丹酚酸b纳米制剂的用图
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种丹酚酸B纳米制剂的新用途。
【背景技术】
[0002] 丹酚酸B是丹参主要水溶性有效成分之一，又称为丹参酸B。丹酚酸B(Salvianolic acid B，Sal B)是一种具有如下结构式所示的的化合物，可从唇形科植物丹参 (SalviamiItiorrhiza Bunge)的干燥根中提取获得，产品外观为棕黄色干燥粉末，味微苦、 涩，可溶于水、乙醇或甲醇等溶液
[0004] 丹酚酸B作为丹参中的主要水溶性成分，在治疗心血管疾病、慢性肝炎、抗肝纤维 化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等方面发挥着重要作用。现代中医药将丹参药物 制备成各种剂型药物，如胶囊、滴丸、片剂或注射剂等，用于活血化瘀、理气止痛、因瘀血阻 滞经络所致缺血性中风、虚弱无力、拘挛疼痛或运动不遂，口眼歪斜等病症。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种丹酚酸B纳米制剂抑制头颈肿瘤细胞系HN13和HN30及白 斑细胞系Leukl的生长、阻滞细胞增殖周期及促进细胞凋亡的用途，为预防或治疗口腔头颈 肿瘤或口腔黏膜白斑病症提供一种新的药物。
[0006] 本发明采用丹酚酸B纳米制剂技术促进细胞对药物的摄取率，所述丹酚酸B纳米制 剂如文南犬 Qiang Peng，Zhi-Rong Zhang , Xun Sun, Jiao Zuo , Dong Zhao , and Tao Gong.Meehanisms of Phospholipid Complex Loaded Nanoparticles Enhancing the Oral BioavailabiIity[J] .Molecular Pharmaceutics·2010.VOL.7,NO.2,565-575中公开 方法制备获得或其他现有技术公开方法制备获得。
[0007] 本发明将通过激光共聚焦显微镜观测单纯药物丹酚酸B(Sal Β-Free)和丹酚酸B 纳米制剂(Sal B-PLC-NPs)对Leukl、HN13和HN30细胞定性摄取的差异。
[0008] 荧光分光光度计分析研究单纯药物丹酚酸B(Sal Β-Free)和丹酚酸B纳米制剂 (Sal B-PLC-NPs)对Leukl、HN13和HN30细胞定量摄取的差异。
[0009] MTS方法研究比较单纯药物丹酚酸B(Sal Β-Free)和丹酚酸B纳米制剂（Sal B-PLC-NPs)对Leukl、HN13和HN30细胞增殖抑制作用的差异。
[0010] 同时用流式细胞仪来分析比较单纯药物丹酚酸B(Sal Β-Free)和丹酚酸B纳米制 剂(Sal B-PLC-NPs)对Leukl、HN13和HN30细胞周期阻滞作用的差异及诱导细胞凋亡作用的 差异。
【附图说明】
[0011]图1激光共聚焦显微镜观测细胞定性摄取示意图。
[0012] 图2荧光分光光度计分析细胞定量摄取作用示意图。
[0013] 图3 MTS方法检测观察药物对细胞增殖抑制作用示意图。
[0014] 图4流式细胞仪检测分析细胞周期阻滞作用示意图。
[0015] 图5 Annexin V-PI实验细胞凋亡率示意图。
【具体实施方式】
[0016] 除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域 普通技术人员通常理解的含义相同。通常，本发明使用的命名及下述实验方法都是本领域 公知的或常用的，若未特别指明，本发明实施例中所用的试剂或实验材料均可市售获得。为 了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体实施例， 对本发明作进一步的说明。
[0017] 本发明实施例中所使用的细胞分别为头颈肿瘤细胞系HN13和HN30细胞和白斑细 胞系Leukl细胞。
[0018] 实施例1:
[0019] 细胞培养液成分及含量为:HN13和HN30用DMEM培养液(型号C40306,购于上海源培 生物科技股份有限公司）培养，每瓶500ml的培养液加入50ml的胎牛血清（Gibco，USA， 26140-079)，并加入青霉素和链霉素浓度均为100units/ml;Leukl用K-SFM培养液(GIB⑶， Grand Island，NY，USA)培养，使用前加入1支产品包装中的表皮生长因子，避光4°C冰箱保 存。
[0020] 将HN13、HN30和Leukl细胞接种于有细胞爬片的24孔板中，24h后待细胞贴壁，更换 含药物浓度为200μg/ml的单纯药物丹酚酸B(Sal B-Free)和丹酚酸B纳米制剂(Sal B-PLC-NPs)的培养液，分别作用HN13、HN30和Leukl细胞2h，采用激光共聚焦显微镜观测细胞定性 摄取的差异。
[0021] 结果如图1所示：
[0022] 图A表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 HNl 3细胞2h，采用激光共聚焦显微镜观测细胞定性摄取示意图；
[0023] 图B表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 HN30细胞2h，采用激光共聚焦显微镜观测细胞定性摄取示意图；
[0024] 图C表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 Leukl细胞2h，采用激光共聚焦显微镜观测细胞定性摄取示意图。
[0025] 将含Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度为200μg/ml培养液作用于HN13细胞培 养2h后，激光共聚焦显微镜直观显示后者胞质中有更明显的荧光团。
[0026] 实施例2:
[0027] 将HN13、HN30和Leukl细胞接种于96孔板中，待24h后细胞贴壁，更换含单纯药物丹 酚酸8(3&184^6)和丹酚酸8纳米制剂（3&18-?^：-即8)药物浓度梯度为25以8/1111、5(^ 8/ ml、100μg/ml和200μg/ml的培养液，分别作用于HN13、HN30和Leukl细胞培养中于5min、 10min、20min、30min、60min和120min时间点，采用焚光分光光度计分析细胞定量摄取的差 异。
[0028] 结果如图2所示：
[0029] 图A表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量分别为25μg/ml、50μg/ml、100 μg/ml和200μg/ml的培养液，培养HN13细胞2h时，荧光分光光度计分析细胞定量摄取作用示 意图；
[0030] 图B表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 HN13细胞5min、10min、20min、30min、60min和120min时，焚光分光光度计分析细胞定量摄取 作用不意图；
[0031] 图C表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量分别为25μg/ml、50μg/ml、100 μg/ml和200μg/ml的培养液，培养HN30细胞2h时，荧光分光光度计分析细胞定量摄取作用示 意图；
[0032] 图D表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 HN30细胞5min、10min、20min、30min、60min和120min时，焚光分光光度计分析细胞定量摄取 作用不意图；
[0033] 图E表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量分别为25μg/ml、50μg/ml、100 μg/ml和200μg/ml的培养液，培养Leukl细胞2h时，荧光分光光度计分析细胞定量摄取作用 示意图；
[0034] 图F表示Sal B-Free和Sal B-PLC-NPs药物浓度含量为200μg/ml的培养液，培养 1^1^1细胞5111；[11、10111；[11、20111；[11、30111；[11、60111；[11和120111；[11时，焚光分光光度计分析细胞定量摄 取作用示意图。
[0035] 含Sal B-PLC-NPs药物浓度为25μg/ml、50μg/m