一种茶皂素粗制品及茶皂素b1的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种茶皂素粗制品的制备方法；本发明还提供了一种茶皂素B1的制备方法，该方法包括茶皂素粗品的提取，茶皂素的预纯化和茶皂素纯品的HPLC纯化等三个步骤。本发明制备方法简单，产品纯度高，稳定性好。
【专利说明】一种茶皂素粗制品及茶皂素BI的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物化学【技术领域】，具体的涉及茶皂素粗品及茶皂素BI (Camelliasaponin BI)的制备方法。
【背景技术】
[0002]茶皂素是从茶籽、茶籽饼中提取的一种天然表面活性剂，具有优良的表面活性，可用其制作高级无公害洗涤剂、清洁剂、泡沫剂、乳化剂、杀虫剂、洗发香波等。同时，茶皂素也有多种生物活性，如抗保鲜、抗渗、消炎、镇痛、杀虫作用等。
[0003]茶皂素是一类由糖体、苷元和有机酸三部分组成的齐墩果烷型五环三萜类皂苷。由于各部分连结方式不同，因此它们能组成多种结构相似的茶皂素，这些茶皂素在实际应用中各有不同，然而目前市售的茶皂素产品都是一些不同茶皂素单体的混合物，严重地限制了茶皂素的应用，而且不同厂家生产的产品所含皂苷的构成也不尽相同，难以获得一种统一的标准皂苷和平均分子量，给分析工作带来较大困难，也给市场上的不法分子带来可乘之机。
[0004]目前常用的茶皂素定量方法主要有重量法、比色法、薄层扫描法等，一般是以人参皂苷或自制精制茶皂素为标准品，然后对茶皂素进行水解或者显色反应进行含量测定。这些方法普遍存在分析所需时间长、操作繁复以及试剂消耗量大、重现性及准确度不高等问题。另外，这些方法中以人参皂苷为对照品测定茶皂素含量并不准确，这是因为茶籽中不含人参皂苷，只是茶皂素和人参皂苷的结构有相似之处，所以会使得测定结果不准确。用自制的高含量的茶皂素也只是一类结构相似的化合物，每个化合物都有其自身的化学特性，也不能准确地测出茶皂素的含量，更无法鉴定产品的真伪。以茶皂素中的某一个主要成份为对照品，Camellia saponin BI为目前市售的茶阜素产品中的主要成份,该化合物分子式为C58H9tlO26，分子量为1202，但在Camellia saponin BI的纯化制备方面没有报道，市场上难以见到合格的标准品，因此造成茶皂素含量的测定较为困难。
[0005]为了测定供试样品中茶皂素的含量，需要建立一种茶皂素Si标准品的制备方法和供试样品中茶皂素的含量测定方法。
【发明内容】
[0006]本发明的目的就是提供一种茶皂素BI的制备方法和该方法制备的茶皂素BI。
[0007]本发明的另一目的，就是提供茶皂素的含量测定方法。
[0008]本发明的第一方面，提供了一种茶皂素粗制品的制备方法，所述制备方法包括下述步骤:
[0009](a)将脱脂茶籽饼粉碎至40-100目；
[0010](b)在粉碎好的茶籽饼中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加热回流提取；过滤后的滤渣再重复本提取步骤一次；
[0011]Ce)真空浓缩得到茶皂素粗提物浸膏；[0012](d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
[0013](e)取正丁醇相溶液，经脱水，真空干燥，获得茶皂素粗品。
[0014]上述步骤(b)中乙醇或甲醇水溶液的体积百分比浓度为60 - 80%、所述加热回流时间为2-3h。
[0015]上述步骤d)萃取时石油醚、乙酸乙酯、正丁醇与茶皂素粗提物浸膏的体积比为
2-4:1。
[0016]上述步骤(e)中采用无水硫酸钠脱水。
[0017]本发明的第二方面，提供一种茶皂素B I的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
[0018](I)根据下述步骤制备获得茶皂素粗品:
[0019]a)将脱脂茶籽饼粉碎至40-100目；
[0020]b)在粉碎好的茶籽饼中加入8 - 12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加热回流提取；过滤后的滤渣再重复本提取步骤一次；
[0021]c)真空浓缩得到茶皂素粗提物浸膏；
[0022]d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；`
[0023]e)取正丁醇相溶液，经脱水，真空干燥，获得茶皂素粗品。
[0024](2)将茶皂素粗品溶于蒸馏水中，采用分子筛层析分离，脱色，加热回流后过滤，真空浓缩获得茶皂素浸膏；
[0025](3)将茶皂素浸膏溶于乙醇水溶液中，经HPLC分离，收集洗脱液，获得茶皂素BI成品。
[0026]上述步骤(2)中茶皂素粗品与蒸馏水的W:V比为1:40。
[0027]上述步骤(2)中，采用S印hadexLH-20或MCI GEL CHP20PMCI进行分子筛层析，所述洗脱液为40-60%甲醇水溶液。
[0028]上述步骤(3)中，洗脱液为60-90%甲醇水溶液。
[0029]上述步骤(2)中，脱色剂为活性炭或EDTA。
[0030]上述步骤(3)中，HPLC分离时，色谱柱选用C18、C8或C4色谱柱。
[0031]上述步骤(3)中，HPLC色谱检测波长为225nm。
[0032]上述步骤(1)中，步骤d)萃取时石油醚、乙酸乙酯、正丁醇与茶皂素粗提物浸膏的体积比为2-4:1。
[0033]上述步骤(b)中乙醇或甲醇水溶液的体积百分比浓度为60 - 80%、所述加热回流时间为2-3h。
[0034]上述步骤(e)中采用无水硫酸钠脱水。
[0035]本发明的第三方面，提供了上述制备方法制备的茶皂素粗制品。
[0036]本发明的第四方面，提供了上述制备方法制备的茶皂素BI。
[0037]由于本发明制备的茶皂素BI纯度高，可以作为标准品，测定样品中茶皂素的含量。测定时，采用HPLC。分析HPLC的色谱条件为:色谱柱Alltech Prevail C18 (5um，
4.6 X 250mm);流动相为乙腈:1%冰醋酸=35:65 ;检测波长为225nm ;流速为1.0ml/min ;柱温为20° C;进样量20ul。
[0038]本发明所公开的一种茶皂素BI的制备方法工艺简单，产品纯度高，稳定性好。本发明中以Camellia saponin BI为对照品，不仅可以检测茶皂素的含量，还可以衡量产品的质量。而且本发明测定方法操作简单、分析时间短、重现性和精确度高，为供试品中的茶皂素含量的测定提供了一种精确的测定方式。
[0039]茶皂素BI的分子式如下:
[0040]
【权利要求】
1.一种茶皂素粗制品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (a)将脱脂茶籽饼粉碎至40-100目； (b)在粉碎好的茶籽饼中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加热回流提取；过滤后的滤渣再重复本提取步骤一次； (C)真空浓缩得到茶皂素粗提物浸膏； (d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取； Ce)取正丁醇相溶液，经脱水，真空干燥，获得茶皂素粗品。
2.根据权利要求1所述茶皂素粗制品的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)中乙醇或甲醇水溶液的体积百分比浓度为60 - 80%、所述加热回流时间为2-3h。
3.根据权利要求1所述茶皂素粗制品的制备方法，其特征在于，所述步骤(e)中采用无水硫酸钠脱水。
4.一种茶皂素B I的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)根据下述步骤制备获得茶皂素粗品: a)将脱脂茶籽饼粉碎至40-100目； b)在粉碎好的茶籽饼中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加热回流提取；过滤后的滤渣再重复本提取步骤一次； c)真空浓缩得到茶皂素粗提`物浸膏； d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取； e)取正丁醇相溶液，经脱水，真空干燥，获得茶皂素粗品。 (2)将茶皂素粗品溶于蒸馏水中，采用分子筛层析分离，脱色，加热回流后过滤，真空浓缩获得茶皂素浸膏； (3)将茶皂素浸膏溶于乙醇水溶液中，经HPLC分离，收集洗脱液，获得茶皂素BI成品。
5.根据权利要求4所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中茶皂素粗品与蒸馏水的W:V比为1:40。
6.根据权利要求4或5所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，采用S印hadexLH-20或MCI GEL CHP20PMCI进行分子筛层析，所述洗脱液为40-60%甲醇水溶液。
7.根据权利要求6所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，洗脱液为60-90%甲醇水溶液。
8.根据权利要求6所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，脱色剂为活性炭或EDTA。
9.根据权利要求4-8任一权利要求所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述HPLC分离时，色谱柱选用C18、C8或C4色谱柱。
10.根据权利要求9所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，HPLC色谱检测波长为225nm。
11.根据权利要求4所述茶皂素BI的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，d)部萃取时石油醚、乙酸乙酯、正丁醇与茶皂素粗提物浸膏的体积比为2-4:1。
12.一种根据权利要求4-8、10或11任一权利要求所述方法制备的茶皂素B I。
【文档编号】C07H15/256GK103509069SQ201210216940
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月27日 优先权日:2012年6月27日
【发明者】王亚 申请人:上海莱博生物科技有限公司