一种总蟾毒内酯纳米胶束制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制剂领域，涉及一种总蟾毒内酯纳米胶束及其制备方法，更具体地说，本发明涉及一种有助于避免体内的网状内皮系统吞噬并可以稳定贮存的总蟾毒内酯纳米胶束及其制备方法。
【背景技术】
[0002]华蟾素提取自中药中华大蟾蜍皮，系采用传统方法水提醇沉法值得的中药注射液，华蟾素注射液抗肿瘤疗效显著，但存在有效成分含量低，杂质多，质量及临床疗效不稳定、毒副作用大等严重缺陷。经研宄发现，华蟾素注射液中具抗肿瘤活性的总蟾毒内酯类(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)成分含量极低，主要为水溶性吲哚类生物碱(如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等)类、氨基酸等成分，而大量的内酯类有效成分损失殆尽，目前尚未有生物碱成分有抗肿瘤活性的研宄报道，且临床研宄认为华蟾素不良反应心律失常、局部静脉刺激反应、皮肤反应、哮喘、超敏反应等均为水溶性吲哚类生物碱成分的药理作用所致。因此，提取纯化华蟾素的重点在于富集内酯类成分和去除生物碱及其他杂质成分，特别是生物碱成分。
[0003]对华蟾素提取液进行分离纯化，得华蟾素有效部位一一总蟾毒内酯，主要含有蟾毒配基(resibufogenin)、华蟾酥毒基(cinobufagin)、蟾毒灵(bufalin)、蟾毒它灵(Bufotalin)、日蟾毒它灵-3-半辛二酸醋(Gamabufotalin-3-hydrogenSuberate)、蟾餘灵-3- 丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精-3- 丁二酰精氨酸酯等内酯类成分。目前市场上中药注射液普遍存在的诸多问题，开发出工艺先进、质量稳定、疗效高、毒副作用少的中药注射制剂是十分必要的，鉴于总蟾毒内酯具有独特的技术优势，我们对华蟾素注射液进行二次深度开发，研制了总蟾毒内酯冻干制剂一一 “注射用华蟾内酯”。
[0004]聚合物胶束制剂作为药物载体的开发研宄源于20世纪90年代，它是由两亲性聚合物在水溶液中自发形成的一种自组装结构。聚合物胶束粒径一般小于lOOnm，具有载药量高、载药范围广、稳定性好、体内滞留时间长等特点，可有效地提高药物的稳定性和生物利用度，减轻不良反应。然而由单一聚合物自组装形成的胶束由于链段数量的限制，通常面临载药量低，稳定性差，生物利用度低等问题。近年来出现了大量有关纳米胶束的研宄报道，纳米胶束是2种或2种以上表面活性剂按一定比例混合而得到的胶束体系，其稳定性高于单组分胶束。与单一胶束比较，包载的药物及其在纳米胶束的药物稳定性得到很大的提高。通过形成纳米胶束，可实现调整胶束的释放和功能。
[0005]综上所述，将总蟾毒内酯制成纳米胶束，可达到改善药物的水溶性，提高药物的生物利用度，延长药物作用时间等目的。因此，研宄开发出总蟾毒内酯的新剂型是非常必要的。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一种总蟾毒内酯纳米胶束；
[0007]本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种总蟾毒内酯纳米胶束冻干针剂；
[0008]本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种总蟾毒内酯纳米胶束及总蟾毒内酯纳米胶束冻干针剂的制备方法。
[0009]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:
[0010]本发明首先公开了一种总蟾毒内酯纳米胶束，包括以下各组分:总蟾毒内酯、聚乙二醇衍生化磷脂、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物、冻干支架剂、PH调节剂、NaCl和注射用水。
[0011]各组分的重量百分含量为:总蟾毒内酯0.01?0.3%，聚乙二醇衍生化磷脂I?15%、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物I?15%、冻干支架剂5?20%、pH调节剂0.01-0.05%,NaCl0.2-0.4%，余量为注射用水；
[0012]其中，聚乙二醇衍生化磷脂选自聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺、聚乙二醇4000 二棕相酞磷脂酞乙醇胺、聚乙二醇2000 二油酞磷脂酞乙醇胺和聚乙二醇4000磷脂酞乙醇胺；优选聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺、聚乙二醇4000 二棕相酞磷脂酞乙醇胺任意一种或两种。
[0013]所述聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物选自泊洛沙姆F68、F108、F127、P105、L61、P123、L121。优选泊洛沙姆F68、F108任意一种或两种或不加入，但加入后可明显降低胶束粒径，增加包封率。
[0014]所述冻干支持剂选自乳糖、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、麦芽糖中的一种或多种。优选为甘露醇、葡萄糖中任意一种或两种。
[0015]所述pH值调节剂选自盐酸、乳酸、氢氧化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、酒石酸、酒石酸钠、醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或多种。优选为枸橼酸和枸橼酸钠缓冲液或磷酸盐缓冲液
[0016]本发明还公开了一种所述总蟾毒内酯纳米胶束的制备方法，包括以下步骤:
[0017](I)按上述原辅料重量百分比分别称取总蟾毒内酯、聚乙二醇衍生化磷脂、冻干支架剂、PH调节剂、NaCl和水，备用；
[0018](2)将总蟾毒内酯和聚乙二醇衍生化磷脂溶于有机溶剂中，混合分散均匀，减压除去有机溶剂，得到总蟾毒内酯的聚合物脂膜，其中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、正己烷、丙酮中的一种或几种；
[0019](3)向所得的聚合物脂膜中加入溶有冻干支架剂和的水溶液，再加入pH调节剂调节pH值为6.0?8.0，水浴加热进行水化，得到总蟾毒内酯的聚乙二醇衍生化磷脂包载纳米胶束溶液；
[0020](4)将得到的胶束溶液冷冻干燥，得到总蟾毒内酯纳米胶束的冻干制剂。
[0021]本发明所制备的总蟾毒内酯纳米胶束粒径为80-250nm，包封率为50% -90%。
[0022]本发明中所述聚乙二醇衍生化磷脂、氧乙烯-聚氧丙烯聚合物有机溶剂的不同种类及其不同用量对总蟾毒内酯纳米胶束平均粒径、多分散系数(roi)、包封率起重要影响作用。其中，总蟾毒内酯与聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺、甘露醇、枸橼酸和NaCl制备的总蟾毒内酯纳米胶束质量评价较好。优选的，总蟾毒内酯0.lmg，聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺8mg、泊洛沙姆F6810mg、甘露醇12mg、枸橡酸0.02mg和NaCl0.3mg，无水乙醇与丙酮(体积比1:2)所制得的总蟾毒内酯纳米胶束平均粒径为130.7nm，包封率为85.3%，质量评价最好。因为，总蟾毒内酯纳米胶束的粒径越小、分散系数越小，其制得的冻干粉针剂药物的靶向性越好；单位投药量包封率越大，其可作用于肿瘤细胞的药量越大，效果越好。
[0023]本发明还公开了一种所述总蟾毒内酯纳米胶束冻干针剂的制备方法，包括以下步骤:按照所述配比向总蟾毒内酯纳米胶束中加入冻干保护剂，冷冻干燥，即得。
[0024]本发明所制得总蟾毒内酯纳米胶束冻干针剂用注射用水溶解，以纳米粒大小、粒径分布和包封率做质量评价，复溶后所测得的总蟾毒内酯纳米胶束粒径为80-250nm，包封率为30% -90% ;最优的，复溶后所测得的总蟾毒内酯纳米胶束平均粒径为130.7nm，包封率为85.3%o
[0025]本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果:
[0026]本发明总蟾毒内酯纳米胶束冻干针剂复溶后所测得的总蟾毒内酯纳米胶束粒径为80-250nm，包封率为30% -90% ;能够有效提高总蟾毒内酯的肿瘤细胞靶向性，降低毒副作用，同时具有缓释、延长生物半衰期的作用。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0028]实施例1总蟾毒内酯纳米胶束的制备
[0029]将Img总蟾毒内酯和SOmg聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺溶于ImL无水乙醇与丙酮(体积比1:1)混合溶液中有机溶剂中，混合分散均匀，减压除去有机溶剂，得到总蟾毒内酯的聚合物脂膜。将120mg甘露醇、10mg泊洛沙姆F68溶于0.7mL注射用水中，加入所得的聚合物脂膜中，再加入PH调节剂调节pH值为7.0，水浴加热至60°C进行水化2h，得到总蟾毒内酯的聚乙二醇衍生化磷脂包载纳米胶束溶液；将得到的胶束溶液冷冻干燥，得到总蟾毒内酯纳米胶束的冻干制剂。
[0030]检测:总蟾毒内酯纳米胶束平均粒径为130.7nm，包封率为85.3%。
[0031]实施例2总蟾毒内酯纳米胶束的制备
[0032]将Img总蟾毒内酯和80mg聚乙二醇4000 二棕相酞磷脂酞乙醇胺溶于ImL无水乙醇与丙酮(体积比1:1)混合溶液中有机溶剂中，混合分散均匀，减压除去有机溶剂，得到总蟾毒内酯的聚合物脂膜。将120mg甘露醇、10mg泊洛沙姆F68溶于0.7mL注射用水中，加入所得的聚合物脂膜中，再加入PH调节剂调节pH值为7.0，水浴加热至60°C进行水化2h，得到总蟾毒内酯的聚乙二醇衍生化磷脂包载纳米胶束溶液；将得到的胶束溶液冷冻干燥，得到总蟾毒内酯纳米胶束的冻干制剂。
[0033]检测:总蟾毒内酯纳米胶束平均粒径为148.6nm，包封率为70.4%。
[0034]实施例3总蟾毒内酯纳米胶束的制备
[0035]将Img总蟾毒内酯和SOmg聚乙二醇2000 二硬脂酸磷脂酞乙醇胺溶于ImL无水乙醇与丙酮(体积比1:1)混合溶液中有机溶剂中，混合分散均匀，减压除去有机溶剂，得到总蟾毒内酯的聚合物脂膜。将120mg甘露醇、10mg泊洛沙姆F68溶于0.7mL注射用水中，加入所得的聚合物脂膜中，再加入PH调节剂调节pH值为7.0，水浴加热至60°C进行水化lh，得到总蟾毒内酯的聚乙二醇衍生化磷脂包载纳米胶束溶液；将得到的胶束溶液冷冻