用精氨酸脱亚氨酶治疗的方法

用精氨酸脱亚氨酶治疗的方法【专利摘要】本发明一般涉及用精氨酸脱亚氨酶，特别是聚乙二醇化的精氨酸脱亚氨酶来治疗癌症的方法。【专利说明】用精氨酸脱亚氨酶治疗的方法[0001]对相关申请的交叉引用[0002]本申请要求对2012年4月4日提交的美国临时申请N0.61/620，368的优先权，该申请通过全文提述并入本文中。[0003]关于序列表的声明[0004]以文本形式代替纸件提供与本申请相关的序列表，且据此通过提述并入说明书中。含有序列表的文本文档的名称是P0LA_001_01W0_ST25.txt。文本文档为8KB，在2012年5月30日创建，且经由EFS-Web电子提交。[0005]发明背景【
技术领域：
】[0006]本发明一般涉及用精氨酸脱亚氨酶(ADI)，特别是聚乙二醇化的ADI(AD1-PEG)来治疗癌症的方法。【
背景技术：
】[0007]氨基酸消除(cbprivation)疗法可能是对一些癌症形式的有效治疗。迄今为止，有一个已知的与此办法相关的临床例子，其利用天冬酰胺酶来降低天冬酰胺的循环水平并抑制蛋白质合成。此治疗对于急性淋巴母细胞性白血病尤为有效(Avramis2005,VieraPinheirO2004)。急性淋巴母细胞性白血病细胞需要氨基酸天冬酰胺用于生长和增殖。相比之下，大多数正常的人细胞能够合成天冬酰胺且不受天冬酰胺消耗影响。因此，用天冬酰胺酶降低血清天冬酰胺能选择性杀死癌症细胞而不损害正常细胞、组织和宿主。已批准将天冬酰胺酶的大肠杆菌衍生型用于人使用。然而，仅在微生物中发现天冬酰胺酶；这使得其在人中高度免疫原性并且在注射后也具有短血清半寿期(AvramiS2005)。为了使天冬酰胺酶为更有效的药物，通过将大肠杆菌衍生的天冬酰胺酶与聚乙二醇(PEG)配制在一起来降低该酶的抗原性和相关的过敏反应而将这些缺点最小化。另外，PEG极大地延长了天冬酰胺酶的循环半寿期，这既降低了治疗频率也降低了治疗总成本。批准使用PEG配制的天冬酰胺酶且其在商标名Oncaspar?下销售(Oncaspar?2011,Avramis2005,VieraPinheiro2004,Fu2007,Zeidan2008)。[0008]精氨酸是人和小鼠的另一种非必需氨基酸(对于综述，参见Rogersl994)。在人中，可以从瓜氨酸以两步合成精氨酸，其经由Krebs(尿素)循环酶精氨基琥珀酸合成酶(ASS，L-瓜氨酸:L-天冬氨酸连接酶[形成AMP]，EC6.3.4.5)和精氨基琥珀酸裂合酶(ASL，L-精氨基琥珀酸精氨酸裂合酶，EC4.3.2.)(Haines2011,Wu2009,Morris2006,Husson2003，Tapiero2002,Rogersl994)JSS催化瓜氨酸和天冬氨酸到精氨基琥拍酸的转化,然后通过ASL将精氨基琥珀酸转化成精氨酸和延胡索酸(图1)。人中的精氨酸缺陷性饮食不引起高氨血症、乳清酸尿症(oroticaciduria),也不改变成人整个身体一氧化氮(NO)合成的速率(Tapiero2002,Castillol995,Rogersl994,Careyl987,Barbul1986,Snydermanl959,Rosel949)。尽管早产儿似乎需要精氨酸(Wu2004)，但精氨酸水平在婴儿、儿童和青少年中与年龄不相关(LUCke2007)。1992年，Takaku和Sugimura分别报告了人黑色素瘤和肝细胞癌瘤(HCC)细胞系似乎需要精氨酸用于生长。其它研究显示聚乙二醇化的ADI对于黑色素瘤和肝细胞瘤的治疗是有效的，具有极少的不良作用。[0009]癌症主要用以下3种类型疗法中的一种或其组合来治疗:外科手术、放射和化疗。对于不能用局部疗法如外科手术、放射和栓塞治疗的癌症，系统性化疗是唯一的治疗选择。然而，传统的化疗不区分正常细胞和癌细胞，其导致显著毒性和有限功效。新一代系统性疗法是靶向疗法，其设计为通过利用正常细胞和癌细胞之间的差异来选择性杀死癌细胞。本发明提供针对癌症治疗的这一优点和其它优点。[0010]参考文献:AvramisVI,PanosyanEH.2005.ClinPharmacokinet44:367-393;BarbulA.1986.JParenteralEnteralNutrlO:227-238;CareyGP等1987.JNutr117:1734-1739;CastiI1L等1995.AmJPhysiol268(EndocrinolMetab31):E360-367;FuCH,SakamotoKM.2007.ExpertOpinPharmacother8:1977-1984;HainesRJ等2011.1ntJBiochemMolBiol2:8-23;HussonA等2003.EurJBiochem270:1887-1899;LuckeT等2007.ClinChemLabMed45:1525-1530;MorrisSMJr.2006.AmJClinNutr83(Suppl):598S-512S;RogersQR.1994.于ProceedingsfromaSymposiumHonoringWillardJ.Visek-fromAmmoniatoCancerandGeneExpression.SpecialPublication86_April,1994，AgricultureExperimentStation,UniversityofIllinois,21IMumfordHall,Urbana,IL61801,pp.9-21;TapieroH等2002.BiomedPharmacother56:439-445,2002;VieraPinheiroJP,BoosJ.2004.BrJHaematol125:117-127;WuG等2009.AminoAcids37:153-168;WuG等2004.JNutrBiocheml5:442-451;ZeidanA等2008.ExpertOpinBiolTher9:111-119.)[0011]发明概述[0012]本发明的一个方面提供治疗患者中白血病的方法，包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物。在一个实施方案中，白血病是急性髓细胞性白血病(acutemyeloidleukemia)或复发的急性髓细胞性白血病。在一个别的实施方案中，白血病不是淋巴细胞性白血病或慢性髓细胞性白血病。然而，在别的实施方案中，白血病可包括淋巴细胞性白血病或慢性髓细胞性白血病。在另一个实施方案中，精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中配制；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中白血病展现出降低的ASS表达。[0013]本发明的另一个方面提供治疗患者中癌症的方法，包括对该患者施用自体吞噬抑制剂和包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物，其中所述癌症是胰腺癌或小细胞肺癌。在这一方面，自体吞噬抑制剂选自下组:氯喹(chlOToquine)、3_甲基腺嘌呤、羟基氯喹、巴夫洛霉素(bafilomycin)Al、5-氨基-4-咪唑羧酰胺核糖苷(AICAR)、冈田酸(okadaicacid)、N6_巯基嘌呤核糖苷、渥曼青霉素(wortmannin)和长春碱。涵盖本领域中已知的其它自体吞噬抑制剂以用于本文中的方法。在某些实施方案中，ADI和自体吞噬抑制剂加合或协同性地作用。在另一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中所述癌症展现出降低的ASS表达。[0014]本发明的一个方面提供治疗患者中癌症的方法，其包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物，其中所述癌症选自下组:乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中所述癌症展现出降低的ASS表达。[0015]本发明的一个方面提供治疗患者中黑色素瘤的方法，包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物与顺钼的组合。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用精氨酸脱亚氨酶；且其中黑色素瘤展现出降低的ASS表达。[0016]本发明的另一个方面提供治疗患者中癌症的方法，包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物，其中所述癌症不是黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、肝细胞瘤和肉瘤。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中所述癌症展现出降低的ASS表达。[0017]本公开的另一个方面提供在患者中治疗非小细胞肺癌、头和颈癌或前列腺癌的方法，包括施用治疗有效量的包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶的化合物与多西他赛的组合。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中非小细胞肺癌、头和颈癌或前列腺癌展现出降低的ASS表达。[0018]本公开的另一个方面提供在患者中治疗肾细胞癌瘤的方法，包括施用治疗有效量的包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶的化合物与雷帕霉素(rapamycin)的组合。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；且其中所述癌症展现出降低的ASS表达。[0019]在本发明的某些实施方案中，ADI共价键合至超过I个聚乙二醇分子，或约9至约12个聚乙二醇分子。在本发明的另一个实施方案中，聚乙二醇具有约1,000至约40，000的总重均分子量、具有约10，000至约30，000的总重均分子量，且在某些实施方案中，聚乙二醇具有20，000的分子量。[0020]在本公开的某些实施方案中，所述连接基团是琥珀酰亚胺基团。在某些实施方案中，所述琥珀酰亚胺基团可以是琥珀酰亚氨基琥珀酸、琥珀酰亚氨基丙酸、琥珀酰亚氨基羧甲基化物、琥珀酰亚氨基琥珀酰胺、N-羟基琥珀酰亚胺或其组合。在一个实施方案中，所述琥珀酰亚胺基团是琥珀酰亚氨基琥珀酸、琥珀酰亚氨基丙酸或其组合。[0021]在本公开的某些实施方案中，ADI不是从精氨酸枝原体(Mycoplasmaarginini)分离的。在其它实施方案中，ADI是从人型枝原体(Mycoplasmahominis)分离的。在一个具体的实施方案中，ADI经过修饰以没有在SEQIDN0:1的112、374、405或408位的至少一个赖氨酸，而在另一个实施方案中，ADI包含SEQIDN0:2中列出的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个PEG分子，且在某些实施方案中，PEG是直链PEG。[0022]在所述方法的一些实施方案中，以约每周两次至约每2周一次施用ADI，而在一个具体的实施方案中，每周施用ADI。[0023]在一个实施方案中，以约80IU/m2至约640IU/m2的剂量施用ADI，且在一个具体的实施方案中，以约160IU/m2的剂量施用。在另一个实施方案中，以约160IU/m2的剂量每周施用ADI。[0024]在一个实施方案中，本文描述的方法中使用的、包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶的化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中。[0025]本发明的另一个方面提供治疗患者中GVHD的方法，包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物。[0026]本发明的又一个方面提供治疗患者中癌症的方法，包括对患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物，其中所述癌症展现出ASS。在一个实施方案中，所述癌症选自下组:白血病、急性髓细胞性白血病、复发的急性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。在一个别的实施方案中，降低的ASS表达起因于精氨基琥拍酸合成酶启动子的甲基化。在另一个实施方案中，降低的ASS表达起因于DNA突变或缺失。在一个具体的实施方案中，降低的ASS表达起因于作为“费城(Philadelphia)染色体”一部分的9q34基因座的缺失或转座。在某些实施方案中，所述癌症展现出降低的ASS表达。[0027]本发明的再一个方面提供治疗患者中癌症的方法，包括对该患者施用包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的ADI的化合物，其中所述癌症展现出降低的精氨基琥珀酸裂合酶表达。在一个实施方案中，所述癌症选自下组:白血病、急性髓细胞性白血病、复发的急性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。在一个实施方案中，降低的ASL表达起因于精氨基琥珀酸裂合酶启动子的甲基化。在某些实施方案中，降低的ASL表达起因于DNA突变或缺失。在一个具体的实施方案中，所述癌症是ASL阴性的。[0028]在本发明的某些实施方案中，用AD1-PEG的治疗在体内抑制NO合成、抑制血管发生、诱导肿瘤细胞中的细胞凋亡、或其组合。在某些实施方案中，所述治疗导致稳定疾病(stabledisease)。在其它实施方案中，所述治疗延长患者中的无进展存活时间(progressionfreesurvivaltime)。在又一个实施方案中，血衆精氨酸消耗达至少I个月或超过2个月。[0029]在某些实施方案中，本文中描述的方法还包括施用治疗剂如化疗剂，其包括但不限于环磷酰胺、吉西他滨(gemcitabine)、顺钼、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)和依维莫司(everolimus)。在某些实施方案中，ADI和化疗剂加合或协同性地作用。[0030]对序列的简要说明[0031]SEQIDNO:1是野生型人型枝原体ADI蛋白的氨基酸序列。[0032]SEQIDN0:2是经修饰的人型枝原体ADI蛋白的氨基酸序列。[0033]SEQIDNO:3和4是用于扩增精氨基琥珀酸合成酶cDNA的PCR引物。[0034]附图简述[0035]图1是经由Krebs(尿素)循环的精氨酸代谢的图。[0036]图2显示在体外通过ADI对胰腺癌细胞的胱天蛋白酶依赖性细胞凋亡和自体吞噬的诱导。图2A是显示在与泛胱天蛋白酶抑制剂ZVAD-fmk(“Zvad”)和/或AD1-PEG温育后经历细胞死亡的细胞百分数的条形图。图2B是显示与AD1-PEG温育72小时后相比于PBS对照，膜联蛋白V(AnnexinV)阳性细胞百分数的条形图。[0037]图3显示在将人胰腺癌细胞与羟化氯喹(“ChQ”)和/或AD1-PEG温育后切割的胱天蛋白酶3、p62和LC3B的表达水平。[0038]图4A和4B显示将人胰腺癌细胞与ChQ和/或AD1-PEG温育后膜联蛋白V阳性细胞和亚G0/G1细胞的百分数。[0039]图5显示在用氯喹(CQ)和/或A`D1-PEG治疗后小鼠中的肿瘤体积。在无胸腺小鼠中建立了人胰腺癌细胞系MIAPaCa-2的皮下异种移植物。[0040]图6显示用氯喹和/或AD1-PEG治疗后MIAPaCa_2肿瘤的组织病理学。第一栏显示H&E染色，第二栏显示对活性胱天蛋白酶3的染色，第三栏显示经由TUNEL测定法对DNA片段化的染色，且第四栏显示对P62的染色。[0041]图7显示在小细胞肺癌人肿瘤和细胞系中ASS的表达。抗ASS抗体195-21-1用于检测正常皮肤(图7A)、结肠癌瘤(图7B)和小细胞肺癌(图7C)中的ASS蛋白表达。图7D显示通过western印迹的一组小细胞肺癌细胞系相比于阳性对照SW1222结肠癌细胞的ASS蛋白表达。图7E显示通过western印迹测量的ASS蛋白表达与通过qRT-PCR测定的mRNA表达的相关性。[0042]图8显示AD1-PEG20对ASS阴性小细胞肺癌细胞的体外增殖的抑制。将粘附(图8A)和非粘附(图8B)细胞用AD1-PEG20处理120小时，接着对于粘附细胞使用MTS测定法或对于非粘附细胞使用BCA总蛋白测定法测定增殖。[0043]图9显示ADI在ASS阴性SK_LC_13小细胞肺癌细胞中诱导细胞凋亡和自体吞噬。对于显示细胞凋亡的亚G1DNA含量的荧光活化的细胞分选分析，将细胞在对照培养基(图9A)、25nM托泊替康(topotecan)(图9B)、1.0mIUHir1AD1-PEG20(图9C)和IOmIUmPAD1-PEGZO(图9D)中温育72小时，接着用碘化丙啶(propidiumiodide(PI))对DNA染色。图9E显示在与AD1-PEG20或氯喹(“CQ”)阳性对照温育24小时后的LC3-1和LC3-1I蛋白水平。图9F显示通过western印迹在SK-LC-13细胞中检测的活性胱天蛋白酶3(图9F)。[0044]图10显示使用siRNA对ASS表达的沉默。图10A显示在用ASSsiRNA处理的SW1222细胞中通过RT-PCR确定的ASSmRNA表达的相对表达。图1OB显示在用ASSsiRNA处理的SW1222细胞中通过western印迹评估的ASS蛋白的相对表达。图1OC显示通过MTS增殖测定法测量的用AD1-PEG20处理的细胞的增殖。[0045]图11显示通过用具有20，000m.w.的PEG配制的ADI对BALB/c裸鼠中中等大小的SK-LC-13小细胞肺癌异种移植物生长的抑制。显示来自接受PBS媒介物(实心圆)、AD1-PEG20的短20天时程(每5天给药)(实心正方形)、或AD1-PEG20的持续给药(每5天直至组终止)(开放正方形)的小鼠(以每小鼠IIU(图11A)、2IU(图11B)和5IU(图11C)的剂量)的肿瘤体积的生长曲线。在第33天对照组终止时的肿瘤体积显示于图11D。显示对于研究的第O、12和40天AD1-PEG20(图11E)、精氨酸(图11F)和瓜氨酸(图11G)的血清水平。在第0和12天时短程给药和延长给药分组中的值相同，因为延长给药仅在第20天时启动。[0046]图12显示BALB/c裸鼠中ASS阳性的NC1-H69小细胞肺癌异种移植物的肿瘤体积的生长曲线。小鼠接受PBS媒介物或每小鼠2IUAD1-PEG20(黑色箭头)。[0047]图13显示对BALB/c裸鼠中大SK_LC_13小细胞肺癌异种移植物的抑制。显示来自接受PBS媒介物(圆)、AD1-PEG20的短20天时程(黑色箭头)(正方形)，或AD1-PEG20的持续给药(灰色箭头)(三角形)的小鼠(以每小鼠IIU(图13A)、2IU(图13B)和5IU(图13C)的剂量)的肿瘤体积的生长曲线。在第32天对照组终止时的肿瘤体积显示于图13D。[0048]图14显示相对于分别的用AD1-PEG20和自体吞噬抑制剂氯喹体外处理的相对细胞易感性(liability)。[0049]图15显示异种移植物数据的图，其显示AD1-PEG20与顺钼的组合导致ASS缺陷性黑色素瘤细胞中增强的抗肿瘤活性。[0050]图16显示异种移植物数据的图，其显示AD1-PEG20与雷帕霉素的组合导致针对异种移植的Cak1-1肾细胞癌细胞系中增强的抗肿瘤活性。[0051]发明详述[0052]本发明一般涉及用ADI，特别是AD1-PEG来治疗癌症的方法。[0053]正常细胞不需要精氨酸来用于生长，因为它们能从瓜氨酸以通过ASS和ASL催化的两步过程合成精氨酸(见图1)。与之相对，某些癌症不表达ASS。某些癌症不表达ASL，而其他癌症可能具有降低的ASS和/或ASL表达，或者可能不表达ASS和/或ASL。因此，这些癌症对于精氨酸是营养缺陷型的。可利用此代谢差异来开发一种治疗这些癌症形式的安全且有效的疗法。ADI催化精氨酸经由精氨酸双水解酶途径到瓜氨酸的转化，如此可用于消除精氨酸。[0054]除非特定地相反指示的，本发明的实践将采用本领域技术中的病毒学、免疫学、微生物学、分子生物学和重组DNA技术的常规方法，其中许多在下文描述以用于例示目的。这类技术在文献中有完全解释。参见，例如CurrentProtocolsinProteinScience,CurrentProtocolsinMolecularBiology或CurrentProtocolsinImmunology,Johnffiley&Sons,NewYork,N.Y.(2009);Ausubeletal.,ShortProtocolsinMolecularBiology,3rded.,ffiley&Sons,1995;Sambrook和Russell,MolecularCloning:ALaboratoryManual(3rdEdition,2001);Maniatisetal.MolecularCloning:ALaboratoryManual(1982);DNACloning:APracticalApproach,vol.I&II(D.Glover,ed.);OligonucleotideSynthesis(N.Gait,ed.,1984);NucleicAcidHybridization(B.Hames&S.Higgins,eds.,1985);TranscriptionandTranslation(B.Hames&S.Higgins,eds.,1984);AnimalCellCulture(R.Freshney,ed.,1986);Perbal,APracticalGuidetoMolecularCloning(1984)和其它类似的参考文献。[0055]如本说明书和所附权利要求中使用的，除非内容清楚地另外指示，单数形式“一个”、“一种”和“该”均包括复数指代物。[0056]贯穿本说明书中，除非上下文另外要求的，词语“包含/包括”将理解为暗示纳入所述要素或整数、或要素或整数的组，但不排除任何其它要素或整数、或要素或整数的组。[0057]除非另外明确陈述，本说明书中的每个实施方案，加以必要的修改(mutatismutandis),适用于每个其它的实施方案。[0058]可将标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质转染(Iipofection))。可依照制造商说明书或作为在本领域中普遍实现的或如本文中描述的来实施酶促反应和纯化技术。这些及相关技术和规程一般可依照本领域中公知的常规方法，以及如在贯穿本说明书引用和论述的各种一般性和更特定的参考文献中描述的来实施。除非提供特定定义，本文中描述的分子生物学、分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学相关使用的命名和本文中描述的分子生物学、分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学的实验室规程和技术是本领域中公知和普遍使用的那些。标准的技术可用于重组技术、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送、以及患者治疗。[0059]“患者”指动物，在某些实施方案中指哺乳动物，而在一个特定的实施方案中指人。[0060]“生物相容性”指一般对生物学功能无害且不会导致任何程度的不可接受毒性(包括过敏和疾病状态)的材料或化合物。[0061]贯穿本公开，可使用以下缩写:PEG，聚乙二醇；ADI，精氨酸脱亚氨酶；SS，琥珀酰亚氨基琥珀酸；SSA，琥珀酰亚氨基琥珀酰胺；SPA，琥珀酰亚氨基丙酸；NHS，N-羟基-琥珀酰亚胺；ASS1或ASS，精氨基琥珀酸合成酶;ASL，精氨基琥珀酸裂合酶。[0062]在本发明中，ADI基因可自任何来源，包括例如微生物、重组生物技术或其任意组合来源、克隆或产生。例如，精氨酸脱亚氨酶可以自以下属的微生物克隆:枝原体属(Mycoplasma)、梭菌属(Clostridium)、芽抱杆菌属(Bacillus)、疏螺旋体属(Borrelia)、肠球菌属(Enterococcus)、链球菌属(Streptococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、贾第虫属(Giardia)。在某些实施方案中，精氨酸脱亚氨酶克隆自肺炎枝原体(Mycoplasmapneumoniae)、人型枝原体、精氨酸枝原体(Mycoplasmaarginini)、酿脓链球菌(Steptococcuspyogenes)、肺炎链球菌(Steptococcuspneumoniae)、布氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)、阿氏疏螺旋体(Borreliaafzelii)、肠贾第虫(Giardiaintestinalis)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、地衣芽抱杆菌(Bacilluslicheniformis)、幾肠球菌(Enterococcusfaecalis)、清酒乳杆菌(Lactobacillussake)、或其任意组合。具体地，本发明中使用的ADI可包含SEQIDN0:1或2的氨基酸序列，或其具有ADI活性的变体(例如，能够将精氨酸代谢成瓜氨酸和氨)或其具有ADI活性的片段。[0063]在本发明的某些实施方案中，ADI克隆自枝原体属的微生物。在别的实施方案中，ADI克隆自人型枝原体、Mycoplasmaarthritides、或其任意组合,且不自精氨酸枝原体来源。具体地，本发明中使用的ADI可具有SEQIDN0:1或2中列出的氨基酸序列，或其具有ADI活性的变体(例如，能够将精氨酸代谢成瓜氨酸和氨)或其具有ADI活性的片段。[0064]天然ADI可见于微生物，其为抗原性的且在患者中被快速从循环清除。这些问题可通过修饰ADI来克服。如此，本公开提供由修饰剂修饰的ADI，所述修饰剂包括但不限于大分子聚合物、蛋白质、肽、多糖或其它化合物。精氨酸脱亚氨酶和修饰剂可通过共价键或非共价相互作用连接以形成稳定的缀合物或稳定的组合物来实现期望的效果。在某些实施方案中，经修饰的ADI保留ADI的生物学活性且在体内具有比未经修饰的ADI更长的半寿期和更低的抗原性。在某些实施方案中，经修饰的ADI保留未经修饰的ADI的至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的生物学活性。[0065]在一个实施方案中，修饰剂可以是生物相容的且能增加ADI在血液中半寿期的聚合物或蛋白质或其片段。修饰剂可以化学偶联至ADI，或当适用时经由融合蛋白表达连接于ADI。[0066]大分子聚合物可包括非肽大分子聚合物,在某些实施方案中，其可具有其自身的生物活性。合适的聚合物包括但不限于，聚烯醇化合物、聚醚化合物、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、二乙烯醚和马来酸酐的共聚物、N-(2-羟丙基)-甲基丙烯酰胺、多糖、聚氧乙烯多元醇(polyoxyethylatedpolyol)、肝素或其片段、聚-烃基-乙二醇及其衍生物、聚_烃基-乙二醇及其衍生物的共聚物、聚(乙烯基乙醚)、a，P-聚[(2-羟乙基)-DL-天冬酰胺]、聚羧酸酯、聚氧乙烯-甲醒(oxymethylene)、聚丙烯酰吗啉、氨基化合物和oxyolefin的共聚物、聚透明质酸、聚环氧乙烷(polyoxirane)、乙二酸和丙二酸的共聚物、聚(1，3_二氧戊环)、乙烯和马来酰肼共聚物、聚唾液酸、环糊精等。在某些实施方案中，所述聚合物是聚乙二醇。[0067]如本文中使用的聚烯醇化合物包括但不限于，聚乙二醇(包括单甲氧基聚乙二醇、单羟基聚乙二醇)、聚乙烯醇、聚烯丙基醇、聚丁烯醇等、及其衍生物如脂质。[0068]所述聚醚化合物包括但不限于聚亚烃基二醇(polyalkyleneglycol)(HO((CH2)x0)nH)、聚丙二醇、polyoxyrehylene(H0((CH2)20)nH)、聚乙烯醇((CH2CHOH)n)。[0069]聚氨基酸包括但不限于，一种类型氨基酸的聚合物或两种或更多种类型氨基酸的共聚物，例如，聚丙氨酸或聚赖氨酸，或其嵌段共聚物。[0070]多糖包括但不限于，葡聚糖及其衍生物，例如右旋糖酐硫酸盐、纤维素及其衍生物(包括甲基纤维素和羧甲基纤维素)、淀粉及其衍生物、聚蔗糖等。[0071]在本发明的一个特定的实施方案中，通过与至蛋白质或肽偶联来修饰ADI，其中所述一种或多种蛋白质或肽直接或间接连接至ADI。蛋白质可以是天然存在的蛋白质或其片段，包括但不限于，天然存在的人血清蛋白质或其片段，如结合甲状腺素的蛋白质、甲状腺素转运蛋白(transthyretin)、al酸糖蛋白、转铁蛋白、血纤蛋白原、免疫球蛋白、IgFereguis、白蛋白、及其片段。“片段”意指蛋白质的任意部分，其小于全蛋白但保留该蛋白质的期望功能。ADI可以直接或间接地经由共价键连接至蛋白质。直接连接意为ADI的一个氨基酸经由肽键或二硫键直接连接至修饰蛋白质的一个氨基酸。间接连接指ADI与修饰蛋白之间的连接经由最初存在于其之间的化学基团或通过生物或化学手段添加的特定化学基团，或者是上述连接的组合。[0072]在一个具体的实施方案中，ADI通过与PEG共价附接而修饰。与PEG共价附接的ADI(有或无连接基团)在下文中可称为〃AD1-PEG〃。在与天然ADI相比时，AD1-PEG保留其大多数酶活性，抗原性低得多，具有极大延长的循环半寿期，且在治疗肿瘤中远更有效。[0073]“聚乙二醇”或“PEG”指支链或直链形式的环氧乙烷和水的缩聚物的混合物，其由通式H(OCH2CH2)nOH代表，其中η至少为4。“聚乙二醇”或“PEG”与数字下标组合指示其大概的重均分子量。例如，PEG5，000指具有总重均分子量约5，000的PEG；PEG12,000指具有总重均分子量约12，000的PEG;而PEG20，000指具有总重均分子量约20，000的PEG。[0074]在本发明的一个实施方案中，PEG具有约1，000至约50，000的总重均分子量；在一个实施方案中从约3，000至约40，000,且在另一个实施方案中从约5，000至约30，000；在某些实施方案中，从约8，000至约30，000;在其它实施方案中从约11，000至约30，000；在另外的实施方案中，从约12，000至约28，000;在其它别的实施方案中，从约16，000至约24，000;而在其它实施方案中，从约18,000至约22,000;在另一个实施方案中，从19,000至约21，000，而在一个实施方案中，PEG具有约20，000的总重均分子量。一般而言，具有30，000或更高的分子量的PEG难以溶解，且配制产物的产量极大地降低。PEG可以是支链或直链的，或者在某些实施方案中，是直链。一般而言，增加PEG的分子量降低ADI的免疫原性。具有此实施方案中描述的分子量的PEG可与ADI，以及任选地生物相容性连接基团联合使用来治疗癌症，包括例如急性髓细胞性白血病如复发的急性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌、胃癌和食道癌。[0075]在本发明的另一个实施方案中，PEG具有约1，000至约50，000的总重均分子量；在某些实施方案中，约3，000至约30，000;在其它实施方案中，从约3，000至约20，000;在一个实施方案中，从约4，000至约12,000;还在其它实施方案中，从约4，000至约10,000；在另外的实施方案中，从约4，000至约8,000;仍在别的实施方案中，从约4，000至约6,000;且在另一个实施方案中`为约5，000。PEG可以是支链或直链，且在某些实施方案中是直链。具有此实施方案中描述的分子量的PEG可与ADI，以及任选地生物相容性连接基团联合使用来治疗移植物抗宿主病(GVHD)或癌症。[0076]虽然AD1-PEG是本文中描述的例示性的经修饰ADI，如会被技术人员认可的，ADI可用其它聚合物或适宜分子修饰用于期望的效果，特别是降低免疫原性并延长血清半寿期。[0077]无论有或无连接基团，ADI可共价键合于修饰剂如PEG，尽管一个优选的实施方案利用连接基团。[0078]用于将ADI共价附接至修饰剂例如PEG的连接基团，可以是任何生物相容性连接基团。如上文论述的，“生物相容性”指示该化合物或基团是无毒的，且可以用于体外或体内而不导致损伤、患病(sickness)、疾病(disease)或死亡。修饰剂如PEG,可以例如经由醚键、酯键、硫醇键或酰胺键键合至连接基团。合适的生物相容性连接基团包括，例如酯基团、酰胺基团、酰亚胺基团、氨基甲酸酯基团、羧基基团、羟基基团、糖、琥珀酰亚胺基团(包括，例如琥珀酰亚氨基琥珀酸(SS)、琥珀酰亚氨基丙酸(SPA)、琥珀酰亚氨基羧甲基化物(SCM)、琥珀酰亚氨基琥珀酰胺(SSA)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS))、环氧化物基团、氧羰基咪唑(oxycarbonylimidazole)基团(包括例如，羰基二咪唑(⑶I))、硝基苯基基团(包括，例如硝基苯基碳酸酯(NPC)或三氯苯基碳酸酯(TPC))、trysylate基团、醒基团、异氰酸酯基团、乙烯砜(vinylsulfone)基团、酪氨酸基团、半胱氨酸基团、组氨酸基团或伯胺。在一个实施方案中，所述生物相容性连接基团是酯基和/或琥珀酰亚胺基团。在另一个实施方案中，所述连接基团是SS、SPA、SCM、SSA或NHS;在某些实施方案中，更优选SS、SPA或NHS，而在其它实施方案中，最优选SS或SPA。[0079]或者，ADI可以经由氨基基团、巯基(sulfhydral)基团、羟基基团或羧基基团直接偶联至修饰剂，如PEG(即无连接基团)。[0080]ADI可以使用本领域中已知的方法经由生物相容性连接基团共价键合至PEG,所述方法例如Park等,AnticancerRes.,1:373-376(1981)；以及Zaplipsky和Lee,PolyethyleneGlycolChemistry:BiotechnicalandBiomedicalApplications,J.M.Harris,ed.，PlenumPress,NY，Chapter21(1992)描述的，其公开通过全文提述并入本文。[0081]PEG对ADI的附接增加ADI的循环半寿期。一般而言，PEG附接于ADI的伯胺。ADI上PEG或其它修饰剂的附接位点的选择由每个位点在该蛋白的活性域中的作用决定，如本领域技术人员会知晓的。PEG可以附接至ADI的伯胺，而实质上并不损失酶活性。例如，自精氨酸枝原体、Mycoplasmaarthritides和人型枝原体克隆的ADI具有约17个可通过此规程修饰的赖氨酸。换言之，所述17个赖氨酸均为ADI可经由生物相容性连接基团(如SS、SPA、SCM、SSA和/或NHS)附接至PEG的可能位点。PEG可附接于ADI上的其它位点，如根据本公开对于本领域技术人员来说将是明显的。[0082]I至约30个PEG分子可以共价键合至ADI。在某些实施方案中，ADI用一个PEG分子修饰。在其它实施方案中，ADI用超过一个PEG分子修饰。在一个实施方案中，ADI用约7至约15个PEG分子修饰，在一个实施方案中约9至约12个PEG分子修饰。在另一个实施方案中，ADI用2、3、4、`5、6、7、8、9、10、11或12个PEG分子修饰。在一个特定的实施方案中，ADI以每ADI4.5-5.5个PEG分子修饰。在另一个实施方案中，ADI用5±1.5个PEG分子修饰。[0083]在另一个实施方案中，ADI中约30%至约70%的伯胺基团用PEG修饰，在一个实施方案中为约40%至约60%，或在某些实施方案中，约45%至约55%，而在其它实施方案中精氨酸脱亚氨酶中约50%的伯胺基团用PEG修饰。当PEG共价键合至ADI的末端时，可以期望仅利用I个PEG分子。增加ADI上PEG单元的数目延长该酶的循环半寿期。然而，增加ADI上PEG单元的数目降低该酶的比活。如此，需要在两者之间达到平衡，如根据本公开对于本领域技术人员来说将是明显的。[0084]在本发明中，生物相容性连接基团的共同特征是它们经由马来酰亚胺基基团附接至精氨酸脱亚氨酶的伯胺。一旦与ADI偶联，SS-PEG就具有邻近PEG的酯连接，这可能使得该位点对从体内ADI释放PEG的血清酯酶敏感。SPA-PEG和PEG2-NHS不具有酯连接，因此它们对于血清酯酶不敏感。[0085]在本发明中，特定的连接基团并不显示影响AD1-PEG的循环半寿期或其酶比活。然而，在某些实施方案中，生物相容性连接基团用于本发明中。附接于蛋白质的PEG可以是直链，如对于SS-PEG、SPA-PEG和SC-PEG的，或者可以使用支链PEG，如对于PEG2-NHS的。[0086]在某些实施方案中，本公开的ADI可以如美国专利N0.6，635，462中描述的进行修饰。具体地，对ADI(具体地来自人型枝原体)的一个或多个天然存在的氨基酸残基的修饰能提供更容易复性和配制的酶，并由此改进制备ADI和包含ADI的治疗性组合物的现有技术。在一个实施方案中，修饰本公开的ADI以除去一个或多个赖氨酸残基(例如，赖氨酸可用另一个氨基酸取代)。具体地，在一个实施方案中，将ADI修饰为在SEQIDN0:1的第112,374,405或408位没有赖氨酸。[0087]在某些实施方案中，修饰位于或邻近酶催化区的与ADI有关的聚乙二醇化位点。就本发明目的而言，短语“聚乙二醇化位点”可定义为可用聚乙二醇共价修饰的ADI的任何位点或位置。“聚乙二醇化位点”可视为位于或邻近于酶的催化区，其中位点的聚乙二醇化导致该酶催化活性的显著降低。这类位点的聚乙二醇化在传统上导致酶的失活。例如，来自人型枝原体的ADI在第112位具有赖氨酸，其可视为位于或邻近于酶的催化区。PEG对此第112位赖氨酸的附接能导致该酶失活。另外，来自人型枝原体的ADI在第397位具有半胱氨酸，其可视为位于或邻近于酶的催化区。对第397位半胱氨酸的氨基酸取代能使该酶失活。具体地，用丙氨酸、组氨酸、精氨酸、丝氨酸、赖氨酸或酪氨酸取代第397位半胱氨酸能导致所有可检测酶活性的丧失。来自人型枝原体的ADI还具有位于此保守半胱氨酸附近的3个赖氨酸，具体为Lys374、Lys405和Lys408。PEG对Lys374、Lys405、Lys408或其组合的附接能使该酶失活。[0088]应理解自其它生物体来源的ADI也可以具有对应于来自人型枝原体的ADI第112位的聚乙二醇化位点。例如，来自酿脓链球菌的ADI在第104位具有赖氨酸，来自肺炎枝原体的ADI在第106位具有赖氨酸，且来自肠贾第虫的ADI在第114位具有赖氨酸。另外,来自一些生物体的ADI可具有对应于与来自人型枝原体的ADI第112位相同的一般位置的赖氨酸。来自这类生物体的ADI中赖氨酸的位置是本领域技术人员已知的且记载于美国专利N0.6，635，462。[0089]如此，在一个实施方案中，本发明在ADI的多肽链中提供特定的氨基酸取代。这些氨基酸取代提供经修饰的ADI，其在由修饰剂修饰例如聚乙二醇化时，失去较少活性。通过消除位于或邻近于酶催化区的聚乙二醇化位点或其它已知的修饰位点，可以实现最佳的修饰例如聚乙二醇化，而不损失活性。[0090]应理解本发明的其它实施方案基于以下理解，即精氨酸脱亚氨酶的某些结构特征在经由重组技术产生时可以阻止或干扰精氨酸脱亚氨酶的适宜和快速的复性。具体地，这些结构属性阻碍或阻止该酶在重组产生期间表现活性构象。就本发明目的而言，短语“活性构象”可定义为允许通过未经修饰或经修饰的精氨酸脱亚氨酶的酶活性的3维结构。具体地，所述活性构象可以是催化精氨酸转化成瓜氨酸所必需的。短语“结构特征”可定义为起因于特定氨基酸或氨基酸组合的任何性状、品质或特性。例如，精氨酸脱亚氨酶可含有氨基酸，其导致正常肽链中的弯曲或弯折，如此阻碍该酶在酶复性期间表现活性构象。具体地，来自人型枝原体的精氨酸脱亚氨酶在第210位具有脯氨酸，其可能导致肽链中的弯曲或弯折，从而导致重组生产期间使该酶复性更困难。应理解，自其它生物体来源的精氨酸脱亚氨酶也可具有对应于来自人型枝原体的精氨酸脱亚氨酶第210位的位点。[0091]如此，本发明再提供在精氨酸脱亚氨酶多肽链中的特定氨基酸取代。这类氨基酸取代能消除精氨酸脱亚氨酶肽链中有问题的结构特征。这类氨基酸取代提供对经修饰精氨酸脱亚氨酶的改进的复性。这些氨基酸取代使得使用降低量的缓冲液将经修饰的精氨酸脱亚氨酶快速复性成为可能。这些氨基酸取代还可以提供增加的复性的、经修饰的精氨酸脱亚氨酶产率。在本发明的一个实施方案中，所述经修饰的精氨酸脱亚氨酶在P210具有单个氨基酸取代。如上文提述的，自人型枝原体来源的精氨酸脱亚氨酶具有位于第210位的氨基酸脯氨酸。不限制本发明，目前认为在第210位的氨基酸脯氨酸的存在导致正常多肽链中的弯曲或弯折，其增加精氨酸脱亚氨酶复性(即重折叠)的难度。对第210位脯氨酸的取代使得使用降低量的缓冲液对经修饰的精氨酸脱亚氨酶快速复性成为可能。对第210位脯氨酸的取代还可提供增加的复性的、经修饰的精氨酸脱亚氨酶产率。在一个优选的实施方案中，将第210位脯氨酸用丝氨酸取代。应理解，依照本发明的这一方面，可以进行在第210位的其它取代。其它取代的例子包括Pro210至Thr210、Pro210至Arg210、Pro210至Asn210、Pro210至Gln210或Pro210至Met210。通过消除与野生型精氨酸脱亚氨酶第210位氨基酸有关的那些结构特征，可以实现该酶的适宜重折叠。[0092]本发明的方法可牵涉体外或体内应用。在体外应用的情况下，包括细胞培养应用中，本文中描述的化合物能添加至培养物中的细胞然后温育。本发明的化合物还可用于帮助使用本领域中公知的抗体生产技术产生单克隆和/或多克隆抗体。然后，所述单克隆和/或多克隆抗体可用于很多种诊断性应用，如对于本领域技术人员来说明显的。[0093]本发明化合物的体内施用手段将随着意图的应用而变化。本文中描述的ADI组合物的施用(以纯形式或在适宜药物组合物中)，可经由药剂的任一种用于类似效用的可接受施用模式来实施。所述药物组合物可通过将ADI例如AD1-PEG、AD1-PEG20与合适的生理学可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合来配制，并且可以配制成固态、半固态、液态或气态形式的制备物，如片剂、胶囊、散剂(powder)、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。另外，其它药学活性成分(包括其它抗癌剂，如本文中别处描述的)和/或合适的赋形剂如盐、缓冲剂和稳定剂，可以但非必需存在于组合物中。施用可通过多种不同途径实现，包括口服、胃肠外、鼻、静脉内、皮内、皮下或局部。施用模式取决于待治疗或预防的疾患的性质。如此，AD1-PEG例如AD1-PEG20可以口服、鼻内、腹膜内、胃肠外、静脉内、淋巴内、肿瘤内、肌内、间质(interstitially)、动脉内、皮下、眼内、滑液内、经上皮和经皮施用。在施用后，减小、`抑制、预防或延迟癌症进展和/或转移的量被视为有效的。在某一实施方案中，本文中的ADI组合物以统计学显著量延长患者的中值存活时间。在一个实施方案中，本文中描述的ADI将患者的中值存活时间延长4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、15周、20周、25周、30周、40周或更长。在某些实施方案中，ADI治疗将患者的中值存活时间延长I年、2年、3年或更长。在一个实施方案中，本文中描述的ADI将无进展存活延长2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周或更长。在某些实施方案中，本文中描述的ADI将无进展存活延长I年、2年、3年或更长。[0094]在某些实施方案中，施用的量足以导致肿瘤消退(tumorregression),如由活肿瘤的量的统计学显著的降低例如肿瘤质量中至少50%的降低，或由改变的(例如具有统计学显著性的降低)扫描尺寸所指示的。在某些实施方案中，施用的量足以导致稳定疾病。在其它实施方案中，施用的量足以导致熟练临床医师已知的特定疾病适应证的症状中临床相关的减轻。[0095]在某些实施方案中，施用的量足以抑制NO合成、抑制血管发生、和/或足以诱导肿瘤细胞中的细胞凋亡、或其任意组合。可以使用本领域中已知的方法来测量NO合成、血管发生和细胞凋亡，参见例如，CurrentProtocolsinImmunology或CurrentProtocolsinMolecularBiology,Johnffiley&Sons,NewYork,N.Y.(2009及其更新内容)；Ausubel等?，ShortProtocolsinMolecularBiology,3rded.，Wiley&Sons,1995;和其它类似的参考文献。在一个具体的实施方案中，施用的量抑制NO合成且抑制黑色素瘤的生长，并与如本文中描述的其它化疗如顺钼协同作用。因此，本公开的一个实施方案提供了治疗黑色素瘤的方法，即与顺钼组合施用AD1-PEG20，其中该治疗消耗内源性一氧化氮(NO)。[0096]治疗的准确剂量和持续时间是所治疗疾病的函数，并且可使用已知的测试方案或通过测试本领域中已知的模型系统中的组合物并从其外推来经验性测定。还可实施受控的临床试验。剂量也可以随着要减轻的疾患的严重性而变化。通常配制并施用药学组合物以施加治疗有用的效果并使得不想要的副作用最小化。所述组合物可施用一次，或可分成许多要以时间间隔施用的更小的剂量。对于任何具体的受试者，可依照个体需要来随时间调整特定剂量方案。[0097]可以单独或与其它已知的癌症治疗如放疗、化疗、移植、免疫治疗、激素治疗、光力学治疗等组合来施用ADI组合物。还可以与抗生素组合来施用组合物。[0098]如此，这些和相关药物组合物的通常施用途径包括但不限于，口服、局部、经皮、吸入、胃肠外、舌下、含服、直肠、阴道和鼻内。如本文中使用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。依照本发明某些实施方案的药物组合物配制为允许其中含有的活性成分在对患者施用该组合物时为生物可用的。将对受试者或患者施用的组合物将采用一个或多个剂量单位的形式，其中例如，片剂可以是单剂量单位，而本文中描述的气雾剂形式的ADI组合物的容器可容纳多个剂量单位。制备这类剂量形式的实际方法对于本领域中技术人员是已知的或会是明显的；例如，参见Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,20thEdition(PhiladelphiaCollegeofPharmacyandScience,2000)。要施用的组合物在任何事件中将含有治疗有效量的本公开的AD1-PEG，如AD1-PEG20，以用于依照本文中的教导来治疗感兴趣的疾病或疾患。[0099]药物组合物可以以固体或液体的形式。在一个实施方案中，载体是颗粒，从而所述组合物为例如片剂或散剂形式。载体可以是液体，从而所述组合物为例如anoral油、可注射液体或气雾剂(可用于例如吸入施用)。当意图用于口服施用时，所述药物组合物一般是固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬液和凝胶形式包含在本文中视为固体或液体的形式中。[0100]作为用于口服施用的固体组合物，药物组合物可配制成散剂、颗粒、压缩的片剂、丸剂、胶囊剂、咀嚼胶、wafer等。这类固体组合物通常会含有一种或多种惰性稀释剂或可食用载体。另外，可存在一种或多种以下物质:粘合剂如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、西黄蓍胶(gumtragacanth)或明胶；赋形剂如淀粉、乳糖或糊精，崩解剂如海藻酸、海藻酸钠、Primogel、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotex;助流剂如胶体二氧化娃；增甜剂如蔗糖或糖精；芳香剂如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙香精；和着色剂。当药物组合物以胶囊剂例如明胶胶囊剂的形式时，它在上述材料类型之外，还可以含有液体载体如聚乙二醇或油。[0101]药物组合物可以以液体，例如酏剂、糖浆剂、溶液、乳剂或悬液的形式。试举两例，液体可以用于例如口服施用或用于通过注射递送。当意图用于口服施用时，优选的组合物除了所述化合物外还含有一种或多种增甜剂、防腐剂、染料/着色剂和增香剂。在意图通过注射施用的一种组合物中，可以纳入一种或多种表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂。[0102]液体药物组合物，不管它们是溶液、悬液或其它类似形式，可以包含一种或多种以下佐剂:无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液，且在某些实施方案中，生理学盐水、林格氏溶液(Ringer’ssolution)、等渗氯化钠、不挥发油如合成的单甘油酯或二甘油酯(其可充当溶剂或悬浮介质)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗细菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯(methylparaben);抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸、柠檬酸或磷酸，和用于调节张度的试剂如氯化钠或右旋糖。胃肠外制备物可装入由玻璃或塑料制备的安瓿、一次性注射器或多剂量管形瓶(multipledosevial)中。生理盐水是优选的佐剂。优选地，可注射药物组合物是无菌的。[0103]意图胃肠外或口服施用的液体药物组合物应含有使得将获得合适剂量的如本文中公开的ADI如AD1-PEG20的量。通常地，此量为组合物中至少0.01%的ADI。当意图用于口服施用时，此量可在组合物重量的0.1至约70%变化。某些口服药物组合物含有约4%至约75%的AD1-PEG。在某些实施方案中，制备依照本发明的药物组合物和制备物从而胃肠外剂量单位在稀释前含有按重量计0.01至10%的AD1-PEG。[0104]所述药物组合物可意图用于局部施用，在此情况下载体可适宜地包含溶液、乳液、软膏或凝胶基底。所述基底例如可包含以下一种或多种:矿脂(petiOlatum)、羊毛脂(lanolin)、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂如水和醇、以及乳化剂和稳定剂。增稠剂可存在于用于局部施用的药物组合物中。如果意图用于经皮施用，所述组合物可包含经皮贴剂(transdermalpatch)或离子电渗装置。所述药物组合物可意图用于直肠施用，其为例如栓剂的形式，栓剂会在直肠中融化并释放药物。用于直肠施用的组合物可含有油质基底作为合适的无刺激性赋形剂。这类基底包括但不限于，羊毛脂、可可油(cocoabutter)和聚乙二醇。[0105]所述药物组合物可包含各种材料，其改变固体或液体剂量单位的物理形式。例如，组合物可包含在活性成分周围形成涂料壳的材料。形成涂料壳的材料通常是惰性的，并且可以选自例如糖、紫胶(shellac)和其它肠包衣剂(coatingagent)。或者,所述活性成分可装入明胶胶囊中。固体或液体形式的药物组合物可包含结合AD1-PEG的药剂并由此帮助化合物递送。可以此能力作用的合适药剂包括单克隆或多克隆抗体、一种或多种蛋白质或脂质体。药物组合物可基本由可作为气雾剂施用的剂量单位组成。术语气雾剂用于指多种系统，从那些具有胶体性质的系统到由加压包装组成的系统。递送可通过液化或加压气体，或通过分散活性成分的合适的泵系统进行。气雾剂可以以单相、双相或三相系统递送以递送活性成分。气雾剂的递送包括必要的容器、激活剂、阀、子容器等，其合起来可以形成试剂盒。本领域中的普通技术人员不用过度实验就可以确定优选的气雾剂。[0106]药物组合物可通过药物领域中公知的方法学来制备。例如，意图通过注射施用的药物组合物可通过将包含如本文中描述的AD1-PEG的组合物和任选地一种或多种盐、缓冲剂和/或稳定剂，与无菌蒸馏水组合从而形成溶液来制备。可以添加表面活性剂来促进均一溶液或悬液的形成。表面活性剂是与AD1-PEG组合物非共价相互作用以协助AD1-PEG在水性递送系统中的溶解或均一悬浮的化合物。[0107]所述组合物可以以治疗有效量施用，其将随着多个因素而变化，所述因素包括采用的特定化合物(例如，AD1-PEG)的活性；化合物的代谢稳定性和作用长度；患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；施用模式和时间；排泄速率；药物组合；特定病症或疾患的严重性；和进行疗法的受试者。[0108]本发明化合物之一的治疗有效量是有效抑制肿瘤生长的量。一般而言，用小剂量启动治疗，其可通过小增量增加直至达到该情况下的最佳效果。一般而言，本发明化合物的治疗剂量可从约I至约200mg/kg每周两次到约每两周一次。例如,剂量可以是以2ml静脉内注射约lmg/kg每周一次至约20mg/kg每3天一次。在一个别的实施方案中，剂量可以是从约50IU/m2至约700IU/m2，约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次施用。在某些实施方案中，剂量可以是约50IU/m2、60IU/m2、70IU/m2、80IU/m2、90IU/m2、100IU/m2、110IU/m2、120IU/m2、130IU/m2、140IU/m2、150IU/m2、160IU/m2、170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2、约350IU/m2、360IU/m2、370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、620IU/m2、630IU/m2、640IU/m2、650IU/m2、660IU/m2、670IU/m2、680IU/m2、690IU/m2、或约700IU/m2，约每3天一次、约每周一次、约每周两次或约每2周一次地施用。在某些受试者可能产生抗ADI免疫应答的实施方案中，可以如熟练临床医师期望的来修改剂量。[0109]AD1-SS-PEG5,000的最佳剂量可以是约每周两次，而AD1-SS-PEG20，000的最佳剂量可以从约每周一次到约每两周一次。在某些实施方案中，AD1-SS-PEG20，000的最佳剂量可以是约每周两次。[0110]可以在注射前将AD1-PEG与磷酸盐缓冲盐水溶液或任何其它本领域技术人员已知的适宜溶液混合。在一个实施方案中，包含AD1-PEG的液体组合物包含约10至约12mg的AD1、约20至约40mg的聚乙二醇、L27mg+5%磷酸二氢钠，USP;约3mg+5%磷酸氢二钠，USP；7.6mg+5%氯化钠，U`SP;pH为约6.6至约7;在合适量的注射用水中(例如，约Iml或约2ml)。在一个实施方案中，包含AD1-PEG的液体组合物包含组氨酸-HCl，且在某些实施方案中，组合物缓冲液为约0.0035M组氨酸-HCl至约0.35M组氨酸-HCl。在一个具体的实施方案中，将所述组合物配制到包含PH6.8的0.035M组氨酸-HCl与0.13M氯化钠的缓冲液中。在另一个实施方案中，将所述组合物配制到包含PH6.8的0.02M磷酸钠缓冲液与0.13M氯化钠的缓冲液中。[0111]在一个实施方案中，包含ADI或AD1-PEG的组合物具有约5至约9、约6至约8、或约6.5至约7.5的pH。在一些实施方案中，包含ADI的组合物具有约6.8±1.0的pH。[0112]在一个实施方案中，包含AD1-PEG的组合物中的游离PEG为1_10%，且在一个别的实施方案中，低于总PEG的7%、低于6%、低于5%、低于4%、低于3%、低于2%或低于1%。在某些实施方案中，包含AD1-PEG的组合物中的天然ADI为低于约1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或低于0.1%。一般而言，包含AD1-PEG的组合物具有低于或等于约4%、3%、2%、1.5%、1%或0.5%的总杂质。[0113]在一个实施方案中，包含ADI或AD1-PEG的组合物中的游离巯基超过约90%。在一些实施方案中，包含ADI或AD1-PEG的组合物中的游离巯基为约91%、约92%、约93%、约94%或约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或更多。[0114]在一个实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约0.5μM至约15μM的Km，而在一个别的实施方案中，为约IμM至约12μΜ、约IμM至约ΙΟμΜ、约1.5μM至约9μΜ、约1.5μΜ至约8μΜ或约1.5μΜ至约7μΜ。在某些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约1.5μM至约6.5μM的Km。在一些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约1.5μM、约2μM、约2.5μΜ、约3μΜ、约3.5μΜ、约4μΜ、约4.5μΜ、约5μΜ、约5.5μΜ、约6μΜ、约6.5μM或约7μM的Km.[0115]在一个实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约0.5秒―1至约15秒―1的Kcat,而在一个别的实施方案中，为约I秒―1至约12秒―1、约I秒―1至约10秒―1、约1.5秒―1至约9秒―1、约2秒―1至约8秒―1或约2.5秒―1至约7秒'在某些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约2.5秒―1至约7.5秒―1的Kcat。在一些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约2.5秒'约3秒'约3.5秒'约4秒'约4.5秒'约5秒'约5.5秒―1、约6秒―1、约6.5秒―1、约7秒―1、约7.5秒―1或约8秒―1的Kcat。[0116]在一个实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约5mS/cm至约20mS/cm的电导率(在本领域中也称为比电导)，而在别的实施方案中，为约5mS/cm至约15mS/cm、约7mS/cm至约15mS/cm、约9mS/cm至约15mS/cm或约10mS/cm至约15mS/cm。在一些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约9mS/cm、约10mS/cm、约llmS/cm、约12mS/cm或约13mS/cm、约14mS/cm或约15mS/cm的电导率。在某些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约13mS/cm±l.0mS/cm的电导率。[0117]在一个实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约50m0sm/kg至约500m0sm/kg、约100m0sm/kg至约400m0sm/kg、约150m0sm/kg至约350m0sm/kg、约200m0sm/kg至约350m0sm/kg或约250m0sm/kg至约350m0sm/kg的重量摩尔渗透压浓度(osmolality)。在某些实施方案中，组合物中的ADI或AD1-PEG具有约300±30m0sm/kg的重量摩尔渗透压浓度。[0118]本公开的包含AD1-PEG的组合物还可与一种或多种其它治疗剂的施用同时、在前或在后施用。这类组合疗法可包括施用含有本发明的化合物和一种或多种另外的活性剂的单药物剂量制剂，以及施用在其自身分开的药物剂量制剂中的包含本发明的AD1-PEG(例如，AD1-PEG20)的组合物和每种活性剂。例如，如本文中描述的AD1-PEG和其它活性剂可以一起在单一口服剂量组合物(如片剂或胶囊)中对患者施用，或者每种药剂在分开的口服剂量制剂中施用。类似地，如本文中描述的AD1-PEG和其它活性剂可以一起在单一胃肠外剂量组合物如盐水溶液或其它生理学可接受溶液中对患者施用，或者每种药剂在分开的胃肠外剂量制剂中施用。当使用分开的剂量制剂时，可以基本同时即共同地，或在分别错开的时间即顺序地且以任何次序地施用包含AD1-PEG的组合物和一种或多种另外的活性剂；组合疗法理解为包含所有这些方案。[0119]如此，在某些实施方案中，还涵盖将本公开ADI组合物与一种或其它治疗剂组合施用。这类治疗剂在本领域中可接受为针对如本文中描述的特定疾病状态，如特定癌症或GVHD的标准治疗。涵盖的例示性治疗剂包括细胞因子、生长因子、类固醇、NSAID、DMARD、抗炎剂、化疗、放疗、自体吞噬抑制剂、或其它活性剂和辅助剂。[0120]在某些实施方案中，本文中公开的ADI组合物可联同任何数目的化疗剂一起施用。化疗剂的例子包括焼化剂类如塞替派（thiotepa)和环磷酰胺(CYTOXAN?)；焼基磺酸酯类(alkylsulfonates)，如白消安(busulfan)、英丙舒凡（improsulfan)和哌泊舒凡（piposulfan);氮丙卩定类（aziridines)，如苯佐替派（benzodopa)、卡波醌（carboquone)、美妥替派（meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺（altretamine)、三乙撑蜜胺（triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代憐酉先胺(triethylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺(trimethylolomelamine);氮芥类(nitrogenmustards)，如苯丁酸氮芥（chlorambucil)、蔡氣芥（chlornaphazine)、胆憐酸胺（cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、异环憐酉先胺（ifosfamide)、双氯乙基甲胺（mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆留醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺（trofosfamide)、尿啼卩定氮芥(uracilmustard);亚硝服类（nitrosoureas)，如卡莫司汀（carmustine)、氯脲菌素（chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀（lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，如阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸（azaserine)、博来霉素（bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、加利车霉素(calicheamicin)、carabicin、洋红霉素（carminomycin)、嗜癌霉素（carzinophilin)、色霉素（chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素（daunorubicin)、地托比星（detorubicin)、6_二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星（doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素（marcellomycin)、丝裂霉素类（mitomycins)、霉酌?酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素（nogalamycin)、橄榄霉素（olivomycin)、培洛霉素（peplomycin)、泊非霉素（potfiromycin)、卩票呤霉素（puromycin)、三铁阿霉素（quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素（streptonigrin)、链佐星（streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司（ubenimex)、净司他丁（zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如甲氨噪呤（methotrexate)和5_氟尿啼唳（5-FU);叶酸类似物，如二甲叶酸（denopterin)、甲氨噪呤（methotrexate)、蝶酉先三谷氨酸（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate);卩票呤类似物，诸如氟达拉滨（fludarabine)、6_巯基卩票呤(mercaptopurine)、硫咪卩票呤（thiamiprine)、硫鸟卩票呤（thioguanine);啼卩定类似物，如安西他滨（ancitabine)、阿扎胞苷（azacitidine)、6_氮尿苷（azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷（cytarabine)、双脱氧尿苷（dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5_FU;雄激素类，如卡鲁睾酮（calusterone)、丙酸屈他雄酮（dromostanolonepropionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睾内酉旨(testolactone);抗肾上腺类，如氨鲁米特（aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinicacid);醋葡醒内酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酉先丙酸(aminolevulinicacid);安口丫唳(amsacrine)；bestrabucil；比生群（bisantrene);依达曲沙（edatraxate)；地憐酉先胺（defosfamide);地美可辛(demecolcine)；地口丫酉昆(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptiniumacetate);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；轻脲(hydroxyurea);香燕多糖(Ientinan)；氯尼达明(1nidamine);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝口丫P定(nitracrine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin);鬼曰酸(podophyllinicacid)；2~乙基酸月井(ethylhydrazide);丙卡巴月井(procarbazine)；PSK.RTM.;雷佐生(razoxane);西佐喃(sizofiran);螺旋错(spirogermanium);细交链抱菌酮酸(tenuazonicacid);三亚胺酉昆(triaziquone);2，2’，2’’-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine)；达卡巴曝(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二漠甘露酉享(mitobronitol);二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman)；gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；类紫杉醇类(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)(T/\Xf)L^,Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N.J.)和多西他赛(doxetaxel)(TAXOTERE?.,Rhne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他滨(gemcitabine);6_硫鸟_呤(thioguanine);疏基票呤(mercaptopurine);甲氨噪呤(methotrexate);钼类似物，如顺钼(cisplatin)和卡钼(carboplatin);长春减(vinblastine);钼(platinum);依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide);丝裂霉素C(mitomycinC);米托蒽醌(mitoxantrone);长春新减(vincristine);长春5晶滨(vinorelbine);navelbine;會泛灭瘤(novantrone);替尼泊苷(teniposide);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin)；xeloda;伊本勝酸盐(ibandronate);CPT_11;拓扑异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);视黄酸衍生物，如Targretin?(贝沙罗汀(bexarotene))、Panretin?(阿利维A酸(alitretinoin))；0NTAK?(地尼白介素2(denileukindiftitox));esperamicin;卡培他滨(capecitabine)；和上文中任一种的药学可接受的盐、酸或衍生物。还包含在此定义中的是作用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂如抗雌激素类，包括例如，他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(Fareston);和抗雄激素类，如氟他米特(fIutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);其他化疗剂包括索拉非尼(sorafenib)和其它蛋白激酶抑制剂如afatinib、axitinib、贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、crizotinib、dasatinib、erlotinib、fostamatinib、gefitinib、伊马替尼(imatinib)、lapatinib、lenvatinib、mubritinib、nilotinib、panitumumab、pazopanib、pegaptanib、ranibizumab、ruxolitinib、曲妥单抗(trastuzumab)、vandetanib、vemurafenib、和舒尼替尼(sunitinib);sirolimus(雷巾白霉素)、依维莫司(everolimus)和其它mTOR抑制剂。还涵盖将上文中任一种的药学可接受的盐、酸或衍生物用于本文。[0121]在某些实施方案中，本文中公开的ADI组合物可联同任意数目的自体吞噬抑制剂一起施用。在一些优选的实施方案中，所述自体吞噬抑制剂选自下组:氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟基氯喹(Plaquenil.TM.)、巴夫洛霉素(bafilomycin)Al、5_氨基_4_咪唑羧酰胺核糖苷(AICAR)、R田酸(okadaicacid)、抑制2A型或I型蛋白磷酸酶的自体吞嗷抑制性藻毒素(autophagy-suppressivealgaltoxin)、cAMP类似物、和升高cAMP水平的药物、腺苷、N6-巯基嘌呤核糖苷、渥曼青霉素和长春碱。另外，还可以使用抑制自体吞噬所必需的蛋白质(如例如ATG5)表达的反义或siRNA。[0122]在一个实施方案中，AD1-PEG与一种或多种治疗剂加合或协同性地作用。在此方面，在本文中描述了协同作用剂，其包括能与本文中提供的AD1-PEG协同作用的治疗剂(例如，化疗剂、自体吞噬抑制剂、mTOR抑制剂、或任何其它用于治疗如本文中描述的癌症、GVHD或炎性肠病的治疗剂)，其中这类协同展现为可检测效果，该效果的幅度大于(即，相对于合适的对照状况以统计学显著的方式)在存在化疗剂但不存在AD1-PEG组合物时，和/或在存在AD1-PEG但不存在化疗剂时所能检测到的效果。用于测量协同性的方法是本领域中已知的(参见例如，CancerResJanuaryl5,201070;440)。[0123]如本文中描述的包含ADI和任选地其它治疗剂的组合物可用于供治疗癌症的治疗性方法和用于预防癌症转移的方法。如此，本发明提供用于治疗多种不同癌症、减轻其症状或抑制其进展、或预防多种不同癌症的方法。在另一个实施方案中，本公开提供用于治疗GVHD、减轻其症状或抑制其进展的方法。具体地，本公开提供用于治疗患者中的癌症或GVHD、减轻其症状或抑制其进展的方法，包括对患者施用治疗有效量的如本文中描述的ADI组合物，由此治疗癌症或GVHD、减轻其症状或抑制其进展。如此，本文中描述的ADI组合物可对患有炎性肠病(例如，克罗恩病(Crohn’sdisease);溃疡性结肠炎)、GVHD或癌症的个体施用，所述癌症包括但不限于白血病(例如急性髓细胞性白血病和复发的急性髓细胞性白血病)、黑色素瘤、肉瘤(包括但不限于转移性肉瘤、子宫平滑肌肉瘤)、胰腺癌、前列腺癌(如但不限于，激素难治性前列腺癌)、间皮瘤、淋巴性白血病、慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌(包括但不限于胃腺癌瘤)、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌(包括但不限于肾细胞癌瘤)、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌(包括但不限于头和颈的鳞状细胞癌瘤；舌癌)、子宫颈癌、睾丸癌、胆囊癌、胆管癌瘤(cholangiocarcinoma)和胃癌。`[0124]在一个实施方案中，本公开提供治疗髓细胞性白血病如但不限于急性髓细胞性白血病(AML)、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20。在某些实施方案中，髓细胞性白血病如AML是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在另一个实施方案中，髓细胞性白血病(例如，AML)不包含易位t(15;17)。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗AML的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20。在某些实施方案中，用于治疗AML所施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，且在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2、约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG治疗AML诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗AML的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗AML的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗AML的方法，即施用包含AD1-PEG20的组合物，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0125]在一个实施方案中，本公开提供治疗肉瘤(包括但不限于转移性肉瘤)、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20。在某些实施方案中，所述肉瘤是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗肉瘤的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20。在某些实施方案中，用于治疗AML施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG治疗肉瘤诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗肉瘤的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗AML的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗肉瘤包括转移性肉瘤的方法，即施用包含AD1-PEG20的组合物，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0126]在一个实施方案中，本公开提供治疗胰腺癌、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与自体吞噬抑制剂的组合，所述自体吞噬抑制剂如但不限于，氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟基氯喹、巴夫洛霉素Al、5-氨基-4-咪唑羧酰胺核糖苷(AICAR)、R田酸、N6-巯基嘌呤核糖苷、渥曼青霉素和长春碱。在某些实施方案中，胰腺癌是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗胰腺癌的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约`每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20;其与治疗有效量的自体吞噬抑制剂如氯喹组合。在此方面，治疗有效剂量的氯喹可以是约600mg碱(base)的起始剂量,接着是在两个连续日每日的额外300mg碱和单剂300mg碱。这代表3天中2.5g氯喹磷酸盐或1.5g碱的总剂量。在别的实施方案中，剂量可以是约300mg碱。氯喹、或其它自体吞噬抑制剂的剂量可以如需要的由熟练临床医师使用本领域中已知的剂量修改。如技术人员会理解的，自体吞噬抑制剂可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗胰腺癌施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，且在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合氯喹治疗胰腺癌诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗胰腺癌的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗胰腺癌的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗胰腺癌的方法，即施用氯喹或其它适宜的自体吞噬抑制剂与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0127]在一个实施方案中，本公开提供治疗小细胞肺癌、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与自体吞噬抑制剂的组合。在某些实施方案中，小细胞肺癌是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗小细胞肺癌的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20；其与治疗有效量的自体吞噬抑制剂如氯喹组合。在此方面，治疗有效剂量的氯喹可以是约600mg碱的起始剂量,接着是在两个连续日每日的额外300mg碱和单剂300mg碱。这代表3天中2.5g氯喹磷酸盐或1.5g碱的总剂量。在别的实施方案中，剂量可以是约300mg碱。氯喹的剂量可以如需要的由熟练临床医师使用本领域中已知的剂量修改。如技术人员会理解的，自体吞噬抑制剂可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗小细胞肺癌施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2、约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/1112、640几/1112、或约700几/1112。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合氯喹治疗小细胞肺癌诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗小细胞肺癌的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗小细胞肺癌的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子,或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治`疗小细胞肺癌的方法，即施用氯喹与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0128]在一个实施方案中，本公开提供治疗肉瘤(包括但不限于，转移性肉瘤)、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与自体吞噬抑制剂的组合。在某些实施方案中，肉瘤是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗肉瘤的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20;其与治疗有效量的自体吞噬抑制剂如氯喹组合。在此方面，治疗有效剂量的氯喹可以是约600mg碱的起始剂量,接着是在两个连续日每日的额外的300mg碱和单剂300mg碱。这代表3天中2.5g氯喹磷酸盐或1.5g碱的总剂量。在别的实施方案中，剂量可以是约300mg碱。氯喹的剂量可以如需要的由熟练临床医师使用本领域中已知的剂量修改。如技术人员会理解的，自体吞噬抑制剂可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗肉瘤施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合氯喹治疗肉瘤诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗肉瘤的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗肉瘤的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗肉瘤的方法，即施用氯喹与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0129]在一个实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与多西他赛的组合。在某些实施方案中，黑色素瘤是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20;其与治疗有效量的多西他赛组合。在此方面，治疗有效剂量的多西他赛可包含约每3周在30分钟至I小时内静脉内施用75mg/m2或100mg/m2。如熟练临床医师会理解的，多西他赛的剂量可根据疾病适应证和/或先前治疗来修改，且多西他赛可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗黑色素瘤施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合多西他赛治疗黑色素瘤诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗黑色素瘤的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，即施用多西他赛与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0130]在一个实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与顺钼的组合。在某些实施方案中，黑色素瘤是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20;其与治疗有效量的顺钼组合。在此方面，治疗有效剂量的顺钼可包含以50-100mg/m2每周期(每3_4周)一次的施用，或每天施用达5天总计每周期为100mg/m2。如熟练临床医师会理解的，顺钼的剂量可根据疾病适应证、个体患者和/或先前治疗来修改，且顺钼可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗黑色素瘤施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合顺钼治疗黑色素瘤诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗黑色素瘤的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗黑色素瘤的方法，即施用顺钼与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0131]在一个实施方案中，本公开提供治疗肾细胞癌瘤、减轻其症状或抑制其进展的方法，即施用治疗有效量的AD1-PEG20与mTOR抑制剂的组合，所述mTOR抑制剂如但不限于雷帕霉素、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)和ridaforolimus。在某些实施方案中，肾细胞癌瘤是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在一个别的实施方案中，本公开提供治疗肾细胞癌瘤的方法，包括约每3天一次、约每周一次、约每周两次、或约每2周一次地施用AD1-PEG20;其与治疗有效量的mTOR抑制剂如雷帕霉素组合。雷帕霉素或其它mTOR抑制剂的剂量可如需要的由熟练临床医师使用本领域中已知的剂量确定。如技术人员会理解的，mTOR抑制剂可在包含AD1-PEG20的组合物之前、同时或之后施用。在某些实施方案中，用于治疗肾细胞癌瘤施用的AD1-PEG20剂量为约160IU/m2至约360IU/m2，而在其它实施方案中为约160IU/m2、约170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340`IU/m2约350IU/m2、约360IU/m2、约370IU/m2、380IU/m2、390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/m2、600IU/m2、640IU/m2、或约700IU/m2。在某些实施方案中，其中用AD1-PEG组合氯喹治疗肾细胞癌瘤诱导针对ADI的免疫应答，本公开提供治疗肾细胞癌瘤的方法，其中ADI的剂量加倍并可增加至每周640IU/m2或更多。在一个具体的实施方案中，用于治疗肾细胞癌瘤的ADI修饰为每ADI3.5-6.5个PEG分子，或在一个实施方案中，每ADI4.5-5.5个PEG分子。在另一个实施方案中，本公开提供治疗肾细胞癌瘤的方法，即施用雷帕霉素或其它适宜的mTOR抑制剂，与包含AD1-PEG20的组合物的组合，其中所述组合物包含用5±1.5个PEG分子修饰的ADI，且在一个实施方案中，包含用5±1.5个直链PEG分子修饰的ADI，且在某些实施方案中，所述组合物包含低于约0.5%的天然ADI(即未用PEG修饰)和/或低于约5%的游离PEG。在一个别的实施方案中，所述组合物包含组氨酸-HCL缓冲剂。[0132]在某些实施方案中，本公开提供治疗患者中癌症、减轻其症状或抑制其进展的方法，其包括对该患者施用如本文中描述的包含ADI的组合物，其中所述癌症不是黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴性白血病、慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、肝细胞瘤或肉瘤。[0133]本公开还提供治疗患者中炎性病症、减轻其症状或抑制其进展的方法，包括单独地或与一种或多种其它治疗剂组合地，对该患者施用如本文中描述的包含ADI(例如AD1-PEG，特别是AD1-PEG20)的组合物。在一个实施方案中，本公开还提供治疗患者中炎性肠病、减轻其症状或抑制其进展的方法，包括单独地或与一种或多种其它治疗剂组合地，对该患者施用如本文中描述的包含ADI(例如AD1-PEG，特别是AD1-PEG20)的组合物。在此方面，本公开提供治疗患者中克罗恩病或溃疡性结肠炎、减轻其症状或抑制其进展的方法，包括单独地或与一种或多种其它治疗剂组合地，对该患者施用如本文中描述的包含ADI(例如AD1-PEG，特别是AD1-PEG20)的组合物。[0134]在另一个实施方案中，本公开提供治疗患者中癌症、减轻其症状或抑制其进展的方法，其包括对该患者施用包含ADI的组合物和任选地一种或多种如本文中描述的其它治疗剂，其中所述癌症是ASS、ASL或两者皆缺陷性的。在此方面，ASS或ASL缺陷性可以是表达中的降低，如通过mRNA表达或蛋白质表达测量的，或者可以是蛋白质活性中的降低，且一般包括表达或活性中统计学显著的降低，如由技术人员确定的。降低的ASS或ASL表达或活性可以是表达或活性约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或更多的降低，如相比于已知无癌症的适宜对照样品中的表达或活性。在某些实施方案中，ASS或ASL表达或活性相比于无癌症对照样品中的表达或活性降低了至少两倍。[0135]在某些实施方案中，ASS或ASL的降低的表达或活性起因于ASS或ASL启动子的甲基化。在另一个实施方案中，ASS或ASL表达或活性中的降低起因于DNA突变(例如，一个或多个点突变、小缺失、插入等)或导致基因缺失的染色体异常。在一个实施方案中，癌症是ASS或ASL阴性的，意味着未观察到表达或活性。[0136]ASS或ASL表达或活性中的降低可使用本领域中已知的任意方法来测量，所述方法如但不限于，定量PCR、免疫组织化学、酶活性测定法(例如，测量瓜氨酸到精氨基琥珀酸的转化或精氨基琥珀酸到精氨酸和延胡索酸的转化的测定法；例如，见图1)等。[0137]如此，本发明提供治疗患者中癌症、减轻其症状或抑制其进展的方法，其包括对该患者施用如本文中描述的包含ADI的组合物，其中所述癌症展现出ASS或ASL、或两者皆降低的表达或活性，其中所述癌症包括但不限于白血病(例如急性髓细胞性白血病和复发的急性髓细胞性白血病)、黑色素瘤、肉瘤(包括但不限于转移性肉瘤、子宫平滑肌肉瘤)、胰腺癌、前列腺癌(如但不限于，激素难治性前列腺癌)、间皮瘤、淋巴性白血病、慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌(包括但不限于胃腺癌)、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌(包括但不限于肾细胞癌瘤)、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌(包括但不限于头和颈的鳞状细胞癌；舌癌)、子宫颈癌、睾丸癌、胆囊癌、胆管癌瘤和胃癌。[0138]各种文献中的研究已显示ASS在以下肿瘤中是缺陷性的:[0139]表1:ASS缺陷性肿瘤【权利要求】1.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗白血病。2.权利要求1的化合物，其中所述白血病是急性髓细胞性白血病。3.权利要求1的化合物，其中所述白血病是复发的急性髓细胞性白血病。4.权利要求1的化合物，其中所述白血病不是淋巴细胞性白血病或慢性髓细胞性白血病。5.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述组合物与自体吞噬抑制剂组合用于治疗患者中的癌症，其中所述癌症是胰腺癌、肉瘤或小细胞肺癌。6.权利要求5的化合物，其中所述自体吞噬抑制剂选自下组:氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟基氯喹、巴夫洛霉素(bafilomycin)Al、5-氨基-4-咪唑羧酰胺核糖苷(AICAR)、冈田酸(okadaicacid)、N6-巯基嘌呤核糖苷、渥曼青霉素(wortmannin)和长春碱。7.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗患者中的癌症，其中所述癌症选自下组:乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。8.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗患者中的癌症，其中所述癌症不是黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、肝细胞瘤或肉瘤。9.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物与顺钼组合用于治疗患者中的黑色素瘤。10.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物与多西他赛组合用于治疗患者中的非小细胞肺癌、头和颈癌或前列腺癌。11.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物与雷帕霉素(rapamycin)组合用于治疗患者中的肾细胞癌瘤。12.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至超过一个聚乙二醇分子。13.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至约9至约12个聚乙二醇分子。14.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个PEG分子。15.权利要求14的化合物，其中所述PEG分子是直链PEG分子。16.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述聚乙二醇具有约1,000至约40,000的总重均分子量。17.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述聚乙二醇具有约10，000至约30,000的总重均分子量。18.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述聚乙二醇具有20，000的分子量。19.权利要求17的化合物，其中所述聚乙二醇是直链聚乙二醇。20.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述连接基团是琥珀酰亚胺基团。21.权利要求20的化合物，其中所述琥珀酰亚胺基团是琥珀酰亚氨基琥珀酸、琥珀酰亚氨基丙酸、琥珀酰亚氨基羧甲基化物、琥珀酰亚氨基琥珀酰胺、N-羟基琥珀酰亚胺或其组合。22.权利要求20的化合物，其中所述琥珀酰亚胺基团是琥珀酰亚氨基琥珀酸、琥珀酰亚氨基丙酸或其组合。23.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶不是从精氨酸枝原体(Mycoplasmaarginini)分离的。24.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶是从人型枝原体(Mycoplasmahominis)分离的。25.权利要求24的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶经过修饰使得没有在SEQIDNO:1的112、374、405或408位的至少一个赖氨酸。26.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中。27.权利要求24的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶包含SEQIDN0:2中列出的氨基酸序列。28.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中以约每周两次至约每2周一次施用所述精氨酸脱亚氨酶。29.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中每周施用所述精氨酸脱亚氨酶。30.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中以约80IU/m2至约650IU/m2的剂量施用所述精氨酸脱亚氨酶。31.权利要求30的化合物，其中以约160IU/m2的剂量施用所述精氨酸脱亚氨酶。32.权利要求1、5和7-11中任一项的化合物，其中以约160IU/m2的剂量施用所述精氨酸脱亚氨酶。33.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗患者中的GVHD。34.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗患者中的癌症，其中所述癌症展现出降低的精氨基琥珀酸合成酶表达。35.权利要求34的化合物，其中所述癌症选自下组:白血病、急性髓细胞性白血病、复发的急性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。36.权利要求34的化合物，其中所述降低的精氨基琥珀酸合成酶表达起因于该精氨基琥珀酸合成酶启动子的甲基化。37.权利要求34的化合物，其中所述降低的精氨基琥珀酸合成酶表达起因于DNA突变或缺失。38.权利要求37的化合物，其中所述癌症是精氨基琥珀酸合成酶阴性的。39.一种化合物，其包含经由连接基团共价键合至聚乙二醇的精氨酸脱亚氨酶，所述化合物用于治疗患者中的癌症，其中所述癌症展现出降低的精氨基琥珀酸裂合酶表达。40.权利要求39的化合物，其中所述癌症选自下组:白血病、急性髓细胞性白血病、复发的急性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头和颈癌、子宫颈癌、睾丸癌和胃癌。41.权利要求39的化合物，其中所述降低的精氨基琥珀酸裂合酶表达起因于该精氨基琥珀酸裂合酶启动子的甲基化。42.权利要求39的化合物，其中所述降低的精氨基琥珀酸裂合酶表达起因于DNA突变或缺失。43.权利要求42的化合物，其中所述癌症是精氨基琥珀酸裂合酶阴性的。44.权利要求1、5、7-11、34和39中任一项的化合物，其中所述治疗在体内抑制NO合成、抑制血管发生、诱导肿瘤细胞的细胞凋亡、或其组合。45.权利要求1、5、7-11、34和39中任一项的化合物，其中所述治疗导致稳定疾病(stabledisease)。46.权利要求1、5、7-11、34和39中任一项的化合物，其中所述治疗延长所述患者中的无进展存活时间。47.权利要求1、5、7-11、34和39中任一项的化合物，其中血浆精氨酸消耗至少I个月。48.权利要求1、5、7-11、34和39中任一项的化合物，其中血浆精氨酸消耗超过2个月。49.权利要求5的化合物，其中所述精氨酸脱亚氨酶和所述自体吞噬抑制剂协同作用。50.权利要求1、5、7-8、10-11、34和39中任一项的化合物，其进一步包含化疗剂的施用。51.权利要求50的化合物，其中所述化疗剂选自下组:环磷酰胺、吉西他滨、顺钼、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)和依维莫司(everolimus)。52.权利要求1、5、7-11和39中任一项的化合物，其中:(a)其中所述精氨酸脱亚氨酶共价键合至5±1.5个直链PEG分子，且所述化合物配制在包含低于约0.5%天然AD1、低于约5%游离PEG或两者皆是的组合物中；(b)其中所述精氨酸脱亚氨酶以约160IU/m2至约640IU/m2的剂量每周施用；和(c)其中所述癌症展现出降低的ASS表达。【文档编号】C07K14/00GK103797025SQ201280027431【公开日】2014年5月14日申请日期:2012年5月30日优先权日:2012年4月4日【发明者】J.博马拉斯基,吴伯文申请人:波拉里集团