一种Thonningianin A单体的分离纯化方法
【专利摘要】本发明涉及一种ThonningianinA单体的分离纯化方法，属于中药活性成分的分离纯化【技术领域】。具体步骤为：（1）提取：将赶黄草药材切成小段，以乙醇回流提取、过滤；（2）浓缩：将滤液浓缩至20%；（3）大孔吸附树脂富集与洗脱；（4）聚酰胺树脂富集与洗脱；（5）高效制备液相色谱分离：流动相为乙腈-0.3%磷酸水溶液，检测波长254nm；（6）产品回收：将ThonningianinA单体溶液过滤析出晶体，经干燥即得到ThonningianinA单体产品。本发明操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定可靠，重现性好，成本易控制，产品纯度高，可作为含量测定的标准物质使用。
【专利说明】—种Thonn i ngi an i η A单体的分离纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药用植物化合物单体的分离提纯方法，具体来说，涉及一种从赶黄草中分离纯化Thonningianin A单体的方法,属于中药分离纯化【技术领域】。
【背景技术】
[0002]赶黄草(Penthorumchinense Pursh)为虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属(Penthorum)植物扯根菜(Penthorum chinense Pursh)的干燥地上部分。夏、秋季节采集，除去杂质、干燥或鲜用。赶黄草为苗族传统药物，民间以其全草入药。全草性温、味甘、无毒，具清热、利尿消尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效。主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等。
[0003]Thonningianin A是赶黄草的特征性化学成分,也是该植物中活性最高的黄酮苷类成分；Thonningianin A分子式为C42H34O21,分子量是874.16,其结构式如下
【权利要求】
1.一种Thonningianin A单体的分离纯化方法,其特征在于:包括以下工艺步骤: (1)提取 将赶黄草药材切成0.5cm的小段，按照药材重量:70%乙醇溶液=IKg:6L,加入浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，收集、合并滤液； (2)浓缩 将步骤(1)收集、合并的滤液回收乙醇,浓缩至原滤液体积的15-25% ； (3)大孔吸附树脂富集与洗脱 将步骤(2)浓缩后的滤液过大孔吸附树脂进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用60%-70%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇； (4)聚酰胺树脂富集与洗脱 将步骤(3)浓缩后的洗脱液过聚酰胺树脂进行吸附，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇得解析产品浓缩液； (5)高效制备液相色谱分离 色谱条件如下: 填料为C18的色谱柱； 流动相组成为:乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45:55 ； 检测波长为254nm ； 取步骤(4)浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μπι有机膜过滤，滤液进样，进行Thonningianin A单体的制备分离,紫外检测器在线监测,针对性收集Thonningianin A单体的制备懼分溶液，得Thonningianin A单体溶液； (6)产品回收 将步骤(5)高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，Thonningianin A单体在水溶液中大量析出，放置室温后用漏斗过滤析出晶体,过滤固体于65°C干燥12小时，即得到Thonningianin A单体产品； 步骤(1)、(3)、(4)中所述乙醇的浓度均为体积百分比。
2.根据权利要求1所述的一种ThonningianinA单体的分离纯化方法,其特征在于:在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中ThonningianinA单体的峰形,取步骤(4)所得的浓缩液过滤然后进样,进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形，色谱条件如下: 填料为C18的色谱柱； 流动相组成为:乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45:55 ； 检测波长为254nm。
3.根据权利要求1所述的一种ThonningianinA单体的分离纯化方法,其特征在于:步骤(6)所述Thonningianin A单体产品的纯度复检采用反相分析型液相色谱RP-HPLC法，色谱条件如下: 以C18为填充剂；以乙腈-0.3%磷酸水溶液V/V=45:55为流动相；流速1.0mL/min ;检测波长为254nm。
【文档编号】C07H1/08GK103665067SQ201310715198
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】白兰辉, 文焕松, 夏柯, 郭建华, 刘丁 申请人:成都普思生物科技有限公司