专利名称：利用雪莲果制备蔗果三糖、蔗果四糖方法
技术领域：
本发明涉及雪莲果中低聚糖，同时，本发明还涉及雪莲果中低聚糖的定性、定量分析及其低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备。
背景技术：
低聚果糖是雪莲果中含量较高的活性物质。低聚果糖是由蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖等组成，并且具有特殊的保健功能。目前的研究大多集中于制备高纯度的低聚果糖， 但对低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖等各单组分制备的研究较少，尚缺乏成熟的技术
发明内容
本发明的目的在于提供一种雪莲果低聚糖，其提取方法简便易行，可大批量生产。本发明的另一目的在于提供雪莲果低聚糖的成分分析方法，此方法准确可靠。本发明的目的还在于提供该雪莲果低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备方法。 该方法制备的蔗果三糖、蔗果四糖纯度较高。本发明提供的雪莲果低聚糖，其采用水提醇沉的方法，取其上清液，然后浓缩、冷冻干燥，得到的雪莲果低聚糖为淡黄色的粉末。本发明提供的雪莲果低聚糖的成分分析方法，采用高压液相色谱法进行分析。色谱条件色谱柱:APS-2HYPERSIL ；柱温:30°C ；流动相乙腈_水(75 25，V/V)；流速 0. 8ml/min ；进样量20μ 1 ；检测器示差检测器。雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38. 30%,16. 44%,14. 58%,12. 29%, 12. 17^^6.20 ^低聚糖样品中的低聚果糖含量为30.66%。本发明采用硅胶柱层析，制备出低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖单组分。将低聚糖样品进行干法上柱，用展开剂冰乙酸氯仿无水乙醇水=3 11 11 1进行洗脱， 经飞行时间质谱分析，洗脱出的物质为蔗果三糖和蔗果四糖，高压液相色谱法分析其纯度分别为95.9%,92.6%,纯度较高。
具体实施例方式实施案例1雪莲果中低聚糖的制备原料雪莲果产自云南，成熟度95%，4°C下贮藏半个月。将雪莲果切片，50°C烘干，用高速粉碎机粉碎，制成雪莲果粉末。雪莲果粉末一80°C热水浸提一离心、抽滤一保留清液，残渣反复提取一合并提取液一浓缩一80%乙醇(ν/ν)沉淀一保留上清液一浓缩一冷冻干燥一雪莲果低聚糖实施案例2雪莲果中低聚糖的定性、定量试验高压液相色谱样品处理将雪莲果低聚糖样品用流动相配成5mg/ml的溶液，经0. 22 μ m微孔滤膜过滤，超声脱气，取20 μ 1滤液进行分析。
标准液配制用流动相分别配制5mg/ml的果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖对照品标准溶液，过0. 22 μ m滤膜，超声脱气备用。。色谱条件色谱柱APS_2HYPERSIL；柱温30°C;流动相乙腈-水(75 25，V/V)，混勻，使用前超声脱气;流速0. 8ml/min ；进样量20μ 1。检测器示差检测器根据高压液相色谱图谱可知，样品中各成分的出峰时间(即保留时间)与标准液中标准物的出峰时间基本一样，所以可以得知从雪莲果制备的低聚糖样品中含有果糖， 葡萄糖，蔗糖，蔗果三糖，蔗果四糖。同时在49. 315min时还有一个小峰，推测其为蔗果五糖。由于条件限制没有买到蔗果五糖的标准品，所以无法验证。经HPLC面积归一化法定量分析，果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的含量分别为38. 30%,16. 44%, 14. 58 %、12. 29 %、12. 17 %、6. 20 %。低聚糖样品中的低聚果糖含量为30. 66 %。实施例3 低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备经过反复的薄层层析试验，确定以展开剂冰乙酸氯仿无水乙醇水= 3 11 11 1为硅胶柱层析的洗脱剂。取适量硅胶，加入洗脱剂，混勻，转入玻璃层析柱(1.6CmX50Cm)。取Ig低聚糖样品，采用干法上柱，然后用洗脱剂进行洗脱，洗脱速度为 ImVmin0用试管收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥。然后进行薄层层析。显色剂为2. 5g 二苯胺， 加5mL苯胺、25mL 85%磷酸混合溶解后，加丙酮稀释至250mL，冷藏备用(冷藏可在2 3 周内使用)。从薄层层析图片中可知，第81-107管主要以蔗果三糖为主，第131-159管主要以蔗果四糖为主，分别收集并命名为样品1、样品2。然后做飞行时间质谱进行分析。样品 1的图谱有一个质荷比(m/z)为527的准分子[GF2+Na]+离子峰，减去一个Na+的质量23， 与蔗果三糖GF2分子量504相符。样品2的图谱有一个质荷比(m/z)为689. 27的准分子 [GF3+Na]+离子峰，减去一个Na+的质量23，与蔗果四糖GF3分子量666相符。还有一个质荷比(m/z)为705.四的准分子[GF3+K]+离子峰，减去一个K+的质量39，也与蔗果四糖GF3* 子量666相符。然后对样品1和样品2进行高压液相色谱分析，方法同实施例2。经过HPLC面积归一化法定量分析，样品1的纯度为95. 9%，样品2的纯度为92. 6%，纯度较高。
图1是雪莲果低聚糖高压液相色谱图谱图； 图2是样品1飞行时间质谱图谱图； 图3是样品2飞行时间质谱图谱图。
权利要求
1.雪莲果低聚糖，由下法制得采用水提醇沉的方法，取上清液，然后浓缩、冷冻干燥， 得到淡黄色的雪莲果低聚糖粉末。
2.权利要求1所述的雪莲果低聚糖，利用高压液相色谱对其进行成分分析，色谱条件为色谱柱:APS-2HYPERSIL ；柱温:30°C ；流动相乙腈_水(75 25，ν/ν)；流速0. 8ml/ min ；进样量20μ 1 ；检测器示差检测器；雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38. 30%,16. 44%,14. 58%,12. 29%,12. 17%, 6. 20%。
3.权利要求1所述的雪莲果低聚糖，以冰乙酸氯仿无水乙醇水= 3 11 11 1为洗脱剂，利用硅胶柱层析制备高纯度蔗果三糖和蔗果四糖的方法。
全文摘要
本发明公开了雪莲果低聚果糖分析方法及蔗果三糖、蔗果四糖制备方法。采用水提醇沉的方法，取其上清液，进行浓缩、冷冻干燥，得到淡黄色的雪莲果低聚糖。雪莲果低聚糖经高压液相色谱分析，色谱条件色谱柱APS-2HYPERSIL；柱温30℃；流动相乙腈-水(75∶25，V/V)；流速0.8ml/min；进样量20μl；示差检测器。雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。将制得的低聚糖样品进行硅胶柱层析，用冰乙酸∶氯仿∶无水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1为洗脱剂进行洗脱，依次收集洗脱液，然后浓缩、冻干。得到蔗果三糖和蔗果四糖。经高压液相色谱法分析，制备的蔗果三糖、蔗果四糖纯度可达90％以上。
文档编号C07H1/08GK102408457SQ201110184208
公开日2012年4月11日 申请日期2011年7月1日 优先权日2011年7月1日
发明者司传领, 朱振元, 连红玉 申请人:天津科技大学