专利名称：一种同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法
技术领域：
本发明涉及一种同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，尤其是涉及一种超临界流体萃取与逆流色谱结合分离纯化天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法。
背景技术：
天芥菜碱分子式C16H27NO5,分子量313，物理性质棱柱状结晶，熔点125 1280C。溶于水、乙醇和氯仿，微溶于乙醚和石油醚。毛果天芥菜碱分子式C21H33NO7,分子量411，物理性质叶状结晶(石油醚)，溶于乙醇、苯，略溶于水。来源于紫草科植物倒提壶，倒提壶全草主要有天芥菜碱、毛果天芥菜碱等多种生物碱，其生物碱对中枢神经系统有抑制作用。据文献报道，天芥菜碱与毛果天芥菜碱具有抗肿瘤、抗菌活性，专利“一种治疗晚期肺癌的中草药制剂”，该专利通过药理实验表明倒提壶中毛果天芥菜碱、天芥菜碱引起大鼠肺中实质细胞及巨形核有抗肿瘤作用；Singh等的进一步研究表明，从紫草科植物中分离出的PAs如毛果天芥菜碱、天芥菜碱等对大肠杆菌、肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌及烟曲霉、青霉菌等真菌具有良好的抑制作用。此外，Pankey等对天芥菜碱进行了神经节阻滞作用方面的药理实验。体内、外实验表明，天芥菜碱选择性降低尼古丁所致神经节激动效应。体外研究表明IOOmg*!/1的天芥菜碱对离体豚鼠回肠和兔子回肠无任何影响，但显著降低尼古丁所致痉挛反应，其LP3tl(30ms的持续电位)为(4. 7士 1. 0) μ g， 作用强度比已知的神经阻滞剂安血定强13倍还多。现有同时提取分离天芥菜碱和毛果天芥菜碱的报道不多，文献“天芥合剂的制备”，该文献公开了倒提壶总生物碱的制备方法，该方法分别采用水煎醇沉法、水煎酸调醇沉法和醇渗漉法提取生物碱，最后优化选用水煎酸调醇沉法提取总生物碱，该方法仅制得总生物碱，且能耗大。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用高速逆流色谱法纯化天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法。本发明所述的一种同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，其特征在于按下列步骤进行
(1)将倒提壶原料粉碎，投入萃取釜中，通入夹带剂和超临界CO2，进行萃取，通过解析釜分离出倒提壶生物碱；
(2)采用高速逆流色谱仪分离倒提壶生物碱，溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水组成，体积比为3-6 4-9 4-8 :1_3，置于分液漏斗中，上相为固定相，下相为流动相，取步骤 (1)总生物碱溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动，泵入流动相，当流动相流出时，连续进样，根据检测器谱图收集两种目标成分，浓缩，低温干燥即得产品。
所述步骤(1)中超临界萃取条件为萃取温度为45-65°C，萃取压力为^_42MPa， 萃取时间为1-2. 5h，分离釜I温度为40-55°C，压力为7_10MPa，分离釜II温度为30_42°C， 压力为5-6. 5MPa。所述夹带剂为乙醇，用量为100-150ml/100g药材，CO2流量为^_40L/h。所述步骤(2)中高速逆流色谱仪流速控制在1.5-3ml/min，主机转速为 750-1000rpm。所述高速逆流色谱仪出液端接紫外检测器，在线检测，与标准图谱对应，收集目标液体，蒸除溶剂，干燥即得产品。本发明与现有技术相比具有如下的优点及有益效果
1)本发明采用超临界流体萃取的方法，对环境无污染，周期短，提取率高；
2)采用高速逆流色谱法分离纯化，制备量大，产品纯度高，处理过程中样品无损失。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1
取倒提壶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界(X)2萃取，通入 IL乙醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度45°C，萃取压力^MPa,萃取时间2. 5h，CO2通入的量为^L/h，设定分离釜I温度为40°C，压力为7MPa，分离釜II温度为 30°C，压力为5MPa，在分离釜II中收集萃取物得倒提壶粗提物；
取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(3:4:8:2)置于分液漏斗中混合均勻，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到750rpm，以1. 5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集天芥菜碱流分和毛果天芥菜碱流分，浓缩，低温干燥即得到天芥菜碱和毛果天芥菜碱，紫外检测含量都在98%以上。实施例2:
取倒提壶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界(X)2萃取，通入 1. 5L乙醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度65°C，萃取压力42MPa，萃取时间lh，CO2通入的量为40L/h，设定分离釜I温度为55°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为 42°C，压力为6. 5MPa，在分离釜II中收集萃取物得倒提壶粗提物；
取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(6:9:8:3)置于分液漏斗中混合均勻，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到lOOOrpm，以3ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集天芥菜碱流分和毛果天芥菜碱流分，浓缩，低温干燥即得到天芥菜碱和毛果天芥菜碱，紫外检测含量都在98%以上。实施例3:
取倒提壶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界(X)2萃取，通入IL 乙醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度50°C，萃取压力30MPa，萃取时间池， CO2通入的量为35L/h，设定分离釜I温度为42°C，压力为8MPa，分离釜II温度为35°C，压力为6MPa，在分离釜II中收集萃取物得倒提壶粗提物；取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(5:5:5:2)置于分液漏斗中混合均勻，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到800rpm，以2. 5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集天芥菜碱流分和毛果天芥菜碱流分，浓缩，低温干燥即得到天芥菜碱和毛果天芥菜碱，紫外检测含量都在98%以上。实施例4:
取倒提壶干燥药材10kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 12L乙醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度50°C，萃取压力40MPa，萃取时间 2h, CO2通入的量为33L/h，设定分离釜I温度为42°C，压力为8MPa，分离釜II温度为30°C， 压力为5. 5MPa，在分离釜II中收集萃取物得倒提壶粗提物；
取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(4:6:7:2)置于分液漏斗中混合均勻，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到950rpm，以2. 8ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集天芥菜碱流分和毛果天芥菜碱流分，浓缩，低温干燥即得到天芥菜碱和毛果天芥菜碱，紫外检测含量都在98%以上。实施例5:
取倒提壶干燥药材10kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 13L乙醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度48°C，萃取压力33MPa，萃取时间 2h, CO2通入的量为35L/h，设定分离釜I温度为44°C，压力为9MPa，分离釜II温度为38°C， 压力为6MPa，在分离釜II中收集萃取物得倒提壶粗提物；
取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(5:6:7:2)置于分液漏斗中混合均勻，静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取样品溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动达到850rpm，以3ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时，开始连续进样，根据检测器谱图分别收集天芥菜碱流分和毛果天芥菜碱流分，浓缩，低温干燥即得到天芥菜碱和毛果天芥菜碱，紫外检测含量都在98%以上。
权利要求
1.一种同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，其特征在于按下列步骤进行(1)将倒提壶原料粉碎，投入萃取釜中，通入夹带剂和超临界CO2,进行萃取，通过解析釜分离出倒提壶生物碱；(2)采用高速逆流色谱仪分离倒提壶生物碱，溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水组成，体积比为3-6 4-9 4-8 :1_3，置于分液漏斗中，上相为固定相，下相为流动相，取步骤 (1)总生物碱溶于下相中，用泵将固定相灌满分离柱，然后使主机转动，泵入流动相，当流动相流出时，连续进样，根据检测器谱图收集两种目标成分，浓缩，低温干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述的同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，其特征在于所述步骤(1)中超临界萃取条件为萃取温度为45-65°C，萃取压力为28-42MPa，萃取时间为1-2. 5h，分离釜I温度为40-55 °C，压力为7-lOMPa，分离釜II温度为30-42 °C，压力为 5-6. 5MPa。
3.根据权利要求1所述的同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，其特征在于所述夹带剂为乙醇，用量为100-150ml/100g药材，CO2流量为^_40L/h。
全文摘要
本发明公开了一种同时制备天芥菜碱和毛果天芥菜碱的方法，包括(1)将倒提壶原料粉碎，投入萃取釜中，通入夹带剂和超临界CO2，进行萃取，通过解析釜分离出倒提壶生物碱；(2)取溶剂系统置于分液漏斗中分层，取上相为固定相，下相为流动相，取倒提壶生物碱溶解于下相中，将固定相用泵灌满分离柱，然后使主机转动，连接柱首端与进样阀，调节流动相流速和主机转速，泵入流动相，当流动相流出时，连续进样，根据检测器谱图收集两种目标成分流出液，蒸干得天芥菜碱和毛果天芥菜碱产品。该发明专属性强，且提取过程无污染，分离过程效率高，能得到高含量的天芥菜碱和毛果天芥菜碱。
文档编号C07D487/04GK102382114SQ20111026453
公开日2012年3月21日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司