专利名称：发酵滤液中侧耳素的提取方法
技术领域：
本发明涉及抗生素提取技术，是一种用盐析法提取发酵滤液中残 留的短截侧耳素。
背景技术：
短截侧耳素pleuromulin(以下称侧耳素)是由伞菌科的斜顶菌 pleuarotus mutifis经液体发酵产生。侧耳素主要是胞内产物，但是还 有约300~1000ug/ml侧耳素被释放到胞外，尤其是当发酵条件控制不 当时其胞外侧耳素可达2000ug/ml以上。回收发酵滤液中的侧耳素可 以提高收率降低侧耳素的生产成本。侧耳素在乙酸乙酯、4-甲基-2-戊酮等疏水溶剂中的溶解度大都在15%左右，从发酵滤液中萃取残留 的侧耳素，溶剂用量大，成本分析表明单独用溶剂萃取侧耳素并不合 算。本发明用氯化钠、硫酸钠等无机盐采用盐析的方法使侧耳素从滤 液中析出，或采用少量的溶剂并在滤液中加入少量的氯化钠或硫酸钠 来萃取侧耳素，可显著的降低提取成本。
发明内容
本发明技术是关于侧耳素提取方法，其特征在于向含有侧耳素的 发酵滤液中加入足够量的氯化钠或硫酸钠，从而使侧耳素从滤液中析 出，然后用离心或过滤的方法将析出的侧耳素分离出来。 一般而言， 在发酵滤液中加入25~35%氯化钠(重量/体积比)或加入10~25%硫 酸钠(重量/体积比)即可使侧耳素的析出率达80~99%，随着盐的加入量越多侧耳素析出率越高，当盐在发酵滤液中达到饱和时，侧耳素 析出率为最大。
还可以在发酵滤液中加入少量的氯化钠或硫酸钠(大约在
5~10%)，同时加入乙酸乙酯或4-甲基-2-戊酮等疏水性溶剂，进行萃 取，由于盐的加入可提高侧耳素在有机相中的分配系数。同样可以减 少溶剂用量，降低提取成本。 脉雄^ 实例1、
发酵结束，发酵液用高压板框压滤，得含侧耳素的菌素滤饼(干 燥后，进一步用有机溶剂提取)和含少量侧耳素(大于300ug/ml)的 发酵滤液。向滤液中加入重量/体积比为35%的氯化钠，充分搅拌使 氯化钠全部溶解，然后过滤或离心，即得含侧耳素的粗提取物。经 HPLC分析，侧耳素的回收率达99%。 实例2、
发酵结束，发酵液用高压板框压滤，得含侧耳素的菌素滤饼(干 燥后，进一步用有机溶剂提取)和含少量侧耳素(大于300ug/ml)的 发酵滤液。向滤液中加入重量/体积比为22%的硫酸钠，充分搅拌使 氯化钠全部溶解，然后过滤或离心，即得含侧耳素的粗提取物。经 HPLC分析，侧耳素的回收率达99%。 实例3、
发酵结束，发酵液用高压板框压滤，得含侧耳素的菌素滤饼(干 燥后，进一步用有机溶剂提取)和含少量侧耳素(大于300ug/ml)的发酵滤液。向滤液中加入重量/体积比为20%的氯化钠，充分搅拌使 氯化钠全部溶解，然后过滤或离心，即得含侧耳素的粗提取物。经
HPLC分析，侧耳素的回收率达82~88%。 实例4、
发酵结束，发酵液用高压板框压滤，得含侧耳素的菌素滤饼(千 燥后，进一步用有机溶剂提取)和含少量侧耳素(大于300ug/ml)的 发酵滤液。向滤液中加入重量/体积比为15%的硫酸钠，充分搅拌使 氯化钠全部溶解，然后过滤或离心，即得含侧耳素的粗提取物。经 HPLC分析，侧耳素的回收率达84~88%。 实例5、
发酵结束，发酵液用高压板框压滤，得含侧耳素的菌素滤饼(干 燥后，进一步用有机溶剂提取)和含少量侧耳素(大于300ug/ml)的 发酵滤液。向滤液中加入相当于滤液5%的4-甲基-2-戊酮和15%的硫 酸钠，充分搅拌萃取，然后静置或离心分相，得含侧耳素的有机相， 萃取率达97%以上，不加入盐的对照组，其萃取率为88%。
权利要求
1、一种短截侧耳素的提取方法，其特征在于向含有短截侧耳素的发酵滤液中加入重量/体积比为10～40％氯化钠或硫酸钠，充分混合，待短截侧耳素析出完成，进行固液分离，即得含短截侧耳素的粗提物。
2、 一种短截侧耳素的提取方法，其特征在于向含有短截侧耳素 的发酵滤液中加入重量/体积比为5~30%氯化钠或硫酸钠，同时加入 相当于发酵滤液体积的5~100%的乙酸乙酯或4-甲基-2-戊酮，充分混 合，然后静置或离心分相，即可获得含短截侧耳素的有机相。
全文摘要
本发明技术是用盐析法从发酵滤液中回收残留的短截侧耳素，方法要点是向含有短截侧耳素的发酵滤液中加入足够量的氯化钠或硫酸钠，残留在发酵滤液中的侧耳素从滤液中析出，经固液分离，得含侧耳素的粗提物，粗提物收率大于98％。
文档编号C07C67/00GK101531592SQ200810084608
公开日2009年9月16日 申请日期2008年3月13日 优先权日2008年3月13日
发明者孙玉胜, 戴晓曦, 潘贞德, 王玉万, 兰 马 申请人:迈德金生物技术(北京)有限公司