专利名称：精氨酸取代的新型合成肽及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新肽及其应用，尤其是用于治疗和/或预防感染、炎症和/或肿瘤的 肽。
背景技术：
乳铁蛋白是分子量77kd的单链金属结合糖蛋白。已发现乳铁蛋白负责抗细 菌特性的结构域是称为乳铁蛋白肽的胃蛋白酶裂解片段(参见BellamyW.，et al., Identification of the bactericidal domain of lactoferrin, Biochim. Biophys Acta 1121 130-136,1992, and Bellamy ff, et al, Antibacterial spectrumof lactoferricin B, a potent bactericidal peptide derived from the N-terminalregion of bovine lactoferrin,J Appl Bact 73 472-479,1992)。在许多细胞类型中发现了乳铁蛋白受体，包括单核细胞和巨噬细胞、植物凝集素 刺激的人外周血淋巴细胞、刷状缘细胞、以及肿瘤细胞系。几份专利公开文本描述了乳铁蛋白可能应用于治疗感染或炎症。例如在W0 98/06425中公开了乳铁蛋白和乳铁蛋白肽可用于治疗和预防感染、炎症和肿瘤。EP 629 347描述了一种抗微生物剂，其含有㈧乳铁蛋白水解物和/或一种或多 种源自乳铁蛋白的抗微生物肽，和(B)选自金属螯合蛋白、生育酚、环糊精、甘油脂肪酸酯、 醇EDTA或其盐、抗坏血酸或其盐、柠檬酸或其盐、聚磷酸或其盐、壳聚糖、半胱氨酸、以及胆 酸中的一种或多种化合物作为其有效成分。这种抗微生物剂用于处理产品，尤其是安全处 理例如食品和药品。因此公开文本所述的试剂是一种新的防腐剂。在公开文本中给出了几 种肽的序列和其中一些类似于本发明的肽，但以下将进一步描述几个重要区别。US 5，304，633公开了由人和牛乳铁蛋白水解物分离的抗微生物肽。特别公开了对 应人乳铁蛋白12-47位，以及17-41位氨基酸的肽的分离。JP 7145196描述了通过乳铁蛋白的水解来制备抗菌肽。特别描述了对应人乳铁蛋 白17-41位氨基酸的肽的制备。JP 8040925公开了含有源自乳铁蛋白的肽的药物组合物及其在治疗角膜损伤 (特别是角膜炎)中的应用。特别公开了对应人乳铁蛋白17-41位、12-58位、以及19-38 位氨基酸的肽。JP 7274970公开了源自抗细菌乳铁蛋白的肽的重组产物，特别公开了对应人乳铁 蛋白18-42位氨基酸的肽。JP 8143468描述了源自乳铁蛋白的肽及其作为抗溃疡药的应用，特别公开了对应 人乳铁蛋白19-33位氨基酸的肽。 W0 00/01730描述了源自人乳铁蛋白的肽及其在治疗感染和炎症中的应用。EP 1228097描述了源自人乳铁蛋白的近N末端的肽及其作为微生物剂的应用。EP 1151009描述了含有对应人乳铁蛋白35-50位氨基酸的序列的肽，其具有抗微 生物和/或内毒素中和的活性。
W0 2006/047744描述了源自人乳铁蛋白的N末端部分的免疫调节肽，其含有至少 33个氨基酸并在N末端和C末端具有四个带正电荷氨基酸的取代。
发明内容
本发明的目的是提供新型的合成肽，其可与乳铁蛋白、乳铁蛋白的肽或源自其他 乳铁蛋白的肽用于相同目的，所述新型的合成肽将具有相同的、或更好的功效，并且具有制 备、技术和/或生物化学上的优势。进行本发明研究的目的是设计新型的肽，这种新型的肽在治疗和预防感染、炎症、 肿瘤、创伤和伤痕上应该与人乳铁蛋白、人乳铁蛋白的肽或源自其他乳铁蛋白的肽一样有 效，或优选更有效。发现，被含精氨酸的肽所取代的由人乳铁蛋白N末端的第21-31位氨基酸中的所 有的或部分的氨基酸构成的序列所形成的肽具有所需特性。根据本发明，显示了被含精氨酸的肽所取代的基于人乳铁蛋白N末端的第21-31 位氨基酸构成的序列所设计的肽具有所需特性。显示了人体在其刷状缘膜(brush border membrane)中具有可与人乳铁蛋白结合 的受体(参见例如 Lonnerdal B.，Lactoferrin receptors in intestinalbrush border membranes, Adv Exp. Med. Biol. 1994，357 :171_175)。还显示了牛乳铁蛋白不能与这些受体 结合。人体摄取这些新肽的可能机制是通过与细胞受体的结合摄取肽。但是，本发明并不 限于这种机制。因此，本发明涉及新型合成肽及其功能等价同系物或类似物。此外，本发明涉及含 有所述肽的医药产品和食品物料，特别是婴儿配方食品。本发明还涉及所述肽在制备用于治疗和预防感染、炎症和肿瘤的医药产品上的应用。本发明所述的肽是抗真菌和抗细菌的，从而在需要具有这样特性的物质时可用于 其他用途。它们可用作例如防腐剂。将由以下说明书和所附权利要求解释本发明的表征特征。
图1.存在HLBDargl和23个氨基酸长度的肽(hLF的18_40位氨基酸)的情况下 对大肠杆菌(E.coli)的生长抑制。使用蛋白胨培养基(1%)，将微板温育过夜并在650nm 处读取分光光度计值。如所观察到的，12. 5 u g/ml浓度完全抑制了生长。图2. A)位于经肽治疗和赋形剂治疗的动物关节上的金黄色葡萄球菌的数量。B) 具有3或更高分的动物分布(最严重炎症和/或关节组织腐烂评分为5，而无组织学变化为 0)。注射了 2xl04金黄色葡萄球菌和100 y g肽(HLBDargl)的剂量。图3.肽治疗对念珠菌皮肤感染的影响(每种肽四次)。治疗剂量是每单位感染面 积400i!g。含精氨酸的肽比基于LF抗微生物区域的更长肽序列(25个氨基酸的肽=对应 于hLF的16-40位氨基酸的肽)更高程度地减少了念珠菌。图4.源自乳铁蛋白的肽(HLBD1 Arg rak)对在MeT_5A细胞中IL-1诱导IL_6(A) 或PAI-1 (B)的生成的抑制活性。添加IL-1之后立即在三份细胞中加入指定浓度的肽(n =3)，温育3小时㈧或6小时⑶之后，收集细胞悬浮液并通过定量ELISA分析IL-6 (A)或 PAI-I (B)。结果分别表示为与未添加任何肽所获得的IL-6水平(288pg/ml)或PAI-I水平 (18. 3ng/ml)的关系。通过双面Student' s t_检验测定统计差异(*p≤0. 05 ；≤0. 01 ； 氺氺氺≤p0. 005 ;氺氺氺氺≤p0. 001)。
图5.源自乳铁蛋白的肽(HLBD1 Arg rak)对源自人单核细胞的巨噬细胞系THP-I 细胞的LPS诱导的TNF-α分泌的剂量的抑制活性。添加LPS(0. lng/ml)30分钟之后在三 份细胞中加入指定浓度的肽(η = 3)。刺激6小时之后通过ELISA测量TNF- α水平(R&D Systems，Minneapolis，MN)。结果表示为与未添加任何肽所获得的TNF-α水平(290pg/ml) 的关系。通过双面Student' st-检验测定基因型之间的统计差异(*p ≤ 0. 05)。图6.源自乳铁蛋白的肽对在MeT_5A细胞中IL-1 β诱导的IL_6(A)或PAI-1 (B) 的生成的剂量抑制活性。添加IL-I β之后立即在三份细胞中加入指定浓度的肽(η = 3)， 温育3小时㈧或6小时⑶之后收集细胞悬浮液并通过定量ELISA分析IL-6㈧或 PAI-I (B)。结果表示为与未添加任何肽所获得的IL-6水平(1770pg/ml)或PAI-I水平 (63. Ong/ml)的关系。通过双面Student ‘ s t_检验测定统计差异(*p ≤ 0. 05 ；) = HLBDarg Irak, A= PXLl 1, X = PXL12，■ = PXL13，· = PXL14。图7.源自乳铁蛋白的肽对源自人单核细胞的巨噬细胞系THP-I细胞中LPS诱导 的TNF-α分泌的剂量抑制活性。添加LPS (0. lng/ml) 30分钟之后在三份细胞中加入指定浓 度的肽(η = 3)。刺激6小时之后通过ELISA测量TNF- α水平(R&D Systems)。结果表示 为添加10 μ g/ml肽所获得的TNF- α水平(273_775pg/ml)的关系。通过双面Student' s t-检验测定基因型之间的统计差异(*p≤0. 05)。 = HLBDarg lrak,A= PXLl 1，X = PXL12, ■ = PXL13, · = PXL14。
具体实施例方式因此，本发明涉及根据人乳铁蛋白(hLF)的氨基酸片段设计的肽。作为本发明基 础的hLE片段是由hLE的21-31位置上的氨基酸构成，其序列为Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO :1)。在说明书中以单字母或三字母符号表示氨基酸。这些符号是本领域技术人员公知 的，其具有以下含义A = Ala =丙氨酸，C = Cys =半胱氨酸，D = Asp =天冬氨酸，E = Glu =谷氨酸，F = Phe =苯并氨酸，G = Gly =甘氨酸，I = Ile =异亮氨酸，K = Lys =赖 氨酸，M = Met =甲硫氨酸，N = Asn =天冬酰胺，P = Pro =脯氨酸，Q = Gln =谷氨酰胺， R = Arg =精氨酸，S = Ser =丝氨酸，T = Thr =苏氨酸，V = Val =缬氨酸，W = Trp = 色氨酸，Orn =鸟氨酸，Nle =正亮氨酸和X = Xaa =变量氨基酸(variable amino acid)。 在一些序列中Ac和NH2分别表示乙酰基(CH3CO-)和氨基，它们用于修饰肽的氨基和羧基末 端。人乳铁蛋白的N末端部分地含有富含精氨酸的序列，人乳铁蛋白1-31位的氨基酸序列 如下所示Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys—Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO 2)序列Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser被鉴定为重要序列基元，并被用在本发明肽的设计中。本发明涉及一种如式(1)所示的肽Rl-Phe-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg-X8-R2| aR3 式(1)其中，氨基酸XI是Gin或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gin、Ala、 0rn、Nle 或 Lys，氨基酸 X4 是 Arg、Ala 或 Lys，氨基酸 X5 是 Asn、Ala、0rn 或 Nle，氨基酸 X6 是 Met、Ala 或 Leu,氨基酸 X7 是 Arg、Ala 或 Lys，氨基酸 X8 是 Gly、Lys、Glu 或 Asp ；当X8是Gly时，则R3是Ser_ (Arg) n_X9且键a是Gly的羧基和Ser的氨基之间 的肽键；当X8是Lys时，则R3是X9_ (Arg) n_Ser且键a是Lys的￡ -氨基和Ser的羧基 之间的酰胺键；和当X8是Glu或Asp时，则R3是Ser- (Arg) n_X9且键a是Glu的Y -羧基或Asp 的3 -羧基和Ser的氨基之间的酰胺键；氨基酸X9位无氨基酸或者是Gly ；而n是1-10的整数，优选2-6的整数，优选4_6的整数，或更优选3_4的整数；R1位无氨基酸、或者是Cys或者是选自SEQ ID NO :3所示的肽及其切除了 N末端 的片段的肽中的肽序列，所述肽序列包括Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys,Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys,Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys,Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys,Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T hr-Lys-Cys,
hr-Lys-Cys,
hr-Lys-Cys,
hr-Lys-Cys,
hr-Lys-Cys,
hr-Lys-Cys,
Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T Trp-Cys-Ala-Val-Ser- -Pro-Glu-Ala-T Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-T Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,
Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Ala-Thr-Lys-Cys,Thr-Lys-Cys,和Lys-Cys,优选地，R1位无氨基酸、或者是Cys或者是选自SEQ ID NO :11所示的肽及其切除 了 N末端的片段的肽中的肽序列，所述肽序列包括Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-
Cys, Cys, Cys, Cys, Cys,
Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,
Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,
Glu-Ala-Thr-Lys-Cys,
Ala-Thr-Lys-Cys,
Thr-Lys-Cys,
和
12
Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-
Lys-Cys,R2位无氨基酸、或者是Pro或者是选自SEQ ID NO 4所示的肽及其切除了 C末端 的片段的肽序列，切除了 C末端的片段的肽序列包括Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys-Arg,Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys,Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile,Pro-Pro-Val-Ser-Cys,Pro-Pro-Val-Ser,Pro-Pro-VaUPPro-Pro ；由此，以上定义R2的肽序列以SEQ ID NO :4或其切除了 C末端的片段表示。在一个优选实施方式中，X8是Gly而R3是Ser-(Arg) n_X9且键α是Gly的羧基 和Ser的氨基之间的肽键。在另一优选实施方式中，Χ8是Lys而R3是Χ9-(Arg)n-Ser且键α是Lys的ε-氨 基和Ser的羧基之间的酰胺键。在另一优选实施方式中，Χ8是Glu而R3是Ser-(Arg) η_Χ9且键α是Glu的γ-羧 基和Ser的氨基之间的酰胺键。在另一优选实施方式中，氨基酸Xl是Gln，Χ2是Trp，X3是Gln或Lys，X4是Arg， X5 是 Asn 或 Ala，X6 是 Met，和 / 或 X7 是 Arg。在另一优选实施方式中，Rl位无氨基酸或者为肽序列Ala-Thr-Lys-Cys。在另一优选实施方式中，R2位无氨基酸或者为肽序列Pro-Pro-Val-Ser-Cys-IIe -Lys-Arg0在一个优选实施方式中，本发明提供了含有SEQ ID NO 12 (Phe-Gln-Trp-X3-Arg -X5-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly)的纯化肽，其中 X3 是 Gln 或 Lys 而 X5 是 Asn 或 Ala，其中，所述肽是 SEQID NO :5、6、7、8、9、或 10。如果存在，用乙酰胺甲基_半胱氨酸取代氨基酸Cys可有利地避免该肽与含有半 胱氨酸的另一肽形成双硫键，和/或避免若肽含有两个Cys残基而形成的分子内双硫键。根据本发明的一个优选方面，肽的羧基末端被切除，即在羧基末端的游离COOH被 转化成CONH2。根据本发明的另一优选方面，肽的氨基末端被切除，即在氨基末端的游离NH2被转 化成酰胺 CH3CONH-(AcNH-)。若肽是分枝的，可切除肽的一个或两个氨基末端。若肽是分枝的，可切除肽的一个 或两个羧基末端。根据本发明的另一优选方面，肽的羧基末端和氨基末端都被切除。切除形式的优势在于这些肽的N末端和C末端的氨基酸是中性且不带电荷的，因 此具有变化的静电性质。假设受体与相应的N末端和C末端无变化的人乳铁蛋白序列结合， 切除肽应该结合得更好因为它们在这方面比未切除肽更类似于天然蛋白。本发明优选的肽是0106]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2
0107]
0108]Gly-Arg-Arg-Arg-Ser ；
0109]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2
0110]
0111]Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；
0112]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2
0113]
0114]Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；
0115]Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Me t-Arg-Lys-Val-Arg~Ly s-NH2
0116]
0117]Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ； 0118]Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2
0119]
0120]Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；
0121 ]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 0122]
0123]Ac-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser
0124]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2
0125]
0126]Ac-G1y-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser
0127]Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2
0128] 0129]
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM
14-Ile-Lys-ArgGly-Arg-Arg-Arg-Arg—Ser ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-Arg|Gly-Arg-Arg-Arg-Arg—Ser ；Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2Gly-Arg-Arg-Arg-Arg—Ser ；Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-ArgGly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-ArgGly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys_Arg-NH2Ac—Gly—Arg-Arg-Arg-Arg-Arg—SerAla-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser ；Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-Arg
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-Arg
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；
15
Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg_Glu-NH2
S er-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g~G1y-NH2 ；Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-Cy sM-Ile-Lys-Arg
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-LLys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-C ysM-Ile-Lys-Arg|
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg_Glu-NH2S er-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g-Arg-Gly-NH2Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg_Glu-NH2|
Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar g-Gly-NH2；(SEQ IDNO 5)Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar
IDNO 6) Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar g-Gly-NH2 ；
g-Gly-NE
(SEQ
ID NO 7)Ala-Thr-Lys-CysM-
(SEQ
-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar g-Gly-NH2 ；
(SEQ IDN0 8)Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar g-Gly-NH2 ；(SEQ ID NO 9)Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Ar g-Gly-NH2 ；(SEQ IDNO 10)CysM是乙酰胺甲基_半胱氨酸。其中给出了切除了 N末端和/或C末端形式的肽，本发明中也可能使用未切除形 式的肽。其中给出了未切除N末端和/或C末端形式的肽，本发明中也可能使用切除形式。序 列 Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser, Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser, Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser, G1y-Arg-Arg-Arg-Ser, Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-G1y, Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly 禾口 Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly 在生理条件下是带正电荷 的，并能够与受体强烈且特异性地相互作用。因此它们是本发明所述肽的重要部分。本发明所述肽的优势是它们含有人乳铁蛋白的乳铁蛋白肽片段部分、或它们的修 饰模型，发明人发现了这种优势并活跃地进行了本发明。一些情况中，所附序列表中仅给出切除形式的序列。但是，根据本发明也可能使用 未切除形式。显示出，以含Arg肽取代hLF活性片段所造就的本发明肽提供了与源自hLF的其 他已知肽相比具有改善特性的肽。本发明所述肽适宜用于治疗和/或预防感染、炎症、肿瘤、疼痛、创伤和伤痕。本文 所用的术语“治疗”是指治愈、恢复、减缓、减轻、最小化、抑制或终止病状的有害作用、疾病 发展或其他异常状态，而本文所用的术语“预防”是指最小化、降低或抑制罹患病状或发展 或其他异常或有害状态的风险。以本发明所述的肽或医药产品可治疗的感染包括由所有类型的病原体，例如细 菌、病毒、真菌等引起的感染。还可以治疗不同类型的炎症。炎症是一种以异常“发红”和组织和器官的肿大、 在受影响区的疼痛和发热、毛细管膨胀、白血球的渗入等为标记的复杂现象。炎症主要是 由暴露于细菌和其他有毒因子和物理创伤引起的。炎症的这些调节剂包括肿瘤坏死因 子-a (TNF- a )、白介素-1 (IL-1)、白介素_6 (IL_6)、白介素_8 (IL_8)、和多种集落刺激因 子(CSFs)。如上所列，本发明所述的肽也适宜用于治疗肿瘤。
本发明所述的肽或可用其本身或被包含在医药产品或药物制品中。本发明所述的 医药产品或药物制品也可含有用于促成药物制品的制备或制品的给药的物质。这种物质是 本领域技术人员公知的，可以是例如药物可接受的佐剂、载体和防腐剂。本发明所述的肽可配制成口服给药、全身给药、肠胃外给药、定点给药或局部给 药。本发明所述的肽或药物产品可经口服、全身、肠胃外、定点或局部给药至患者。本 文所用的术语“患者”是指患有病状、疾病发展或其他异常或有害状态或具有患病风险的任 何人。全身给药适宜用于例如治疗泌尿道感染、结肠炎和肿瘤。全身给药可通过口、鼻、静 脉内、动脉内、腔内、肌肉内、皮下、经皮、栓剂(包含直肠)或本领域技术人员已知的其他途 径进行。口服给药是优选的。定点给药适宜用于例如治疗皮肤感染，黏膜上的所有感染和 炎症等。定点给药可通过局部、口、鼻、阴道或口咽途径进行。对于治疗皮肤或黏膜上的局 部感染或炎症，本发明所述的肽或医药产品可被包含在凝胶、乳膏、软膏、或浆糊中。在本发明所述的方法中，将有效量的本发明所述肽给药至患者。本文所用的术语 “有效量”是指足以治疗或预防病状、疾病发展或其他异常或有害状态的量。本发明所述的肽或医药产品和方法特别适宜用于治疗和/或预防尿道感染和结 肠炎，但根据本发明也可治疗几种其他炎症和传染病，例如炎性肠疾病、风湿性关节炎、由 病毒HIV-1弓丨起的病状、由病毒CMV引起的病状、和由真菌(例如念珠菌属如白色念珠菌和 克鲁斯念珠菌，曲霉菌和新型隐球菌)引起的病状。该列表不限制本发明的范围。本发明 所述的肽或医药产品和方法也特别适宜用于预防性医疗护理，是降低对这些疾病具有增强 风险的患者罹患尿道感染或其他炎症或传染病的风险。本发明的肽适宜用于抗炎症和免疫调节治疗，示例但不限于1)通常，治疗炎症和/或由炎症造成的医学病状，特别是，2a)肠道；克罗恩病(Morbus Crohn)，溃疡性结肠炎，2b)关节；风湿性关节炎，关节炎，关节病，局部的肌肉病症包括肌肉痉挛，肌肉撕 裂，肌肉损伤，肌肉劳损，肌肉扭伤，2c)皮肤病学；银屑病，湿疹(红疹)，皮炎，座疮，2d)心脏；心包炎，心内膜炎，心功能不全，2e)疼痛；(由以下2f进一步指定)2f)神经系统；阿尔茨海默病，多发性硬化，腕管综合征，椎间盘突出，宫颈瘤，贝 尔麻痹，急性脊髓损伤，脊髓压迫症，椎管狭窄，带状疱疹后神经疼，病毒性脑炎，病毒性脑 膜炎，美尼尔症，骨髓灰质炎和骨髓灰质炎后并发症，慢性炎症性脱髓鞘性多发神经病，多 发神经病，三叉神经痛，慢性癫痫性病症，2g)感官器官；青光眼2h)黏膜表面(化疗/放疗造成的炎症)2i)变态反应，2j)自体免疫疾病本发明的肽还适宜用于预防和治疗与病状和手术相关联的伤口和伤痕，示例但不 限于3a)在多个组织(例如皮肤，肌肉，肌腱，神经组织，血管)和在不同身体部位(例如眼睛，耳朵，声带，手，脊髓，腹腔内，胸腔内，颅内，口腔，妇科手术，子宫内膜，包茎)上的 外科手术3b)座疮3c)肥大性疤痕&疤痕疙瘩，3d)肋膜炎，3e)腹膜透析，据信本发明的肽还具有抗血管生成的功效，因此适宜用于治疗4a)癌症4b)风湿性关节炎本发明的肽具有抗感染功效，适宜用于预防和治疗5a)抗细菌功效上和下呼吸道(扁桃体炎、窦炎等)眼睛的感染(例如结膜炎)泌尿道感染性传播疾病(包括避孕套的抗微生物涂层)生殖道疾病，包括阴道病、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、PID胃肠道感染(G1引发的全身感染)中枢神经感染皮肤感染(包括葡萄球菌，例如MRSA，医院的，伤口，烧伤)，肌肉感染，关节(例如 脓毒性关节炎)感染，骨骼和造血系统感染，与口腔相关的感染(包括牙周炎，牙龈炎)5b)抗病毒功效上和下呼吸道性传播疾病胃肠道感染(G1引发的全身感染)中枢神经系统感染5c)抗真菌功效上和下呼吸道(例如口疮，皮肤粘膜念珠菌病)泌尿道，例如外阴阴道念珠菌，龟头炎，胃肠道感染(G1引发的全身感染)中枢神经系统感染皮肤感染(例如皮肤粘膜念珠菌病)本发明所述的肽、医药产品和方法可单独、相互组合、或与常规治疗组合使用。根据本发明，也可能在任何类型的食品或饮料中包含有效量的肽以减少由于潜在 疾病、低出生体重或医学治疗而对这些病状具有增强风险的患者的感染和/或炎症。例如， 可能在婴儿配方食品中包含有效量的肽以抑制细菌的有害影响，例如由细菌、病毒或真菌 诱导炎症引起的婴儿体重减轻。若将本发明所述肽用在食品物料，例如为营养目的，特别优 选使用天然来源的肽。因为本发明所述的肽具有抗微生物功效，它们也可在不同食品物料和医药产品 (例如凝胶，乳膏，软膏，浆糊，溶液，乳液等)中用作防腐剂。
将在以下实施例中进一步解释本发明。这些实施例仅用于示例本发明而不应认为 限制本发明的范围。实施例实施例1.抗微生物试验使用大肠杆菌，金黄色葡萄球菌(S. aureus)和白色念珠菌(C. albicans)作为检 验微生物，通过抗微生物试验对含有Arg-Arg-Arg-Arg-或Arg-Arg-Arg-的肽(表1)进行 分析。将清洗的细胞悬浮在细菌蛋白胨(BP) (Difco, USA)。通过分光光度计值调整 细菌或真菌的浓度。将分两步以BP系列稀释的肽按两份或三份加入到微孔板的孔中(每 孔200ia)。加入10 iil细菌或酵母细胞溶液至终浓度为约每毫升2 X105细胞。通过活菌 计数法检查母液浓度。除非另有说明，将微孔板在37°c恒湿箱中温育2小时。从每孔中取 出5iU滴加在血液琼脂平板上并在37°C温育过夜。使接种物减少99%的乳铁蛋白或肽浓度被定义为MMC99。肽的抗微生物活性显示，除了 HLBDarg2之外所有肽都强于天然序列1_31位氨基 酸(HLBD31)(表2)。在这个肽中Arg-Arg-Arg-Arg-Arg序列与氨基末端侧的苯丙氨酸通过 间隔区(三个甘氨酸残基)相连。在图1中，比较了 HLBDargl与含有18_40位氨基酸的源自天然乳铁蛋白的肽 HLBD2的生长抑制。记录了在这个培养基中HLBDargl具有强得多的抗微生物活性，其强烈 地降低了许多源自其他LF的肽的抗微生物活性。
20表1.实施例中所用的精氨酸尾的肽
MMC99 , Jig/ml 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 *ND =未测定实施例2.金黄色葡萄球菌的关节感染小鼠。从B&K(Sollentuna，Sweden)获得5-8周龄的小鼠，并将30只饲养在哥德 堡带血风湿病学学院的动物房中。十只一笼，标准的温度和光照条件，并饲喂标准食物和任 意的水。细菌菌株和感染。使用金黄色葡萄球菌AB-1。将细菌注射到双后肢的膝关节中 (滑液空间)。细菌和肽或赋形剂在注射之前再混合。注射剂量为2xl04金黄色葡萄球菌和 100 ug(HLBDargl) 0右后肢的膝盖作为阳性对照。此外某些动物仅注射肽溶液。感染后3 天处死动物，以福尔马林保存膝关节并脱钙用于组织学评价。通过培育分析左关节中存在 的细菌数量(去除皮肤之后关节液体的棉签)。关节中金黄色葡萄球菌的数量比赋形剂处理组更高，尽管并不存在统计显著性 (图2)。关节的盲性评分揭示了肽处理和赋形剂处理动物之间的统计差异。因而，肽显示 出了可降低金黄色葡萄球菌诱导关节炎的严重性。实施例3.白色念珠菌皮肤感染白色念珠菌。将酵母细胞(ATCC64549)在23°C的Sabourad肉汤中温育过夜。以 磷酸缓冲液(10mM，pH 7. 4)洗涤细胞并调整至ZxlO^Vml浓度。皮肤感染和肽处理。在麻醉期间通过温柔擦拭以钝圆塑料棒将10 iU体积的白色 念珠菌处理小鼠的刮毛面积区(每点2xl08酵母细胞)。第二天将10 yl或20 yl体积的肽 溶液或赋形剂(磷酸缓冲液)施加在感染点以处理麻醉小鼠。让溶液干燥。4小时之后重 复处理。之后处死小鼠。对洗涤物进行活菌计数，其是通过将金属环置于点上并以100 yl 含有Triton-x 100(0.01%)的磷酸缓冲液温柔擦拭而获得的。采用最多三个不同肽浓度， 以每点40(^8、10(^8、和25118开始。尽管获得了高度差异性(每个浓度四个点)，三个 肽明显减少了菌落形成单位(CFU)(表3)。图3中给出了 400 y g获得的结果。表3 ° 每点 lmg实施例4.体外抗炎症和溶纤维蛋白功效将对应于正常人间皮细胞的MeT_5A细胞系，维持在附加了 10%胎牛血清(FBS ； PAA Laboratories GmbH)、3. 3nM 表皮生长因子(EGF ;AMSBiotechnology Ltd)、400nM 氢化 可的松(MP Biomedicals)、20mM 羟乙基哌嗪乙磺酸 Ofepes) (PAA Laboratories GmbH)和 870nM人重组胰岛素(Sigma)的M199培养基(GIBC0)中。通过在以上所述培养基(除了含 有5%热失活FBS)中添加重组IL-1 (R&D Systems)来诱导细胞，在IL-6或PAI-1试验中添 加量分别为0. 1或0. 5ng/ml。通过IL-1刺激后立即添加给定浓度的HLBDIArg rak。使用人单克隆抗IL-6抗体(R&D Systems)通过定量免疫ELISA，在诱导3小时之 后测量IL-6的生成。通过商业可供的ELISA 试剂盒(Tint-Eliza PAI-1, Trinity Biotech)，在诱导 6 小时之后测量PAI-1水平。结果表示为与未添加任何肽所获得的IL-6水平(288pg/ml)或PAI-1水平 (18. 3ng/ml)的关系。结果(图4)表明了肽对间皮细胞中IL-6和PAI-1的生成有明显的降调节。实施例5.体外抗炎症功效将对应于人单核细胞的THP-1细胞系(ATCC #TIB_202)，维持在附加了 10 % 胎牛血清(FBS ；PAA)，ImM 丙酮酸钠(Sigma)，和 20mM HEPES (PAA)的 RPM11640 (PAA Laboratories GmbH)中。细胞密度调整至1x106细胞/ml并将500 yl细胞悬浮液添加到 24孔细胞培养板(Sarstedt)中。用10ng/ml PMA((12_)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐； Sigma)处理细胞48小时以分化单核细胞成巨噬细胞样细胞。48小时之后在以上所述培养 基(除了含有5%热失活FBS)中添加0. lng/ml LPS(大肠杆菌血清型055:B5 ；Sigma)来 刺激细胞。添加LPS后30分钟加入给定浓度的肽HLBDIArg rak。温育6小时之后收集细 胞悬浮液，离心并通过ELISA (R&D Systems)分析TNF-a的生成。实验结果(图5)证实了肽对人单核细胞源巨噬细胞中的TNF-a生成有明显的降 调节。实施例6.体外抗炎症和溶纤维蛋白功效将对应正常人间皮细胞的MeT_5A细胞系维持在附加了 10%胎牛血清(FBS ；PAA Laboratories GmbH)、3. 3nM表皮生长因子(EGF ；AMSBiotechnology Ltd)、400nM 氢化可的 松(MP Biomedicals)、20mM 羟乙基哌嗪乙磺酸 Ofepes) (PAALaboratories GmbH)和 870nM 人重组胰岛素(Sigma)的M199培养基中。细胞密度调整至1. 6xl05细胞/ml并将100 u 1细胞悬浮液添加到96孔细胞培养板(Sarstedt)的每个孔中。温育细胞48小时以使细胞 附着并生长至汇合。48小时之后通过在以上所述培养基(除了含有5%热失活FBS)中添 加重组IL-10 (R&D Systems)来诱导细胞，在IL-6或PAI-1试验中添加量分别为0. 1或 0. 5ng/ml。通过IL-1 ^刺激后立即添加给定浓度的不同肽。温育3或6小时之后收集细胞悬浮液，离心并分别通过IL-6 (R&DSystems)或 PAI-1 (Tint-Eliza PAI-1, Trinity Biotech)特异性 ELISA 分析 IL-6 或 PAI-1。结果(图6)表明了肽对间皮细胞中IL-6和PAI-1的生成有明显的降调节。实施例7.体外抗炎症功效 将对应于人单核细胞的THP-1细胞系(ATCC #TIB_202)，维持在附加了 10 % 胎牛血清(FBS ；PAA)，ImM 丙酮酸钠(Sigma)，禾P 20mM HEPES (PAA)的 RPM1 1640 (PAA Laboratories GmbH)中。细胞密度调整至lxlO6细胞/ml并将100 u 1细胞悬浮液添加到 96孔细胞培养板(Sarstedt)的每个孔中。用10ng/ml PMA((12_)十四酸佛波酯(-13-)乙 酸盐；Sigma)处理细胞48小时以分化单核细胞成巨噬细胞样细胞。48小时之后在以上所述 培养基(除了含有5%热失活FBS)中添加0. lng/ml LPS (大肠杆菌血清型055:B5 ；Sigma) 来刺激细胞。添加LPS后30分钟加入指定浓度的不同肽。温育6小时之后收集细胞悬浮 液，离心并通过ELISA(R&D Systems)分析TNF-a的生成。实验结果(图7)证实了肽对人单核细胞源巨噬细胞中的TNF-a生成有明显的降 调节。实施例8.抗微生物试验使用大肠杆菌(E.coli)，金黄色葡萄球菌(S.aureus)和铜绿假单胞杆菌 (P. aeruginose)作为检验微生物通过抗微生物试验对含有Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-或 Arg-Arg-Arg-Arg-的肽(表4)进行分析。将细胞悬浮在1 %的脑-心浸液培养基(BHI) (Difco, USA)中。通过分光光度计 值调整细菌的浓度。将分两步以1%BHI系列稀释的肽按两份加入到微孔板的孔中(每孔 100 iil)。加入5 iil体积的细菌细胞溶液至终浓度为约每毫升5x 105细胞。通过活菌计 数法检查母液浓度。将微孔板在37°C温育2小时。从每孔中取出5 yl滴加在血液琼脂平 板上并在37°C温育过夜。使接种物减少99 %的肽浓度被定义为MMC99。表 权利要求
一种如式(1)所示的肽R1-Phe-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg-X8-R2|αR3式(1)其中，氨基酸X1是Gln或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gln、Ala、Orn、Nle或Lys，氨基酸X4是Arg、Ala或Lys，氨基酸X5是Asn、Ala、Orn或Nle，氨基酸X6是Met、Ala或Leu，氨基酸X7是Arg、Ala或Lys，氨基酸X8是Gly、Lys、Glu或Asp；当X8是Gly时，则R3是Ser-(Arg)n-X9且键α是Gly的羧基与Ser的氨基之间的肽键；当X8是Lys时，则R3是X9-(Arg)n-Ser且键α是Lys的ε-氨基与Ser的羧基之间的酰胺键；和当X8是Glu或Asp时，则R3是Ser-(Arg)n-X9且键α是Glu的γ-羧基或Asp的β-羧基与Ser的氨基之间的酰胺键；氨基酸X9位无氨基酸或者是Gly；且n是1-10的整数，优选2-6的整数，优选4-6的整数，或更优选3-4的整数；R1位无氨基酸、或者是Cys、或者是选自SEQ ID NO3所示的肽及其切除了N末端的片段的肽中的肽序列，所述肽序列包括Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Arg-Arg-Ser-Val-G ln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Pro-Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Glu-Ala-Thr-Lys-Cys，Ala-Thr-Lys-Cys，Thr-Lys-Cys，和Lys-Cys，R2位无氨基酸，或者是Pro，或者是选自SEQ ID NO4所示的肽及其切除了C末端的片段的肽中的肽序列，所述肽序列包括Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys-Arg，Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys，Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile，Pro-Pro-Val-Ser-Cys，Pro-Pro-Val-Ser，Pro-Pro-Val，andPro-Pro，。
2.根据权利要求1所述的肽，其中，氨基酸X8是Gly，R3是Ser-(Arg)n-X9，且键a是 Gly的羧基与Ser的氨基之间的肽键。
3.根据权利要求1所述的肽，其中，氨基酸X8是Lys，R3是X9-(Arg)n-Ser，且键a是 Lys的￡ -氨基与Ser的羧基之间的酰胺键。
4.根据权利要求1所述的肽，其中，氨基酸X8是Glu，R3是Ser-(Arg)n-X9，且键a是 Glu的Y _羧基与Ser的氨基之间的酰胺键。
5.根据权利要求1-4中的任意一项所述的肽，其中，氨基酸XI是Gln，氨基酸X2是Trp， 氨基酸X3是Gin或Lys，氨基酸X4是Arg，氨基酸X5是Asn或Ala，氨基酸X6是Met，且氨 基酸X7是Arg。
6.根据权利要求1-5中的任意一项所述的肽，其中，氨基酸X9是Gly。
7.根据权利要求1-6中的任意一项所述的肽，其中，R1位无氨基酸或者是肽序列 Ala-Thr-Lys-Cys。
8.根据权利要求1-7中的任意一项所述的肽，其中，R2位无氨基酸或者是肽序列Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile—Lys—Argo
9.根据权利要求1-8中的任意一项所述的肽，其中，羧基末端的游离C00H被转化成 C0NH2o
10.根据权利要求1-8中的任意一项所述的肽，其中，氨基末端的游离NH2被转化成酰 胺 ch3conh。
11.根据权利要求1-8中的任意一项所述的肽，其中，如果存在氨基酸Cys，则氨基酸 Cys被乙酰胺甲基-半胱氨酸替代。
12.—种肽，其中，该肽选自以下序列Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gl y-NH2(SEQ IDNO 5)Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-nh2；(SEQ ID NO 6)Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gl y-NH2(SEQ IDNO 7)Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg_G1y_NH2(SEQ ID NO 8)Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gl y-NH2(SEQ ID NO 9)禾口Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Gly-Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-nh2(SEQ ID NO 10)
13. 一种肽，其中，该肽选自以下序列Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-SerAla-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-Ile -Lys-Arg ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-I le-Lys-Arg ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-SerA1a-Thr-Lys-CysM_-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-SerA1a-Thr-Lys-CysM_-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-Ile -Lys-Arg ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-I le-Lys-Arg ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-SerA1a-Thr-Lys-CysM_-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2 ；Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2Ac-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-NH2Ac _G 1 y-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g-Ar g-Ser禾口Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Lys-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-I le-Lys-Arg-NH2Ac-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser5
14. 一种肽，其中，该肽选自以下序列Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-G1u-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-G1u-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Asn-Met-Arg-Lys-Val-Arg-G1u-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ；Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-G1u-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ； Ala-Thr-Lys-CysM--Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-Ile -Lys-Arg ；Ser-Arg-Arg-Arg-Arg—Gly-NH2 Ac-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-I le-Lys-Arg ；Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 A1a-Thr-Lys-CysM_-Phe-Gln-Trp-Gln-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2ISer-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ； Ala-Thr-Lys- CysM--Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-Ile -Lys-Arg ；ISer-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-Pro-Pro-Val-Ser-CysM-I le-Lys-Arg ；Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH ； A1a-Thr-Lys-CysM_-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2 ； 禾口Ac-Phe-Gln-Trp-Lys-Arg-Ala-Met-Arg-Lys-Val-Arg-Glu-NH2Ser-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-NH2。
15.一种药物组合物，其中，该药物组合物含有权利要求1-14中的任意一项所述的肽。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中，该药物组合物用于治疗和/或预防感 染、炎症、肿瘤、疼痛、创伤和伤痕。
17.根据权利要求15-16中的任意一项所述的药物组合物，其中，该药物组合物配制用 于口服给药、全身给药、肠胃外给药、定点给药或局部给药。
18.一种食品物料，其中，该食品物料含有权利要求1-14中的任意一项所述的肽。
19.权利要求1-14中的任意一项所述的肽在制备用于治疗和/或预防感染、炎症、肿 瘤、疼痛、创伤和伤痕的医药产品中的应用。
20.根据权利要求19所述的应用，其中，所述医药产品配制用于口服给药、全身给药、 肠胃外给药、定点给药或局部给药。
21.一种治疗或预防感染、炎症、肿瘤、疼痛、创伤和伤痕的方法，其中，该方法包括对患 者给药有效剂量的权利要求1-14中的任意一项所述的肽、它的片段、以及它的功能等价同 系物和类似物。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，通过口服给药、全身给药、肠胃外给药、定点给 药或局部给药的方式进行给药。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述给药的物质包含在食品物料中。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述给药的物质包含在婴儿配方食品中。
25.根据权利要求1-14中的任意一项所述的肽，其中，该肽用作药剂。
26.根据权利要求1-14中的任意一项所述的肽，其中，该肽用于治疗和/或预防感染、 炎症、肿瘤、疼痛、创伤和伤痕。
27.根据权利要求26所述的肽，其中，该肽配制用于口服给药、全身给药、肠胃外给药、 定点给药或局部给药。
全文摘要
本发明涉及根据人体乳铁蛋白序列设计的精氨酸取代的新肽及其应用，尤其是用于治疗和/或预防感染、炎症、肿瘤、疼痛、创伤和/或伤痕的肽。
文档编号C07K14/79GK101878226SQ200880114504
公开日2010年11月3日 申请日期2008年11月10日 优先权日2007年11月14日
发明者G·多尔芬, 马特斯贝-巴尔策 申请人:瑞典外科药物公司