一种含有杀优洛菌素链霉菌发酵产物的杀菌剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及抗植物病原真菌的菌株及其应用，具体设及一种杀优洛菌素链霉菌、 含有杀优洛菌素链霉菌的杀菌剂及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 微生物杀菌剂是利用微生物的寄生、括抗、竞争、溶菌等作用来抑制甚至灭杀植物 病原微生物生长的生物制剂。微生物杀菌剂开发潜力巨大、应用前景广阔，将可能成为继微 生物杀虫剂之后第二个重要的商品化生物农药。
[0003] 自然界中的有害细菌、真菌和病毒等是引起大量植物病害的主要原因之一，如农 作物中常见的引起水稻纹枯病、棉花立枯病的立枯丝核菌等。在过去的几十年中，人们大都 采用抗病品种与化学防治的方法对植物病害进行防治，取得了良好的成效。然而随着化学 农药使用量的增大及使用范围的扩张，特别是高毒、高残留化学农药的持续使用，使得农药 对环境的负面影响日趋严重。社会的进步和人类的发展要求开发出新型环保型农药产品， 能够保护农产品稳产高产，又不影响农产品质量，不影响生态环境和其它生物安全。农药研 究人员发现从生物中寻找防治有害生物的活性物质最有可能达到选择性强、效率高、成本 低、不污染环境、对人畜无害的理想要求。有效利用微生物间的括抗作用及其代谢产物的有 效活性成分制备生物农药进行有害生物防治将是一个必然的发展方向。
[0004] 微生物源农药不仅具有高效、安全、低残留、易降解等特点，而且微生物源农药作 用机理复杂，作用位点多样，能够有效的抑制害物抗药性的发展，因此倍受人们所关注。放 线菌是应用最广泛的生防微生物之一，是具有巨大实用价值的一类微生物。目前从微生物 发现的大约8000种生物活性物质中，近70 %是由放线菌产生的。放线菌产生的抗生素在农 作物病虫害防治方面有重要作用。目前，主要应用的农用抗生素有9种，如杀菌剂有春日霉 素、链霉素、多氧霉素、有效霉素、灰黄霉素、灭攝素、灭胞素；杀蛾剂有杀蛾素；除草剂有双 丙胺麟等。我国农用抗生素的研究和应用始于20世纪50年代初。我国于20世纪60年代 研制成功了放线菌酬和灭攝素，70年代研制成功了春雷霉素、庆丰霉素、井冈霉素、多抗霉 素，80年代研制成功了公主岭霉素、多效霉素、农抗120、浏阳霉素、莫能霉素等抗生素，90 年代又研制成功了阿维菌素、中生菌素、宁南霉素和华光霉素等农用抗生素品种。在微生物 农药的研究与开发领域做出了重大贡献。
[000日]杀优洛菌素链霉菌（Streptomyceseurocidicus)的研究始于上世纪中页D0sata(1955年）和Lancini(1967年）等人先后从杀优洛菌素链霉菌（Streptomyces eurocidicus)菌株中分离到叔霉素（tei^tiomycin)、优洛杀菌素（eurocidin)和氮霉素 (azomycin)等特殊结构。但关于杀优洛菌素链霉菌的抗真菌活性未见研究与报道。本发明 确定杀优洛菌素链霉菌皿2014(StreptomycesSP.皿2014)对抗植物病原真菌具有较强的 抗菌活性，在不同种类病原真菌间具备一定的选择性。该菌株代谢产物及菌体提取物对小 麦纹枯病菌（Rhizoctoniacerealis)、水稻纹枯病菌（Thanatephoruscucumeris)、灰霉病 菌度otrytis cinerea)等病原真菌均有很好的抑制效果，适用于开展植物病害领域的的防 治研究。
【发明内容】
[0006] 为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种含有杀优洛菌素链霉菌发酵产物的 杀菌剂及其制备方法和应用。
[0007] 本发明的技术方案是：一种抗植物病原真菌的杀菌剂，包含杀优洛菌素链霉菌的 发酵产物。
[0008] 本发明的进一步改进包括：
[0009]所述杀优洛菌素链霉菌为杀优洛菌素链霉菌皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)， 保藏在中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，保藏号为CCTCCNO:M2015207。
[0010] 所述杀优洛菌素链霉菌皿2014(str巧tomyces sp.皿2014)的发酵培养基质为包 括：酵母提取物5g，大豆蛋白腺5g，葡萄糖20g，加入lOOOmL水后加热溶解，初始抑值为 7. 0。
[0011] 所述杀优洛菌素链霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)的发酵培养基为ME、 GYM、GPY、PS或PD。
[0012] 一种制备上述杀优洛菌素链霉菌的发酵产物的方法，包括W下步骤：（1)菌种活 化；将保存在4°C冰箱里PDA的试管斜面上的杀优洛菌素链霉菌皿2014(Str巧tomyces sp.皿2014)菌种取出，在室溫下放置lOmin;然后用接种针采用划线法接入预先制作好的 PDA平板上，24-25C下进行活化培养一周，备用；（2)种子液的制备；将平板上培养的活化 菌株接入到装有300mLGPY培养基的500mLS角瓶中，24-25°C，130r.min1，振荡培养12化； (3)发酵培养；将上述培养好的种子液，按1 %的体积比例接种至GPY培养基中，25°C，振 荡培养1个月；(4)分离菌体与发酵液；将发酵培养好的培养物，在转速SOOOrpm下离屯、 lOmin，然后分别收集湿菌体和发酵液。
[0013] 一种上述的杀优洛菌素链霉菌的发酵产物在制备抑制水稻纹枯病菌、灰霉病菌或 小麦纹枯病菌药物中的应用
[0014] 本发明具有积极有益的效果：
[0015] 本发明提供了防治作物中一些病害的微生物杀菌剂，其中杀优洛菌素链霉菌 皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)发酵产物对小麦纹枯病菌、水稻纹枯病菌和灰霉病菌 等病原真菌均有很好的抑制效果，并具有广泛的溫度、酸碱适应性和储藏稳定性，适于用于 农作物病害防治加W开发利用。
[0016] 本发明所述的杀优洛菌素链霉菌皿2014(St;r巧tomyces sp.皿2014)已经保藏于 中国典型培养物保藏中屯、。
[0017] 本发明的杀优洛菌素链霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)在PDA培养基、高 氏一号培养基、ISP2和ISP5培养基中，生长状况良好，基内菌丝发达，淡黄色至黄色，气生 菌丝丰富，白色。在ISP1培养基和LB培养基中菌落较湿润，基内菌丝发达，黄色，气生菌丝 较稀疏，其中，在LB培养基上有黄色可溶性色素生成。在ISP4和ISP7培养基中生长状况一 般，菌落略稀少，气生菌丝较不发达，基内菌丝淡黄色。在ISP3培养基和蔡氏培养基中生长 状况较差，菌落少且细小，生长缓慢，气生菌丝白色。在显微镜下观察，菌种气生菌丝丰富， 抱子丝波曲形至松螺旋形。
[0018] 参照《链霉菌鉴定手册》对杀优洛菌素链霉菌皿2014 (Str巧tomyces SP.皿2014) 进行鉴定，可初步鉴定该菌种为链霉菌属白色类群白抱亚群。
[0019] 本发明的杀优洛菌素链霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)与NCBI数据 库中相近菌株进行同源性比对分析，与链霉菌属（Str巧tomyces)的16SrDNA序列的同 源性最高，保守区相似性为99%，通过结合菌体形态特征、生长条件、鉴定其为链霉菌属 (Streptomyces)杀优洛菌素链霉菌（Streptomyceseurocidicus)。
【附图说明】
[0020] 图1为杀优洛菌素链霉菌皿2014与NCBI数据库中相近菌株进行同源性比对构建 的系统发育树图。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图对本发明做详细说明。 阳02引实施例1 : W23] 本实施方式抑制植物病原真菌的杀优洛菌素链霉菌为杀优洛菌素链霉菌 皿2014 (Streptomyces sp.皿2014)，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，保 藏地址是武汉市武昌塔挪山武汉大学，保藏日期为2015年4月7日，保藏号为CCTCCNO: M2015207〇
[0024] 本发明的杀优洛菌素链霉菌皿2014(Str巧tomycessp.皿2014)在PDA培养基、高 氏一号培养基、ISP2和ISP5培养基中，生长状况良好，基内菌丝发达，淡黄色至黄色，气生 菌丝丰富，白色。在ISP1培养基和LB培养基中菌落较湿润，基内菌丝发达，黄色，气生菌 丝较稀疏，其中，在LB培养基上有黄色可溶性色素生成。在ISP4和ISP7培养基中生长状 况一般，菌落略稀少，气生菌丝较不发达，基内菌丝淡黄色。在ISP3培养基和蔡氏培养基中 生长状况较差，菌落少且细小，生长缓慢，气生菌丝白色。在显微镜下观察，菌种气生菌丝丰 富，抱子丝波曲形至松螺旋形。 W25] 参照《链霉菌鉴定手册》和国际链霉菌计划（IS巧对杀优洛菌素链霉菌 皿2014(St;r巧tomycessp.皿2014)生长形态进行鉴定，可初步判断该菌种为链霉菌属白色 类群白抱亚群。
[0026] 本发明的杀