTTTCCT 660TAACTATGCCTTTTTCACGTAAATGACAGGTGGTCTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGA 720AGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACTCAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAG 780AAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTGCCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCC 840ACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTGATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCA 900CTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAGCACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTG 960CTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGGCGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAG 1020CTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATAACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGC 1080CCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGTGCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAG 1140CATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACCAGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTT 1200TCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTCTCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGG 1260TCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCATTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGAT 1320ACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAAGCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTC 1380GAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATAGTATCTTCCCATGGACAGATTTATCA 1440CCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCAAGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACC 1500TTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTAGCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTC 1560AAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCTGTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAG 1620
CCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGTATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCC 1680TTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCAGCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1740基因的cDNA序列AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA 60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGGCTTCAGAGATGTG 360GAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCAT 420TCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTGGT 480CTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGAAGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACT 540CAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAGAAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTG 600CCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCCACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTG 660ATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCACTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAG 720CACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTGCTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGG 780CGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAGCTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATA 840ACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGCCCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGT 900GCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAGCATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACC 960AGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTTTCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTC 1020TCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGGTCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCA 1080TTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGATACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAA 1140GCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTCGAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATA 1200GTATCTTCCCATGGACAGATTTATCACCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCA 1260AGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACCTTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTA 1320GCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTCAAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCT 1380GTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAGCCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGT 1440ATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCCTTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCA 1500GCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1560
权利要求
1.糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因，其特征在于该基因的基因组DNA序列和cDNA序列分别为(1)基因组序列全长为1739bp，包含121bp和93bp的两个内含子，三个外显子，其DNA序列为AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGTATAATCAAAATCC 360TGCACACTTTATTCTTCTCCATAATCAATTTCCACTGCTTCGTGTTCCTCTCCAAGGCAA 420CTTCTTTCTCCCAGTCTTCTCATAACGGCCCAATTAATGGTTGCAGGGCTTCAGAGATGT 480GGAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCA 540TTCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTAA 600ATTTTATCCCAAGTTGCACTGTCAGAATTTTGCACCAATTGCTTTAAAGCAAGCTTTCCT 660TAACTATGCCTTTTTCACGTAAATGACAGGTGGTCTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGA 720AGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACTCAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAG 780AAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTGCCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCC 840ACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTGATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCA 900CTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAGCACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTG 960CTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGGCGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAG 1020CTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATAACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGC 1080CCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGTGCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAG 1140CATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACCAGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTT 1200TCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTCTCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGG 1260TCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCATTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGAT 1320ACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAAGCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTC 1380GAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATAGTATCTTCCCATGGACAGATTTATCA 1440CCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCAAGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACC 1500TTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTAGCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTC 1560AAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCTGTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAG 1620CCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGTATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCC 1680TTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCAGCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1740(2)cDNA序列全长为1525bp，其中3’非翻译区为212bp，5’非翻译区为41bp，编码区为1272bp，共编码424个氨基酸，C-端存在一个丝氨酸丰富区；该基因的cDNA序列为AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGGCTTCAGAGATGTG 360GAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCAT 420TCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTGGT 480CTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGAAGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACT 540CAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAGAAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTG 600CCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCCACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTG 660ATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCACTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAG 720CACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTGCTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGG 780CGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAGCTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATA 840ACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGCCCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGT 900GCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAGCATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACC 960AGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTTTCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTC 1020TCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGGTCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCA 1080TTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGATACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAA 1140GCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTCGAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATA 1200GTATCTTCCCATGGACAGATTTATCACCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCA 1260AGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACCTTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTA 1320GCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTCAAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCT 1380GTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAGCCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGT 1440ATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCCTTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCA 1500GCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT。
1560
2.权利要求1所述的糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因，用于与相应的植物启动子连接，构建糜子MYB类转录因子基因的表达载体或转化获得的糜子MYB类转录因子基因的宿主菌的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，通过基因枪、农杆菌介导或花粉管通道等方法将糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因的表达载体导入小麦、玉米等作物或其它植物，获得的抗旱性和水分利用效率提高的转基因植物细胞系及转基因植株。
全文摘要
本发明公开了糜子抗旱调控基因MYB类转录因子基因及其用途，该基因的基因组序列为1739bp，包含121bp(347－467bp)和93bp(599－691bp)的两个内含子，三个外显子；全长cDNA序列为1525bp，其中3’非翻译区为212bp，5’非翻译区为41bp，编码区为1272bp，共编码424个氨基酸，C－端存在一个丝氨酸(Ser，S)丰富区。该基因的RT－PCR表达分析表明，该基因在正常情况下有一定量的表达，在干旱胁迫下(土壤相对含水量为36％)诱导表达，重度胁迫下(土壤相对含水量24％)表达受到抑制，复水后2h表达量最高，随后下降到比正常生长还低的水平。利用该基因转化小麦、玉米等作物和其它植物，提高其抗旱性和水分利用效率，具有很大的应用潜力。
文档编号C07K14/415GK1908172SQ200610104478
公开日2007年2月7日 申请日期2006年8月7日 优先权日2006年8月7日
发明者胡银岗, 林凡云 申请人:西北农林科技大学