冻干制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生产多肽组合物的方法，该方法包括：将多肽与挥发性添加剂混合以形成液体混合物和将该液体混合物冻干以获得冻干的多肽组合物。
【专利说明】冻干制剂
发明领域
[0001]本发明涉及用于减少冻干的生物分子的重构时间(reconstitution time)的制剂和使用方法。
[0002]发明背景
[0003]冻干法是从溶液中除去溶剂以形成固体或粉末的方法，这些固体或粉末在升高的温度比液体稳定和更易于储存。冻干，也被称为冷冻干燥，包括冷冻及后续的升华。生成的冻干的物质可以不冷藏储存，从而减少该物质的储存和运输成本及产品所需的储存空间。其也可减少产品的重量，这同样地减少运输和相关的成本。冻干法尤其用于保存和储存各种生物分子，因为其增加了它们的保存期限。
[0004]由于化学基团的数目和维持天然折叠对稳定性的依赖性，生物分子比小分子更难通过配制加以稳定。因此，很多商业生物分子为冻干的。通常，冻干法通过以下两方面改善了稳定性:(i)除去水(因为大多数生物化学降解为水解)和(ii)降低了系统整体的流动性(因为侧链和分子的动态运动是化学和物理降解事件发生所必需的)。
[0005]冻干的生物分子在使用前重构，通常就在其冻干和储存的容器中进行。对于医生和患者而言短的重构时间是优选的。如果冻干的生物分子的重构时间太长，将增加制备时间从而使得难以同时向很多患者给药。此外，很多生物分子设计成患者自助给药。更短的重构时间确保患者在给药前完全地重构了该生物分子，从而改善安全性和有效性。
[0006]之前减少重构时间的努力主要集中在重构缓冲液的制剂上。与之相反，本发明涉及向用于冻干生物分子的缓冲液的制剂中加入挥发性添加剂。因此，对减少冻干的生物分子重构时间的方法和组合物存在需要。
[0007]发明概述
[0008]本发明涉及生产多肽组合物的方法，其包括将多肽与挥发性添加剂组合以形成液体混合物和将该液体混合物冻干以获得冻干的多肽组合物。
[0009]本发明还涉及减少冻干的多肽组合物的重构时间的方法，其包括:a)将含有多肽的液体混合物冻干，其中该液体混合物包含挥发性添加剂；和b)用对冻干的多肽组合物而言足量的可药用分散剂重构该冻干的多肽以生成液体多肽组合物，其中在挥发性添加剂存在下冻干的多肽重构的时间少于在无挥发性添加剂下冻干的相同多肽重构的时间。
[0010]本发明还涉及生产液体多肽组合物的方法，其包括:获得通过本发明的方法生产的冻干的多肽，和用足量可药用分散剂重构该冻干的多肽以生成液体多肽组合物。
[0011 ] 本发明还涉及适于冻干多肽的制剂。
[0012]本发明还涉及通过本发明的方法生产的干燥多肽组合物。
[0013]本发明还涉及通过本发明的方法生产的液体多肽组合物。
[0014]附图简述
[0015]图1.使用振摇法的亲液物(Iyophile)重构时间图。
[0016]图2.使用静置法的亲液物重构时间图。
[0017]图3.亲液物重构时间与样品编号的关联图。(A)箱线图总结了所有测试的平均重构时间与样品编号的关联。接近零点的箱线边界表示第25百分位数，箱中的线表示中位数，且远离零点的箱线边界表示第75百分位数。箱线上方和下方的须线(误差条线)表示第90百分位数和第10百分位数。低于第10百分位数或高于第90百分位数的极端值以符号标示。(B)所有亲液物重构时间以与样品编号关联来绘制。
[0018]图4.亲液物重构时间与样品编号的关联图，按分析者和重构方法区分。
[0019]图5.阿必鲁泰(Albiglutide)的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。
[0020]图6.比较添加或未添加2%叔丁醇条件下冻干的样品的重构终点的直方图。条表示所有测试的平均数而须线表示所有测试的一个标准偏差，作为与样品类型关联。
[0021]图7.比较添加或未添加2%叔丁醇条件下冻干的样品的重构终点的直方图。条表示所有测试的平均数而须线表示所有测试的一个标准偏差，作为与样品类型关联。
[0022] 图8.抗-NOGO mAb重链的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)和抗-NOGO mAb轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)。
[0023]图9.抗-TNFRldAb 的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)。
[0024]图10.1L18 的氨基酸序列(SEQ ID N0:6)。
[0025]图11.抗-1L5重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)和抗-1L5轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)o
[0026]图12.抗-CD20VH域的氨基酸序列(SEQ ID NO:9)和抗-CD20VL域的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)。
[0027]发明详述
[0028]本发明提供了(尤其是)冻干制剂。本发明还提供了(尤其是)冻干制剂的制备方法和使用方法。发明人发现当向多肽的冻干制剂中加入挥发性添加剂时，该冻干的多肽的重构时间减少。本发明还涉及通过本发明的方法生产的干燥多肽组合物。
[0029]本发明提供了可用于生产多肽组合物的许多方法、试剂和化合物，其包括将多肽和挥发性添加剂组合以形成液体混合物和将该液体组合物冻干以获得冻干的多肽组合物。
[0030]本文提供了用于由液体溶液冻干多肽的方法和包含由这样冻干的液体溶液获得的冻干的多肽的产品。在一些实施方案中，该挥发性添加剂溶解在含有多肽的水性溶液中并冻干以生成含有冻干的多肽的固体组合物。在一些实施方案中，这些含有冻干的多肽的固体组合物稳定并适于储存，例如适于长时间储存。这种储存可在环境条件下、可在受控的温度下、可在受控的湿度下，或其它条件或条件的组合下；且可储存在密封的容器(例如，带有可移除盖子的瓶或罐、管、囊、囊片、小瓶、注射器、双筒注射器或其它容器)中，且可在惰性气体(例如，氮气、氩气、氦气或其它惰性气体)下的密封容器中，或在其中含或不含其它元素或化合物的其它容器中。
[0031]应当理解，本发明不限于具体的方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，其当然可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅为描述具体的实施方案，而不是为了限制。如本说明书及所附权利要求书中使用的，除非内容明确另有所指，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括所指事物的复数形式。因此，例如，提及“多肽”包括两种或多种多肽的组合等。
[0032]当涉及可测量值如量、持续时间等时，本文所用的“约”是指涵盖从特定数值的±20%或±10%的变体(包括±5%、±1%和±0.1%),这样的变体适于施行所公开的方法。
[0033]除非另有所指，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。尽管任何与本文所述的方法和材料相似或相当的方法和材料可用于本发明测试的实践中，但优选的材料和方法如本文所述。在描述和请求本发明中，将用到以下术语。
[0034]本文所鉴定的所有“氨基酸”残基为天然的L-构型。与标准多肽命名一致，氨基酸残基的缩写如下表所示。
[0035]
【权利要求】
1.制备多肽组合物的方法，其包括:将多肽与挥发性添加剂混合以形成液体混合物，并将该液体混合物冻干以获得冻干的多肽组合物，其中所述液体混合物包含约2%体积的挥发性添加剂，且所述挥发性添加剂为叔丁醇。
2.权利要求1的方法，其中所述多肽为抗原结合多肽。
3.权利要求1的方法，其中所述多肽包括至少两种遗传融合至人血清白蛋白的N-端的GLP-1多肽。
4.权利要求1的方法，其中所述抗原结合多肽选自可溶的受体、抗体、抗体片段、免疫球蛋白单一可变域、Fab、F (ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、闭合构象的多特异性抗体、二硫键连接的scFv和双特异抗体。
5.由权利要求1的方法制备的干燥多肽组合物。
6.权利要求5的多肽组合物，其包括至少两种遗传融合至人血清白蛋白的N-端的GLP-1多肽。
7.制备液体多肽组合物的方法，其包括:获得由权利要求1的方法制备的冻干的多肽，和用足量可药用分散剂重构所述冻干的多肽以生成液体多肽组合物。
8.权利要求7的方法，其中所述多肽为抗原结合多肽。
9.权利要求7的方法，其中所述多肽包括至少两种遗传融合至人血清白蛋白的N-端的GLP-1多肽。
10.权利要求8的方法，其中所述抗原结合多肽选自可溶的受体、抗体、抗体片段、免疫球蛋白单一可变域、Fab、F (ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、闭合构象的多特异性抗体、二硫键连接的scFv和双特异抗体。
11.由权利要求7的方法制备的液体多肽组合物。
12.减少冻干的多肽组合物的重构时间的方法，其包括: a)将包含所述多肽的液体混合物冻干，其中所述液体混合物包含约2%体积的挥发性添加剂，其中所述挥发性添加剂为叔丁醇，和 b)用对于该冻干的多肽组合物而言足量的可药用分散剂重构该冻干的多肽以生成液体多肽组合物， 其中在挥发性添加剂存在下冻干的多肽重构的时间少于在无挥发性添加剂存在下冻干的相同多肽重构的时间。
13.权利要求12的方法，其中所述多肽为抗原结合多肽。
14.权利要求12的方法，其中所述多肽包括至少两种遗传融合至人血清白蛋白的N-端的GLP-1多肽。
15.权利要求12的方法，其中所述抗原结合多肽选自可溶的受体、抗体、抗体片段、免疫球蛋白单一可变域、Fab、F (ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、闭合构象的多特异性抗体、二硫键连接的scFv和双特异抗体。
16.组合物，其包含:治疗性多肽、缓冲剂、表面活性剂、至少一种赋形剂，和至少一种挥发性添加剂。
17.权利要求16的组合物，其中所述治疗性多肽包括GLP-1或其片段和/或变体。
18.权利要求16的组合物，其中所述治疗性多肽包括至少两种遗传融合至人血清白蛋白的 N-端的 GLP-1 (7-36 (A8G))多肽。
19.权利要求16至18任一项的组合物，其中所述治疗性多肽包括SEQID NO:1。
20.权利要求16或19的组合物，其中所述缓冲剂为磷酸钠。
21.权利要求16至20任一项的组合物，其中所述表面活性剂为聚山梨酯80。
22.权利要求16至21任一项的组合物，其中所述至少一种赋形剂选自:海藻糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、甘油和右旋糖。
23.权利要求16至22任一项的组合物，其中所述赋形剂包括海藻糖和甘露醇。
24.权利要求16至23任一项的组合物，其中所述挥发性添加剂为含氧烃。
25.权利要求24的组合物，其中所述含氧烃选自:甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、2- 丁醇、叔丁醇、戊醇、异戊醇、2-戊醇、3-戊醇、叔戊醇、甲基乙基酮、苯甲醇、乙酸、甲基乙基酮或其组合。
26.权利要求16至25任一项的组合物，其中所述挥发性添加剂选自叔丁醇、乙醇、乙腈、乙酸铵和NH4HCO3或其组合。
27.组合物，其包含:包括SEQID NO:1的多肽、磷酸钠、海藻糖、甘露醇、聚山梨酯80和叔丁醇。
28.权利要求16至25任一项的组合物，其中所述挥发性添加剂为叔丁醇且所述叔丁醇存在的量为约2%体积。`
【文档编号】C07K1/02GK103492407SQ201280017617
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2012年2月9日 优先权日:2011年2月9日
【发明者】J.克兰兹, J.里尼拉 申请人:葛兰素史密斯克莱有限责任公司