专利名称：向白细胞的有效转运的制作方法
向白细胞的有效转运本发明涉及特异性转运蛋白货物结合分子(transporter cargo conjugate molecule)的用途，用于将感兴趣物质(货物分子)运输到白细胞。所述转运蛋白货物结合分子可以被用于治疗、预防、减弱和/或改善涉及白细胞的疾病和/或病症。本发明也涉及所述转运蛋白货物结合分子的制造、涉及将感兴趣物质(货物)运输到白细胞的方法、以及涉及包含所述转运蛋白货物结合分子或其片段的白细胞。使感兴趣的物质，如核酸、蛋白质或细胞毒性剂，而且还有其它化合物能够从外部介质有效地转移进组织或细胞，特别是转移到细胞核的技术在生物技术领域相当受关注。 这些技 术可适于体外和体内运输并翻译核酸进细胞，并因此适于蛋白质或(多)肽生产、适于基因表达调节、适于细胞毒性效应或凋亡效应的诱导、适于细胞内过程的分析以及适于由运输各种不同货物进细胞(或细胞核)引起的影响的分析等。感兴趣货物从外部介质到组织或细胞的这种转移的一个重要应用是靶向药物输送。靶向药物输送涉及药学活性药物的组织_/细胞特异性输送。目的是在(全身)给药后，在感兴趣细胞和组织上或内随着时间推移达到高浓度的药学活性药物，而同时剩余细胞和组织中药学活性药物的浓度被保持在低水平。这提高治疗的功效并降低副作用。这样的靶向药物输送可以，例如通过高度特异性抗体调节。感兴趣货物从外部介质到组织或细胞的这种转移的进一步重要应用是基因治疗， 其中所述货物通常是核酸或基因。管该技术在过去十年已显示一些相当有前景的发展，但是基因转移通常受限于基因转移载体不能有效地将生物活性货物转移进将被治疗的宿主的细胞质或细胞核而不影响宿主基因组或改变活性货物的生物学性质。在这方面，已发展了几项技术，以努力更有效地将例如核酸，如DNA或RNA，转染进细胞。通过基因转移的方法将核酸转染进患者的细胞或组织是分子医学的重要方法并在众多疾病的治疗和预防中起关键作用。基因转移方法的代表性例子包括普通(物理的或物理化学的)方法如用磷酸钙或 DEAE-葡聚糖共沉淀核酸，这是能使核酸穿透质膜然后进入细胞和/或细胞核的方法。然而，该技术遭受低转移效率和高百分比细胞死亡的困扰。另外，由于其本身的性质，该方法局限于体外或离体方法，但不适用于体内情况。对于涉及体外电穿孔的方法同样如此。体外电穿孔基于高压电流的使用，使细胞膜变得可透过，以允许新的核酸，例如DNA或RNA引入细胞。然而，这样的方法通常不适于体内。此外，该技术同样遭受低转移效率和高百分比细胞死亡的困扰。另外熟知的物理或物理化学方法包括(裸)核酸的(直接)注射或生物射弹基因转移。生物射弹基因转移(也称作生物射弹粒子轰击)是在康奈尔大学开发的方法，其允许将遗传物质引入组织或培养细胞。生物射弹基因转移通常通过表面包被金属的颗粒，如金或银颗粒而完成，并通过使用基因枪将包括被吸附的DNA的这些金属颗粒射进细胞。与上面所讨论的相似，该方法局限于体外或离体方法，但通常不适用于体内情况。其它方法利用所谓的转运分子的转运能力。将在该上下文中使用的转运分子通常可以被分为一方面病毒载体，即转运分子，其包括病毒元件(viral element)；以及另一方面非病毒载体。当今可利用的最成功的基因治疗策略依赖于病毒载体，如腺病毒、腺伴随病毒、逆转录病毒和疱疹病毒。这些病毒载体通常应用对DNA和核酸具有强亲和力的病毒相关物质的结合物。由于其感染性质，病毒或病毒载体具有非常高的转染速率。以在转染的细胞中不形成功能性感染颗粒的方式，基因修饰通常使用的病毒载体。然 而，尽管有这个安全措施， 但是存在许多与涉及免疫原性、细胞毒性和插入诱变的病毒载体有关的问题。举例来说，不能排除引入的治疗上有活性的基因或病毒基因的不受控增殖的危险，例如，由于可能的重组事件。另外，病毒结合物难于利用并通常在治疗之前需要长期的制备(参考，例如，美国专利号 5，521，291)。如果是基因治疗，非病毒载体不象病毒载体一样有效；然而，它们当中的许多已经被开发，以在基因治疗中提供更安全的选择。一些最常见的非病毒载体包括聚乙稀亚胺、树状聚体、壳聚糖、聚赖氨酸和基于(多)肽的转运系统，例如许多类型的(多)肽，它们通常本质上是阳离子并能通过静电相互作用而与核酸如质粒DNA相互作用。另外，非病毒载体也允许不基于核酸的输送药物。为了成功的输送，非病毒载体，特别是基于(多)肽的转运系统必须能克服许多障碍。这样的障碍包括在运输期间货物部分，例如DNA或其它化合物的保护，以及货物部分在体内早期降解或代谢的预防。在核酸，如DNA和RNA分子的情况下，非病毒载体必须另外能特异性地输送这些分子，以在靶细胞中有效表达基因。尤其是关于核酸，如DNA和RNA分子，非病毒载体目前必须克服4个障碍以达到成功地输送基因(参考，例如 Martin et al. ,The AAPS Journal 2007 ；9 (I)Article 3)。非病毒载体必须能1)紧密地结合并保护核酸，2)它必须能靶向特异的细胞表面受体，3)非病毒载体必须能分裂内体膜，和4)它必须将核酸货物输送到核并允许编码的蛋白质或(多) 肽序列的翻译。这样的非病毒载体，特别是基于(多)肽的非病毒载体，相对于其它非病毒策略有禾IJ，因为它们一般而言能到达所有这4个目的，然而，关于不同的障碍具有不同的效率。举例来说，富含碱性残基如赖氨酸和/或精氨酸的阳离子(多)肽能有效地将核酸如DNA浓缩成可以稳定于血清中的小的紧密的颗粒。此外，(多)肽配体与多聚物/核酸复合物(polyplex)的连接允许靶向特异受体和/或特异细胞型。如上述的多聚物/核酸复合物或阳离子聚合物通常与带负电荷的核酸形成复合物，所述复合物导致核酸的浓缩，并保护这些核酸免于降解。利用多聚物/核酸复合物(阳离子聚合物)向运细胞运输通常通过受体介导的胞吞作用而发生。因此，通过例如结合到表面受体并触发胞吞作用的多聚物/ 核酸复合物聚左旋赖氨酸(PLL)，将DNA偶联到独特的分子，如转铁蛋白。多聚物/核酸复合物(阳离子聚合物)包括例如聚左旋赖氨酸(PLL)、壳聚糖、聚乙稀亚胺(PEI)、聚甲基丙烯酸二甲胺乙酯(polydimethylaminoethylmethacrylate) (PD-MAEMA)、聚酰胺(PAMAM)。这样的作用还从纳米颗粒/核酸复合物(nanoplexes)(纳米颗粒系统)或脂质/核酸复合物 (Iipoplexes)(脂质体系统)得知。纳米颗粒/核酸复合物(纳米颗粒系统)通常包括聚丙烯酸酯、聚酰胺、聚苯乙烯、氰基丙烯酸酯、聚乳酸(polylactat) (PLA)、聚(乳酸乙醇酸共聚物)(PLGA)等的使用。脂质/核酸复合物或脂质体系统通常包括能模拟细胞膜的阳离子脂质的使用。因此，脂质带有正电荷的部分与核酸带有负电荷的部分相互作用，并因而能够与细胞膜融合。脂质/核酸复合物或脂质体系统包括，例如DOTMA、DOPE、DOSPA、DOTAP, DC-Cho 1、EDMPC 等。在该上下文中，受体介导的胞吞作用在实验系统中同样被广泛利用，以向细胞靶内向输送货物如核酸或治疗剂。在受体介导的胞吞作用期间，含有货物的复合物被位于细胞膜中的对该货物特异的受体或者位于细胞膜组分中的特异抗体选择性地内在化。针对包括IgG Fe、生长抑素、胰岛素、IGF-I和-II、转铁蛋白、EGF、GLP-I、VLDL或整合素受体等在内的许多受体，已经描述了胞吞作用活性。通过受体介导的胞吞作用，已经广泛检验了不同的(多)肽或蛋白质序列在基因转移方法中的用途。令人惊奇地，通过噬菌体展示技术的应用，已经深深地推动了指导有效的受体介导的胞吞作用的(多)肽序列的分离。噬菌体展示文库是极其强大的工具，其为细胞受体提供分子变体的几乎无限的来源以及短(多)肽，所述变体包括对天然配体或货物部分的修饰。相似的文库也已被直接注射进小鼠中，并且(多)肽序列已被成功地分离， 所述序列显示对脑和肾的13倍的选择性。前蛋白转化酶可作为可用于将分子运输至细胞的(多)肽或蛋白质序列的例子。 前蛋白转化酶是细胞表面受体的例子，其通过受体介导的胞吞作用变得内在化。已经显示， 这些蛋白质是造成(多)肽激素、神经肽和许多其它蛋白质的前体转变成其生物学活性形式的原因。前蛋白转化酶家族的所有切割位点遵从共有序列R-X-X-R。哺乳动物前蛋白转化酶在其组织分布的基础上可以分成三组。弗林蛋白酶、PACE4、PC5/PC6和LPCIPC7/PC8/ SPC7在广泛范围的组织和细胞系中表达。相反，PC2和PC1/PC3的表达限于神经内分泌组织，如胰岛、垂体、肾上腺髓质和许多脑区域。PC4的表达高度局限于睾丸生精细胞。神经内分泌特异转化酶——PC2和PC1/PC3主要位于分泌颗粒中。也已经报道PC5/PC6A位于分泌颗粒中。此外，间接的证据已经表明，一部分前蛋白转化酶分子存在于细胞表面上，并且已经显示，弗林蛋白酶在TGN和细胞表面之间循环。总之，这些性质表明，前蛋白转化酶将细胞外配体运输进细胞内间隙。所谓的易位蛋白(translocatory protein)或蛋白转导结构域(PTDs)也是有利的。来源于易位蛋白或蛋白转导结构域(PTDs)的(多)肽序列通常能在其酸性环境中选择性地裂解内体膜，导致多聚物/核酸复合物的胞质释放。易位蛋白被认为是能影响大分子在细胞(易位蛋白)之间转运的一组(多)肽，如HIV-ITAT(HIV)、触角(果蝇属(Drosophila)触角)、HSVVP22 (单纯疱疹)、FGF或乳铁蛋白等。相反，蛋白转导结构域 (PTDs)被认为是能指导与这些序列共价结合的蛋白质和(多)肽通过细胞膜进入细胞的一组(多)月太(Leifert and Whitton Translocatory proteins and protein transduction domains -.a critical analysis of their biological effects and the underlying mechanisms. Molecular Therapy Vol.8 No. 12003)。易位蛋白共有的以及 PTDs 共有的是碱性区，由于所述碱性区能结合聚阴离子如核酸，其被认为是造成融和(多)肽转运的主要原因。利用受体依赖的非饱和吸附胞吞作用，在没有结合到其上的情况下，PTDs可以发挥与阳离子转染试剂相似的作用。当给予基于疫苗的(多)肽时，为了实现或增强CTL应答， PTDs通常与蛋白质或(多)肽偶联(参考综述Melikov and Chernomordik,Arginine-rich cell penetrating (poly-)peptides s :from endosomal uptake to nuclear delivery, Cell.Mol. Life Sci. 2005)。
尽管已知本领域存在几项技术，其能够将感兴趣物质从外部介质转移到组织或细胞，总体而言，但仍非常需要允许向特异组织和细胞型有效转移的技术。因此，本发明的目的是提供新的手段，以有效地并以提高的特异性将货物例如药物和效应分子靶向到特定组织和细胞型中。借助于所附权利要求所阐明的主题，针对白细胞(WBC)，该目的被解决。尤其地，本申请的发明者惊奇地发现，某些类型的(多)肽可以使感兴趣货物有效转移到白细胞中。 如本文所使用的术语“WBC靶向(多)肽”指这样的(多)肽，所述(多)肽能够以增加的特异性(与例如H印G2(人肝癌细胞)或HCT-116细胞(人结肠癌细胞)相比) 进入白细胞(white blood cell)(白细胞(leukocyte))，而且其衍生自HIV TAT蛋白，即包括这样的氨基酸序列或由这样的氨基酸序列组成，所述氨基酸序列是片段或变体(或者这样的HIV TAT蛋白(SEQ ID NO 1 ；描述于美国专利号5，804，604和5，674，980中，这些参考文献每篇均通过引用被并入本文)片段的变体)。尤其地，所述片段、变体和这样的片段的变体由TAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)或者48至57 (SEQ ID NO 3)生成。所述氨基酸序列可以包括D-氨基酸和/或L-氨基酸。如本文所使用的术语“(多)肽” 一般与本领域所理解的一样，即指氨基酸链。然而，该术语不应该被解释为限制氨基酸链的长度。该链也不必是线性的，而是可以是分枝的。优选地，WBC靶向(多)肽包括少于 150、100、90、80、70、60、50、40、30、20 或少于 10个氨基酸残基，更优选为5至150个氨基酸残基的范围，更优选为5至100个氨基酸残基的范围，甚至更优选为5至75个氨基酸残基的范围，而最优选为9至50个氨基酸残基的范围，例如 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40 或 50 个氨基酸残基。所述WBC靶向(多)肽序列的例子可以包括表1中给出的序列或由表1中给出的序列组成。表权利要求
1.转运蛋白货物结合分子用于治疗、预防、减弱和/或改善涉及白细胞的疾病和/或病症的的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子包括a)作为组分㈧包括HIVTAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)的氨基酸序列，或其变体的(多)肽，b)作为组分(B):(药学活性)货物分子，和c)任选的一种或更多种另外的组分，其中，所述SEQ ID NO 2的变体选自i)(多)肽，其包括根据SEQID NO 235的至少一个氨基酸序列，或其反向序列，和ii)(多)肽，其包括根据SEQID NOs 2至116任意一个的至少一个氨基酸序列，或其反向序列。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述涉及白细胞的疾病和/或病症选自选自癌或肿瘤疾病——包括由缺陷型凋亡引起的疾病；炎性疾病、感染疾病——包括细菌和病毒 (感染)疾病、与JNK信号传导密切相关的疾病、自身免疫性病症或疾病、心血管疾病、神经元或神经变性疾病、肝病、脊柱疾病、子宫疾病、严重抑郁症、非慢性或慢性炎性消化病、糖尿病、脱发、听力丧失或内耳疾病。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述涉及白细胞的疾病和/或病症选自病毒感染，尤其选自白细胞的病毒感染。
4.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述涉及白细胞的疾病和/或病症是由选自以下之一的介质引起的感染疾病HIV、爱泼斯坦巴尔病毒、麻疹病毒(麻疹)、副粘病毒、 风疹病毒、疱疹病毒6型、疱疹病毒、登革病毒、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、细小病毒、呼吸道合胞病毒、天花病毒、水痘、黄病毒、人类嗜T淋巴病毒1型、人类嗜T淋巴病毒2型、人类嗜T淋巴病毒3型、人类嗜T淋巴病毒4型、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、拉沙病毒、甲型流行性感冒(包括亚型Hmi和 H3N2)、乙型流行性感冒、丙型流行性感冒。
5.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述涉及白细胞的疾病和/或病症选自 中性白细胞增多症、中性白细胞减少症、白细胞减少、嗜碱细胞减少症、嗜碱粒细胞增多、嗜曙红细胞减少、嗜曙红细胞增多、特发性嗜酸细胞增多综合征、淋巴细胞白细胞增多、淋巴细胞增多、淋巴细胞减少、单核细胞增多、单核细胞减少、梅一黑二氏异常、佩一休二氏异常、奥而德一赖利二氏异常、切一东二氏综合征、乔布综合征(高IgE)、懒惰白细胞综合征、 先天性C3缺乏、慢性肉芽肿性疾病、白细胞、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症、髓过氧化物酶缺陷-良性、严重联合免疫缺陷病、迪乔治氏综合征、奈泽洛夫氏综合征、婴儿伴性无Y球蛋白血症、普通可变性低丙种球蛋白血症、粘多糖增多症、脂积症、高歇病、尼一皮二氏病、 法布里病、法伯氏病、神经节苷脂沉积症；泰一萨二氏(病)、山德霍夫病、克腊比病、变色反应的、脑白质病变、沃耳曼氏病、白血病、急性淋巴细胞性白血病(L1、L2、L3)、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病(AML)、未分化AML (MO)、原始粒细胞性白血病(Ml)、原始粒细胞性白血病、(M2)、前髓细胞性白血病、(M3)、粒一单核细胞型白血病(M4)、单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、成巨核细胞白血病、(M7)、慢性骨髓性白血病。
6.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子的剂量(每kg 体重)在多达lOmmol/kg，优选为多达lmmol/kg，更优选为多达100 μ mol/kg,甚至更优选为多达1()1111101/1^，甚至更优 选为多达11111101/1^，甚至更优选为多达lOOnmol/kg，最优选为多达50nmol/kg的范围内。
7.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子的剂量(每kg 体重)在约 lpmol/kg 至约 lmmol/kg、约 IOpmol/kg 至约 O, lmmol/kg、约 IOpmol/kg 至约 0，01mmol/kg、约 50pmol/kg 至约 1 μ mol/kg、约 100pmol/kg 至约 500nmol/kg、约 200pmol/ kg 至约 300nmol/kg、约 300pmol/kg 至约 100nmol/kg、约 500pmol/kg 至约 50nmol/kg、约 750pmol/kg 至约 30nmol/kg、约 250pmol/kg 至约 5nmol/kg、约 lnmol/kg 至约 1 Onmol/kg> 或者任意两个所述值的组合的范围内。
8.转运蛋白货物结合分子用于将感兴趣物质(货物分子)转运至白细胞的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子包括a)作为组分㈧包括HIVTAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)的氨基酸序列，或其变体的(多)肽，b)作为组分(B)货物分子，和c)任选的一种或更多种另外的组分，其中，所述SEQ ID NO 2的变体选自i)(多)肽，其包括根据SEQID NO 235的至少一个氨基酸序列，或其反向序列，和ii)(多)肽，其包括根据SEQID NOs 2至116任意一个的至少一个氨基酸序列，或其反向序列。
9.包括HIVTAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)的氨基酸序列或其变体的(多)肽用于制备转运蛋白货物结合分子的用途，其中，所述SEQ ID NO :2的变体选自i)(多)肽，其包括根据SEQID NO 235的至少一个氨基酸序列，或其反向序列，和ii)(多)肽，其包括根据SEQID NOs 2至116任意一个的至少一个氨基酸序列，或其反向序列，所述转运蛋白货物结合分子用于将感兴趣物质(货物分子)转运至白细胞。
10.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子的两种或更多种组分彼此共价连接，尤其地，其中组分(A)和(B)彼此共价连接。
11.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述货物分子(组分(B))选自a)蛋白质或(多)肽，其包括治疗上有活性的蛋白质和/或(多)肽，b)蛋白激酶抑制剂，其包括蛋白激酶c-Jim氨基末端激酶或因子的抑制剂，c)抗原，d)抗体，e)凋亡因子，f)病理状态中牵涉的蛋白酶，其包括肽蛋白酶抑制剂，g)BH3-结构域，h)唯BH3蛋白，i)DNAs,j)RNAs，其包括 siRNAs、反义 RNAs、微小 RNAs，k)细胞毒性剂，1)小有机化合物，m)小分子药物，η)金颗粒， ο)荧光染料， P)抗生素，和/或 q)病毒抑制剂。
12.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述SEQID NO :2变体是选自SEQ ID NOs :2至116、235或各自反向序列的化学衍生物的(化学)衍生物。
13.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述任选的一种或更多种另外的组分选自信号序列或定位序列，其将所述转运蛋白货物结合分子指引至特定的细胞内靶点定位或至特定的细胞型。
14.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述转运蛋白货物结合分子的一种、两种或更多种和/或所有组分是蛋白质或(多)肽序列，并由L-氨基酸、D-氨基酸或两者的混合物组成。
15.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述变体包括(多)肽序列或由所述 (多)肽序列组成，所述(多)肽序列与所提到的所述(多)肽序列具有至少10%、20%、 30%,40%,50%,60%,70%,80%,85%,90%,95%^； 99%的序列同一性。
16.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述货物是所述c-Jun氨基末端激酶的抑制剂，选自SEQ ID NOs :117至200或其片段或变体。
17.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述转运至白细胞离体发生。
18.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述白细胞是初级细胞。
19.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述白细胞是无限增殖化细胞。
20.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述白细胞是转基因细胞。
21.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述白细胞选自粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、小神经胶质细胞和/或肥大细胞。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述粒细胞选自嗜中性粒细胞、嗜伊红粒细胞和嗜碱性粒细胞。
23.根据权利要求21所述的用途，其中所述淋巴细胞选自NK细胞、辅助性T细胞、细胞毒性τ细胞、γ δ T细胞和B细胞。
24.将感兴趣物质(货物分子)转运至白细胞的方法，所述方法包括以下步骤 i)将转运蛋白货物结合分子和白细胞接触，所述转运蛋白货物结合分子包括a)作为组分㈧(多)肽，其包括HIVTAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)的氨基酸序列，或其(化学)衍生物，或其变体，b)作为组分⑶货物分子，和c)任选的一种或更多种另外的组分， 其中，所述SEQ ID NO 2的变体选自i’)(多)肽，其包括根据SEQ ID NO 235的至少一个氨基酸序列，其(化学)衍生物， 或其反向序列，和ii’)(多)肽，其包括根据SEQ ID NOs 2至116任意一个的至少一个氨基酸序列，其 (化学)衍生物，或其反向序列。
25.分离的白细胞，其包括转运蛋白货物结合分子，所述转运蛋白货物结合分子包括a)作为组分㈧(多)肽，其包括HIVTAT残基49至57 (SEQ ID NO 2)的氨基酸序列，或其(化学)衍生物，或其变体，b)作为组分⑶货物分子，和c)任选的一种或更多种另外的组分， 其中，所述SEQ ID NO 2的变体选自i)(多)肽，其包括根据SEQID NO 235的至少一个氨基酸序列、其(化学)衍生物、 或其反向序列，和ii)(多)肽， 其包括根据SEQID NOs 2至116任意一个的至少一个氨基酸序列、其 (化学)衍生物、或其反向序列或其片段。
全文摘要
本发明涉及特异性转运蛋白货物结合分子用于将感兴趣物质(货物分子)转运至白细胞的用途。所述转运蛋白货物结合分子可以被用于治疗、预防、减弱和/或改善涉及白细胞的疾病和/或病症。本发明也涉及所述转运蛋白货物结合分子的制备，涉及将感兴趣物质(货物)转运至白细胞的方法，以及涉及包括所述转运蛋白货物结合分子或其片段的白细胞。
文档编号C07K14/16GK102256999SQ200980151897
公开日2011年11月23日 申请日期2009年12月22日 优先权日2008年12月22日
发明者C·邦尼 申请人:希根有限责任公司