一种丹酚酸a冻干粉针及其制备药物用途的制作方法

专利名称：一种丹酚酸a冻干粉针及其制备药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种丹酚酸A冻干粉针及其制备药物用途。
背景技术：
缺血性心脏病(IHD)是由于冠状动脉循环改变引起冠状动脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，最常见的原因是冠状动脉粥样硬化、冠状动脉血栓及冠状动脉痉挛，约占缺血性心脏病的90%左右。其共同点是由于心肌供血不足所致氧的供需矛盾而造成心肌缺血、缺氧，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作，从而发生一系列病理生理改变及症状，引起心绞痛发作，甚至发生心肌梗塞而危及生命。根据冠状动脉病变的部位、范围及病变严重程度、心肌缺血程度，临床分五类无症状型心肌缺血、心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病型、猝死型。以心绞痛、心肌梗死、心源性猝死较为常见。而这些因冠脉病理改变引起的心脏病统称为冠状动脉性心脏病简称冠心病。因此一般情况下所说的缺血性心脏病主要指冠心病、心绞痛。心脏没有“氧仓库”，完全依赖心肌血供，所以一旦缺血，立刻会引起缺氧。氧是心肌细胞活动必不可少的物质，正常心肌细胞摄取血液氧含量达 65 75 %，其它组织仅摄取10 25 %。心肌缺氧的直接后果是心肌细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律失常、心功能下降。同时，代谢的废物也不能被有效及时地清除，易产生不利影响。缺血、缺氧、缺能量，最终会影响心脏的收缩功能。若有20% 25%的心肌停止收缩，通常会出现左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收缩，就会有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突然发生，就会出现非常危险的心源性休克。急性心肌梗死就常与这种情况相关。心肌缺血还会损害舒张功能。收缩不良和舒张不良结合起来，可引起复杂的物质代谢紊乱和心肌电活动失常。
因此改善心脏血管功能，增加心肌的供血供氧、降低氧的消耗，改善心肌代谢，缓解心绞痛，减小心肌梗死面积是药物治疗的主要目的。目前治疗缺血性心脏病主要包括药物治疗和介入(PICA)或搭桥等手术治疗。心绞痛发作时一般用硝酸脂类药物，如舌下含化硝酸甘油，起效快，但是只能用于救急，缓解症状，不能从根本上治疗心肌缺血。缓解期用药包括硝酸酯类、他汀类、ACEI、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂、溶栓药(尿激酶、链激酶等) 及中药等。能量代谢障碍是心肌缺损伤的使动因素之一，近年来，通过优化调节心肌能量代谢发挥抗心绞痛的一类促代谢类药物亦颇受关注，有望成为新的一类治疗或辅助药物。而目前主要以冠脉血运重建术、尽快恢复血流灌注为原则的缺血性心脏病基础治疗方法，亦存在不可忽视的风险动物实验和临床研究发现，随着血运的恢复，某些受损的心肌细胞功能及结构破坏反而加重，即发生心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)。再灌注损伤是在心肌缺血后，再灌注的早期，氧化应激反应导致心肌中产生大量氧自由基、超氧阴离子，连同细胞及线粒体内钙超载等因素加速心肌细胞凋亡及坏死， 使得心肌梗死范围扩大、心功能迅速恶化。临床表现为在闭塞的冠状动脉再通及梗死区血液灌流重建后一段时间内，有的患者发生血压骤降、心功能不全、心律失常甚至猝死等一系列病情恶化的现象。临床实践中如心肌梗死溶栓再通后、冠脉搭桥、心脏移植、心脏骤停心脏复苏后、体外循环心脏手术后等均存在再灌注损伤问题。如何做到既保证尽早恢复缺血组织的血流，又减轻甚至解除再灌注损伤的发生便成为又一冠心病防治中的重要课题。
世界卫生组织在《全球疾病负担》报告中发出警告，心血管系统疾病已成为全球范围的主要死因。统计数据显示，全球每年近2000万人突发急性心血管病，致死亡数占全球死亡的30%以上，其中43%死于冠心病。在地域分布上，80%以上的心血管疾病死亡发生在低中等收入国家。据报道，美国每年约有45 50万人死于心脏性猝死，而其中以缺血性心脏病(冠心病)占猝死原因的80%以上。近几十年，冠心病发病率在我国逐年增高，目前在各类心脏病中居首位。2010年中国国家统计数据显示，中国超过40%的人死于心血管疾病。冠心病的有效防治已成为不容忽视的全球性公共健康问题，这类疾病防治药物的研制已连续被列为我国“十一五”、“十二五”创新药物重大专项研究的重点内容，且将成为今后很长一段时间重点研究的药物类别，有着重大的社会意义和经济价值。
丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根莖， 具有活血化瘀、凉血消痈及养血安神的功效。丹参作为中医传统活血化瘀的药物，因疗效确切，自70年代开始广泛用于临床各科，成为临床应用最多最广的药物之一。因具有改善微循环、扩张冠脉、抑制血栓形成、抑制血小板聚集、保护缺血心肌等药理作用，其制剂的近代临床实践主要应用于缺血性心、脑血管疾病。常用含丹参的治疗心肌缺血的中成药有丹参片、复方丹参片、心可舒、冠脉宁等；囊括了扩张冠状动脉、增加冠脉流量、降低血黏度和血凝、抑制血小板聚集、保护缺血心肌和改善微循环等药理作用。适用于血瘀症的胸痹病人以及心绞痛急性发作等。
丹参的药效物质基础是其中的水溶性酚酸类化合物，包括丹酚酸A-G、迷迭香酸及其甲酯、丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等，以抗氧化、抗凝和抗炎为特点、同时具有保护脉管内皮细胞、降脂、升高HDL、抗凝、激活纤溶、抑制纤维蛋白原合成、螯合钙铁离子等多种有益的药理作用；其中以丹酚酸A活性最强。丹酚酸A可以提高损伤后大鼠心肌H9c2细胞存活率，抑制细胞凋亡，并有很强的抗氧化作用，可明显减轻线粒体损伤。因此丹酚酸A可通过减轻心肌细胞凋亡、提高机体抗氧化能力和保护心肌线粒体等机制对缺血心肌有保护作用。丹酚酸A对心肌缺血再灌注损伤亦具有明显的保护作用，而且作用优于丹酚酸B (林治荣等.丹酚酸A与丹酚酸B抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的比较研究[D].时珍国医国药， 2011，22(2) =412-424)。
但是，丹酚酸A的天然含量极低(约为丹参药材的O. 01-0. 06% ),使得原药材成本过高，分离纯化难度过大，严重制约着药物的开发和研究，成为其产业化的瓶颈。另外，现有技术中，也有实验证实丹酚酸B通过酯水解脱羧和苯并二氢呋喃环开环反应进行降解可转化成丹酚酸A，但上述现有技术的转化过程无法控制，转化副产物多，主产物丹酚酸A的产率较低。
尽管现有技术中也有一些专利文献提出试图克服现有技术中存在的缺陷，但都仅仅是单纯的尝试升温、改变PH值或提高转化前丹酚酸类化合物的浓度等等，没有任何一项专利或现有技术深入、全面地研究转化反应都包括哪些主要影响因素，更没有任何一项专利或现有技术提出这些因素如转化前丹酚酸类化合物的浓度、PH值、温度、时间等彼此之间如何协同作用共同对丹酚酸A产率产生影响。
在此基础上，更很少有其他发明人或现有技术提出尝试在转化中加入催化剂以使反应更加充分，目前现有技术中涉及到了采用催化剂进行转化的相关内容仅存于在2010 年4月6日同一日提交的两份专利申请文件中，这两份专利申请文件分别是申请号为 2010101436787，发明名称为“一种催化转化丹酚酸B制备丹酚酸A的方法”的专利申请以及申请号为2010101436876，发明名称为“一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法”的专利申请。在这两份专利申请的说明书中，虽然公开了催化转化丹酚酸B制备丹酚酸A的技术内容，但其催化剂为尿素，尿素与丹酹酸B的摩尔比为(O. 4 O. 6) I,要求消耗和加入尿素非常高，因此生产成本非常高。并且，在上述两份专利申请文件中，也同样并未关注PH值及其他相关因素协同对丹酚酸A产率产生的影响。再者，其转化原料为经联合色谱法初步纯化的丹参水提物，其中丹酚酸B > 50%，这对转化原料的纯度及提纯工艺均要求较高，工艺也较为复杂，进一步增加了生产成本。更为关键的是，尽管其申请文件中声称“使用本方法制备的丹酚酸A丹酚酸B定向转化率> 10%，甚至达60 %”。但由于尿素实际上并没有开环、脱水、脱羧作用，仅有成酯作用，因此，其转化率根本达不到60%，并且该申请文件的具体实施例中的转化率最高仅为53%，而且多个实施例的转化率仅为10%、20%和30%。这与实际产业化的要求仍有很大差距。
丹酚酸A是由丹参素和咖啡酸缩合而成，含有多个酚羟基、羟基、酯键等活泼基团，其对光和热不稳定，暴露空气易氧，由于丹酚酸A的上述理化特性，制成丹酚酸A制剂， 其稳定性并保证丹酚酸A药理作用成为制剂的关键技术。发明内容
为克服现有技术存在的上述缺陷，本发明提供了一种丹酚酸A冻干粉针用于预防和或治疗缺血性心脏病方面的用途。
本发明提供的一种丹酚酸A冻干粉针用于制备预防和治疗缺血性心脏病药物的用途，所述丹酚酸A冻干粉针其重量配比为丹酚酸A IOg 80g，填充剂IOg 80g，抗氧剂为制成总量的O. 01% O. 2% ;所述丹酚酸A冻干粉针的制备方法为
取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，每次加3 15倍量、45 95 0C水温浸提取，同时以10 50转/分速度搅拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小时；提取液减压浓缩至相对密度I. O I. 25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味，得丹参提取液；或者
取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小时，共提取I 3次；减压回收乙醇并浓缩至无醇味， 得丹参提取液；
上述丹参提取液加水稀释至每Iml含丹酚酸B I 30mg，水溶液用碱调pH至3.5 6. 5，加入与丹酚酸B摩尔百分比O. I 3%氯化锌作为催化剂，在100 140°C温度加热转化I 6小时；
转化液调pH值至2. 5 4. 5，静置、离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸Al 10mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 35 I 70，树脂柱径高比为I : 4 I : 30，分别用I 8倍柱体积水、I 10倍柱体积10% 40%乙醇洗脱，除去杂质，再用2 10倍柱体积20% 60%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；
水溶液浓缩至每Iml含I-IOmg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A 上样量与聚酰胺比为I : 5 I : 25，树脂柱径高比为I : 4 I : 25，分别用I 10倍柱体积水、5 20倍柱体积20% 60%乙醇溶液洗脱除杂，再用4 15倍柱体积40% 90%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味水溶液；
水溶液浓缩，调酸pH至2. O 4. 0，用水溶液1_8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6 次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅胶，搅拌，挥干；
把搅拌样硅胶加到已装好的5 20倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 4 I 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚 (4 6)洗脱6 30倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱6 30倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A ;
取所述丹酚酸A IOg 80g加注射用水1500 2800ml搅拌使溶解，用碱调pH 值4. O 5. 0，加入所述填充剂使其溶解，再加入所述抗氧剂，搅拌使溶解混匀，再加入活性炭O. 5 2g搅拌吸附，滤过除去活性炭，加注射用水后灌装成瓶，送入冻干机中进行冷冻干燥；
所述冷冻干燥包括如下步骤
A、冷冻以20°C 30 V /h速度降温至-40 V -45 V，保温冷冻10 16小时；
B、升华抽真空至O. 3mbar以下，在10 14小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-23°C -27°C，维持-23°C -27°C真空干燥6 8小时；
C、干燥继续升温，以O. 5°C I. (TC /min均匀升温至40°C 45°C，维持40°C 45°C干燥2 5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
优选的，其重量配比为丹酚酸A 20g 60g，填充剂20g 60g，抗氧剂为制成总量的 O. 02% O. 1%。
优选的，其重量配比为丹酚酸A 20g 40g，填充剂20g 40g，抗氧剂为制成总量的 O. 03% O. 08%。
优选的，其中所述填充剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖中的任意一种或几种，用量为 20mg 40mg/2ml 3ml。
优选的，其中所述抗氧剂选自维生素C、硫脲、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠中的任意一种或几种。
优选的，其重量配比为丹酚酸A 20g，填充剂甘露醇20g，抗氧剂维生素C O. 8g ； 其制备方法为
取所述丹酚酸A 20g，加注射用水1900ml搅拌使溶解，用氢氧化钠钠调pH值4.O 5. O,加入甘露醇20g使溶解，再加入O. 8g维生素C，搅拌使溶解混匀，加入活性炭 O. 5g搅拌吸附，滤过除去活性炭；加注射用水至2000ml，灌装成1000瓶，冷冻干燥；
所述冷冻干燥包括如下步骤
A、冷冻以25°C /h速度降温至_45°C，保温冷冻15小时；
B、升华抽真空至O. 3mbar以下，在12小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-25°C，维持-25°C真空干燥8小时；
C、干燥继续升温，以O. 8°C /min均匀升温至40°C，维持40°C干燥3小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
优选的，微波真空干燥温度20-100°C，回差温度1_5°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分钟。
优选的，微波真空干燥温度50-85°C，回差温度2-4°C，真空度_0. 07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分钟。
优选的，微波真空干燥温度55-80°C，回差温度2-3°C，真空度_0. 07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分钟。
优选的，其中所述的用于预防和治疗缺血性心脏病的药物可用于治疗以下病症的一种或几种冠心病、心绞痛、缺血性心肌病、心肌梗死、心肌缺血性卒中、急性冠状动脉综合症、冠状动脉狭窄、心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化。
优选的，其中所述丹酚酸A冻干粉针用于改善缺血心脏血流动力学的用途。
优选的，其中所述丹酚酸A冻干粉针用于改善缺血性心脏心功能的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于增加缺血性心脏的冠脉血流量的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于减少缺血性心脏心肌梗死范围的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于缩小心肌缺血范围的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于减轻心肌缺血程度的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于保护心肌细胞膜结构调节心肌酶活性的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于抑制缺血心肌组织炎症反应的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于保护心肌线粒体损伤的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善心肌代谢的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善心肌代谢的用途包括用于改善以下心肌代谢的一种或几种心肌氧自由基代谢、脂肪酸代谢、能量代谢。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于降低心肌耗氧量的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善血液流变学的用途。
优选的，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于抑制血栓形成的用途。
本发明提供的丹酚酸A冻干粉针主药是丹酚酸A，本发明通过对丹参的提取、转化、纯化、干燥工艺，得到了丹酚酸A原料经过系统的筛选和优化，首先比较确定了起始原料丹酚酸B的提取溶剂和提取方法，由于丹酚酸B水溶性较好，确定了采用水提取或低浓度醇提取，又由于丹酚酸B热稳定性较差，确定了采用热水温浸提取并加搅拌提取方法，或用低浓度乙醇回流提取，使提取溶度低于100°C，保持丹酚酸B不被破坏，通过正交实验确定了最佳溶剂用量和提取时间，得到了适应工业化生产的丹酚酸B最佳提取工艺的。
本发明与现有技术对比表明起始原料用丹参药材直接提取即可进行投料转化， 不需对丹酚酸B进行纯化后再进行转化，即本发明催化转化反应中，反应原料丹酚酸B不需要高纯度，例如不需要丹酚酸B的纯度> 50%。一般认为反应原料越纯越好，然而，本发明的实验证明，催化转化反应中，丹酚酸B的纯度高低对转化反应效果没有影响。相反，丹酚酸B纯度> 50%时不但产生大量杂质，且没有提高转化率。
再者，本发明通过反复实验比较，首先确定了对丹酚酸A产率产生重要影响的因素如转化前丹酚酸类化合物的浓度、PH值、温度、时间等。在此基础上，又通过付出大量的时间、物质和精力反复实验对温度、PH值、时间、丹酚酸B的浓度及其他相关条件进行了研究， 以及这些因素彼此之间如何协同作用共同对丹酚酸A产率产生影响，从而确定了丹酚酸B 转化丹酚酸A的需要控制的最佳温度、pH值、时间等，并将丹酚酸B起始浓度控制在Img/ ml 30mg/ml，从而使得本发明丹酚酸A转化率更加明显优于其他转化条件。化学反应中， 反应物的纯度与浓度常常影响反应的效果。一般情况下对反应物有浓度要求，且认为浓度高比浓度低好。然而，本发明的实验证明，催化转化反应中，丹酚酸B的浓度高低对转化反应效果没有影响。相反，丹酚酸B浓度高不但产生大量杂质，且没有提高转化率。而且含丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的浓度并非越高越好，30mg/ml以上浓度转化率反而低，效果更差。 因此，本发明的工艺在节约成本和生产周期方面，具有预料不到的技术效果。在现有技术没有给出任何技术启示的情况下，本领域技术人员如果仅从理论上推断，是不可能得出在上述各条件参数下将丹酸B转化成丹酚酸A主份原料具有更好的转化效果的结论。
更为重要的是，本发明通过创造性的劳动，发现氯化锌作为催化剂能显著提高丹酚酸B转化丹酚酸A主份原料的转化率，转化率非常稳定的能达到接近60 %，多数情况都可以超过60%，这在以往任何一项现有技术中都是不可能的，因此，取得了预料不到的技术效果O
由于丹酚酸A含量较低，经转化后丹酚酸A含量大提高，但还含大量杂质，因此， 分别选择了弱极性和非极性大孔吸附树脂进行粗分离，再选择聚酰胺、溶剂萃取、硅胶分离，并对不同流份进行测定，去除杂质部分后，将丹酚酸A含量从10%左右提高到80%，至 90%，至 93%，至 96%。
进一步，在显著提高转化率的同时，本发明通过适于实际产业应用的纯化步骤，尤其是通过一系列的分离、洗脱处理等步骤后，没有采用传统的常压干燥，并从真空干燥、喷雾干燥、微波真空干燥方法中优选了微波真空干燥，从而彻底克服了以往干燥温度过高，干燥时间过长及对丹酚酸A的破坏大的缺陷；而冷冻干燥时间过长，成本极高且冷冻干燥所得的提取物无法完全去除溶剂残留问题。
本发明还可以通过将低浓度与高浓度的丹酚酸B直接混合，只需配成合适的起始转化浓度，同样可以达到转化成丹酚酸A的目的，这种转化原料的制备工艺非常简单，生产成本本降低的同时非常适于实际产业中的应用。
本发明提供的丹酚酸A冻干粉针，根据丹酚酸A的化学与物理特性，从影响药物稳定的附加剂，剂型、容器、外界如空气、光线、水分，杂质等产生化学反应反而导致药剂的分解进行创造性的实验分析。通过筛选制剂处方，反复试验，选择了甘露醇、葡萄糖、乳糖等， 制成冻干粉针，粉针成型良好，块状物疏松，孔隙、色泽均匀，并且稳定性非常高，解决了由于空气、光线、水分，杂质等产生化学反应导致的药物分解。将丹酚酸A制成合适的制剂，解决了丹酚酸A制成注射剂稳定性问题，通过选择合适的辅料与剂型，保证了丹酚酸A药理作用，为临床提供安全、有效的丹酚酸A注射制剂。
基于上述原因，我们根据丹酚酸A的理化特性，通过选择合适的剂型，筛选了不同的辅料，优选了不同的制备工艺及工艺参数，制备出了稳定、安全、有效、质量可控的丹酚酸 A冻干粉针。
本发明中的丹酚酸A通过碱液将pH值调整到适合范围，再通过加入甘露醇等，使其更易于冷冻干燥，并且不影响药性。
本发明与现有技术对比表明本发明通过创造性的劳动，最终确定了冻干速度降温速度及冷冻时间，升华时升温速度与温度，确定真空升华时间，明确了干燥升温速度和温度，及干燥时间；创造性的明确定了冷冻降温速度与温度、升华升温速度与温度干燥升温速度与温度及时间之间的复杂关系，以及适宜的数值范围的确定等，从而才最终获得了稳定的冻干粉针剂。
更为重要的是，采用本发明制备方法制成的丹酚酸A冻干粉针完全可以不改变丹酚酸A原有的化学属性；制成的丹酚酸A冻干粉针与丹酚酸A相比具有水溶性好、热稳定性高、复溶性好等特点。
另一方面，本发明还提供了其用于预防和或治疗缺血性心脏病药物的用途，并且通过大量实验证明
经过实验数据对比可知,模型组缺血再灌注60min, CBF> +dp/dtmax、_dp/dtmax明显下降，LVEDP显著增高。与模型组比较，阳性药物组、丹酚酸A冻干粉针高、中、低剂量组上述指标均有明显改善，能抑制缺血再灌注引起的冠脉流量减少、左室舒张压上升、左室内压最大上升速率下降、左室内压最大下降速率下降。且丹酚酸A冻干粉针组高剂量组与阳性药物组效果相当。实验结果显示丹酚酸A冻干粉针能减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤程度，提示丹酚酸A冻干粉针能明显改善冠脉血流量、改善离体心脏主动脉舒张功能和受损心肌的舒缩功能、保护心脏缺血再灌注损伤。
经对心肌缺血大鼠心电及心功能影响的实验数据对比可知，结扎冠状动脉致大鼠长期心肌缺血模型大鼠心电图ST段显著提高，其HR、动脉压、LVSP, +dp/dtmax、-dp/dtmax均显著下降，模型组大鼠心肌收缩功能明显降低，静脉给药7d后，各药物组大鼠ST段明显下降；各项指标综合显示，各药物组中以丹酚酸A冻干粉针中、高剂量对长期心肌缺血大鼠的心电及心功能指标改善效果最为明显，提示丹酚酸A冻干粉针能降低心肌缺血大鼠ST段的升高、改善心率、增高其动脉压、改善心肌舒缩力，对心肌缺血大鼠的心电及心脏功能有明显的改善作用。
经过实验数据对比可知，丹酚酸A冻干粉针能使心肌缺血大鼠血清中SOD活性增高，抑制MDA的生成，降低血清内AST、CK和LDH活性，说明丹酚酸A冻干粉针能抑制氧自由基产生，提高心肌组织的抗氧化能力，保护心肌细胞膜，减少酶的溢出，改善心肌的能量供应，降低缺血对心肌的损伤程度，从而起到心肌缺血保护作用。
经过实验数据对比可知，心肌缺血模型组大鼠出现明显的心肌缺血梗死，梗死范围达53 %左右；与模型组相比，不同剂量丹酚酸A冻干粉针注射给药7d后，大鼠的心肌梗死范围显著降低，并呈现一定的量效关系。提示丹酚酸A冻干粉针能缩小心肌梗死范围，减轻心肌缺血损伤及心梗程度，对心肌缺血具有明显治疗作用。
光镜和电镜结果提示，丹酚酸A冻干粉针能明显改善心肌缺血大鼠的心肌病理改变，减轻心肌病理损伤，可用于缺血性心脏病的治疗。
观察大鼠心肌缺血-再灌不同时间心肌梗死范围，模型组大鼠心肌缺血I. 5h，再灌注6h后心肌梗死严重，且在恢复灌注48h内，梗死范围逐步增大，心肌损伤加剧。经过实验数据对比可知，与模型组比较，不同剂量丹酚酸A冻干粉针能明显缩小心肌梗死范围，减轻心肌缺血再灌损伤，且心肌梗死范围并不随缺血再灌时间延长而扩大；各剂量组之间存在一定剂效关系。提示丹酚酸A冻干粉针能缩小实验性心肌缺血再灌注大鼠的心肌梗死范围，减轻心肌损伤程度，对心肌缺血-再灌注损伤具有较好的防治作用。
经过实验数据对比可知，大鼠在心肌缺血-再灌注24h，心肌组织SOD、GSH-Px、CAT 酶活显著下降，MDA、XOD酶活显著升高，提示大鼠心肌缺血-再灌注后，过氧化产物堆积严重，心肌清除过氧化产物能力显著下降，缺血再灌引起大量氧自由基产生导致心肌损伤加重。药物组与模型组比较，心肌组织SOD、GSH-Px, CAT酶活不同程度升高，MDA、XOD酶活不同程度降低，丹酚酸A冻干粉针高、中剂量组效果最明显。提示丹酚酸A能增强心肌清除自由基能力，抑制氧自由基产生，增强大鼠心肌抗氧化能力，抑制心肌缺血-再灌注损伤。
经过实验数据对比可知，结扎犬冠状动脉后60min到结扎后ISOmin期间(即给药后45min到药后165min期间)，各药物组犬心外膜电图ST段抬高总数(Σ -ST)持续下降，与模型组比较均有显著性差异；恢复再灌注后，各药物组Σ -ST与模型组比较亦显著降低。丹酚酸A冻干粉针各剂量组之间存在一定量效关系，丹酚酸A冻干粉针中剂量组Σ -ST 下降幅度与O. 5mg/kg注射用盐酸地尔硫卓组相当。提示丹酚酸A冻干粉针能减轻实验缺血-再灌注犬的心肌缺血程度。提示其能保护心肌缺血损伤，对缺血性心脏病具有良好的治疗作用。
经过实验数据对比可知，结扎犬冠状动脉后60min到结扎后ISOmin期间(即给药后45min到药后165min期间)，各药物组犬心外膜电图N-ST仍持续降低，且与模型组比较均有显著性差异；恢复再灌注后，各药物组N-ST与模型组比较亦显著降低。丹酚酸A冻干粉针各剂量组之间存在一定量效关系，丹酚酸A冻干粉针中剂量组N-ST减少率与O. 5mg/kg 注射用盐酸地尔硫卓组相当。提示丹酚酸A冻干粉针能减少实验缺血-再灌注犬的心肌缺血范围。提示其能保护心肌缺血损伤，对缺血性心脏病具有良好的治疗作用。
经过实验数据对比可知，模型组犬心肌缺血-再灌注后，心肌梗死较重。丹酚酸A 冻干粉针、注射用盐酸地尔硫卓均能显著减少实验犬心肌梗死范围，且以丹酚酸A冻干粉针高剂量组犬心肌梗死比值最小。与模型组比较，丹酚酸A冻干粉针高、中剂量组能极显著减少梗死心肌占心脏及心室的比重，丹酚酸A冻干粉针低剂量犬心肌梗死区占心脏及心室的比重亦明显降低，提示丹酚酸A冻干粉针能剂量依赖性地缩小实验犬心肌梗死范围，能保护心肌缺血-再灌注损伤，用于治疗缺血性心脏病。
经过实验数据对比可知，结扎犬冠状动脉形成心肌缺血，给药后45min至给药后 225min(即结扎60min至240min)，各药物治疗组冠脉流量与给药前比较，增加了 25. 3% 52. 6%之间；以丹酚酸A冻干粉针高、中剂量组、注射用盐酸地尔硫卓组最为显著，增幅分别为52. 6%,40. 2%,36. 7%。提示丹酚酸A冻干粉针能促进侧枝循环开放，增加心肌缺血时的冠脉血流量，从而对抗心肌缺血，保护心肌缺血损伤，提示其在防治缺血性心脏病方面有一定的用途。
经过实验数据对比可知，丹酚酸A冻干粉针给药后15min(即缺血30min)能显著抑制LVEDP升高、抑制土dp/dtmax下降、抑制犬LVW减少、降低TPR，给药后45min(即缺血 60min后)能显著抑制CO下降；呈剂量依赖性；提示丹酚酸A冻干粉针给药后，能改善心肌12缺血犬血流动力学指标，增强实验犬的心肌收缩力、改善心肌舒缩功能，降低外周阻力，抑制心输出量减少、提高心脏的泵血功能，改善心肌血液供应，改善心肌缺血状态及心功能， 发挥抗心肌缺血作用。
经过实验数据对比可知，心肌缺血模型组犬血清中CK、LDH、AST、CK-MB显著升高， 说明结扎冠脉缺血后，犬心肌线粒体破坏，心肌细胞损伤，心肌酶被释放出来致血清中心肌酶活升高。丹酚酸A冻干粉针各剂量组与模型组比较，能不同程度地降低犬心肌缺血4h后血清中CK、LDH、AST、CK-MB活性，且呈剂量依赖性；说明丹酚酸A冻干粉针能能稳定心肌细胞膜，减少心肌缺血损伤时心肌酶的溢出，对缺血心肌具有明显保护作用。
经过实验数据对比可知，模型组犬在缺血4h后，血清中游离脂肪酸(FFA)、过氧化脂质(LPO)显著升高，提示心肌缺血后心肌脂肪酸代谢出现障碍，将会抑制葡萄糖氧化主要酶的活性，从而增加心肌耗氧量，扩犬心肌梗塞范围。而丹酚酸A冻干粉针各剂量组与模型组比较，能显著降低心肌缺血犬血清中FFA、LP0含量，且呈剂量依赖关系。提示丹酚酸A 冻干粉针能显著抑制血清中FFA水平升高，改善心肌脂肪酸代谢，降低乳酸的堆积，增加单位氧耗的产能量，降低心肌耗氧量，从而改善心功能，抑制心肌梗塞范围，保护心肌缺血损伤。
经过实验数据对比可知，模型组犬心肌缺血4h后血清中MDA含量显著升高，S0D、 GSH-Px活性显著下降，提示犬心肌缺血后，氧自由基生成明显增加，体内清除氧自由基的酶活显著降低，而氧自由基会通过一系列氧化反应影响细胞的正常结构和功能，加剧心肌缺血损伤程度。丹酚酸A冻干粉针各剂量组与模型组比较，能显著降低心肌缺血犬血清中MDA 的含量，同时使血清中S0D、GSH-Px活性明显增强，且呈一定的剂效关系；提示丹酚酸A冻干粉针能通过某种机制抑制脂质过氧化过程，减少氧自由基生成，同时又能提高内源性抗氧化酶活性而减轻氧自由基对心肌的损伤，提高缺血心肌的抗氧化能力而发挥抗心肌缺血作用。
经过实验数据对比可知，不同剂量的丹酚酸A冻干粉针能不同程度地减少心肌耗氧量以及氧利用率，其中丹酚酸A冻干粉针高、中剂量组缺血120min (即给药后105min)氧利用率较给药前分别降低了近20%、16%。说明丹酚酸A冻干粉针能降低心肌耗氧量及氧利用率，改善心肌氧的供需平衡，改善心室功能，发挥保护缺血心肌的作用，防治心肌缺血。
经过实验数据对比可知，不同剂量丹酚酸A冻干粉针能使心肌缺血犬血液粘度、 血浆粘度、红细胞压积及血小板粘附率不同程度地降低，明显降低血浆中纤维蛋白含量；各剂量组之间呈一定剂效趋势；提示丹酚酸A冻干粉针能降低血粘度，抑制血小板粘附聚集， 预防血管内血栓形成，改善心肌缺血犬血液流变学，改善微循环，能用于防治缺血性心脏病。
经过实验数据对比可知，不同剂量的丹酚酸A冻干粉针能显著减轻大鼠血栓湿、 干重，对血栓形成具有明显的抑制作用；各剂量组之间呈一定的量效关系。提示丹酚酸A冻干粉针具有抑制大鼠体内血栓形成的作用，提示其可用于防治血栓所致的缺血性心脏病。
医学和药学研究人员无法预先在不做相关实验的前提下，预先得知丹酚酸A冻干粉针具有上述的良好用途。


图I.
图2.
图3.
图4.
图5.
图6.具体实施方式
实施例I
取丹参药材，粉碎成6目颗粒，每次加7倍量92°C水，温浸提取3次，同时以25转 /分速度搅拌，每次温浸提取3小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 20 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每Iml含丹酚酸B20mg，水溶液用10%氢氧化钠调pH至4. 0，加入O. 5% ZnCl2作为催化剂，120°C温度加热转化4小时，转化液用20%磷酸调pH值至2. 5，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸 A3mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 50，树脂柱径高比为I : 10，分别用3倍柱体积水、5倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用4倍柱体积40%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸 A上样量与聚酰胺比为I : 10，树脂柱径高比为I : 8，分别用3倍柱体积水、12倍柱体积 40%乙醇溶液洗脱除杂，再用8倍柱体积60%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20%磷酸调 PH至2. 5，用水溶液3倍量的叔丁基甲基醚，分3次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸AO. 5g的萃取液，加入I 3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的15倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 10，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷叔丁基甲基醚(4 6)洗脱10倍柱体积，正戊烷叔丁基甲基醚出4)洗脱10倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加12倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度60°C，回差温度3°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率 20KW，干燥100分钟)干燥130分钟，得丹酚酸A。
实施例2
取丹参药材，切成饮片，每次加8倍量85°C水温浸提取3次，同时以20转/分速度搅拌，每次温浸提取2. 5小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 16 (600C )，加入乙醇使含醇量在75%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每Iml含丹酚酸 B15mg，水溶液用10%氢氧化钾调pH至4. 0，加入O. 6% ZnCl2作为催化剂，在120°C温度加热转化3. 5小时，转化液用15%盐酸调pH值至2. 5，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A5mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 45，树脂柱径高比为I : 8，分别用3. 5倍柱体积水、4倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用5 倍柱体积45%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的45%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 9，树脂柱径高比为I : 7，分别用4倍柱体积水、10倍柱体积40%乙醇溶液洗脱除杂，再用8倍柱体积65%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的65% 乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用15%盐酸调pH至2. 6，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚， 制成每Iml含丹酚酸A0. Sg的萃取液，加入2 3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的13倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 8，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂， 梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚 (6 4)洗脱8倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度50°C，回差温度3°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率20KW)干燥 140分钟，得丹酚酸A。
实施例3
取丹参药材，粉碎成直径约2mm颗粒，每次加9倍量85°C水温浸提取2次，同时以30转/分速度搅拌，每次温浸提取3. 5小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 10 (600C )， 加入乙醇使含醇量在75%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每 Iml含丹酚酸B18mg，水溶液用10%碳酸钠调pH至4. 2，加入O. 6% ZnCl2作为催化剂，在 123°C温度加热转化4. 5小时，转化液用15%硝酸调pH值至2. 8，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A6mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 40，树脂柱径高比为I : 7，分别用4倍柱体积水、4倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用5倍柱体积40%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脱部分， 减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含6mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 8，树脂柱径高比为I : 8，分别用4倍柱体积水、9倍柱体积40%乙醇溶液洗脱除杂，再用7倍柱体积65%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸AlOmg水溶液；水溶液用15%硝酸调pH至2. 6，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分离有机层，减压回收乙酸甲酯，制成每Iml含丹酚酸AO. 7g的萃取液，加入3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的10倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 7，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱9倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度60°C，回差温度1°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率10KW) 干燥110分钟，得丹酚酸A。
实施例4
取丹参药材，切成饮片，每次加10倍量80°C水温浸提取3次，同时以15转/分速度搅拌，每次温浸提取3小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 15 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每Iml含丹酚酸 B20mg，水溶液用10%碳酸氢钠调pH至5. 4，加入O. 8% ZnCl2作为催化剂，在128°C温度加热转化4. O小时，转化液用20%硫酸调pH值至2. 6，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A5mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 40，树脂柱径高比为I : 7，分别用4倍柱体积水、4倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用5倍柱体积40%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含6mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 10，树脂柱径高比为I : 15，分别用4倍柱体积水、7倍柱体积35%乙醇溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积60%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的60% 乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用20%硫酸调pH至2. 8，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚， 制成每Iml含丹酚酸AO. 5g的萃取液，加入2. 5倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的9倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 8，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂， 梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚 (6 4)洗脱8倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加10倍量水溶解， 用微波真空干燥(干燥温度80°C，回差温度5°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率60KW)干燥100分钟，得丹酚酸A。
实施例5
取丹参药材，粉碎成直径约2mm颗粒，每次加9倍量85°C水温浸提取3次，同时以20转/分速度搅拌，每次温浸提取2. 5小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 12 (600C )， 加入乙醇使含醇量在70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每 Iml含丹酚酸BlOmg，水溶液用20%柠檬酸钠调pH至5. 5，加入O. 4% ZnCl2作为催化剂，在 132°C温度加热转化3. 5小时，转化液用20%醋酸调pH值至2. 6，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A5mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 35，树脂柱径高比为I : 8，分别用3倍柱体积水、4. 5倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用6倍柱体积40%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脱部分， 减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含8mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 12，树脂柱径高比为I : 18，分别用4倍柱体积水、8倍柱体积30%乙醇溶液洗脱除杂，再用5倍柱体积65%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20%醋酸调pH至2. 7，用5倍量的叔丁基甲基醚，分5次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸AO. 5g的萃取液，加入2倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的10倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 10，以正戊烷、叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱8倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加12倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度45°C，回差温度3°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率60KW)干燥150分钟，得丹酚酸A。
实施例6
取丹参药材，粉碎成直径约2mm颗粒，每次加9倍量88°C水温浸提取3次，同时以22转/分速度搅拌，每次温浸提取3. 5小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 23 (600C )， 加入乙醇使含醇量在75%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每 Iml含丹酚酸B13mg，水溶液用10%氢氧化钠调pH至5. 6，加入O. 5% ZnCl2作为催化剂，在 133°C温度加热转化4. 5小时，转化液用10%盐酸调pH值至2. 7，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A5mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 40，树脂柱径高比为I : 9，分别用4倍柱体积水、4倍柱体积22%乙醇洗脱，除去杂质，再用6倍柱体积43%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的43%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含IOmg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 15，树脂柱径高比为I : 20，分别用4倍柱体积水、8倍柱体积30%乙醇溶液洗脱除杂，再用5倍柱体积60%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用10%盐酸调pH至2. 8，用5倍量的叔丁基甲基醚，分5次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸AO. 5g的萃取液，加入3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的12倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 10，以正戊烷、叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱6倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱7倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加10倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度70°C，回差温度2°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率5KW)干燥120分钟，，得丹酚酸A。
实施例7
取丹参药材，切成饮片，每次加9倍量90°C水温浸提取3次，同时以25转/分速度搅拌，每次温浸提取3小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 20 (600C )，加入乙醇使含醇量在 75%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每Iml含丹酚酸B20mg， 水溶液用10%碳酸钠调pH至5. 0，加入I. 0% ZnCl2作为催化剂，在135°C温度加热转化4. 5 小时，转化液用15%硫酸调pH值至3. O,离心,上清液减压浓缩至每Iml含丹酹酸A5mg,经 HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 36，树脂柱径高比为I : 9，分别用3倍柱体积水、4倍柱体积25%乙醇洗脱，除去杂质，再用5倍柱体积45% 乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的45%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每Iml含6mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 10，树脂柱径高比为I : 10，分别用4倍柱体积水、8倍柱体积45%乙醇溶液洗脱除杂，再用8倍柱体积65%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸AlOmg水溶液；水溶液用15%硫酸调pH至2. 7， 用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸AO. 6g的萃取液，加入3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的10倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 8，以正戊烷、叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱8 倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥 (干燥温度55°C，回差温度2 V，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率70KW)干燥90分钟，得丹酚酸A。
实施例8
取丹参药材，粉碎成直径约2mm颗粒，每次加9倍量85°C水温浸提取3次，同时以22转/分速度搅拌，每次温浸提取3小时；提取液减压浓缩至相对密度I. 14(600C )， 加入乙醇使含醇量在70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每 Iml含丹酚酸B25mg，水溶液用10%柠檬酸钠调pH至4. 2，加入O. 4% ZnCl2作为催化剂，在 133°C温度加热转化4. 5小时，转化液用10%盐酸调pH值至2. 8，离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸A5mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 45，树脂柱径高比为I : 10，分别用5倍柱体积水、6倍柱体积20%乙醇洗脱，除去杂质，再用5倍柱体积45%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的45%乙醇洗脱部分， 减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每Iml含8mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 12，树脂柱径高比为I : 8，分别用3倍柱体积水、6倍柱体积45%乙醇溶液洗脱除杂，再用8倍柱体积55%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的55%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每Iml含丹酚酸AlOmg水溶液；水溶液用15%盐酸调pH至2.9，用5倍量的叔丁基甲基醚，分5次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸AO. 6g的萃取液，加入2. 5倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的12倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 8，以正戊烷、叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱8倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱8倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加9倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度40°C，回差温度1°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率80KW)干燥130分钟，得丹酚酸A。
实施例9
取实施例3制成的丹酚酸A80g，加注射用水2800ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值4. 5，加入甘露醇60g使溶解，再加入维生素CO. 5g,搅拌使溶解，混匀,加入活性炭 2g搅拌吸附,滤过,除去活性炭；加注射用水至3000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000 瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以20°C /h速度降温至-40°C， 保温冷冻16小时；抽真空至O. 3mbar以下，在10小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-25 °C，维持-25 °C真空干燥8小时；继续升温，以O. 5°C /min均匀升温至41°C，维持41°C 干燥3小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例10
取实施例4制成的丹酚酸A20g，加注射用水1900ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值4. 8，加入甘露醇20g使溶解，再加入维生素CO. 8g,搅拌使溶解，混匀，加入活性炭O. 5g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至2000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以25 V /h速度降温至_45°C，保温冷冻15小时；抽真空至O. 3mbar以下，在12小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到_25°C，维持_25°C真空干燥8小时；继续升温，以O. 8°C /min均匀升温至40°C， 维持40°C干燥3小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例11
取实施例5制成的丹酚酸AlOg，加注射用水1500ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值4. 6，加入甘露醇20g使溶解，再加入维生素CO. 8g,搅拌使溶解，混匀，加入活性炭I. 2g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至2000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以25 V /h速度降温至_42°C，保温冷冻12小时；抽真空至O. 3mbar以下，在13小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到_23°C，维持_23°C真空干燥7小时；继续升温，以O. 8°C /min均匀升温至42°C， 维持42°C干燥4小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例12
取实施例6制成的丹酚酸A30g，加注射用水2000ml搅拌使溶解，用20%碳酸钠调 pH值4. 2，加入甘露醇20g、乳糖IOg使溶解，再加入硫脲O. 5g，搅拌使溶解，混匀，加入活性炭I. Og搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至2000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以29°C /h速度降温至-44°C，保温冷冻14小时；抽真空至O. 3mbar以下，在11小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到_26°C，维持_26°C真空干燥6. 5小时；继续升温，以O. 6°C /min均匀升温至43°C， 维持43°C干燥3. 5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例13
取实施例7制成的丹酚酸A35g，加注射用水2500ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钾调pH值4. 5，加入葡萄糖30g使溶解，再加入亚硫酸氢钠3g，搅拌使溶解，混匀，加入活性炭I. 5g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至3000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以27V /h速度降温至-43°C，保温冷冻11小时；抽真空至O. 3mbar以下，在12. 5小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到_24°C，维持_24°C真空干燥7. 5小时；继续升温，以O. 7°C /min均匀升温至 400C，维持40°C干燥5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例14
取实施例8制成的丹酚酸A40g，加注射用水2700ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值4. 3，加入葡萄糖20g、乳糖20g使溶解，再加入焦亚硫酸钠4g，搅拌使溶解，混匀， 加入活性炭I. 5g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至3000ml，检测中间体含量，pH 值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以28°C /h速度降温至-41 °C，保温冷冻13小时；抽真空至O. 3mbar以下，在13. 5小时内将冻结的丹酚酸A 制剂温度上升到-25. 5°C，维持-25. 5°C真空干燥6. 5小时；继续升温，以O. 9V /min均匀升温至44°C，维持44°C干燥3. 5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例15
取实施例I制成的丹酚酸A60g，加注射用水2700ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值4. O,加入甘露醇40g使溶解，再加入维生素C2g，搅拌使溶解，混匀，加入活性炭2g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至3000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以24. 5°C /h速度降温至-42. 5°C，保温冷冻11. 5小时；抽真空至O. 3mbar以下，在13. 5小时内将冻结的丹酚酸A 制剂温度上升到-24. 50C，维持-24. 5°C真空干燥6. 5小时；继续升温，以O. 55°C /min均匀升温至42. 5°C，维持42. 5°C干燥2. 5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实施例16
取实施例2制成的丹酚酸A70g，加注射用水2800ml搅拌使溶解，用10%氢氧化钠调pH值5. O,加入甘露醇40g使溶解，再加入维生素C2g，搅拌使溶解，混匀，加入活性炭2g搅拌吸附，滤过，除去活性炭；加注射用水至3000ml，检测中间体含量，pH值，检测合格后用O. 22 μ m微孔滤膜滤过，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，共制成1000瓶，装盘，灌装完成后，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，以28. 5°C /h速度降温至-44. 5°C，保温冷冻11. 5小时；抽真空至O. 3mbar以下，在13. 5小时内将冻结的丹酚酸A 制剂温度上升到-24. 50C，维持-24. 5°C真空干燥6. 5小时；继续升温，以O. 75°C /min均匀升温至43. 5°C，维持43. 5°C干燥3小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
实验例I :丹酚酸A、丹酚酸B分析方法研究
I.仪器与试药
仪器Waters e2695高效液相色谱仪，Empower2色谱工作站,2998 二极管阵列检测器；Sartorius cp225D十万分之一电子天平。
色谱柱YMCC18 色谱柱(250 X 4. 6mm，5 μ m);
试剂甲醇为色谱纯，水为Millipore制备的超纯水，其他试剂均为分析纯。
丹酚酸B对照品(批号111562-201009)均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用；丹酚酸A对照品为自制，经纯度标化含量为99. 52%。
2.对照品溶液及供试品溶液的制备
2.1对照品溶液的制备分别精密称取丹酚酸B、丹酚酸A对照品约10mg，置 IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液；再分别精密吸取上述各1ml，置同一 IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。
2. 3供试品溶液的制备精密称取实施例I样品(约相当于丹酚酸AlOmg)以及下述“实验例2中I. 3丹酚酸B原料制备”获得样品(约相当于丹酚酸BlOmg)，，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速I. Oml/min ;检测波长取混合对照品溶液，进行紫外扫描，结果在286nm波长处有最大吸收，故确定检测波长为286nm ;柱温30°C ； 理论板数按丹酚酸A峰计算应不低于10000。
0-10分钟时，甲醇的比例由30%升至40%，O. 1-0. 5%磷酸水溶液的比例由70% 降至60% ;10-30分钟时，甲醇的比例由40%升至55%，0. 1_0. 5%磷酸水溶液的比例由 50%降至45% ;30-60分钟时，甲醇的比例由55%升至80%,O. I-O. 5%磷酸水溶液的比例由45%降至20%。
在上述条件下，丹酚酸A、丹酚酸B对照品和丹参提取液、丹酚酸催化转化液的色谱峰保留时间见表1，HPLC图谱见图I、图2、图3、图4。
表I.各对照品的色谱峰保留时间结果 ~ 保留时间(min)
乃酚酸 B21.76J'H份酸 A27.16
4、线性关系的考察
精密吸取上述混合对照品溶液O. lml、0.2ml、0.5ml、lml、2ml、5ml，分别置IOml 量瓶中，加甲醇稀释成以下浓度约为0. 001mg/ml、0. 002mg/ml、0. 005mg/ml、0. 01mg/ml、0.02mg/ml、0. 05mg/ml的系列标准溶液。精密吸取上述标准溶液各10 μ I注入液相色谱仪, 按“3.色谱条件与系统适用性试验”项下色谱条件计算峰面积，分别以峰面积积分值为纵坐标，各浓度对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。结果表明混合对照品溶液在如下范围内成良好的线性关系，表2。
表2.混合对照品溶液线性关系结果
权利要求
1.一种丹酚酸A冻干粉针用于制备预防和治疗缺血性心脏病药物的用途，所述丹酚酸A冻干粉针其重量配比为丹酚酸A IOg 80g，填充剂IOg 80g，抗氧剂为制成总量的·0.01% 0.2% ;所述丹酚酸A冻干粉针的制备方法为 取丹參药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，毎次加3 15倍量、45 95 °C水温浸提取，同时以10 50转/分速度搅拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小时；提取液减压浓缩至相对密度I. O I. 25 (600C )，加入こ醇使含醇量在50% 85%，静置，滤过，滤液减压回收こ醇并浓缩至无醇味，得丹參提取液；或者取丹參药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，毎次加3 15倍量30% 60%こ醇回流提取，每次提取I 4小时，共提取I 3次；减压回收こ醇并浓缩至无醇味，得丹參提取液； 上述丹參提取液加水稀释至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用碱调pH至3. 5 ·6.5，加入与丹酚酸B摩尔百分比O. I 3%氯化锌作为催化剂，在100 140°C温度加热转化I 6小时； 转化液调PH值至2. 5 4. 5，静置、离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸Al 10mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为I : 35 I 70，树脂柱径高比为I : 4 I : 30，分别用I 8倍柱体积水、I 10倍柱体积10% ·40%こ醇洗脱，除去杂质，再用2 10倍柱体积20% 60%こ醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的20% 60%こ醇洗脱部分，减压回收こ醇并浓缩至无醇味； 水溶液浓缩至每Iml含I-IOmg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为I : 5 I : 25，树脂柱径高比为I : 4 I : 25，分别用I 10倍柱体积水、5 20倍柱体积20% 60%こ醇溶液洗脱除杂，再用4 15倍柱体积40% 90%こ醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的40% 90%こ醇溶液部分，减压回收こ醇并浓缩至无醇味水溶液； 水溶液浓缩，调酸pH至2. O 4. 0，用水溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成姆Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅胶，搅拌，挥干； 把搅拌样硅胶加到已装好的5 20倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为I : 4 I : 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脱·6 30倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脱6 30倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A ； 取所述丹酚酸AlOg 80g加注射用水1500 2800ml搅拌使溶解，用碱调pH值4. O ·5.O,加入所述填充剂使其溶解，再加入所述抗氧剂，搅拌使溶解混匀，再加入活性炭O. 5 ·2g搅拌吸附，滤过除去活性炭，加注射用水后灌装成瓶，送入冻干机中进行冷冻燥； 所述冷冻干燥包括如下步骤 A、冷冻以20°C 30°C/h速度降温至-40°C -45°C，保温冷冻10 16小时； B、升华抽真空至O.3mbar以下，在10 14小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-23°C _27°C，维持-23°C -27°C真空干燥6 8小时； C、干燥继续升温，以O.5°C I. (TC /min均匀升温至40°C 45°C，维持40°C 45°C干燥2 5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
2.根据权利要求I所述的用途，其中所述填充剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖中的任意一种或几种，用量为20mg 40mg/2ml 3ml。
3.根据权利要求I或2所述的用途，其中所述抗氧剂选自维生素C、硫脲、亚硫酸氧钠、焦亚硫酸钠中的任意ー种或几种。
4.根据权利要求3所述的用途，其重量配比为丹酚酸A20g，填充剂甘露醇20g，抗氧剂维生素CO. 8g ;其制备方法为 取所述丹酚酸A20g，加注射用水1900ml搅拌使溶解，用氢氧化钠钠调pH值4. O 5. O,加入甘露醇20g使溶解，再加入O. 8g维生素C，搅拌使溶解混匀，加入活性炭O. 5g搅拌吸附，滤过除去活性炭；加注射用水至2000ml，灌装成1000瓶，冷冻干燥； 所述冷冻干燥包括如下步骤 A、冷冻以25°C/h速度降温至_45°C，保温冷冻15小时； B、升华抽真空至O.3mbar以下，在12小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-25°C，维持-25°C真空干燥8小时； C、干燥继续升温，以O.8°C /min均匀升温至40°C，維持40°C干燥3小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
5.根据权利要求I所述的ー种用途，其特征在于微波真空干燥温度20-100で，回差温度1-5°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分钟。
6.根据权利要求5所述的ー种用途，其特征在于微波真空干燥温度50-85°C，回差温度2-4°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分钟。
7.根据权利要求6所述的ー种用途，其特征在于微波真空干燥温度55-80°C，回差温度2-3°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分钟。
8.根据权利要求I的用途，其中所述的用于预防和治疗缺血性心脏病的药物可用于治疗以下病症的ー种或几种冠心病、心绞痛、缺血性心肌病、心肌梗死、心肌缺血性卒中、急性冠状动脉综合症、冠状动脉狭窄、心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化。
9.根据权利要求I或8的用途，其中所述丹酚酸A冻干粉针用于改善缺血心脏血流动力学的用途。
10.根据权利要求9的用途，其中所述丹酚酸A冻干粉针用于改善缺血性心脏心功能的用途。
11.根据权利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于增加缺血性心脏的冠脉血流量的用途。
12.根据权利要求I或8的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于减少缺血性心脏心肌梗死范围的用途。
13.根据权利要求12的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于缩小心肌缺血范围的用途。
14.根据权利要求12的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于减轻心肌缺血程度的用途。
15.根据权利要求12的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于保护心肌细胞膜结构调节心肌酶活性的用途。
16.根据权利要求12的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于抑制缺血心肌组织炎症反应的用途。
17.根据权利要求12的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于保护心肌线粒体损伤的用途。
18.根据权利要求I或8的的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善心肌代谢的用途。
19.根据权利要求18的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善心肌代谢的用途包括用于改善以下心肌代谢的ー种或几种心肌氧自由基代谢、脂肪酸代谢、能量代谢。
20.根据权利要求I或8的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于降低心肌耗氧量的用途。
21.根据权利要求I或8的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于改善血液流变学的用途。
22.根据权利要求I或8的用途，其中所述的丹酚酸A冻干粉针用于抑制血栓形成的用途。
全文摘要
本发明涉及一种丹酚酸A冻干粉针用于制备预防和治疗缺血性心脏病药物的用途，所述丹酚酸A冻干粉针其重量配比为丹酚酸A 10g～80g，填充剂10g～80g，抗氧剂为制成总量的0.01％～0.2％，其中制备方法的冷冻干燥包括如下步骤A、冷冻以20℃～30℃/h速度降温至-40℃～-45℃，保温冷冻10～16小时；B、升华抽真空至0.3mbar以下，在10～14小时内将冻结的丹酚酸A制剂温度上升到-23℃～-27℃，维持-23℃～-27℃真空干燥6～8小时；C、干燥继续升温，以0.5℃～1.0℃/min均匀升温至40℃～45℃，维持40℃～45℃干燥2～5小时后，将样品温度降至室温，加盖，即得丹酚酸A冻干粉针。
文档编号C07C67/30GK102973544SQ201210487270
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者刘地发, 李志勇, 程帆, 欧阳婷, 罗恒真, 刘尧奇, 刘艳红 申请人:陈飞虹