专利名称：一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法
技术领域：
本发明涉及同位素标记领域，尤其是涉及一种同位素内标检测试剂稳定同位素标记隐色孔雀石绿、孔雀石绿的合成方法。
背景技术：
隐色孔雀石绿、孔雀石绿等三苯甲烷类化合物，作为杀菌剂曾被广泛使用于鱼类养殖业中。隐色孔雀石绿、孔雀石绿中的化学功能团三苯甲烷可致癌，很多国家已经禁用，但仍有渔民在防治鱼类感染真菌时使用，也有运输商用作消毒剂，以延长鱼类在长途贩运中的存活时间。为防止隐色孔雀石绿、孔雀石绿等三苯甲烷类化合物残留进入食物链，养殖者和政府监控部门需要一种能够快速、准确并很敏感的技术来检测它。 用来检测这类三苯甲烷类化合物的主要检测技术有高效液相色谱法、薄层色谱法、分光光度法和高效液相色谱串联质谱法。高效液相色谱法的灵敏度高，但是该方法繁琐，测定的是孔雀石绿的总量，无法分别定量测定孔雀石绿和隐色孔雀石绿，故该方法已经很少使用。薄层色谱法操作简便快捷，但不能同时检测孔雀石绿和隐色孔雀石绿。分光光度法的检测限很高，但检测的灵敏度较低，准确性很差。而质谱作为目前发展最快的检测技术，在各类残留检测中应用逐渐普及，成为分析和确证实验室必备的检测仪器。由于质谱能够同时提供定性和定量信息，因此发达国家对于食品、饲料中的残留均要求用质谱法来进行检测，并对相关判定标准进行了详细的规定如欧盟的2002/657/EC指令。稳定同位素稀释质谱法IDMS(Isotope Dilution Mass Spectrometry)是采用与被测物质具有相同分子结构的稳定同位素标记的化合物作为内标物质，用高分辨液相色谱-质谱联用仪(LC/MS)进行检测，通过质谱仪测量相应质量数的离子的比值并与标准的比值比较达到准确定量的目的。采用同位素内标可以有效消除样品在化学和物理的前处理步骤中所引起的回收率差异，从而避免因为样品处理过程的损失对检测结果造成的偏差。稳定同位素内标的这种特性与LC/MS的高灵敏度和处理复杂样品的能力结合起来，使得色谱/同位素稀释质谱技术被公认为是一种测量微量及痕量有机物的基准方法。而稳定同位素标记三苯甲烷类化合物稳定同位素标记隐色孔雀石绿、孔雀石绿的开发成功，将为更准确的定量检测隐色孔雀石绿、孔雀石绿提供标准试剂，从而有效地为我国食品安全领域兽药残留检测服务。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种过程简单、分离提纯容易的稳定同位素标记隐色孔雀石绿及孔雀石绿的合成方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现稳定同位素标记隐色孔雀石绿合成方法，利用稳定同位素标记的N，N- 二甲基苯胺与苯甲醛反应后得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。所述的稳定同位素标记的N，N- 二甲基苯胺为N，N- 二甲基苯胺-15N、N，N- 二甲基苯胺-13C2或N，N- 二甲基苯胺-D6。N，N- 二甲基苯胺-15N标记的隐色孔雀石绿的分子结构为
权利要求
1.一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，该方法利用稳定同位素标记的N，N- 二甲基苯胺与苯甲醛反应后得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。
2.根据权利要求I所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，所述的稳定同位素标记的N，N-二甲基苯胺为N，N-二甲基苯胺-15N、N，N-二甲基苯胺-13C2或N, N- 二甲基苯胺-D6。
3.根据权利要求2所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于， N，N- 二甲基苯胺-15N标记的隐色孔雀石绿的分子结构为；
4.根据权利要求I所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，隐色孔雀石绿的合成具体包括以下步骤将稳定同位素标记的N，N- 二甲基苯胺与联结齐U、苯甲醛按一定摩尔比例混合，置于液相环境中，在催化剂作用下，在一定压力下，控制反应温度反应一定时间，反应液经分离提纯后得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。
5.根据权利要求4所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，所述的稳定同位素标记的N，N-二甲基苯胺与联结剂的摩尔比为2 : I 4 : 1，优选2: 1、3 : I或4 : I中的一种；所述稳定同位素标记的N，N-二甲基苯胺与苯甲醛按摩尔比为I : I 3 : 1，优选I : 1、2 : I或3 : I中的一种；所述的联结剂包括尿素、多聚甲醛或醋酸甲脒，优选尿素或多聚甲醛，所述的液相环境为盐酸、乙酸、乙酸酐、丙酮、乙腈或二氧六环中的一种或几种，优选盐酸、乙酸、乙酸酐、丙酮或乙腈中的一种或几种；所述催化剂为 Fe (NO3) 3、CuBr、FeCl3' CuCl 或 AlCl3 中的一种或几种，优选 Fe (NO3) 3、FeCl3 或 CuCl 中的一种；催化剂与稳定同位素标记的N，N-二甲基苯胺的重量比为0.01 : I 0.2 : 1，优选0.04 I 0.1 I ;反应压力为0 5MPa ;反应温度为10 190°C，优选30 160°C;反应时间为2 16h，优选4 12h。
6.根据权利要求I所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，所述的同位素标记的隐色孔雀石绿还可以进一步氧化得到稳定同位素标记的孔雀石绿。
7.根据权利要求6所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，同位素标记的隐色孔雀石绿氧化得到稳定同位素标记的孔雀石绿具体包括以下步骤将稳定同位素标记隐色孔雀石绿置于酸性液相环境中，再加入催化剂，在氮气及氧气气氛下，控制反应温度，搅拌反应时间一定时间，反应液经分离提纯后得到稳定同位素标记孔雀石绿。
8.根据权利要求7所述的一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，其特征在于，所述的酸性液相环境选自盐酸、乙酸、乙酸酐、丙酮、乙腈或二氧六环中的一种或几种，优选盐酸、乙酸、乙酸酐、丙酮或乙腈中的一种或几种；所述的反应温度为10 160°C，优选70 120°C ;所述的反应时间为2 10h，优选4 8h。
全文摘要
本发明涉及一种稳定同位素标记隐色孔雀石绿的合成方法，利用稳定同位素标记的N，N-二甲基苯胺与苯甲醛反应后得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。与现有技术相比，本发明制备的稳定同位素标记隐色孔雀石绿、孔雀石绿经分离提纯后，化学纯度达99％以上，同位素丰度在98％atom以上。
文档编号C07C209/68GK102796009SQ201210313640
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月29日 优先权日2012年8月29日
发明者杨超, 杨维成, 罗勇, 李美华 申请人:上海化工研究院