专利名称：对IL12受体β亚基特异的治疗性抗体的组合物和方法
对IL12受体β亚基特异的治疗性抗体的组合物和方法本发明涉及与IL12Ri3 1(异二聚IL12受体(连同IL12Ri3 2链)的非信号转导链)以及IL23受体(连同IL23Ra链)特异结合的抗体。本发明更具体地涉及能抑制血细胞IL12/IL18诱导的IFN γ产生的，是IL12和IL23受体拮抗剂的特异性抗体，以及将所述抗体用于治疗可以通过抑制IFNy产生来治疗的病理疾病的组合物和方法，所述病理疾病例如为类风湿性关节炎、银屑病或炎性肠病或者其他自身免疫和炎症疾病。已知IL12受体β 1 (IL12Ri3 1)链为治疗Thl/Thl7介导的疾病例如银屑病和其他自身免疫和炎症疾病的潜在治疗靶。银屑病是以表皮层的过度增殖以及树突细胞和T细胞的明显浸润为特征的常见慢性炎症皮肤疾病。T细胞在发生于皮肤中的病理反应中通过分泌1型细胞因子(诱导性IFN-γ和TNF-α)起关键作用，并且所述1型细胞因子诱导角质细胞过度增殖、血管发生和嗜中性粒细胞浸润。认为在银屑病中对产生Thl免疫应答重要的两个细胞因子是白细胞介素 12(IL12)和白细胞介素23(IL23)。两个细胞因子都由抗原呈递细胞，例如巨噬细胞、树突细胞产生，并且其功能为活化T细胞和天然杀伤细胞。IL12和IL23是可溶性细胞因子的异二聚家族成员，所述可溶性细胞因子在IL12的情况中包含p35/p40蛋白质亚基，并且在 IL23的情况中包含pl9/p40蛋白质亚基。任一细胞因子的IL12p40亚基与在免疫细胞的表面上发现的跨膜IL12受体β l(IL12Ri3 1)结合。破坏IL12p40/IL12Rβ 1相互作用可以阻止IL12和IL23 二者的生物学活性。几种炎症和自身免疫疾病包括银屑病都与加剧的Thl和/或Thl7应答有关。目前，许多炎症和自身免疫疾病都用一般的免疫抑制剂或者非常选择性起作用的生物制剂例如抗TNF-α抗体治疗，其并非在所有患者中都有效。发现这些药剂增加了感染的风险，并且在重复治疗后会变得无效。因此，对于具有增加的安全性并同时能诱导长期缓解或治愈疾病能力的治疗，还存在未满足的医学需求。即使在转移了诱导银屑病样疾病的T细胞亚集后施用时，IL12p40的中和抗体也在小鼠中成功地消除了银屑病病变(Hong等人，J. Immunol. 162. 12 (1999) 7480-91)。靶向IL12和IL23 二者的抗IL12p40抗体目前已用于银屑病(Kauffman等人 J. Invest Dermatol. 123. 6(2004) :1037-44, Papp 等人 Lancet. 371. 9625(2008) 1675-84，Kimball 等人 Arch. Dermatol. 144. 2(2008) :200-07)、Crohns 病((Sandborn 等人，Gastroenterology. 135. 4 (2008) 1130-41)和多发性硬化(Segal 等人，Lancet Neurol. 7. 9 (2008) :796-804))的临床试验中。靶向IL12R3 1并因此分化和维持Thl和 Thl7细胞群体，以及由这些细胞所产生的IL12和IL23介导的炎症细胞因子，提供了改进治疗剂的可能性。美国专利6，046，012 一般地涉及与抗IL12R^ 1结合的IL12R^ 1和抗体。Becton Dickinson也商品化了抗小鼠IL12R0 1单克隆抗体(目录号551455)。然而，到目前为止，本领域还没有将显示出IL12Ri3 1拮抗活性的人IL12Ri3 1的结合分子用于治疗自身免疫疾病和炎症疾病，例如银屑病或Crohns病的描述。仅只有通过靶向各个相互作用配偶体(IL12p40)的间接证据证实了该途径是有效的。
因此，在一个方面，本发明提供了抗体或包含所述抗体的针对IL12Ri3 1多肽(SEQ ID NO 41)中靶标的抗原结合部分的结合蛋白质，其特征在于所述抗体或结合蛋白质特异地结合IL12Ri3 1多肽。在一个实施方案中，本发明的抗体来自例如人类或骆驼来源的哺乳动物，或者其是人源化抗体。在特定的实施方案中，抗IL12Ri3 1抗体的特征在于其具有对于目标蛋白质IL12Ri3 1特异的并与IL12Ri3 1或IL12Ri3 1的片段结合的抗原结合区。在一个实施方案中，根据本发明的抗体是不具有或具有低激动活性的IL12Ri3 1 拮抗剂。在某些实施方案中，抗体结合靶蛋白质IL12Ri3 1并在人血细胞中抑制IL12依赖性的IFN-Y产生。在另一个实施方案中，根据本发明的抗体竞争性抑制IL12和IL23与IL12Ri3 1结合。更优选地，抗体是不具有激动活性的ILURii 1拮抗剂。可以通过一种或多种测定法测量结合，所述测定法用于测量通过抗体产生的活性是拮抗作用还是激动作用。优选地，测定法测量抗体对IL12Ri3 1的至少一种作用，其包括 人血细胞中IL12依赖性的IFN-Y产生、人血细胞中IL23/IL17依赖性的IFN-γ产生、灵长类动物血细胞中IL12离体IFN-Y产生。在另一个实施方案中，本发明提供了特异结合IL12Ri3 1的共同IL12/IL23p40配体结合区的抗体。根据另一个特定的实施方案，抗体以IOOnM或更小、IOnM或更小、InM或更小的Kd 与IL12RM结合，并如在体外竞争性结合测定法中所测量的，以大约IOnM或更小、InM或更小、IOOpM或更小的IC5tl抑制IL12和IL23与IL12R3 1多肽的结合。在另一个备选的实施方案中，抗体特异地结合IL12Ri3 1，并如在体外竞争性结合测定法中所测量的，以约IOnM或更小、InM或更小、IOOpM或更小的IC5tl选择性抑制IL12与 IL12R^ 1多肽结合，而不抑制IL23与IL12R0 1多肽结合。在另一个实施方案中个，抗体以约IOnM或更小、InM或更小、IOOpM或更小的IC5tl 抑制人血细胞中IL12依赖性的IFNy产生。在另一个相关的实施方案中，与未治疗的对照动物比较，抗体能在IBD小鼠模型中缓解疾病。在另一个相关的实施方案中，在用单剂量治疗的猕猴(cynomolgous monkey) 的外周血单核细胞中，抗体能完全阻断IFNy应答更长的时间。在H(/PD研究中，10yg/ml 以上的抗IL12Ri3 ImAb血浆水平导致了离体IL12诱导的IFNy产生的完全抑制。在另一个实施方案中，抗体阻断了 IL12Ri3 1与其亚基IL12Ri3 2和/或IL23R的异二聚化。在一些特定的实施方案中，本发明的抗体不与至少一种其他细胞因子受体交叉反应。在特定的实施方案中，本发明的抗体不与人IL4Rci受体交叉反应。在优选的实施方案中，本发明的抗体至少与啮齿动物或灵长类动物IL12Ri3 1受体交叉反应。在另一个相关的实施方案中，根据本发明的抗体是不具有抗体依赖性细胞毒作用 (ADCC)活性的完全人IgG4抗体或人源化IgG4抗体或者沉默突变的IgGl抗体，并且其以约 IOnM或更小、InM或更小、IOOpM或更小的IC5tl抑制人血细胞中IL12依赖性的IFNy产生。本发明也涉及包含针对IL12Ri3 1多肽(SEQ ID NO 41)中靶标的所述抗体的抗原结合部分的结合蛋白质，其中所述抗原结合部分是聚乙二醇化的。在一个相关的实施方案中，聚乙二醇化抗原结合部分是聚乙二醇化!^b。本发明涉及分离的抗体，特别是人抗体或人源化抗体，其抑制IL12和IL23与 IL12Ri3 1结合，并在人血细胞中抑制IL12依赖性的IFNy产生。在某些实施方案中，本发明的抗体衍生自特定的重链和轻链序列和/或包含特定的结构特征例如含有特定氨基酸序列的CDR区。本发明提供了分离的抗体，制备此类抗体的方法、包含此类抗体的免疫缀合物和多价或多特异性分子，以及含有抗体的药物组合物、本发明的免疫缀合物或双特异性分子。本发明也涉及使用抗体抑制(即拮抗)IL12Ri3 1的功能的方法，以抑制受IL12、IL23 和/或IL12Ri3 1调节的疾病或病症的发生，例如，其导致由IL12Ri3 1介导的或者可以通过抑制血细胞中IFNy产生来治疗的病理疾病的治疗；例如，Thl/Thl7介导的疾病如类风湿性关节炎、银屑病和炎性肠病。为了使本发明更易于理解，首先定义了一些术语。其他定义在详细描述中描述。术语“免疫应答”指例如，淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和上述细胞或肝脏产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，其导致选择性损害、破坏或从人体清除侵入性病原体、受病原体感染的细胞或组织、癌性细胞，或者(在自身免疫或病理炎症的情况下)正常人细胞或组织。“信号转导途径”或“信号活性”指通常由蛋白质-蛋白质相互作用例如生长因子与受体的结合引发的生物化学因果关系，其导致信号从细胞的一部分传递到细胞的另一部分。总而言之，传递涉及在引起信号转导的一系列反应中，在一个或多个蛋白质上，一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特异磷酸化。次末过程一般包括核事件，其导致基因表达的改变。术语IL12R3 1或IL12受体β 1指如在SEQ ID NO 41中所定义的人IL12R3 1。本文涉及的术语“抗体”包括完整抗体和其任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或单链。包含抗体的抗原结合部分的结合蛋白质意在被术语“抗体”包括。特别地， 术语“与IL12Ri3 1结合的抗体”意在包括包含抗体的IL12Ri3 1结合部分的IL12Ri3 1结合
蛋白质。天然存在的“抗体”是糖蛋白，其包含通过二硫键连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(本文中简写和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文中简写为Vj和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域Q。可以将V1^nt进一步细分为高变区，称作互补决定区 (CDR)，其散布在更保守的称作构架区(FR)的区域中。每个V1^Pt由三个CDR和四个FR 组成，它们从氨基末端到羧基末端以下面的顺序排列FR1、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、FR4。 重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞) 和经典补体系统的第一组分(Clq)。如本文中所用，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗原部分”)指抗体的全长或者一个或多个片段，其保留特异结合抗原(例如，IL12Ri3 1的一部分)的能力。已经表明抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。术语抗体的“抗原结合部分”内包括的结合片段的实例包括Fab片段、由八、Vh、(^和CHl结构域组成的单价片段；F(ab)2片段、 包含通过二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；由V1^PCHl结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的\和Vh结构域组成的Fv片段；由Vh结构域组成的dAb片段(Ward等人，1989 Nature 341 :544-546)；和分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域\和Vh由单独的基因编码，但是它们可以用重组方法通过合成接头连接，所述接头使得它们成为一条蛋白质链，其中\和Vh区配对形成单价分子(称作单链 Fv(scFv)；见例如，Bird 等人，1988 Science 242 :423-426 ；和 Huston 等人，1988Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883)。此类单链抗体意在被术语抗体的“抗原结合部分”包括。使用本领域技术人员已知的常规技术得到这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的效用。如本文中所用，“分离的抗体”指抗体，其基本上没有具有不同抗原特异性的其他抗体(例如，特异结合IL12Ri3 1的分离的抗体基本上无特异结合不同于IL12Ri3 1的其他抗原的抗体)。然而，特异结合IL12Ri3 1的分离的抗体可以与其他抗原，如来自其他物种的 IL12Ri3 1分子具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上无其他细胞物质和/或化学
P
ΡΠ O如本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单一结合特异性和亲和性。如本文中所用，术语“人抗体”意在包括具有其中构架区和CDR区二者都来自人来源的序列的可变区的抗体。此外，如果抗体含有恒定区，那么该恒定区也来自该人类序列， 例如，人种系序列、或人种系序列的突变形式，或者来自含有来自人构架序列分析的共有构架序列的抗体，例如，如在Knappik，等人(2000. J Mol Biol 296,57-86)中所述。本发明的人抗体可以包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过在体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变导入的突变)。然而，如本文所用的术语“人抗体” 不意在包括这样的抗体，其中来自另一哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列已经被移植到人构架序列上。术语“人单克隆抗体”指显示出单结合特异性的抗体，其具有可变区，其中构架区和CDR区都来自人序列。如本文所用的术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如从对于人免疫球蛋白基因为转基因或转染色体的动物(例如，小鼠)或从其制备的杂交瘤分离的抗体，从被转化而表达人抗体的宿主细胞分离的抗体，例如，从转染瘤分离的抗体，从重组的组合人抗体文库分离的抗体，和通过涉及将人免疫球蛋白基因序列的全部或部分剪接成其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有可变区，其中构架和CDR区来自人种系免疫球蛋白序列。然而，在一些实施方案中，此类重组人抗体可以进行体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，并且从而重组抗体的Vh和\区的氨基酸序列是这样的序列，其尽管来自并且涉及人种系％和\序列，但是可以不天然在体内存在于人抗体种系所有组成成分。如本文中所用，“同种型”指通过重链恒定区基因分类的抗体类别(例如，IgM、IgE、 IgG 如 IgGl 或 IgG4)。短语“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”在本文中与术语“特异结合抗原的抗体”可互换使用。如本文中所用，“特异结合人IL12Ri3 1多肽”的抗体意指以IOOnM或更小、IOnM或更小、InM或更小的Kd结合人IL12Ri3 1多肽的抗体。“与不同于人IL12Ri3 1的抗原交叉反应”的抗体意指以0. 5x10-8M或更小、5X10_9M或更小、2X 10_9M或更小的Kd结合该抗原的抗体。“不与特定抗原交叉反应”的抗体意指以1. 或更大，或5-lOx 10_1或& IO^7M 或更大的Kd结合该抗原的抗体。在一些实施方案中，不与所述抗原交叉反应的此类抗体在标准结合测定中显示出对于这些蛋白质的基本上检测不到的结合。如本文中所用，术语“拮抗剂”意指在人血细胞中的人细胞测定法例如IL12依赖性的IFNy产生测定法中IL12存在的情况下，抑制IL12Ri3 1诱导的信号活性的抗体。在以下的实施例中更详细地描述了人血细胞中IL12依赖性的IFNy产生测定法和人血细胞中几23依赖性的正^^产生测定法的实例。在一些实施方案中，如在人血细胞测定法中所测量，抗体以IOnM或更小、InM或更小、IOOpM或更小的IC5tl抑制IFNy产生。如本文中所用，具有“无激动活性”的抗体意指在基于细胞的测定法，例如人血细胞IFNy产生测定法中IL12不存在的情况下，并不显著增加IL12Ri3 1介导的信号活性的抗体。在以下的实施例中更详细地描述了此类测定法。如本文中所用，抑制IL12和IL23与IL12Ri3 1多肽结合的抗体或结合蛋白质意指如在体外竞争性结合测定法例如Bioveris 测定法中所测量，以IOnM或更小的EC5tl，优选地以InM或更小的EC5tl，更优选地以IOOpM或更小的EC5tl抑制IL12和IL23与IL12R3 1多肽结合的抗体。在以下的实施例中更详细地描述了此类测定法。如本文中所用，抑制灵长类动物血细胞中IL12离体IFNy产生的抗体或结合蛋白质意指以10yg/ml以上的抗IL12Ri3 1 mAb血浆水平，降低IL12离体IFN γ产生水平至对照水平10%以下的抗体。在一些实施方案中，其指在具有10 μ g/ml以上的抗IL12Ri3 1 mAb 血浆水平的灵长类血细胞中，完全终止IL12离体IFNy产生的抗体。在以下的实施例中更详细地描述了此类测定法。如本文中所用，术语"Kass。。”或“Ka”意指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而如本文中所用，术语"Kdis”或“KD”意指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文中所用，术语“K/意指解离常数，其从Kd与Ka的比(即Kd/Ka)得到并且表达为摩尔浓度(M)。 可以使用本领域成熟的方法测定抗体的Kd值。用于测定抗体Kd的方法是通过使用表面等离振子共振，或者使用生物传感器系统，如Biacore 系统。如本文中所用，术语“亲和性”指在单一抗原位点，抗体和抗原之间相互作用的强度。在每一抗原位点内，抗体“臂”的可变区通过弱非共价作用力与抗原在多个位点相互作用；相互作用越多，亲和性越强。如本文中所用，术语“亲和力”指抗体-抗原复合物的整体稳定性或强度的信息性测量。其受三个主要因素控制抗体表位亲和性；抗原和抗体二者的效价；和相互作用部分的结构重排。这些因素最终定义了抗体的特异性，即，特定的抗体结合精确的抗原表位的可能性。为了得到更高亲和力的探针，可以构建二聚缀合物(与FACS标志物偶联的两个抗体蛋白质分子)，从而制备更容易被FACS检测的低亲和性相互作用(例如与种系抗体相互作用)。此外，增加抗原结合亲和力的另一手段涉及产生抗IL12Ri3 1抗体的任一本文中所述的构建体的二聚体、三聚体或多聚体。可以通过例如模仿天然的C末端与NF末端结合或者通过模仿借助其恒定区结合在一起的抗体二聚体，经各个组件之间共价结合来产生此类多聚体。改造成Fc/Fc界面的键可以是共价的或者非公价的。此外，在IL12Ri3 1杂交中可以使用非Fc的二聚化或多聚化配偶体，以产生此类更高级的结构。例如，可使用的多聚化结构域如三聚化结构域描述于Borean (W02004039841)。如本文中所用，术语“选择性”对于抗体而言指与确定的目标多肽而非密切相关的多肽结合的抗体。如本文中所用，术语“高亲和性”对于抗体而言指与目标抗原具有InM或更小的Kd 的抗体。如本文中所用，术语“受试者”包括任一人类或非人类动物。术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，如非人类灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。如本文中所用，术语“优化的”意为核苷酸序列已经用在生产细胞或生物中优选的密码子改变以编码氨基酸序列，生产细胞或生物一般为真核细胞例如毕赤酵母属(Pichia) 的细胞、木霉属(Trichoderma)的细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或人细胞。改造优化的核苷酸序列以完全地或者尽可能多地保留由起始核苷酸序列原始编码的氨基酸序列，其也已知为“亲本”序列。本文中已经改造了优化的序列，其具有在CHO哺乳动物细胞中优选的密码子；然而，本文中也考虑了在其他真核细胞中这些序列的优化表达。将由优化的核苷酸序列编码的氨基酸序列也称为优化的。用于评估抗体对多种物种IL12Ri3 1的结合能力的标准测定法是本领域已知的， 包括例如，ELISA、蛋白质印迹和RIA。合适的测定法在实施例中详述。也可以通过本领域已知的标准测定法，如通过Biacore分析评估抗体的结合动力学(例如，结合亲和性)。用于评估抗体对IL12Ri3 1的功能性质(例如，受体结合、IL12或IL23配体结合的抑制、抑制 IL12诱导的IFNy产生)的影响的测定法在实施例中进一步详细描述。因此，如通过本领域已知的和本文所述的方法测定的“抑制”这些IL12Ri3 1功能性质(例如，生物化学、免疫化学、细胞的、生理的或其他生物活性等等)一种或多种的抗体将被理解为涉及相对于不存在所述抗体时(例如，或者当存在不相关特异性的对照抗体时)具体活性的统计学显著降低。抑制IL12Ri3 1活性的抗体实现所测量参数的这种统计学显著减少至少10 %，至少50 %、80 %或90 %，在一些实施方案中，本发明的抗体抑制 IL12R^ 1功能活性大于95%、98%或99%。术语“交叉阻断”、“经交叉阻断的”和“交叉阻断的”在本文中互换地用于指在标准竞争性结合测定法中，抗体或其他结合剂干扰其他抗体或结合剂与IL12Ri3 1结合的能力。可以使用标准竞争性结合测定法测定抗体或其他结合剂干扰另一抗体或结合分子与IL12Ri3 1结合的能力或程度，并从而测定其是否可以称作为根据本发明的交叉阻断。一种合适的测定法涉及Biacore技术(例如，通过使用BIAcore 3000仪器(Biacore， Uppsala，瑞典))的用途，其使用表面等离振子共振技术测量相互作用的程度。用于测量交叉阻断的另一测定法使用基于ELISA的方法。在实施例中给出了这些方法的进一步详细说明。根据本发明，本发明的交叉封闭抗体或其他结合剂在所述BIAcore交叉阻断测定法中与IL12Ri3 1结合，使得抗体或结合剂的组合物(混合物)的记录结合在最大理论结合的80%至0. 之间(例如80%至4%)，特别地在最大理论结合的75%至0. 之间(例如75%至4% )，和更特别地在70%至0. 之间(例如70%至4% )，和更特别地在组合的两个抗体或结合剂的最大理论结合(如上所定义)的65%至0. 之间(例如65%至 4% )。与在不存在溶液相抗IL12Ri3 1抗体的情况下获得的抗IL12Ri3 1检测信号(即阳性对照孔)比较，如果溶液相抗IL12Ri3 1抗体能引起IL12Ri3 1检测信号(即被包被的抗体结合的IL12Ri3 1的量)在60%至100%之间，特别地在70%至100%之间，和更特别地在80%至100%之间的降低，那么如在实施例中所述，在ELISA测定法中将抗体定义为交叉阻断。重组抗体本发明的抗体包括如在实施例中所述的分离的和结构表征的人重组抗体。根据本发明分离的抗体的Vh氨基酸序列显示于SEQ ID N0:29-32。本发明分离的抗体的\氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO :25- 。本发明的其他抗体包括已经通过氨基酸缺失、插入或替换而突变，然而在⑶R区中与上述序列中描述的⑶R区具有至少60、70、80、90或95%同一性的氨基酸。在一些实施方案中，其包括这样的突变氨基酸序列，其中当与上述序列中所述的⑶R区比较时，通过⑶R区中氨基酸缺失、插入或替换，已经突变了不超过1、2、3、4或 5个氨基酸。可变的轻链核苷酸序列显示于SEQ ID NO 33-36.可变的重链核苷酸序列显示于 SEQ ID NO 37-40。编码本发明抗体的其他核酸包括已经突变，然而与上述序列具有至少 60、70、80、90或95%同一性的核酸。在一些实施方案中，其包括这样的变体核酸，其中当与上述序列中所述的可变区比较时，通过可变区中核苷酸缺失、插入或替换，已经改变了不超过1、2、3、4或5个核苷酸。对于与相同表位结合的抗体，可以将VH、\、全长轻链和全长重链序列(核苷酸序列和氨基酸序列)“混合和匹配”以产生本发明的其他抗IL12Ri3 1结合分子。可以使用上述和实施例中所述的结合测定法(例如，ELISA)测试此类“混合和匹配的”抗体的IL12Ri3 1 结合。当这些链被混合和匹配时，来自具体VH/\配对的Vh序列应该用结构上相似的Vh序列置换。同样，来自具体全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应当用结构上相似的全长重链序列置换。同样，来自具体配对的\序列应该用结构上相似的\序列置换。 同样，来自具体全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应当用结构上相似的全长轻链序列置换。因此，在一个方面，本发明提供了分离的重组抗体，其具有包含选自SEQ ID NO 29-32的氨基酸序列的重链可变区；包含选自SEQ ID NO 25-28的氨基酸序列的轻链可变区；其中该抗体特异结合IL12R3 1。在另一方面，本发明提供了分离的重组抗体，其具有包含选自SEQ ID NO :29-32 的Vh氨基酸序列的全长重链；和包含选自SEQ ID NO :25-28的\氨基酸序列的全长轻链； 其中该抗体特异结合IL12Ri3 1。在另一方面，本发明提供了分离的重组抗体，其具有由包含选自SEQ ID NO 37-40的序列的核苷酸序列编码的全长重链；和由包含选自SEQ ID NO :33-36的序列的核苷酸序列编码的全长轻链；其中该抗体特异结合IL12Ri3 1。根据本发明的抗体的Vh⑶Rl的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID NO :1_4。根据本发明的抗体CDR2的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID NO :5_8。根据本发明的抗体 WVh⑶R3的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID N0:8-12。根据本发明的抗体的八⑶Rl的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID N0:13-16。根据本发明的抗体的\⑶R2的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID N0:17-20。根据本发明的抗体的\⑶R3的氨基酸序列的实例显示于 SEQ ID NO :21-24ο 使用 Kabat 系统描述 CDR 区(Kabat，Ε. A.，等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)。考虑到这些抗体的每一种可以结合IL12Ri3 1并且抗原结合特异性主要通过 CDRU2和3区提供，可以将Vh CDRU2和3序列与Vl CDRU2和3序列“混合和匹配”(即， 来自不同抗体的⑶R可以被混合和匹配，含有Vh⑶Rl、2和3和Vl⑶Rl、2和3的每个抗体产生本发明的其他抗IL12Ri3 1结合分子。可以使用上文和实施例中描述的结合测定法 (例如，ELISA)测试此类“混合和匹配的”抗体的IL12Ri3 1结合。当混合和匹配Vh⑶R序列时，来自具体Vh序列的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3序列应该用结构上相似的⑶R序列置换。 同样，当混合和匹配VfDR序列时，来自具体八序列的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3序列应该用结构上相似的CDR序列置换。技术人员将容易显而易见的是，通过用来自本文所示本发明单克隆抗体的CDR序列的结构上相似的序列替代一个或多个V1^n /或\ CDR序列，可以产生新的Vh和Vl序列。分离的重组抗体，或者其抗原结合部分具有包含选自SEQ ID NO :1_4的氨基酸序列的重链可变区⑶Rl ；包含SEQ ID NO :5_8的氨基酸序列的重链可变区⑶R2 ；包含选自 SEQ ID NO :9-12的氨基酸序列的重链可变区CDR3 ；包含选自SEQ ID NO 13-16的氨基酸序列的轻链可变区⑶Rl ；包含选自SEQ ID NO 17-20的氨基酸序列的轻链可变区⑶R2 ；包含选自SEQ ID NO 21-24的氨基酸序列的轻链可变区⑶R3 ；其中该抗体特异结合IL12R3 1。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO 1的重链可变区⑶Rl ；SEQ ID NO 5的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO :9的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO 13的轻链可变区CDRl ；SEQ ID NO 17的轻链可变区⑶R2 ；和SEQ ID NO 21的轻链可变区⑶R3。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO 2的重链可变区⑶Rl ；SEQ ID NO 6的重链可变区⑶R2 ；SEQ ID NO 10的重链可变区⑶R3 ；SEQ ID NO 14的轻链可变区⑶Rl ； SEQ ID NO 18的轻链可变区CDR2 ；和SEQ ID NO 22的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO 3的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO 7的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO 11的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO 15的轻链可变区CDRl ； SEQ ID NO 19的轻链可变区CDR2 ；和SEQ ID NO 23的轻链可变区CDR3。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO 4的重链可变区CDRl ；SEQ ID NO 8的重链可变区CDR2 ；SEQ ID NO 12的重链可变区CDR3 ；SEQ ID NO 16的轻链可变区CDRl ； SEQ ID NO 20的轻链可变区⑶R2 ；和SEQ ID NO 24的轻链可变区⑶R3。如本文中所用，人抗体包含重链或轻链可变区或全长重或轻链，如果该抗体的可变区或全长链从使用人种系免疫球蛋白基因的系统得到，那么所述可变区或全长链是特定种系序列的“产物”或“来自”该特定种系序列。此类系统包括用目的抗原免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠或者用目的抗原筛选在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库。 为人种系免疫球蛋白序列的“产物”或者“来自”所述序列的人抗体可以如下鉴定通过比较人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列并选则在序列上与人抗体的序列最接近(即，最大的％同一性)的人种系免疫球蛋白序列。为具体的人种系免疫球蛋白序列的“产物”或者“来自，，所述序列的人抗体可以由于例如天然存在的体细胞突变或者有意引入定点诱变而与种系序列相比含有氨基酸差异。然而，所选的人抗体通常与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列上至少90%同一性并且含有这样的氨基酸残基，当与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)比较时，所述氨基酸残基将所述抗体鉴定为人的抗体。在一些情况中，人抗体可以在氨基酸序列上与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少60%、70%、80%、90%、或至少95%、或甚至至少96%、 97%、98%、或99%同一性。通常，来自具体人种系序列的人抗体将显示出与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10个氨基酸差异。在一些情况中，人抗体可以显示出与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差
已同源抗体在再一个实施方案中，本发明的抗体具有全长重链和轻链氨基酸序列；全长重链和轻链核苷酸序列、可变区重链和轻链核苷酸序列或可变区重链和轻链氨基酸序列，其与本文所述抗体的氨基酸和核苷酸序列同源，并且其中所述抗体保留本发明的抗IL12Ri3 1 抗体的所希望的功能性质。例如，本发明提供了包含重链可变区和轻链可变区的分离的重组抗体(或包含其抗原结合部分的结合蛋白质)，其中重链可变区与选自SEQ ID NO :29-32的氨基酸序列至少80%或至少90%的同一性；轻链可变区与选自SEQ ID NO :25- 的氨基酸序列至少80% 或至少90%的同一性；所述抗体特异结合IL12Ri3 1，并且该抗体显示出至少一种下面的功能性质其抑制IL12和IL23与ILURβ 1的结合，其抑制人血细胞中IL12依赖性的IFNy 产生，其抑制人血细胞中IL23依赖性的IFNy产生或者其抑制灵长类动物血细胞中IL12 离体IFNy产生。在另一实例中，本发明提供了包含全长重链和全长轻链的分离的重组抗体，其中 重链可变区由与选自SEQ ID NO 37-40的核苷酸序列至少80%或至少90%的同一性的核苷酸序列编码；轻链可变区由与选自SEQ ID NO :33-36的核苷酸序列至少80%或至少90% 的同一性的核苷酸序列编码；所述抗体特异结合IL12Ri3 1，并且该抗体显示出至少一种下面的功能性质其抑制IL12和IL23与IL12Ri3 1的结合，其抑制人血细胞中IL12依赖性的 IFNy产生，其抑制人血细胞中IL23依赖性的IFNy产生或者其抑制灵长类动物血细胞中 IL12离体IFNy产生。在多种实施方案中，抗体可以显示出上面讨论的功能性质的一种或多种、两种或多种、三种或多种或者四种。该抗体可以是例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。优选地， 抗体是完全人沉默IgGl抗体。在其他实施方案中，￥11和/或\氨基酸序列可以与上面给出的序列50%、60(%、 70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在其他实施方案中，除在不超过1、 2、3、4或5个氨基酸位置中的氨基酸替换外，Vh和/或\氨基酸序列可以是同一的。具有分别与SEQ ID NO 29-32和SEQ ID N025-28的Vh和Vl区有高(例如，80%或更高)同一性的Vh和\区的抗体可以如下得到诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)分别编码 SEQ ID NO :37-40和33-36的核酸分子，接着使用本文讨论的功能测定法对所编码的经改变抗体测试保留的功能(即，上文给出的功能)。
如本文中所用，两个序列之间的同一性百分数是这两个序列共有的相同位置数目的函数(即，％同一性=相同位置数/位置总数X100)，考虑缺口数、每个缺口的长度，它们被引入以进行两个序列的最佳比对。可以使用如下所述的数学算法完成序列的比较和两个序列之间同一性百分数的确定。可以使用E.Meyers 和 W. Miller (Comput. Appl. Biosci.，4 :11-17,1988)的算法， 使用PAM120权重残基表、缺口长度罚分12和缺口罚分4，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数，该算法已经被整合到ALIGN程序(版本2.0)中。此外，可以使用整合到GCG 软件包(可以在 http //www, gcg. com 得到)的 GAP 程序的 Needleman 和 Wunsch (J. Mol， Biol. 48 :444-453,1970)算法，使用 Blossom 62 矩阵或 PAM250 矩阵，和缺口权重 16、14、 12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。具有保守修饰的抗体在一些实施方案中，本发明的抗体具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区和包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列轻链可变区，其中这些⑶R序列的一个或多个具有基于本文所述抗体或者其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留本发明的抗IL12Ri3 1 抗体的所需功能性质。因此，本发明提供了包含抗原结合部分的分离的重组抗体，其组成为；包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区和包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中重链可变区CDRl氨基酸序列选自SEQ ID NO :1_4和其保守修饰；重链可变区 ⑶R2氨基酸序列选自SEQ ID NO :5-8和其保守修饰；重链可变区⑶R3氨基酸序列选自SEQ ID NO :9-12和其保守修饰；轻链可变区⑶Rl氨基酸序列选自SEQ ID NO :13-16和其保守修饰；轻链可变区⑶R2氨基酸序列选自SEQ ID NO :17-20和其保守修饰；轻链可变区⑶R3 氨基酸序列选自SEQ ID NO :21- 和其保守修饰；该抗体特异结合IL12Ri31，并且该抗体显示出至少一种下面的功能性质其抑制IL12和IL23与IL12Ri3 1的结合，其抑制人血细胞中IL12依赖性的IFNy产生，其抑制人血细胞中IL23依赖性的IFNY产生或者其抑制灵长类动物血细胞中IL12离体IFNy产生。在多种实施方案中，抗体可以显示出一种或多种、两种或多种，三种或多种、或者四种上面列出的功能性质。此类抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在其他实施方案中，用于在哺乳动物细胞中优化表达的本发明抗体具有全长重链序列和全长轻链序列，其中这些序列的一个或多个具有基于本文所述的抗体或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本发明抗IL12Ri3 1抗体想要的功能特性。 因此，本发明提供了用于在哺乳动物细胞中优化表达的分离的单克隆抗体，其由全长重链和全长轻链组成，其中全长重链包含选自SEQ ID NO :29-32的可变氨基酸序列和其保守修饰；并且全长轻链包含选自SEQ ID NO 25-28的可变氨基酸序列和其保守修饰；该抗体特异结合IL12Ri3 1，并且该抗体显示出至少一种下面的功能性质其抑制IL12和IL23与 IL12R β 1的结合，其抑制人血细胞中IL12依赖性的IFN γ产生，其抑制人血细胞中IL23依赖性的IFNy产生，或者其抑制灵长类动物血细胞中IL12离体IFNY产生。在多种实施方案中，抗体可以显示出一种或多种、两种或多种，三种或多种、或者四种上面列出的功能性质。此类抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。如本文所用的，术语“保守序列修饰”意指氨基酸修饰，其不显著影响或改变含有该氨基酸序列的抗体的结合特征。此类保守修饰包括氨基酸替代、添加和缺失。
保守氨基酸替代是其中将氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基置换的替代。 在本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、 色氨酸)、非极性侧链氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸)、β分枝侧链氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链氨基酸 (例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。从而，本发明抗体的CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以用来自相同侧链家族的其他氨基酸残基置换，并且可以使用本文所述的功能测定法测试经改变的抗体所保留的功能。可以通过本领域已知的标准技术，如定点诱变和PCR介导的诱变向本发明的抗体中引入修饰。结合与本发明的杭IL12RP 1杭体相同表拟的杭体在另一实施方案中，本发明提供了结合与本文提供的多种具体抗IL12Ri3 1抗体所结合表位相同的表位的抗体。因此，此类额外的抗体可以基于它们在标准IL12Ri3 1结合测定法中与本发明的其他抗体以统计学显著方式交叉竞争(即，竞争性抑制结合)的能力来鉴定。受试抗体抑制本发明的抗体与人IL12Ri3 1结合的能力表明该受试抗体与本发明抗体竞争结合人 IL12Ri3 1 ；根据非限制性理论，这种抗体可以结合人IL12Ri3 1上与它所竞争的抗体相同或相关的(例如，结构上相似或空间上接近的)表位。在一些实施方案中，与本发明的抗体结合人IL12Ri3 1上相同表位的抗体是人重组抗体。此类人重组抗体可以如实施例中所述进行制备和分离。改造和修饰的抗体还可以使用具有本文所示的一个或多个Vh和/或\序列的抗体作为起始物质以改造修饰的抗体来进一步制备本发明的抗体，该修饰的抗体可以具有不同于起始抗体的改变性质。通过修饰一个或两个可变区(即，Vdn/或VJ，例如，一个或多个CDR区内和/或一个或多个构架区内的一个或多个残基，可以改造抗体。额外或备选地，通过修饰恒定区内的残基来改造抗体，例如，以改变抗体的效应功能。可以进行的一种类型的可变区改造是⑶R嫁接。抗体主要通过位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。为此，各抗体之间CDR内的氨基酸序列比CDR外的序列更多样化。因为CDR序列负责多数抗体-抗原相互作用，所以可能通过构建表达载体表达重组抗体，其模拟特定天然存在的抗体的性质，所述表达载体包括来自特定天然存在的抗体的CDR序列，其嫁接到来自具有不同性质的不同抗体的构架区上(见例如，Riechmann，L.等人，1998 Nature 332:323-327 Jones,P.等人，1986 Nature 321 :522-525 ；Queen, C.等人，1989 Proc. Natl. Acad. See. U. S. Α. 86 :10029-10033 ；winter 的美国专利号5，225，539，和Queen等人的美国专利号5，530，101 ；5，585,089 ；5，693，762 和 6，180，370)。因此，本发明的另一实施方案涉及分离的单克隆IL12Ri3 1抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区包含分别具有选自SEQ ID NO :1-4的氨基酸序列的⑶Rl序列；具有选自SEQ ID NO 5-8的氨基酸序列的⑶R2序列；具有选自SEQ ID NO :9_12的氨基酸序列的⑶R3序列；轻链可变区分别具有选自SEQ ID NO :13-16的氨基酸序列的⑶Rl 序列；具有选自SEQ ID NO 17-20的氨基酸序列的CDR2序列；具有选自SEQ ID NO 21~24 的氨基酸序列的CDR3序列。从而，此类抗体含有单克隆抗体的V1^nt CDR序列，而可以含有来自这些抗体的不同构架序列。此类构架序列可以从公共DNA数据库或公布的参考文献得到，其包括种系抗体基因序列。例如，人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在"VBase"人种系序列数据库(可以在英特网网址www. mrc-cpe. cam. ac. uk/vbase获取)，以及在Kabat, Ε. Α.，等人， 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 ;Tomlinson，I. M.，等人，1992 J. fol. Biol. 227 :776-798 ；和 Cox，J. P. L.等人，1994 Eur. J Immunol. 24 :827-836 中找到。用于本发明抗体的构架区的实例是与所选的本发明抗体使用的构架序列，例如， 本发明的单克隆抗体使用的共有序列和/或构架序列结构上相似的那些构架序列。可以将乂11⑶Rl、2和3序列，和\⑶Rl、2和3序列嫁接在构架区上，该构架区具有与该构架序列所来源的种系免疫球蛋白基因中发现的相同的序列，或者可以将CDR序列嫁接在构架区上，该构架区与种系序列相比具有一个或多个突变。例如，已经发现在一些情况中，有益的是突变构架区内的残基以保持或增强抗体的抗原结合能力(见，例如，Queen等人的美国专利号 5，530，101 ；5，585，089 ；5，693，762 和 6，180，370)。另一类型的可变区修饰是突变Vh和/或Vl⑶Rl、⑶R2和/或⑶R3区内的氨基酸残基从而提高目的抗体的一种或多种结合性质(例如，亲和性)，称作“亲和性成熟”。可以进行定点诱变或者PCR介导的诱变以以导入突变，并且可以用如本文所述的和实施例中提供的体外或体内测定法评估对抗体结合或者其他目的功能性质的影响。可以引入保守修饰 (如上文讨论)。突变可以是氨基酸替代、添加或缺失。此外，通常改变CDR区内不超过1、 2、3、4或5个残基。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了分离的抗IL12Ri3 1单克隆抗体，其由重链可变区组成，该重链可变区具有由选自SEQ ID NO :1-4的氨基酸序列或与SEQ ID N0 1-4相比具有1、2、3、4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列组成的Vh⑶Rl区；具有选自SEQ ID NO :5-8的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO :5_8相比具有1、2、3、4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列的Vh CDR2区；具有选自SEQ ID NO :9_12的氨基酸序列或与SEQ ID NO :9-12相比具有1、2、3、4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列 CDR3区；具有选自SEQ ID NO 13-16的氨基酸序列或与SEQ ID NO :13-16相比具有1、2、3、 4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列的\⑶Rl区；具有选自SEQ ID NO :17-20 的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO :17-20相比具有1、2、3、4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列的\⑶R2区；和具有选自SEQ ID NO 21~24的氨基酸序列或与SEQ ID NO 21-24相比具有1、2、3、4或5个氨基酸替代、缺失或添加的氨基酸序列的\⑶R3区。mmmw^mmm^mm^^可以应用多种抗体/免疫球蛋白构架或支架，只要得到的多肽包含与IL12Ri3 1特异结合的至少一个结合区。此类框架或支架包括人免疫球蛋白的5种主要独特型或者其片段(例如本文中其他地方所公开的那些)，并包括其他动物物种的免疫球蛋白，优选地具有人源化方面。在这点上，单重链抗体例如在骆驼(camelids)中鉴定的那些单重链抗体是特别感兴趣的。本领域技术人员继续发现并研发了新的构架、支架和片段。在一个方面，本发明涉及使用可以在上面嫁接本发明的CDR的非免疫球蛋白支架，产生基于非免疫球蛋白的抗体。可以应用已知的或将来的非免疫球蛋白构架和支架，只要它们包含对于SEQ ID NO :41的目标蛋白质特异的结合区。此类化合物在本文中称为“包含目标特异结合区的多肽”。在以下部分(骆驼抗体和非抗体支架)中进一步描述了非免疫球蛋白构架的实例。骆驼抗体已经对获自骆驼和单峰驼(双峰驼(Camelus bactrianus)和Calelus dromaderius)家族成员包括新大陆成员如美洲驼(llama)物种(Lama paccos、马驼(Lama glama)和小羊驼(Lama vicugna))的抗体蛋白质的大小、结构复杂性和对人受试者的抗原性进行了表征。发现来自该哺乳动物家族的一些IgG抗体天然缺失轻链，并因此就来自其他动物的抗体而言，其在结构上不同于具有两个重链和两个轻链的一般四链四级结构。见 PCT/EP93/02214(1994 年 3 月 3 日公布的 WO 94/04678)。通过基因改造可以获得定义为Vhh的小单可变区的骆驼抗体的一个区域，以产生对目标具有高亲和性的小蛋白质，其导致称为“骆驼纳米抗体(camelid nanobody)“ 的低分子量抗体衍生蛋白质。见1998年6月2日颁布的美国专利5，759，808;也 β StijIemans, B.等人，2004 J Biol Chem 279 :1256-1261 ；Dumoulin, M.等人， 2003Nature 424:783-788 ；Pleschberger，Μ·等人 2003 Bioconjugate Chem 14:440-448; Cortez-Retamozo，V.等人 2002 Int J Cancer 89 :456-62 ；禾口 Lauwereys，Μ.等人 1998 EMBO J 17:3512-3520。骆驼抗体和抗体片段的改造文库是例如从Ablynx，(ihent，比利时商业可获得的。与其他非人来源的抗体一样，也可以重组改变骆驼抗体的氨基酸序列以获得更近似人序列的序列，即可以“人源化”纳米抗体。因此，可以进一步降低骆驼抗体对人的天然低抗原性。骆驼抗体具有大约人IgG分子十分之一的分子量，并且该蛋白质仅具有几纳米的物理直径。小尺寸的一个结果是，骆驼纳米抗体结合对于较大抗体蛋白而言为功能上不可识别的抗原性位点的能力，即骆驼科纳米抗体可用作检测抗原的试剂，而所述抗原对于利用经典免疫技术而言是隐蔽的，骆驼科纳米抗体还可用作可能的治疗剂。因此，小尺寸的又一结果是，由于骆驼纳米抗体结合目标蛋白质凹槽或狭缝中特异位点而产生抑制性结果制，因此能够形成这样的能力，其比经典高分子量抗体更近似地模仿经典低分子量药物的功能。低分子量和紧凑形式进一步产生了极端热稳定的、对极端pH和对蛋白水解消化稳定的、和低抗原性的骆驼纳米抗体。另一结果是，骆驼纳米抗体可以容易地从循环系统移动到组织中，甚至可以穿过血脑屏障，并且可以治疗影响神经组织的疾病。纳米抗体还方便药物穿过血脑屏障运输。见2004年8月19号公布的美国专利申请20040161738。这些特点连同对人类的低抗原性显示了极大的治疗性潜能。此外，这些分子可以在原核细胞例如大肠杆菌中完全表达，并且可以与噬菌体一起表达为融合蛋白质且是具备功能的。因此，本发明的特点是具有对IL12Ri3 1高亲和性的骆驼抗体或纳米抗体。在本文中的一些实施方案中，骆驼抗体或纳米抗体是在骆驼动物中天然产生的，即通过用 IL12Ri3 1或其肽片段使用本文中所述的用于其他抗体的技术免疫骆驼后产生的。备选地，对抗IL12Ri3 1骆驼纳米抗体进行改造，即如在本文实施例中所述，以IL12Ri3 1作为靶标， 使用淘选法，例如从展示合适的诱变处理的骆驼纳米抗体蛋白的噬菌体文库中选择产生的。例如，使用实施例中所述的相应测定法，从抑制IL12和IL23结合IL12Ri3 1和/或抑制人血细胞中IL12诱导的IFNy产生、和/或抑制人血细胞中IL23诱导的IFNY产生的那些中选择抗IL12Ri3 1骆驼纳米抗体。可以进一步通过基因改造定制经改造的纳米抗体，以在受试者中具有45分钟至两周的半衰期。在特定的实施方案中，通过将本发明的人抗体的重链或轻链的CDR序列嫁接到纳米抗体或单域抗体构架序列中获得骆驼抗体或纳米抗体，如例如在PCT/EP93/02214 中所述。非抗体支架已知的非免疫球蛋白构架或支架包括但不限于，Adnectin(纤连蛋白)(Compound Therapeutics, Inc. , ffaltham, MA)、ankyr in (Molecular Partners AG, Zurich,瑞士)、 结构域抗体(Domantis 有限公司(Cambridge，ΜΑ)和 Ablynx ην(Zwijnaarde,比利时))、脂笼蛋白(Anticalin) (Pieris Proteolab AG, Freising，德国)、小模块免疫药物 (small modular immuno-pharmaceuticals)(Trubion Pharmaceuticals Inc. ， Seattle, WA), maxybodies (Avidia, Inc. (Mountain View, CA))、蛋白 A(Affibody AG,瑞典)和 affilin(y晶体蛋白或泛素)(kil蛋白质GmbH，Halle，德国)、蛋白质表位模拟物 (Polyphor 有限公司，AlIsctiwi 1，瑞士 )。(i)纤连蛋白支架纤连蛋白支架优选基于纤连蛋白III型结构域(如纤连蛋白III型的第十组件 (l(Fn3结构域))。纤连蛋白III型结构域具有分布于两个β片层之间的7个或8个β 链，其自身相互包装以形成蛋白质的核心，并还含有将β链相互连接的环(类似于⑶R)，且是溶剂暴露的。在β片层多层结构的每一边缘存在至少3个此类环，其中所述边缘是蛋白质垂直于β链的方向的界限。(US 6，818，418)。这些基于纤连蛋白的支架不是免疫球蛋白，但是总体的折叠与最小的功能抗体片段(重链的可变区)的折叠密切相关，所述最小的功能抗体片段包含骆驼(camel) IgG和美洲驼(llama) IgG中的整个抗原识别单位。因为这种结构，非免疫球蛋白抗体模仿类似于天然的抗原结合特性和抗体对那些抗原的亲和性。这些支架可用于与体内的抗体亲和性成熟过程相似的体外环随机化和改组策略。这些基于纤连蛋白的分子可用作支架，其中分子的环区可使用标准的克隆技术用本发明的CDR替代。(ii) Ankyrin-分子配偶体这种技术是基于使用具有ankyrin衍生的重复组件的蛋白质作为用于支撑可变区的支架，所述可变区可用于结合不同目标。Ankyrin重复组件是33个氨基酸多肽，由两个反平行α-螺旋和一个β-转角组成。可变区的结合主要通过使用核糖体展示来最优化。(iii)Maxybodies/Avimers-AvidiaAvimers衍生自天然的含有A-结构域的蛋白质如LRP-1。这些结构域本质上用于蛋白质-蛋白质相互作用，并且在人中，超过250个蛋白质的结构是基于A-结构域的。 Avimers由许多通过氨基酸接头连接的不同“A-结构域”单体Q-10)组成。使用描述于如 20040175756 ；20050053973 ；20050048512 ；和 20060008844 中的方法，可产生能与目标抗原结合的Avimers。(iv)蛋白 A-AffibodyAffibody 亲和配体是包含基于蛋白A的IgG结合结构域之一的支架的三螺旋束的小的简单蛋白质。蛋白A是来自细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)的表面蛋白质。这种支架结构域由58个氨基酸组成，其中将13个氨基酸随机地产生具大量配体变体的Affibody 文库(见如US 5，831，012)。Affibody⑧分子模仿抗体，与150kDa分子量的抗体比较，它们具有6kDa的分子量。尽管其小型，但是AfTibody 分子的结合位点与抗体的结合位点相似。(v)Anticalins-PierisAnticalins .是由Pieris ProteoLab AG公司研发的产品。它们衍生自脂笼蛋白， 一类广泛分布的小且坚固的蛋白质，所述脂笼蛋白通常参与生理转运或化学敏感的或者不溶的化合物的存储。几种天然的脂笼蛋白存在于人组织或体液中。蛋白质结构暗示为免疫球蛋白，在刚性构架顶部具有高变环。然而，与抗体或其重组片段不同，脂笼蛋白包含具有160个至180个氨基酸残基的单一多肽链，这仅比单一的免疫球蛋白结构域略大。构成结合袋的4个环的集合显示出意义深远的结构可塑性并耐受多种侧链。因此，为了高亲和力和高特异性地识别不同形状的指定目标分子，结合部位可用专利方法进
行重塑。通过诱变处理4个环的集合，已将脂笼蛋白家族的一种蛋白质，即Pieris Brassicae的后胆色素结合蛋白(BBP)用于研发anticalins。描述“anticalins”的专利申请的一个例子是PCT WO 199916873。(Vi)Affilin-Scil 蛋白质Affilin 化合物是经设计的对蛋白质和小分子具有特异亲和力的小非免疫球蛋白蛋白质。新Affilin 分子可非常快地选自两个文库，其中每一个文库基于不同的人来源的支架蛋白质。Affilin 化合物与免疫球蛋白蛋白质不显示出任何结构同源性。kil蛋白质使用两种Affilin 支架，其中一种Affilin 支架是、晶体蛋白(人结构性眼晶状体蛋白质)和另一种是“泛素”超家族蛋白质。两种人支架都非常小，显示出高的温度稳定性且几乎耐PH变化和变性剂。这种高稳定性主要由于蛋白质的展开的β片层结构。Y晶体蛋白衍生的蛋白质的例子描述于W0200104144中，且“泛素样”蛋白质描述于W02004106368中。(vii)蛋白质表位模拟物(PEM)PEM是中等大小的、环状、模仿蛋白质的β发夹二级结构的肽样分子(MW l-2kDa)，该β发夹二级结构是主要的涉及蛋白质-蛋白质相互作用的二级结构。改造的构架或Fc本发明的经改造的抗体包括这样的抗体，其中已经对Vh和/或&内的构架残基进行修饰以例如改善抗体的性质。通常，进行此类构架修饰以降低抗体的免疫原性。例如， 一种方法是“回复突变” 一个或多个构架残基成对应的种系序列。更具体地，已经经历体细胞突变的抗体可以含有与该抗体所来源的种系序列不同的构架残基。通过比较抗体构架序列与该抗体所来源的种系序列可以鉴定此类残基。为了使构架区序列回复到它们的种系构型，可以例如通过定点诱变或PCR介导的诱变将体细胞突变“回复突变”成种系序列。此类 “回复突变”抗体也意在被本发明包括。另一类型的构架修饰涉及突变构架区内，或者甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基，以除去T细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。该方法也称作“去免疫”并且在Carr等人的美国专利公布号20030153043中进一步详细描述。除了在构架或⑶R区内进行修饰之外或备选地，可以改造本发明的抗体以包括Fc 区内的修饰，通常改变抗体的一种或多种功能性质，如血清半寿期、补体固定、Fc受体结合， 和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以连接到抗体)或经修饰而改变它的糖基化，再次改变该抗体的一种或多种功能性质。这些实施方案的每一个都在下面详细描述。Fc区内的残基编号为Kabat的EU索引编号。在一个实施方案中，修饰CHl的铰链区使得改变，例如，增加或减少铰链区中半胱氨酸残基的数目。该方法在Bodmer等人的美国专利号5，677，425中进一步描述。改变CHl 的铰链区中的半胱氨酸残基数目以例如方便轻链和重链的装配或增加或降低抗体的稳定性。在另一实施方案中，将抗体的Fc铰链区突变以降低该抗体的生物学半寿期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变导入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区，使得该抗体相对于天然Fc铰链结构域SpA结合具有受损的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。该方法在Ward 等人的美国专利号6，165，745中进一步详细描述。在另一实施方案中，修饰抗体以增加其生物学半寿期。多种方法是可能的。例如， 可以导入一个或多个下面的突变T252L、T2MS、T256F，如Ward的美国专利号6，277，375所述。备选地，为了延长生物学半寿期，可以在抗体的CHl或CL区内改变以含有从IgG的Fc区的CH2结构域的两个环得到的补救受体结合表位，如I^resta等人的美国专利号5，869，046 和6，121，022中描述。在其他实施方案中，通过将至少一个氨基酸残基用不同的氨基酸残基置换以改变抗体的效应功能来改变Fc区。例如，一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基置换，使得该抗体对于效应配体具有改变的亲和力但是保留亲本抗体的抗原结合能力。改变亲和力的效应配体可以是例如，Fc受体或补体的Cl组分。该方法在Winter等人的美国专利号 5，624，821 和 5，648，260 中进一步详述。在另一实施方案中，选自氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以用不同氨基酸残基置换使得该抗体具有改变的Clq结合和/或减小或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。该方法在Idusogie等人的美国专利号6，194，551中进一步详述。在另一实施方案中，改变一个或多个氨基酸残基以改变该抗体固定补体的能力。 该方法在Bodmer等人的PCT公布WO 94/29351中进一步描述。在再一个实施方案中，通过修饰一个或多个氨基酸修饰Fc区以增加该抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fc γ受体的亲和力。该方法在 Presta的PCT公布号WO 00/42072中进一步描述。此外，已经为人IgGl对Fc y Rl、Fc yRII, Fc y RIII和Fcfoi的结合位点作图并且已经描述了具有提高的结合的变体(见Siields， R.L.等人，2001 J. Biol. Chen. 276 :6591-6604)。
在一些实施方案中，使用IgGl同种型的Fc结构域。在一些特定的实施方案中，使用IgGl Fc片段的突变变体，例如降低或去除融合多肽介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和 /或与Fc γ受体结合的能力的沉默IgGl Fe。在Hezareh等人的J. Virol 2001年12月； 75(24) :12161-8中描述了 IgGl同种型沉默突变的实例，其中将在氨基酸位置234和235处的亮氨酸残基用丙氨酸残基取代。在一些实施方案中，Fc结构域是在Fc结构域的位置297残基处阻止糖基化的突变体。例如，Fc结构域含有在位置297处天冬酰胺残基的氨基酸替代。该氨基酸替代的实例是将N297用甘氨酸或丙氨酸取代。在再一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化抗体(即，缺少糖基化的抗体)。可以改变糖基化以例如，增加抗体对“抗原”的亲和力。此类糖类修饰可以通过例如改变抗体序列内一个或多个糖基化位点完成。例如，可以进行一个或多个氨基酸替代，其导致去除一个或多个可变区构架糖基化位点，从而去除该位点的糖基化。此类无糖基化可以增加抗体对抗原的亲和性。这种方法在Co等人的美国专利号5，714，350和 6，350，861中进一步详细描述。额外或备选地，可以制备具有改变类型的糖基化的抗体，如具有减少量的岩藻糖残基的低岩藻糖基化抗体或者具有增加的等分GlcNac结构的抗体。已经表明此类改变的糖基化模式增加抗体的ADCC能力。通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体完成此类糖类修饰。具有改变的糖基化机制的细胞已经在本文中描述并且可以用作宿主细胞，在其中表达本发明的重组抗体从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，Hang等人的EP 1，176，195描述了具有功能被破坏的FUT8基因的细胞系，所述FUT8基因编码岩藻糖基转移酶，使得在这种细胞系中表达的抗体显示出低岩藻糖化。因此，在一个实施方案中，本发明抗体通过在表现出低岩藻糖模式的细胞系，例如具有编码岩藻糖基转移酶的 FUT8基因缺陷表达的哺乳动物细胞系中重组表达产生。I^resta的PCT公布WO 03/035835 描述了变体CHO细胞系Lecl3细胞，其将岩藻糖连接到Asn (297)-连接的糖类的能力降低， 也导致在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖化(也见aiields，R.L.等人，2002 J.Biol. Chem. 277 :26733-26740)。Umana等人的PCT公布WO 99/54342描述了细胞系，其被改造而表达修饰糖蛋白的糖基转移酶(例如，β (1，4)4乙酰基葡糖胺基转移酶111(&11111)，使得在该改造细胞系中表达的抗体显示出增加的等分GlcNac结构，其导致抗体增加的ADCC 活性(也见Umana等人，1999Nat. Biotech. 17 :176-180)。备选地，本发明抗体可以在酵母或丝状真菌中产生，所述酵母或丝状真菌被改造成哺乳动物样糖基化模式，并能产生缺少作为糖基化模式的岩藻糖的抗体(见例如EP1297172B1)。本发明涵盖的本文抗体的另一种修饰是聚乙二醇化。可以将抗体聚乙二醇化，例如，以延长该抗体的生物学(例如，血清)半寿期。为了聚乙二醇化抗体，通常将该抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)，如PEG的活性酯或醛衍生物在这样的条件下反应，在所述条件下， 一个或多个PEG基团变得附着到抗体或抗体片段。通过用反应性PEG分子(或其类似的反应性水溶性聚合物)进行酰化反应或烷基化反应，可以进行聚乙二醇化。如本文所用的，术语“聚乙二醇”意在包括任一种形式的PEG，其已经被用于衍生其他蛋白质，如单(Cl-ClO) 烷氧基-或芳氧基聚乙二醇或者聚乙二醇-马来酰亚胺。在一些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化的抗体。聚乙二醇化蛋白质的方法是本领域已知的，并且可以应用于本发明的抗体。见例如,Nishimura等人的EP 0 154 316和Ishikawa等人的EP 0 401 384。本发明涵盖的抗体的另一种修饰是将本发明抗体的至少抗原结合区与血清蛋白质，例如人血清白蛋白或其片段缀合或蛋白质融合，以增加得到的分子的半衰期。该方法例如描述于Balance等人EP0322094。另一可能是将本发明抗体的至少抗原结合区与能结合血清蛋白质，如人血清白蛋白的蛋白质融合，以增加得到的分子的半衰期。该方法例如描述于Nygren等人，EP 0 486 525。改造改变的抗体的方法如上面讨论，具有本文所示的Vh和\序列或全长重链和轻链序列的抗IL12Ri3 1 抗体可以用于通过修饰全长重链和/或轻链序列、Vh和/或\序列或其连接的恒定区而产生新的抗IL12Ri3 1抗体。从而，在本发明的另一方面，本发明的抗IL12Ri3 1抗体的结构特征用于产生结构相关的抗IL12Ri3 1抗体，其保留本发明抗体的至少一种功能性质，如结合人IL12Ri3 1以及抑制IL12Ri3 1的一种或多种功能性质(例如，抑制IL12和/或IL23与 IL12Ri3 1结合、抑制血细胞中IL12诱导的IFNy产生等等)。例如，本发明抗体的一个或多个CDR区或其突变可以与已知的构架区和/或其他 ⑶R重组组合，以产生如上文讨论的额外的重组改造的抗IL12Ri3 1抗体。其他类型的修饰包括前面部分中描述的那些修饰。用于改造方法的起始材料是本文提供的一种或多种％和 /或\序列，或者其一个或多个CDR区。为了产生改造的抗体，不必实际上制备(即，作为蛋白质表达)具有本文提供的一个或多个Vh和/或\序列或其一个或多个CDR区的抗体。 相反，将序列中所含的信息用作起始材料产生来自最初序列的“第二代”序列，然后制备“第二代”序列并表达为蛋白质。因此，在另一实施方案中，本发明提供了制备抗IL12Ri3 1抗体的方法，所述抗 IL12Ri3 1抗体由重链可变区抗体序列和轻链可变区抗体序列组成，所述重链可变区抗体序列具有选自SEQ ID NO 1-4的CDRl序列、选自SEQ ID NO :5_8的CDR2序列和/或选自SEQ ID NO 9-12的⑶R3序列；所述轻链可变区抗体序列具有选自SEQ ID NO :13-16的⑶Rl序列、选自SEQ ID NO 17-20的CDR2序列和/或选自SEQ ID NO 21~24的CDR3序列；改变所述重链可变区抗体序列和/或轻链可变区抗体序列内的至少一个氨基酸残基以产生至少一个改变的抗体序列；并将该改变的抗体序列表达为蛋白质。因此，在另一实施方案中，本发明提供了制备在哺乳动物细胞中优化表达的抗 IL12Ri3 1抗体的方法，所述抗IL12Ri3 1抗体由全长重链抗体序列和全长轻链抗体序列组成，所述全长重链抗体序列包含选自SEQ ID NO :29-32的可变序列；和所述全长轻链抗体序列包含选自SEQ ID NO 25-28的可变序列；改变所述全长重链抗体序列和/或全长轻链抗体序列内的至少一个氨基酸残基以产生至少一个改变的抗体序列；并将该改变的抗体序列表达为蛋白质。改变的抗体序列也可以通过筛选抗体文库制备，所述抗体文库具有分别选自SEQ ID NO 9-12和SEQ ID NO :21-24的独特重链和轻链CDR3序列、或如在US20050255552中所述的最小基本结合决定簇和CDRl和CDR2序列的多样性。筛选可以根据适合于从抗体文库筛选抗体的任一筛选技术，例如噬菌体展示技术进行。可以用标准分子生物学技术制备和表达改变的抗体序列。所改变的抗体序列编码的抗体是保留本文所述的抗IL12Ri3 1抗体的一种、一些或所有功能性质的抗体，其功能性质包括，但不限于，特异结合IL12Ri3 1 ；和/或该抗体抑制IL12和IL23蛋白质与IL12R3 1 多肽结合；和/或该抗体抑制人血细胞中IL12诱导的IFNy产生；该抗体抑制人血细胞中 IL23诱导的IFNy产生；和/或该抗体抑制灵长类动物血细胞中IL12离体IFNY产生。所改变的抗体可以显示出一种或多种、两种或多种，或三种或多种上面讨论的功能性质。可以使用本领域中可得的和/或本文所述的标准测定法，如实施例中给出的那些 (例如，ELISA)评估改变的抗体的功能性质。在改造本发明抗体的方法的一些实施方案中，可以沿着抗IL12Ri3 1抗体编码序列的全部或者部分随机或者选择性导入突变，并可以对得到的经修饰的抗IL12Ri3 1抗体筛选如本文所述的结合活性和/或其他功能性质。突变方法已经在本领域描述。例如， Siort的PCT公布WO 02/092780描述了使用饱和诱变、合成连接装配，或者其组合产生和筛选抗体突变的方法。备选地，Lazar等人的PCT公布WO 03/074679描述了使用计算机筛选方法优化抗体的理化性质的方法。编码本发明抗体的核酸分子本发明的另一方面涉及编码本发明抗体的核酸分子。可变的轻链核苷酸序列的实例显示于SEQ ID N0:33-36。可变的重链核苷酸序列的实例显示于SEQ ID NO :37-40。本发明也涉及来源于SEQ ID NO :33-40的序列的核酸分子，所述核酸分子已经优化用于在哺乳动物细胞，例如CHO细胞系中蛋白质表达。核酸可以存在于完整细胞、细胞裂解物中，或者可以是部分纯化或者基本上纯的形式。当通过标准技术纯化核酸以除去其他细胞组分或其他污染物，例如，其他细胞核酸或蛋白质时，核酸是“分离的”或“使得基本上纯的”，所述标准技术包括碱/SDS处理、CsCl分带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳和本领域公知的其他技术。见F. Ausubel，等人， 编著，1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience,New York。本发明的核酸可以是例如DNA或RNA，并且可以含有或不含有内含子序列。在一个实施方案中，核酸是cDNA分子。核酸可以存在于载体，如噬菌体展示载体，或者重组质粒载体中。可以使用标准分子生物学技术得到本发明的核酸。对于杂交瘤(例如，如下文进一步描述的携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，编码通过杂交瘤制备的抗体的重链和轻链的cDNA可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术得到。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)得到的抗体，可以从作为文库成员的多种噬菌体克隆回收编码所述抗体的核酸。一旦得到编码Vh和\区段的DNA片段，就可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如，以将可变区基因转变成全长抗体链基因、Fab片段基因，或者scFv基因。在这些操作中，编码或Vh的DNA片段有效连接到另一 DNA分子，或者编码另一蛋白质的片段，如抗体恒定区或柔性接头。该上下文中使用的术语“有效连接”意指两个DNA片段以功能方式连接，例如，使得这两个DNA片段编码的氨基酸序列保持符合读框，或者使得该蛋白质在所希望的启动子控制下表达。可以将编码Vh区的分离的DNA转变成全长重链基因，通过将Vh编码DNA有效连接到编码重链恒定区(CH1、CH2和OK)的另一 DNA分子实现所述转变。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(见例如，Kabat, E.A.，等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)并且可以通过标准PCR扩增得到包含这些区域的DNA片段。重链恒定区可以是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。在一些实施方案中， 重链恒定区选自IgGl同种型。对于Fab片段重链基因，可以将编码Vh WDNA有效连接到编码仅仅重链CHl恒定区的另一 DNA分子。通过将Vl编码DNA有效连接到编码轻链恒定区CL的另一 DNA分子，可以将分离的编码\区的DNA转变成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域己知的(见例如，Kabat，E. A.，等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)并且包含这些区的DNA片段可以通过标准DNA扩增得到。轻链恒定区可以是 κ或入恒定区。为了产生scFv基因，可以将编码Vh和Vl的DNA片段有效连接到编码柔性接头，例如，编码氨基酸序列(Gly4-kr)3的另一片段，使得Vh和\序列可以作为连续的单链蛋白质表达，通过柔性接头连接\和VHg (见，例如，Bird等人，1988 Science 242 =423-426 ； Huston 等人，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883 ；McCafferty 等人，1990 Nature348 :552-554)。产牛本发明的单克降抗体可以通过多种技术产生单克隆抗体(mAb)，所述技术包括常规的单克隆抗体方法， 例如，Kohler和Milstein，1975 Nature 256 :495的标准体细胞杂交技术。可以使用多种用于产生单克隆抗体的技术，例如，B淋巴细胞的病毒或癌基因转化。用于制备杂交瘤的动物系统是鼠系统。在小鼠中的杂交瘤产生是成熟的方法。用于分离用于融合的经免疫的脾细胞的免疫方案和技术是本领域已知的。融合配偶体(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合步骤也是已知的。可以基于如上述制备的鼠单克隆抗体的序列制备本发明的嵌合或人源化抗体。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从目的鼠杂交瘤得到并使用标准分子生物学技术改造成含有非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠可变区连接到人恒定区(见，例如，Cabilly等人的美国专利号4，816，567)。 为了产生人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠CDR区插入到人构架区，见例如， Winter的美国专利号5，225，539和Queen.等人的美国专利号5，530，101 ；5，585,089 ； 5，693，762 和 6；180 ；370。 在一些实施方案中，本发明的抗体是人单克隆抗体。可以使用携带部分人免疫系统而不是小鼠免疫系统的转基因或转染色体小鼠产生针对IL12Ri3 1的此类人单克隆抗体。这些转基因和转染色体小鼠包括在本文中分别称作HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，并且它们在本文中统称为“人Ig小鼠”。 HuMAb小鼠 (Medarex, Inc.)含有人免疫球蛋白基因小基因座，其编码未重排的人重链(μ和Y)和κ轻链免疫球蛋白序列，以及定向突变，其失活内源μ和κ链基因座(见例如，Lonberg，等人，1994 Nature 368(6474) :856-859)。因此，小鼠显示出小鼠IgM或κ的降低的表达，并且在应答免疫时，所导入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和性人IgGK单克隆抗体(Lonberg，N.等人，1994上文；Lonberg， N. ,1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113 :49-101 ；Lonberg,N.禾口 Huszar, D.,1995 Intern. Rev. Immunol. 13 :65-93, 禾口 Harding, F.and Lonberg, N. ,1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764 :536-546中综述)。HuMAb小鼠的制备和用途，和此类小鼠携带的基因组修饰在Taylor，L.等人，1992 Nucleic Acids Research 20 :6287-6295 ；Chen, J.等人，1993 International Immunology 5 :647-656 ；Tuaillon 等人’1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 :3720-3724 ;Choi 等人，1993 Nature Genetics 4 :117-123 ；Chen, J.等人，1993 EMBO J. 12 :821-830 ；Tuaillon 等人，1994 J. Immunol. 152 :2912-2920 ；Taylor, L.等人，1994 International Immunology 579-591 ；禾口 Fishwild, D.等人，1996 Nature Biotechnology 14 :845-851中进一步描述，将它们的内容都完整引入本文作为参考。还见，Lonberg和 Kay 的美国专利号 5，545，806 ；5，569，825 ；5，625，126 ；5，633，425 ；5，789，650 ；5，877，397 ； 5，661，016 ；5，814，318 ；5，874，299 ；和 5，770，429 ；Surani 等人的美国专利号 5，545，807 ； 和 Lonberg 和 Kay 的 PCT 公布号 WO 92103918、WO 93/12227、WO 94/25585、WO 97113852、 WO 98/24884 和 WO 99/45962 ；和 Korman 等人的 PCT 公布号 WO 01/14424。在另一实施方案中，使用在转基因或转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠， 如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠产生本发明的人抗体。此类小鼠在本文中称作“KM小鼠”，在Ishida等人的PCT公布号WO 02/43478中详细描述。此外，表达人免疫球蛋白基因的备选的转基因动物系统可以在本领域中得到并且可以用于产生本发明的抗IL12R β 1抗体。例如，可以使用称作Xenomouse (Abgeniχ， Inc.)的备选转基因系统；此类小鼠在例如Kucherlapati等人的美国专利号5，939，598 ； 6，075，181 ；6，114，598 ；6，150，584 和 6，162，963 中描述。此外，表达人免疫球蛋白基因的备选的转染色体动物系统可以在本领域中获得并且可以用于产生本发明的抗IL12RM抗体。例如，可以使用称作“TC小鼠”的携带人重链转染色体和人轻链转染色体的小鼠；此类小鼠在iTomizuka等人，2000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 :722-727中描述。此外，携带人重链和轻链转染色体的奶牛已经在本领域描述 (Kuroiwa等人，2002 Nature Biotechnology 20:889-894)并且可以用于产生本发明的抗 IL12R^ 1 抗体。也可以使用筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法制备本发明的人重组抗体。此类用于分离人抗体的噬菌体展示方法在本领域中建立或描述于下文的实施例中。见例如:Ladner 等人的美国专利号 5，223，409 ；5，403，484 ；和 5，571,698 ；Dower 等人的美国专利号5，427，908和5，580，717 ；McCafferty等人的美国专利号5，969，108 和 6，172，197 ；和 Griffiths 等人的美国专利号 5，885，793 ；6，521，404 ；6，544，731 ； 6，555，313 ；6，582，915 和 6，593，081。也可以使用其中已经重建了人免疫细胞的SCID小鼠制备本发明的人单克隆抗体，从而当免疫时可以产生人抗体应答。此类小鼠在例如Wilson等人的美国专利号 5，476，996 和 5，698，767 中描述。产生人单克隆抗体的杂交瘤的制备为了制备可以产生本发明的人单克隆抗体的杂交瘤，可以将脾细胞和/或淋巴结细胞从免疫的小鼠中分离并与合适的永生化细胞系，例如小鼠骨髓瘤细胞系融合。得到的杂交瘤可以筛选抗原特异性抗体的产生。例如，可以用50% PEG将来自经免疫的小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液与六分之一数的P3)(63-Ag8. 653非分泌小鼠骨髓瘤细胞(ATCC， CRL 1580)融合。将细胞以大约h 145接种于平底微量滴定板中，然后在含有20%胎牛克隆血清、18% “653”条件培养基、5% origen (IGEN)、4mM L-谷氨酰胺、ImM丙酮酸钠、5mM HEPES、0. 055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和IX HAT (Sigma;将HAT在融合后M小时加入)的选择性培养基中温育两周。大约两周后，将细胞培养在用HT取代了 HAT的培养基中。然后，通过ELISA筛选各个孔的人单克隆IgM和 IgG抗体。一旦发生了大量的杂交瘤生长，那么通常可以在10-14天后观察培养基。可以重新接种分泌抗体的杂交瘤，再次筛选，并且如果对于人IgG还是阳性，那么可以通过有限稀释至少两次亚克隆该单克隆抗体。然后可以将稳定的亚克隆体外培养，以在组织培养基中产生用于表征的少量抗体。为了纯化人单克隆抗体，可以将选择的杂交瘤培养在两升旋转烧瓶中用于单克隆抗体纯化。可以在用蛋白A琼脂糖(Pharmacia，Piscataway, N. J.)亲和层析前，过滤并浓缩上清液。可以通过凝胶电泳和高效液相层析检查洗脱的IgG以确保纯度。可以将缓冲液改成PBS，并通过OD28tl使用1. 43消光系数测定浓度。可以将单克隆抗体分成等份并储存于-80"C。产牛单克降抗体的转染瘤的制备还可以在宿主细胞转染瘤中产生本发明的抗体，使用例如，本领域公知的重组DNA 技术和基因转染方法的组合(例如，Morrison，S. (1985) Science 229 :1202) 例如，为了表达抗体，或者其抗体片段，可以通过标准分子生物学技术(例如，PCR 扩增或cDNA克隆，使用表达目的抗体的杂交瘤)可以得到编码部分或全长轻链和重链的 DNA,并且可以将DNA插入到表达载体中，使得基因有效连接到转录和翻译控制序列。在该上下文中，术语“有效连接”意指抗体基因连接到载体中，从而载体内的转录和翻译控制序列发挥它们调节抗体基因转录和翻译的预期功能。选择表达载体和表达控制序列以与所用的表达宿主细胞相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入到单独的载体，或者更典型地，可以将两种基因插入到相同的表达载体中。通过标准方法向表达载体中插入抗体基因(例如，在抗体基因片段或载体上连接互补限制性位点，或者如果不存在限制性位点，那么为平末端连接)。本文所述抗体的轻链和重链可变区可以用于产生任何抗体同种型的全长抗体基因，通过将所述基因插入到已经编码所希望同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得Vh区段有效连接载体内的CH区段并且\区段有效连接载体内的CL区段，可以实现所述产生。额外或备选地，重组表达载体可以编码信号肽，其方便抗体链从宿主细胞的分泌。可以将抗体链基因克隆到载体中使得信号肽与抗体链基因的氨基末端符合读框地连接。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。除了抗体链基因外，本发明的重组表达载体还可以携带控制抗体链基因在宿主细胞中表达的调节序列。术语“调节序列”意在包括启动子、增强子和其他表达控制元件 (例如，多聚腺苷酸化信号)，其控制抗体链基因的转录或翻译。此类调节序列描述于例如 Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego, CA 1990)。本领域技术人员将明白表达载体的设计，包括调节序列的选择，可以依赖于此类因素，如待转化的宿主细胞的选择、所希望的蛋白质表达水平，等等。哺乳动物宿主细胞表达的调节序列包括指导哺乳动物细胞中高水平蛋白质表达的病毒元件，如启动子和/或增强子，其来自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))，和多瘤。备选地，可以使用非病毒调节序列，如泛蛋白启动子或P 珠蛋白启动子。此外，由不同来源的序列组成的调节元件，如SRa启动子系统，其含有来自 SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病病毒1型的长末端重复的序列(Takebe，Y.等人， 1988 Mol. Cell. Biol. 8 :466-472)。除了抗体链基因和调节序列外，本发明的重组表达载体可以携带额外的序列，如调节宿主细胞中载体复制的序列(如复制原点)和选择标记基因。选择标记基因方便已经导入载体的宿主细胞的选择(见，例如，Axel等人的美国专利号4，399，216，4，634，665 和5，179，017)。例如，通常，选择标记基因对已经导入载体的宿主细胞赋予对药物(如 G418、潮霉素或氨甲蝶呤)的抗性。选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于 dhfr-宿主细胞，使用氨甲蝶呤选择/扩增)和neo基因(用于G418选择)。对于轻链和重链的表达，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞。术语“转染”的多种形式意在包括常用于向原核或真核宿主细胞中导入外源DNA的多种技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等等。在理论上可能在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体。讨论了抗体在真核细胞，例如哺乳动物宿主细胞、酵母或丝状真菌中的表达，因为此类真核细胞，尤其哺乳动物细胞，比原核细胞更可能装配和分泌正确折叠的和免疫活性抗体。已经报导抗体基因的原核表达对于产生高产量的活性抗体是无效的(Boss, Μ. Α.禾口 Wood，C. R.，1985 Immunology Today 6 :12-13)。用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(包括 dhfr-CHO 细胞，描述于 Urlaub 和 Chasin，1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 4216-4220，使用 DH FR 选择标记，如 R. J. Kaufman 和 P. A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159 601-621中描述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。具体而言，对于使用NSO骨髓瘤细胞，另一表达系统是显示于WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338，841的GS基因表达系统。在一个实施方案中，用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物细胞包括，例如如在 US6, 946，292B2中所述的FUT8基因表达缺陷的哺乳动物细胞系。当将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过培养宿主细胞足够允许抗体在宿主细胞中表达的时间或者将抗体分泌到宿主细胞所生长的培养基中来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基回收抗体。免疫綴合物另一方面，本发明描述了缀合到治疗部分的抗IL12Ri3 1抗体，或其片段，所述治疗部分如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射性毒素。此类缀合物在本文中被称作 “免疫缀合物”。包括一个或多个细胞毒素的免疫缀合物被称作“免疫毒素”。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害(例如，杀死)的任何物质。实例包括taxon、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙素、 阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、l-去氢睾酮、糖皮质激素类、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素和其类似物或同系物。治疗剂还包括例如，抗代谢物(例如，氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺)，腐蚀剂(例如，氮芥、噻替哌(thio印a)、chlorambucil、美法仑、卡莫司汀 (BSNU)和罗氮芥(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C，和顺-二氯二胺钼(II) (DDP)、顺钼、蒽环类(例如，柔红霉素(以前道诺霉素)和阿霉素)，抗生素 (例如，更生霉素(以前放线菌素)、博来霉素、光辉霉素、和氨茴霉素(AMC))，和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春碱)。可以缀合到本发明抗体的治疗性细胞毒素的其他实例包括多卡米星、加利车霉素、美登素和auristatins，和其衍生物。加利车霉素抗体缀合物的实例可通过商业途径获得(MylotargTm ；Wyeth-Ayerst)。使用本领域中可获得的接头技术，可以将细胞毒素缀合到本发明的抗体。已经用于将细胞毒素缀合到抗体的接头类型的实例包括，但不限于，腙类、硫醚、酯、二硫化物和含有肽的接头。可以选择例如对溶酶体隔室内的低PH切割敏感或者对蛋白酶敏感的接头，所述蛋白酶为诸如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶，如组织蛋白酶类(例如，组织蛋白酶B、 C、D)。关于细胞毒素类型、用于将治疗剂缀合到抗体的接头和方法的进一步讨论，也见 Saito, G.等人，2003 Adv. Drug Deliv. Rev. 55 :199-215 ；Trail, P. Α.等人，2003 Cancer Immunol. Immunother. 52 :328-337 ；Payne, G.,2003 Cancer Cell 3 :207-212 ；Allen, Τ. M. ，2002 Nat. Rev. Cancer 2 :750-763 ；Pastan, I.禾口 Kreitman，R. J. ，2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3 :1089-1091 ；Senter，P. D.禾口 Springer，C. J.，2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53 :247-264o还可以将本发明的抗体缀合到放射性同位素以产生细胞毒性放射性药物，也称作放射免疫缀合物。可以缀合到诊断或治疗应用的抗体的放射性同位素的实例包括，但不限于，碘131、铟“1、钇9°和镥177。制备放射免疫缀合物的方法是本领域中成熟的。放射性免疫缀合物的实例可以通过商业途径获得，包括kvalin (DEC Pharmaceuticals)和 Bexxar (Corixa Pharmaceuticals)，并且可以用类似的方法用本发明的抗体制备放射性免疫缀合物。本发明的抗体缀合物可以用于修饰给定生物应答，并且药物部分将不被理解为局限于典型的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所希望的生物活性的蛋白质或多肽。此类蛋白质可以包括，例如，酶促活性毒素，或者其活性片段，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、 假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质，如肿瘤坏死因子或Y干扰素；或生物应答调节剂，如淋巴因子、白介素-1( “IL-1”)、白介素-2( “IL-2”)、白介素-6( “IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)，或其他生长因子。用于将此类治疗部分缀合到抗体的技术是本领域公知的，见例如，Amon等人，"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy，，， Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld% 243-56 M (Alan R. Liss, Inc. 1985) ；Hellstrom等人，"Antibodies For Drug Delivery，，，Controlled Drug Delivery 第二版，Robinson 等人编辑，第 623-53 页(Marcel Dekker, Inc. 1987) ；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy :A Review”，Monoclonal Antibodies ' 84 :Biological And Clinical Applications，Pinchera 等人编辑，第475-506 页(1985) ；"Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy，，，Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin等人编辑，第 303-16 页(Academic Press 1985), 禾口 Thorpe 等人，‘‘The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates，，，Inmuno 1. Rev. ,62 :119-58(1982)。双特异件分子另一方面，本发明描述了双特异性或多特异性分子，其包含本发明的抗IL12R3 1 抗体。本发明的抗体可以被衍生或连接到另一功能分子，例如，另一肽或蛋白质(例如，另一抗体或受体的配体)以产生双特异性分子，其结合至少两个不同的结合位点或靶分子。 实际上可以将本发明的抗体衍生或连接到一个以上的功能分子以产生结合两个以上不同的结合位点和/或靶分子的多特异性分子；此类多特异性分子也意在被本文使用的术语 “双特异性分子”包括。为了产生本发明的双特异性分子，可以将本发明的抗体功能连接(例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方法)到一个或多个其他结合分子，如另一抗体、抗体片段、肽或结合模拟物，从而产生双特异性分子。因此，本发明包括双特异性分子，其包含至少对IL12Ri3 1的第一种结合特异性和对第二种目标表位的第二种结合特异性。例如，第二种目标表位是不同于第一目标表位的 IL12Ri3 1另一表位。另一实例是包含至少对IL12Ri3 1的第一种结合特异性和对IL12R3 2 或IL23Ra内表位的第二种结合特异性的双特异性分子。此外，对于双特异性分子是多特异性的本发明，分子除了第一种和第二种目标表位外，还包含第三种结合特异性。在一个实施方案中，本发明的双特异性分子包含作为结合特异性的至少一种抗体，或其抗体片段，包括例如Fab、Fab'、F(ab' )2、Fv或单链Fv。抗体还可以是轻链或重链二聚体，或者其任何最小部分，如Ladner等人的美国专利号4，946，778中描述的Fv或轻链构建体。可以用于本发明的双特异性分子的其他抗体是鼠的、嵌合和人源化的单克隆抗体。使用本领域已知的方法，通过缀合组分结合特异性，可以制备本发明的双特异性分子。例如，可以单独产生双特异性分子的每种结合特异性，然后将它们相互连接。当结合特异性是蛋白质或肽时，多种偶联或交联剂可以用于共价连接。交联剂的实例包括蛋白A、 碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5，5' -二硫代二(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻苯二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基_3_(2_吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，和硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环丙烷-1-羧酸酯(硫代-SMCC) (见例如 Karpovsky 等人，1984 J. Exp. Med. 160 :1686 ；Liu，MA等人，1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648)。其他方法包括 Paulus，1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132 ； Brennan 等人，1985 Science 229 :81-83),和 Glennie 等人，1987 J. Immunol. 139 2367-2375)中描述的那些。缀合剂是SATA和硫代SMCC，它们都可以从Pierce Chemical Co. (Rockford, IL)得到。当结合特异性是抗体时，它们可以通过两个重链的C-末端铰链区的巯基键合结合。在具体实施方案中，修饰铰链区以在缀合前含有奇数个巯基，例如，一个巯基。
备选地，可以在相同载体中编码两种结合特异性并在相同的宿主细胞中表达和装配。当双特异性分子是mAb X mAb.mAb χ Fab,Fab χ F(ab' )2或配体χ Fab融合蛋白时， 该方法尤其有用。本发明的双特异性分子可以是单链分子，其包含一个单链抗体和结合决定簇，或者包含两个结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性分子可以包含至少两个单链分子。制备双特异性分子的方法在例如美国专利号5，260, 203 ；美国专利号5，455，030 ； 美国专利号4，881，175;美国专利号5，132，405;美国专利号5，091，513;美国专利号 5，476，786 ；美国专利号5，013，653 ；美国专利号5，258，498 ；和美国专利号5，482，858中描述。双特异性分子与它们的特定靶标的结合可以通过例如，酶联免疫吸附测定 (ELISA)、放射免疫测定法(REA) ,FACS分析、生物测定法(例如，生长抑制)，或者蛋白质印迹测定法证实。这些测定法的每一种通常通过使用对目的复合体特异的标记试剂(例如， 抗体)检测具体目的蛋白质-抗体复合体的存在。多价抗体在另一方面，本发明提供了多价抗体，其包含与IL12Ri3 1结合的本发明抗体的至少两个相同的或不同的抗原结合部分。在一个实施方案中，多价抗体提供抗体的至少两个、 三个或四个抗原结合部分。抗原结合部分可以通过蛋白质融合或共价或非共价键合连接在一起。备选地，已经描述了键合双特异性分子的方法。可以例如通过将本发明抗体的抗体与结合本发明抗体的恒定区(例如Fc或铰链区)的抗体交联，获得四价化合物。药物组合物另一方面，本发明提供了组合物，例如，药物组合物，其含有本发明的抗体之一或组合，与可药用载体一起配制。此类组合物可以包括本发明的抗体或免疫缀合物或双特异性分子之一或组合(例如，两种或多种不同抗体的组合)。例如，本发明的药物组合物可以包含结合靶抗原上不同表位或者具有互补活性的抗体的组合。也可以以组合疗法，即与其他药剂相组合来施用本发明的药物组合物。例如，组合疗法可以包括与至少一种其他抗炎剂或另一种化疗剂(例如免疫抑制剂)组合的本发明的抗IL12Ri3 1抗体。可以用于组合疗法的治疗剂的实例在下面关于本发明抗体用途的章节中更详细地描述。如本文所用的，“可药用载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂，等等。载体应该适于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或灌输)。在一个实施方案中，载体应当适合于皮下途径。取决于施用途径，活性化合物，即抗体、免疫缀合物，或双特异性分子可以用材料包衣以保护化合物免于酸和可以失活该化合物的其他自然条件的作用。本发明的药物化合物可以包括一种或多种可药用盐。“可药用盐”指保留亲本化合物的所希望的生物活性并且不赋予任何不希望的毒理学效应的盐(见例如，Berge, S. M.， 等人，1977 J. Pharm. Sci. 66 :1_19)。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括来自无毒无机酸的盐，如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸的盐，等等，以及来自无毒有机酸的盐，所述无毒有机酸为如脂肪族一或二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳族酸、脂肪族和芳族磺酸，等等。碱加成盐包括来自碱土金属如钠、钾、镁、钙等等的那些盐，以及来自无毒有机胺的盐，所述无毒有机胺为如N，N' -二苯甲基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因，等等。本发明的药物组合物还可以包括可药用抗氧化剂。可药用抗氧化剂的实例包括 水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等等；油可溶的抗氧化剂，如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、 卵磷脂、没食子酸丙酯、α生育酚，等等；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、 山梨醇、酒石酸、磷酸，等等。可以用于本发明的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇，等等)，和其合适的混合物，植物油，如橄榄油，和可注射的有机酯，如油酸乙酯。例如，通过使用包衣材料，如卵磷脂，对于分散体的情况通过保持所需的颗粒大小，和通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。微生物存在的防止可以通过如上消毒程序，和通过包括多种抗细菌和抗真菌剂来确保，所述抗细菌和抗真菌剂为例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、山梨酸等等。还希望在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等等。此外，通过包括延迟吸收的试剂，如单硬脂酸铝和明胶可以引起可注射药物形式的延长吸收。可药用载体包括无菌水溶液或分散体和无菌粉剂，其用于临时制备无菌注射液或分散体。此类介质和试剂在药学活性物质中的用途是本领域已知的。除了与活性化合物不相容的任一常规介质或试剂之外，预期其用于本发明的药物组合物。还可以将补充性活性化合物掺入组合物中。治疗组合物通常必须是在生产和保存条件下是无菌的和稳定的。可以将组合物配制成溶液剂、微乳剂、脂质体或适于高药物浓度的其他有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇，等等)，和其合适的混合物。可以保持适当流动性，例如，通过使用包衣，如卵磷脂，对于分散体的情况通过保持所需的颗粒大小和通过使用表面活性剂。在许多情况中，可以在组合物中包括等渗剂，例如， 糖、多元醇，如甘露醇，山梨醇，或者氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的物质，如单硬脂酸盐和明胶来实现。通过将活性化合物以所需的量在合适的溶剂中与上面列举的成分之一或者组合掺和，如果需要，接着无菌微量过滤来制备无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体制备分散体，所述载体含有基本分散介质和来自上面列举的那些成分的所需的其他成分。对于用于制备无菌注射溶液的无菌粉剂的情况，制备方法是真空干燥和冷冻干燥 (冻干)，其产生活性成分加上来自其之前无菌过滤溶液的任何额外的所需成分的粉末。可以与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于被治疗的受试者、 具体施用方式而变。可以与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常是产生治疗效果的组合物的量。通常，以百分比计，该量将为约0.01%到约99%活性成分、约0. 1% 到约70%，或约到约30%活性成分与可药用载体组合。调节剂量方案以提供最佳的目的应答(例如，治疗应答)。例如，可以施用单次快速浓注，可以随时间施用几个分份剂量，或者可以根据治疗情况的紧迫性成比例地减小或增加剂量。特别有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以容易施用和剂量统一。如本文所用的剂量单位形式指适宜作为待治疗受试者的单一剂量的物理上分离的单位；每个单位含有预定量的活性成分，所述量经计算以与所需的药物载体结合产生所希望的治疗效果。本发明的剂量单位形式的规格由如下决定并且直接依赖于活性化合物的独特特征和待实现的具体治疗效果，和本领域中配制用于治疗个体中敏感性的这种活性化合物的固有局限性。对于抗体施用，剂量为约0. 0001到100mg/kg，更通常0. 01到5mg/kg宿主体重。 例如，剂量可以为0. 3mg/kg体重、lmg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或l-10mg/kg的范围内。示例性治疗方案需要每周施用一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3月一次、或每3到6月一次。本发明的抗IL12Ri3 1抗体的剂量方案可以包括通过静脉内施用lmg/kg体重或;3mg/kg体重，用下面的给药方案之一施用抗体 每四周施用6个剂量，然后每3月；每3周；;3mg/kg体重一次，接着每3周lmg/kg体重。在一些方法中，同时施用具有不同结合特异性的两种或多种单克隆抗体，在这种情况下施用的每种抗体的剂量落入所指出的范围内。通常在多个时机施用抗体。单次剂量之间的间隔可以是例如每周、每月、每3月或每年。间隔也可以是不规则的，通过测量患者中针对靶抗原的抗体的血液水平来指示。在一些方法中，调节剂量以实现血浆抗体浓度为约1-1000 μ g/ml并且在一些方法中为约25-300 μ g/ml。备选地，可以作为持续释放制剂施用抗体，在该情况中，需要较低频率的施用。剂量和频率取决于抗体在患者中的半寿期而变。通常，人抗体显示出最长的半寿期，其次是人源化抗体、嵌合抗体，和非人抗体。剂量和施用频率可以随着治疗是预防性还是治疗性的而变。在预防性应用中，在长时间期间内以相对不频繁的间隔施用相对低的剂量。一些患者终生持续接受治疗。在治疗应用中，有时需要以相对较短的间隔施用相对高剂量直到疾病的进展减慢或者终止或者直到患者显示出疾病症状的部分或完全减轻。之后，可以对患者施用预防方案。本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，只要活性成分的量对于具体患者、组合物和施用方式实现所希望的治疗应答，而对该患者无毒性。所选的剂量水平将取决于多种药物代谢动力学因素，包括使用的本发明的具体组合物或者其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，使用的具体化合物的排泄速率，治疗持续时间，与所用的具体组分组合使用的其他药物、化合物和/或物质、被治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、 一般健康和以前的医疗史，和医学领域中公知的其他因素。本发明抗IL12Ri3 1抗体的“治疗有效剂量”可以导致疾病症状严重性的降低、无疾病症状期的频率和持续时间的增加，或者由于疾病折磨而引起的病损或残疾的预防。可以使用本领域已知的一种或多种方法，通过一种或多种施用途径施用本发明的组合物。如技术人员将理解，施用途径和/或方式将取决于所希望的结果而变。本发明抗体的施用途径包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如，通过注射或灌注。如本文使用的短语“肠胃外施用”指不同于经肠和局部施用的施用方式， 通常通过注射，并且包括但不限于，静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、 腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下腔、脊柱内、硬膜外和intrastemal 注射和灌注。备选地，本发明的抗体可以通过非肠胃外途径施用，如局部、表皮或粘膜施用途径，例如，鼻内、口腔、阴道、直肠、舌下或局部。
可以用保护活性化合物免于快速释放的载体制备活性化合物，如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂，和微囊化递送系统。可以使用生物可降解的生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备此类制剂的许多方法被申请专利或者是本领域技术人员公知的。见例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson Marcel Dekker, Inc. ，M.^, 1978。可以用本领域已知的医学装置施用治疗组合物。例如，在一个实施方案中，可以用无针头的皮下注射装置施用本发明的治疗组合物，如美国专利号5，399，163 ；5, 383，851 ； 5，312，335 ；5，064，413 ；4，941,880 ；4，790，824 或 4，596，556 中所示的装置。可用于本发明的公知的植入物或组件的实例包括美国专利号4，487，603，其说明了用于以受控速率分配药物的可植入的微量输液泵；美国专利号4，486，194，其说明了用于通过皮肤施用药物的治疗装置；美国专利号4，447，233，其说明了用于以精确的输注速率递送药物的药物输液泵；美国专利号4，447，224，其说明了用于连续药物递送的变速流可植入输液器；美国专利号4，439，196，其说明了具有多个腔室的渗透药物递送系统；和美国专利号4，475，196， 其说明了渗透药物递送系统。许多其他此类植入物、递送系统，和组件是本领域技术人员已知的。在一些实施方案中，可以配制本发明的人单克隆抗体以确保在体内适当分配。例如，血脑屏障(BBB)排除许多高亲水性化合物。为了确保本发明的治疗化合物穿过BBB(如果希望)，可以将它们用例如脂质体配制。关于生产脂质体的方法，见例如，美国专利4，522，811 ；5，374，548 ；和5，399，331。脂质体可以包含一种或多种部分， 其被选择性运输到特定细胞或器官中，从而增强定向药物递送(见，例如，V. V. Ranade, 1989 J.Cline Pharmacol. 29 :685)。示例性定向部分包括叶酸或生物素(见，例如，Low 等人的美国专利 5，416，016)；甘露糖苷类(Umezawa 等人，1988 Biochem. Biophys. Res. Commun. 153 :1038)；抗体(P. G. Bloeman 等人，1995 FEBS Lett. 357 140 ;M. Owais 等人， 1995 Antimicrob. Agents Chemother. 39 180)；表面活性剂蛋白 A 受体(Briscoe 等人， 1995 Am. J. Physiol. 1233 :134) ；pl20 (Schreier 等人，1994 J. Biol. Chem. 269 :9090)；也见 K. Keinanen ；M. L. Laukkanen, 1994 FEBSLett. 346 :123 J. J. Killion ；I. J. Fidler, 1994 Immnunomethods 4 :273。本发明的用途和方法本发明的抗体具有体外和体内诊断性和治疗性应用。例如，可以将这些分子例如体外或体内施用给培养的细胞或者例如体内施用给受试者，以治疗、预防或诊断多种疾病。该方法特别适合于治疗、预防或诊断IL12Ri3 1相关的疾病和/或自身免疫和炎症疾病，例如，银屑病或炎性肠病。本发明也提供了通过施用包含本发明治疗有效剂量的抗体，在人血细胞中降低或抑制IL12或IL23诱导的信号应答的方法。如本文中所用，“IL12Ri3 1相关的疾病”包括与异常的IL12和/或IL23水平相关或者以异常的IL12和/或IL23水平为特征的疾病和/或能通过在人血细胞中降低或抑制 IL12和/或IL23诱导的信号应答治疗的疾病或病症，所述IL12和/或IL23诱导的信号应答例如在血浆中测量的IFNy或IL17的产生或者由流式细胞术方法或蛋白质印迹测量的STAT4蛋白质磷酸化的程度。这些疾病包括炎症疾病和自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎、银屑病和炎性肠病。这些疾病还包括过敏症和过敏性疾病、超敏反应和器官或组织移植排斥。例如，可以将本发明的抗体用于治疗心、肺、组合的心-肺、肝、肾、胰、皮肤或角膜移植，包括同种异体移植排斥或异种移植排斥的接受者，并用于例如在骨髓移植后预防移植物抗宿主疾病，和器官移植相关的动脉硬化。本发明的抗体对于治疗、预防或改善自身免疫和炎症疾病，特别是具有包括自身免疫组分的病原学的炎症疾病是有用的，所述疾病例如关节炎(例如类风湿性关节炎、 arthritis chronica progrediente和变形性关节炎)和风湿性疾病，包括炎症疾病和涉及骨质流失、炎症疼痛的风湿性疾病、脊椎关节病(spondyloarhropathie)包括ankolsing 脊椎炎、赖特尔综合症、反应性关节炎、银屑病关节炎和致肠病性关节炎(enterophathis arthritis)、超敏反应(包括呼吸道超敏反应和皮肤超敏反应)和过敏症。可以使用本发明抗体的具体自身免疫疾病包括自身免疫性血液疾病(包括例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少)、系统性红斑狼疮、炎性肌肉疾病、多软骨炎、硬皮病(sclerodoma)、Wfegener肉芽肿、皮肌炎、慢性活动型肝炎、重症肌无力、银屑病、 Steven-Johnson综合征、特发性口炎性腹泻、自身免疫炎性肠病(包括例如溃疡性结肠炎、 Crohns病和肠易激惹综合征)、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬化、幼年型糖尿病(I型糖尿病)、葡萄膜炎(前房和后房)、干性角膜结膜炎和春季角膜结膜炎、肺间质纤维化、银屑病关节炎和肾小球性肾炎(患和未患肾病综合征，例如包括特发性肾病综合征或微小病变性肾病)、肿瘤、多发性硬化、皮肤和角膜的炎症疾病、肌炎、骨植入体松动(loosening of bone implant)、代谢性疾病，例如动脉粥样硬化、糖尿病禾口 dislipidemia。本发明抗体对于治疗、预防或改善哮喘、支气管炎、肺尘埃沉着病、肺气肿和呼吸道的其他梗阻性或炎症疾病也是有用的。本发明抗体对于治疗骨代谢疾病包括骨关节炎、骨质疏松和其他炎症性关节炎， 以及一般骨质损失包括年龄相关的骨质损失，和特别地牙周病也是有用的。可以将本发明抗体作为单一活性组分施用或例如作为其他药物的佐剂或与其它药物组合来共同施用例如免疫抑制剂或免疫调节剂或其它抗炎药或其他细胞毒性或抗癌剂，例如用于治疗或预防前面提及的疾病。例如，本发明抗体可以与如下活性组分联用DMARD，例如金盐、柳氮磺吡啶、抗疟药(antimalarias)、甲氨喋呤、D-青霉胺、硫唑嘌呤、麦考酚酸、环孢菌素A、他克莫司、西罗莫司、二甲胺四环素、来氟米特、糖皮质激素 (glococorticoids)；钙神经素抑制剂，例如环孢菌素A或506 ；淋巴细胞再循环的调节剂，例如FTY720和FTY720类似物；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素，40-0-(2-羟基乙基)_雷帕霉素，CCI779，ABT578, AP23573，TAFA-93 ；具有免疫抑制特性的子囊霉素，例如ABT481， ASM981等；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；来氟米特；咪唑立宾；麦考酚酸； 麦考酚酸吗乙酯；15-脱氧精胍菌素或其免疫抑制同源物、类似物或衍生物；免疫抑制单克隆抗体，例如白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8,⑶25，CD28, ⑶40，⑶45，⑶58，⑶80，⑶86或其配体；其它免疫调节化合物，例如具有CTLA4的至少部分胞外域的重组结合分子或其突变体，例如与非CTLA4蛋白质序列相连的CTLA4的至少胞外部分或其突变体，例如CTLA4Ig (例如命名为ATCC 68629)或其突变体，例如LEA29Y ；黏着分子抑制剂，例如LFA-I拮抗剂，ICAM-I或-3拮抗剂，VCAM-4拮抗剂或VLA-4拮抗剂；或化疗剂，例如紫杉醇，吉西他滨，顺钼，多柔比星或5-氟尿嘧啶；或抗TNF剂，例如TNF的单克隆抗体，例如英夫利西单抗、阿达木单抗、⑶P870或者TNF-RI或TNF-RII的受体构建体， 例如依那西普、PEG-TNF-RI ；促炎症细胞因子的阻断剂、ILl阻断剂，例如阿那白滞素或ILl trap、AAL160、IL17阻断剂、IL13阻断剂、IL4阻断剂、IL6阻断剂；趋化因子阻断剂，例如蛋白酶例如金属蛋白酶的抑制剂或活化剂、抗IL15抗体、抗IL6抗体、抗IL17抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体、抗⑶20抗体、抗Blys或抗BAFFR抗体、NSAID，例如阿司匹林或抗感染剂 (名单不仅限于提及的药剂)。根据上述内容，本发明的再一方面提供如上定义的方法，包括共施用(例如同时或者依次)治疗有效量的IL12Ri3 1拮抗剂(例如本发明的抗体)，和至少一种第二药物，所述第二药物是免疫抑制性/免疫调节性药物、消炎化学治疗药物或者抗感染药物，例如如上公开的。或者，一种治疗组合(例如试剂盒)，其包含治疗有效量的a) IL12Ri3 1拮抗剂，例如本发明的抗体，和b)至少一种选自免疫抑制性/免疫调节性药物、消炎化学治疗药物或者抗感染药(例如如上公开的)的第二物质。该试剂盒可以包含其施用的说明书。当本发明的抗体联合其它免疫抑制性/免疫调节性、消炎化学治疗性或者抗感染性治疗施用时，共施用的联合化合物的剂量将肯定取决于所使用的共-药物的类型(例如其是否是DMARD，抗TNF，IL-I阻断剂或者其它)、使用的具体药物、正在治疗的病症等等而变化。在一个具体的实施方案中，本发明的抗体可以与抗TNF剂组合施用。在其他实施方案中，本发明的抗体仅施用给这样的患者群体，其选自患SLE或RA 并且表现出异常的IL12分别依赖地IFN γ或IL17血清水平或者在血细胞中磷酸STAT4水平和频率升高的患者。在其他实施方案中，本发明的抗体仅施用给选自对抗IL12或抗p40 治疗起反应的患者的患者群体。鉴定对抗IL12(或抗p40)治疗应答增加的可能性的患者的生物标志物可以是任何不限于以下这些生物标志物的血清IL12的升高水平、一些T细胞亚集的升高水平、来自分离的外周血单核细胞(PBMC)的IFN γ、TNFa、IL12R3 2或STAT4 的mRNA水平、在皮肤活组织检查或PBMC中分别的磷酸STAT4表达。在一个实施方案中，本发明的抗体可以用于检测IL12Ri3 1的水平，或者含有 IL12Ri3 1的细胞水平。这可以例如，通过将样品(如体外样品)和对照样品与抗IL12Ri3 1 抗体在允许抗体和IL12Ri3 1之间形成复合体的条件下接触来实现。在样品和对照中检测抗体和IL12Ri3 1之间形成的任何复合体并比较。例如，可以使用本发明的组合物进行本领域公知的标准检测方法，如ELISA和流式细胞测定法。因此，一方面，本发明还提供了检测样品中IL12Ri3 1(例如人IL12Ri3 1抗原)的存在，或测量IL12Ri3 1的量的方法，其包括将样品和对照样品与本发明的抗体或其特异结合IL12Ri3 1的抗原结合部分在允许所述抗体或其部分与IL12Ri3 1之间形成复合体的条件下接触。然后检测复合体的形成，其中样品与对照样品相比复合体形成的差异表明在该样品中存在IL12R3 1。本发明的范围内还包括试剂盒，其由本发明的组合物(例如，抗体、人抗体和双特异性分子)和使用说明书组成。试剂盒可以还含有至少一种其他试剂，或者一种或多种本发明的其他抗体(例如，具有互补活性的抗体，其结合靶抗原上不同于第一种抗体的表位)。试剂盒通常包括标签，指出该试剂盒内含物的预期用途。术语标签包括在试剂盒上提供或试剂盒提供或附随该试剂盒的任何书面或记载的材料。试剂盒还可以包含用于诊断患者是否属于对抗ILURi^ 1抗体治疗起反应(如上所定义)的组的患者的工具。已经完全描述了本发明，通过下面的实施例和权利要求进一步阐明本发明，所述实施例是说明性的并且不意在进一步限定。
实施例方法1.筛选测定法将HuCAL GOLD噬菌粒文库用于筛选本发明的抗体。该文库基于HuCAL 原理 (Knappik, A.等人 2000，J Mol Biol 296,57-86)并应用 CysDisplay 技术将 Fab 抗体片
段展示在丝状噬菌体的表面上(Liihning，c. 2001. wo 01/05950)。以下描述的筛选策略
可以适用于其他类型的文库和支架，包括非免疫球蛋白支架的文库，从而允许鉴定具有与本发明抗体类似的显著性能但具有不同支架的IL12Ri3 1结合体。1. 1在直接包被重组人IL12Ri3 1/Fc融合蛋白质上针对IL12Ri3 1的标准固相淘选对于抗体选择，将HuCAL GOLD 抗体-噬菌体在直接包被于Maxisorp 板(F96 Nunc-Immunoplate)的人重人IL12Rβ Ι/Fc融合蛋白质上进行3轮固相淘选。详细地，在 22°C，用各300 μ 1的10μ g/ml人ILl^^ 1/Fc融合蛋白质过夜(ο/η)包被Maxisorp 板上的两孔。将包被的孔用350 μ 1 PBS洗涤2次，并用350 μ 1 5% MPBS在微量滴定板振荡器上室温(RT)封闭2小时。对于每一淘选，将大约&1013 HuCAL GOLD 噬菌体用等体积包含终浓度的人Y球蛋白的PBST/5%乳粉(MP)室温封闭2小时。封闭后，用350 μ 1 PBS 洗涤包被孔2次。将300 μ 1预封闭的HuCAL GOLD 噬菌体加入每一抗原包被的孔中，并在振荡器上室温温育2小时。通过添加5次350 μ 1 PBS/0. 05% Tween-20 (Sigma, St. Louis, M0，美国)进行洗涤，然后用PBS洗涤5次。用每孔300μ 1在IOmM Tris/HCl中的20mM DTT PH8进行从板洗脱噬菌体10分钟。将DTT噬菌体洗脱物加入到15ml大肠杆菌TGl (其在 37 0C hYT培养基中生长至0.6-0.8的00600)中，并在37 °C，在没有振荡的情况下，在50ml 塑料管中温育45分钟用于噬菌体感染。进行噬菌体感染的大肠杆菌TGl的滴定，以测定噬菌体的产量滴度，并随后以5000转/分钟进行离心10分钟。将细菌沉淀逐一重悬在500 μ 1 2χΥΤ培养基中，接种在hYT-CG琼脂板上并在30°C温育过夜。然后从平板上刮去克隆，并且如上所述复苏噬菌体，并进行扩增。除增加了洗涤步骤的严格性外，根据第一轮的方案进行第二和第三轮的在直接包被的人IL12Ri3 1/Fc融合蛋白质上的固相淘选。1. 2在通过抗人Fc捕获的包被人IL12Ri3 1/Fc融合蛋白质上的固相淘选对于固相淘选，除抗原的包被条件外，与上述的步骤相同。此处，用10yg/ml AffiniPure山羊抗人IgG (Fe γ片段特异的)捕获2. 5 μ g/ml抗原。将每次淘选的两孔在 Maxisorp 板(F96 Nunc-Immunoplate)上包被。额外地用终浓度的小鼠或以终浓度(取决于所使用的捕获抗体，对于淘选的第一和第三轮，使用山羊抗人IgG，和淘选的第二轮使用小鼠抗人IgG)的山羊Y球蛋白和的人Y球蛋白封闭噬菌体。用350μ 1的 5%MPBS,室温封闭捕获抗体1小时，用PBS洗涤2次，并随后将预封闭的噬菌体混合物加入到捕获的抗原中室温温育2小时。进行全部后续步骤，如上对于直接包被的抗原所述。1. 3用Ba/F3/IL12Ri3 1表达细胞进行全细胞淘选，包括在Ba/F3亲本细胞上的吸附步骤对于抗体选择，将HuCAL GOLD 抗体-噬菌体单独地在Ba/F3/IL12R β 1表达细胞上进行3轮全细胞淘选。详细地，用Iml 2% PBS/BSA(=封闭缓冲液)预封闭切106个至IxlO7个细胞，并且每次淘选使用各5xl06个细胞。对于每次淘选，将约hlO13个HuCAL GOLD 噬菌体在4°C用等体积的PBS/4% BSA封闭1. 5小时。将预封闭的HuCAL GOLD 噬菌体加入到预封闭的靶细胞中，并在回转轮上4°C孵育2小时。在回转轮上用1. 5ml2% PBS/ BSA在4°C洗涤5min，进行3次，然后在4°C用PBS洗涤一次5分钟。在4°C，以2000转/分钟在1分钟内离心细胞。用Iml的0. IM甘氨酸、0. 5M NaCl, pH 2. 2，在室温通过酸性洗脱进行噬菌体的洗脱10分钟。将未缓冲的30 μ 1 2Μ Tris加入到离心的噬菌体洗脱物中，以中和该洗脱物。随后，在4°C，在回转轮上，用每一淘选洗脱物1E+7个细胞进行Ba/F3亲本细胞的后吸附3次，每次20分钟。在4°C，2000转/分钟离心细胞1分钟。通过添加9ml 的大肠杆菌TGl (其在37°C，2xYT培养基中生长至0. 6-0. 8的0D600)，使用最后的SN感染大肠杆菌TG-1，并在37°C，在没有振荡的情况下，在50ml塑料管中水浴孵育30分钟用于噬菌体感染。进行感染的噬菌体的滴定，并随后以5000转/分钟进行离心10分钟，将细菌沉淀逐一重悬在500 μ 1 2χΥΤ培养基中，接种在hYT-CG琼脂板上并30°C孵育过夜。然后从平板上刮去克隆，并且复苏噬菌体，并如上所述进行扩增。除增加了洗涤步骤的严格性外， 根据第一轮的方案进行第二和第三轮的用表达Ba/F3/IL12Ri3 1的细胞的全细胞淘选。1. 4用Ba/F3/IL12R β 1表达细胞和重组人IL12R β 1/Fc的差异细胞淘选通过借助于小鼠单克隆抗人IL12Ri3 1对照抗体(R&D Systems)的FACS分析验证细胞表面表达。如上对于全细胞淘选的第一轮和第三轮淘选所述进行淘选，包括在细胞淘选期间在Ba/F3亲本细胞上的吸附步骤。如上对于在直接包被的重组人IL12Ri3 1/Fc 融合蛋白质(rh IL12Ri3 1)上针对IL12Ri3 1的标准固相淘选所述，在直接包被的重组人 IL12Ri3 1/Fc融合蛋白质上进行第二轮。1. 5通过ELISA (直接或捕获模式)对IL12Ri3 1特异的Fab的初级筛选对于直接筛选模式，在22°C，将10μ g/ml在PBS中的重组人IL12Ri3 1/Fc融合蛋白质(R&D Systems)过夜包被在384孔Maxisorp 板上。对于捕获模式的筛选，在4°C， 将384孔Maxisorp 板的孔用20 μ 1在PBS中特异的10 μ g/ml的Affini Pure山羊抗人IgGFc γ包被过夜。包被后，用PBST洗涤孔5次。然后，用5% MPBST室温封闭孔2小时。平行地，在22°C，用15μ 1 12. 5% MPBST封闭15 μ 1 BEL提取物。对于直接筛选模式， 在将20 μ 1已封闭的BEL提取物加入到孔中并室温孵育2小时前，用PBST洗涤已封闭的 Maxisorp⑧板5次。对于捕获模式，加入2. 5 μ g/ml重组人IL12R3 1/Fc融合蛋白质(R&D Systems)并室温孵育1小时，并随后用已封闭的BEL提取物孵育。对于一级Fab抗体的检测，应用以下第二抗体加入碱性磷酸酶(AP)-缀合的AffiniPure F(ab' )2片段、山羊抗人和抗小鼠或抗绵羊IgGCJackson Immuno Research)用于对应的对照抗体。对于检测AP 缀合物，根据厂商说明书，使用荧光底物Att0W10s(R0Che)。在所有孵育步骤之间，用PBST 洗涤微量滴定板的孔3次，并在用第二抗体的最后孵育步骤后，用TBST洗涤3次。用Tecan GENios Pro平板读数器测量荧光。
2.从筛选测定法鉴定的抗体的亲和测定2. 1使用表面等离振子共振的亲和测定建立了抗人Fc捕获(Dianova)测定法。将捕获的Fc融合体用作为配体，并将Fab 用作为分析物。详细地使用标准的EDC-NHS胺偶联化学，在所有4个流动池中用5000-6000RU抗 Fc (Dianova,山羊抗人IgG，Fc片段特异的；在IOmM乙酸缓冲液中的80ug/ml，pH4. 5)包被 CM5芯片(Biacore，瑞典)。流动池2用IL12R1_/Fc融合蛋白质捕获(20 μ 1的以5 μ 1/ml 的流速，300-400RU的IOOnM配体)。随后，以15. 6nM至500nM之间的浓度范围注射(20 μ 1， 流速20 μ 1/分钟)分析物。运行条件PBS pH7. 2。每一循环后，用pHl. 5的IOmM甘氨酸再生流动池。从特异信号值人工减去得到的缓冲液感应值(sensogram)用于两次参考(缓冲液注射)。使用BIA评价软件3. I(Biacore)将所有感应值作图并评价。通过该方法测定总结的亲本Fab抗体对IL12R0 1的亲和性在2_450nM之间。2. 2用于检测细菌裂解物中IL12Ri3 1结合的Fab的基于电化学发光(BioVeris) 的结合分析为了检测大肠杆菌裂解物(BEL提取物)中亲和性改进的IL12Ri3 1特异性抗体片段，通过BioVeris M-384 SERIES Workstation分析结合。在96孔聚丙烯微量滴定板中实施BioVeris筛选。将BEL提取物稀释于测定缓冲液(补充了 0. 5% BSA和0. 05% Tween-20的PBS)。根据厂商说明书，将生物素化的IL12Ri3 1与链霉亲和素包被的顺磁性珠子(M480，Dynal)偶联。在Heidolph振荡器(1000转/分钟)上，将BEL提取物和用生物素化IL12R3 1包被的链霉亲和素珠子室温孵育过夜。对于检测，使用具有钌化合物 (BV-tag )标记的抗人(Fab)，2 (Dianova)。2. 3使用溶液平衡滴定(SET)测定皮摩尔亲和性对于通过溶液平衡滴定(SET)的Kd测定，使用Fab蛋白质的单体部分(通过分析 SEC分析的至少90%的单体含量；Superdex75，Amersham Pharmacia)。应用的Fab浓度类似于或低于期望的KD。溶液中基于电化学发光(ECL)的亲和性测定和数据评价基本上按照之前针对溶液中重组人 IL12R0 l/Fc(lnM 起始浓度)所述(Haenel，C.，等人 Q005)Anal Biochem 339,182-184)进行。将与顺磁性珠子(M480Str印tavidin，Dynal)偶联的生物素化人 IL12R3 1/Fe 和含铷的 BV-tag (BioVeris Europe)标记的抗人(Fab) ‘ 2 (Dianova)加入， 并孵育30分钟。随后，通过ECL检测，使用M-SERIES (R) 384分析仪(BioVeris Europe)定量未结合的Fab的浓度。对于Kd测定的Fab分子的数据评价，使用以下的拟合模型(根据Abraham等人J Mol Recognit. 9,456-461(1996)修改)y = Bmax-(Bmax/(2*cFab)氺(x+cFab+KD-sqrt((x+cFab+KD)氺(x+cFab+KD)_4氺χ氺c Fab)))cFab 应用的Fab浓度clgG:应用的IgG浓度，完整分子(非结合位点)χ 应用的总可溶性抗原浓度(结合位点)sqrt 平方根
使用上述测定条件，在溶液中测定亲和性优化的抗IL12R β 1 Fab的(单体)亲和性。2. 4 IL12R0 1-IL12/IL23体外竞争性结合抑制测定法对于IL12和IL23结合抑制测定，将25 μ g重组人IL12和20 μ g IL23 (R&D Systems)与 250 μ 1 羧酸 M_270Dynal 磁珠 Qx 109 个珠子 /ml)直接偶联(NHS/EDC 偶联)。在96孔板(Nunc)中，将每孔50 μ 1 Fab抗体(20ηΜ储液)以1 4稀释梯度(Fab 浓度0. 6pM-10nM)与50 μ 1的40_100pM IL12R3 1/Fc融合蛋白质一起孵育2小时。根据供应商说明书(BioVeris Europe)，将25 μ 1 IL12或IL23包被的珠子和1 500稀释的用 BV-tagTM标记的链霉亲和素检测抗体加入到每孔中并孵育1. 5小时。通过BioVeris M-384 SERIES Workstation (BioVeris Europe)进行检测。通过 4 参数逻辑拟合模型(XLfit， IDBS)评价获得的数据，进行EC50测定。3.体外表征抗体，包括基于细胞的功能性测定法3. 1抑制人红细胞的IL12依赖性的IFN γ产生如上所述，通过Histopaque梯度分离来自供体血液的外周血单核细胞(PBMC)。在 X-Vivo 15培养基中，将细胞调整至2E+6个细胞/ml。将50 μ 1细胞(1Ε+5)转移到96孔U 型底平板中，并且以想要的浓度用抑制抗体，例如抗人IL12Ri3 1 Fab或IgG4或者对照mAb 或对照孵育，并在振荡器上室温预孵育30分钟。在37°C，在5% C02恒温箱中，用2μ g/ml 抗⑶3和抗OT^mAb和2ng/ml重组人细胞因子IL12进行过夜刺激20小时。第二天，通过室温250g离心细胞5分钟收集上清液，并且转移到新鲜的96孔板并用于ELISA测定或者储存于-20°C直到进行测定。对于IFN γ ELISA，将以上收集的上清液稀释于X_Vivol5培养基，并根据厂商方案 BenderMed Systems #BMS228HS 或 Biozol/Biolegend#BLD-430105 进行 ELISA。根据 IFN γ 标准滴定曲线测定IFNy产生。3. 2抑制人血细胞的IL23依赖性的IFN γ产生使用PHA刺激的PBMC研究另一测定系统。在该细胞群体中，T细胞在凝集素暴露后增殖，并因此增加群体中T细胞的比例。在初步的实验中，评价了这些细胞对单独的或组合的IL12、IL23、IL18和LPS的反应性，并建立了最佳刺激条件。IL-12+IL-18和IL-23+IL-18 对IFNy分泌的作用是分别在约7ng/ml和800pg/ml诱导。3. 3抑制全血中IL12依赖性的IFN γ产生将等分的200 μ 1抗凝血液分配给顶行和底行都装满了 PBS的U型底96孔板 (Costar，3799)的各个孔。以20倍期望的终浓度在X-Vivo 15培养基(Bio-Whitaker， BE04-418F)中制备并滴定化合物，并且每一情况加入重复的3孔(10 μ 1)。单独地制备细胞因子IL12_ Systems, 219-IL)和IL-18_，B001-5)和以20倍浓度组合，并加在上部(10μ1)，得到了 220μ1的总培养体积。没有刺激或抑制化合物的重复3孔仅用合适的培养基填满。在37°C，5% C02孵育20_24小时后，将含有全血的平板以650g离心10分钟，并小心地从上部收集血浆。为了获得在标准曲线的线性范围内的测量值，将血浆用PBS/2mM EDTA稀释1 5。在诱导更强的情况下，以1 10-1 20的更高稀释进行另外的测定。3. 4通过FACS分析测定表达IL12R β 1的Ba/F3细胞的特异性细胞结合
计数各个细胞系(用猕猴和人IL12Ri3 1稳定转染的BaF3细胞；用猕猴IL12R3 1 稳定转染的HEK EBNA和Jurkat细胞)的细胞，并在PBS/3 % FCS/0. 02 % NaN3 (FACS缓冲液)中调整至&107个细胞/ml。在V型底的96孔微量滴定板(NUNCTM，Wiesbaden，德国) 中进行FACS染色，并且将每孔IxlO5个细胞与稀释于FACS缓冲液中的a)纯化的Fab片段或 b)纯化的IgG4或者c)阳性对照抗体(小鼠抗IL12R3 1，R&D Systems,目录号:MAB839)混合并在40°C孵育1小时。然后用200 μ 1 FACS缓冲液/孔洗涤细胞2次，并加入100 μ 1已经1 200稀释于FACS缓冲液中的藻红蛋白缀合的山羊抗人IgG(H+L)第二抗体(Jackson ImmunoResearch)。在4°C孵育45分钟后，用FACS缓冲液洗涤细胞3次，重悬于100 μ 1的 FACS缓冲液中，并在FACSCaliburTM(Becton Dickinson)中通过细胞的FL2荧光强度测量 IL12Ri3 1特异性抗体的细胞表面结合。4.体内/离体功能性测定法4. 1猕猴药效学(PD)测定法将肝素化的血液样品分配在96U型孔板(190μ 1/孔)中。将重组人IL12(R&D Systems ；终浓度100ng/ml)和IL18(MBL ；终浓度50ng/ml)加入到每孔中，并轻轻混合平板 3分钟。在37°C，6% CO2中孵育M小时后，将平板2000转/分钟离心10分钟。收集血浆并保存于_80°C直到进一步处理。如由生产商(UcyiTechBiosciences, Utrecht)所述，用 NHP 特异性 ELISA 试剂盒 (CT711、CT148 和 CT141)进行 IL2、TNFa 和 INFy 评估。对于PD读出，通过在每一样品中发现的淋巴细胞数校正以pg计的INFY/ml结果，最终表示为pg/ΙΟ6淋巴细胞。对于检测循环的IL2/TNF a /INF γ水平，将结果表示为pg细胞因子/ml。4. 2大鼠体内相容性测定用定义剂量的mAb注射大鼠，并在几个间隔获取血液样品来监测最大血浆浓度和清除速率，以测定血浆半衰期时间。因为预期与大鼠目标没有交叉反应，所以也预期没有与目标相关的作用(内化、转换)影响结果。4.3 CD45RBhi移植的炎性肠病小鼠模型为了诱发以重量损失为特征的疾病，通过FACS分选术从BALB/c小鼠脾分离 CD4+CD45RBHi T淋巴细胞，并注射(2xl05个细胞/小鼠，静脉内)到10周龄雌性SCID小鼠中(第0天)。阴性对照小鼠静脉内接受PBS，并且将在每一笼中的一只上述小鼠作为标记以监测在该免疫缺陷群体中可能的感染。在第1天、第7天、第14天和第21天，通过皮下注射mAb (抗IL12p40克隆C17. 8或抗IL12Ri3 1抗体或同种型对照)或PBS使每组小鼠接受治疗。在研究期间和最后监测每只小鼠的体重。结果实施例1 拮抗物抗人IL12R β 1抗体候选物的鉴定1. 1在直接包被的IL12R0 Ι/Fc上的噬菌体淘选在直接包被于Maxisorp的IL12R3 Ι/Fc上的淘选产生了在直接包被IL12R3 1/ Fc上筛选中的353个一级命中。序列分析产生30个唯一的Fab序列。一个Fab在HCDR2、 IXDRl和IXDR2中具有几个潜在的N-糖基化位点，并因此将其排除于进一步分析之外。1. 2在通过抗Fc抗体捕获的IL12Ri3 1上的淘选
在通过山羊抗人IgG Fcy特异性抗体捕获的IL12Ri3 1/Fc上的淘选和随后在 IL12Ri3 1/Fc捕获的抗原上的一级筛选产生了 75个一级命中。序列分析显示8个唯一的 Fab序列。1. 3在Baf3/IL12R3 1表达的细胞上的全细胞淘选包括在Baf3/IL12R0 1表达的细胞上3轮选择的全细胞淘选(WCP)包括在Baf3 亲本细胞上的吸附步骤。在直接包被的抗原上鉴定了 112个一级命中，并在捕获的抗原上鉴定了 122个一级命中。对于差异细胞淘选(DCP)，第一轮淘选在细胞上进行，而第2轮在 IL12Ri3 1/Fc直接包被的Maxisorp上进行，然后再在细胞上进行第3轮。DCP的一级筛选显示了在直接包被的抗原上的50个命中和在捕获的抗原上的51个命中。总共鉴定了 14 个另外的唯一 Fab，ll个来自WCP和3个来自DCP。在细胞淘选中再次鉴定了来自以前在 ILURii 1/Fc (直接和捕获)上淘选的4个Fab。在ELISA中，总共鉴定了 52个识别人IL12R0 1/Fc的Fab。1.4在ELISA中表征Fab，包括与人IL4Ra/Fc的交叉反应在ELISA中测试了与人ILURβ 1/Fc和人IL4Ra/Fe的结合。将1 μ g/ml和 10 μ g/ml的每一 Fc融合蛋白质直接包被于Maxisorp上，平行地，通过抗Fc捕获1 μ g/ml 和10 μ g/ml的每一 Fc融合蛋白。一个Fab在抗原捕获模式中显示出与IL4Ra /Fe的一些交叉反应，但与直接包被的IL4Ra/Fe未显示出结合(数据未显示)。将该Fab排除于进一步分析之外。全部其他经测试的Fab在直接包被的和捕获的抗原二者上的都显示与人 IL12Ri3 1/Fc的特异结合，并不与人IL4Ra /Fe结合。1. 5 FACS分析在IL12R0 1转染的Baf3细胞上的!^ab通过FACS分析与Baf3细胞上表达的人IL12Ri3 1/Fc的结合。首先检测了人 IL12Ri3 1转染细胞的两种细胞群体，所述两种细胞群体具有人IL12Ri3 1的不同表达水平。 两轮FACS分选导致了均一性细胞群体的检出。52个ELISA阳性Fab中的48个显示出与人 IL12Ri3 1转染的BaF3细胞的FACS结合，并将其用于进一步分析。1. 6使用Fab抗体的IL12和IL23结合抑制测定法(BioVeris)分析FACS阳性Fab对于IL12和IL23受体结合的抑制。26个Fab在BioVeris 中显示出IL12/IL12R^ 1结合抑制，而仅14个Fab在BioVeris 中显示出IL23/IL12R^ 1 结合抑制。不同的大小、稍微不同的结合表位或者简单地不同配体受体亲和性都可能造成这种差异。明显地，12个Fab检测到了平行的IL12和IL23/IL12R^ 1结合抑制。一般地， 与IL23抑制比较，从IL12抑制获得的EC50值要稍低(表1)。12个Fab中的1个由于在 ELISA中与rh IL4Ra/Fc交叉反应结合，所以将其排除。最后，选择了 52个Fab中的11 个用于进一步评价。11个Fab中的3个来源于细胞淘选，而8个来自直接或捕获模式的在 IL12R3 1/Fc上的淘选。EC50值范围为低nM至几百nM(见表1)。表1 在Bioveris中IL12和IL23受体结合抑制
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权利要求
1.分离的抗体或包含针对靶标IL12Rβ1多肽(SEQ ID NO 41)的抗体的抗原结合部分的蛋白质，其特征在于所述抗体或蛋白质以IOOnM或更小的Kd与IL12Ri3 1多肽结合，并且如在体外竞争性结合测定法中测量的，其抑制IL12和/或IL23与IL12Ri3 1多肽结合。
2.权利要求1所述的分离的抗体或蛋白质，其中所述抗体或蛋白质另外地以约InM或更小的IC5tl抑制人血细胞中IL12依赖性的IFNy产生。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其是完全人抗体或人源化的抗体。
4.权利要求1或2所述的抗体，其包含突变的或化学修饰的氨基酸Fc区，其中所述突变的或化学修饰的Fc区与野生型Fc区比较，没有ADCC活性或者提供了降低的ADCC活性。
5.权利要求4所述的抗体，其中所述突变的或化学修饰的氨基酸Fc区是沉默的IgGl Fc区。
6.根据权利要求1-2中任一项所述的蛋白质，其基本上由针对IL12Ri31多肽(SEQ ID NO 41)的抗体的聚乙二醇化抗原结合部分组成。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体或结合蛋白质，其至少包含具有与选自SEQ ID NO 9-12的重链区CDR3序列至少60、70、80、90、95或100百分比序列同一性的重链区 CDR3。
8.根据权利要求1-7所述的抗体或结合蛋白质，其包含具有与SEQID NO :29-32的至少一个至少60、70、80、90、95或100百分比序列同一性的Vh多肽序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或结合蛋白质，其包含具有与SEQID NO 25-28的至少一个至少60、70、80、90、95或100百分比序列同一性的\多肽序列。
10.抗体，其包含以下之一(a)SEQ ID NO :29的重链序列和SEQ ID NO 25的轻链序列；(b)SEQID NO 30的重链序列和SEQ ID NO 26的轻链序列；(c)SEQID NO 31的重链序列和SEQ ID NO 27的轻链序列；或(d)SEQID NO 32的重链序列和SEQ ID NO 28的轻链序列。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体或结合蛋白质，其包含具有与权利要求10 的至少一个抗体的Vh和Vl对应序列至少60、70、80、90、95或100百分比序列同一性的Vh和Vl序列。
12.根据权利要求11所述的抗体或结合蛋白质，其包含包含选自SEQID NO :1-4的氨基酸序列的重链可变区⑶Rl ；包含选自SEQ ID NO :5_8的氨基酸序列的重链可变区⑶R2 ； 包含选自SEQ ID NO 9-12的氨基酸序列的重链可变区⑶R3 ；包含选自SEQ ID NO :13-16 的氨基酸序列的轻链可变区⑶Rl ；包含选自SEQ ID NO :17-20的氨基酸序列的轻链可变区 ⑶R2 ；和包含选自SEQ ID NO 21~24的氨基酸序列的轻链可变区⑶R3。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的抗体或结合蛋白质，其与IL12Ri31的结合受权利要求10的至少一个抗体交叉阻断。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的抗体或结合蛋白质，其交叉阻断权利要求10的至少一个抗体与IL12Ri3 1的结合或者其与IL12Ri3 1的结合受权利要求10的至少一个抗体交叉阻断。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体或结合蛋白质，用作药物。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的抗体或结合蛋白质，用于治疗受IL12Ri31调节的或者可以通过抑制IFNy产生而得到治疗的病理疾病。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体或结合蛋白质，用于治疗自身免疫和炎症疾病，例如类风湿性关节炎、银屑病或炎性肠病。
18.药物组合物，其包含根据权利要求1-17中任一项的抗体或结合蛋白质，所述抗体或结合蛋白质与一种或多种可药用赋形剂、稀释剂或载体组合。
19.分离的核酸，其编码根据权利要求1-17中任一项所述的抗体或结合蛋白质。
20.克隆或表达载体，其包含根据权利要求19所述的一个或多个核酸。
21.根据权利要求20所述克隆或表达载体，其包含选自SEQID No 33-40的至少一个核酸或者编码至少一个⑶R区的片段。
22.宿主细胞，其包含一个或多个根据权利要求20-21所述的克隆或表达载体。
23.用于产生根据权利要求1-17中任一项所述的抗体或结合蛋白质的方法，其包括培养权利要求22所述的宿主细胞，并分离所述抗体或功能性蛋白质。
24.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体在制备用于治疗自身免疫疾病和炎症疾病，例如类风湿性关节炎、银屑病或炎性肠病的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及与IL12Rβ1(异二聚IL12受体(连同IL12Rβ2链)的非信号转导链)以及IL23受体(连同IL23Rα链)特异结合的抗体。本发明更具体地涉及能抑制T细胞IL12/IL18诱导的IFNγ产生，是IL12和IL23受体拮抗剂的具体抗体，以及将所述抗体用于治疗可以通过抑制IFNγ产生来治疗的病理疾病的组合物和方法，所述病理疾病为例如类风湿性关节炎、银屑病或炎性肠病或者其他自身免疫和炎症疾病。
文档编号C07K16/28GK102414223SQ201080018648
公开日2012年4月11日 申请日期2010年3月29日 优先权日2009年3月31日
发明者C·厄塞, C·施韦尔茨勒, D·德拉杜卡塔, 埃雷拉 J·M·卡瓦利多, M·巴德罗夫, U·杰格 申请人:诺瓦提斯公司