一种新型巯基荧光探针、制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于生物检测【技术领域】，具体涉及一种新型巯基荧光探针、制备方法及其应用。该新型荧光探针具有如式1所示的结构：式1，其中，R=NH2或COOH，可用于多糖、肽、蛋白质以及核酸的定量分析或定位示踪。
【专利说明】一种新型巯基荧光探针、制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物检测【技术领域】，具体涉及一种新型巯基荧光探针、制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002]荧光标记技术是指利用一些能发荧光的物质共价结合或物理吸附在所要研究的分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记技术起源于20世纪40年代用荧光标记抗体来检测相应的抗原，随着现代医学、分子生物学发展，各种先进的荧光检测技术及仪器的应用，荧光标记作为一种非放射性的标记技术受到很大程度的重视，并取得了迅速发展，广泛应用与细胞内外物质检测、核酸的检测及疾病早期的诊断等。[0003]在荧光标记技术中常使用的荧光标记试剂有荧光素类和罗丹明类，其它的荧光标记试剂有多环芳烃化合物及芳香杂环化合物类和一些稀土元素的螯合物等。其中荧光素类标记试剂主要有异硫氰酸荧光素、羟基荧光素、四氯荧光素等；罗丹明类主要包括R101、四乙基罗丹明、和羧基四甲基罗丹明等；其他荧光标记试剂包括萘、蒽、芘吲哚等多环芳烃，吖啶、香豆素、菲锭等芳香杂环化合物，镧系稀土螯合物，藻红素等。
[0004]虽然这些传统荧光试剂应用范围很广但是也存在着一些缺陷，如有关多糖的荧光标记目前报道的很少，现有的标记方法大多缺乏选择性，不能够很好地反应多糖的生物学性质，现有的荧光试剂不能够理性的定点标记蛋白质，有些荧光试剂荧光信号弱，荧光信号不稳定，不能够满足对生物大分子的生物学性质进行研究。
[0005]因此合成一种能够特异性标记多糖分子同时能够对所需研究的蛋白进行理性定点标记成为了一项研究重点。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是针对上述存在问题，提供一种新型巯基荧光探针、制备方法及其应用，可用于多糖、肽、蛋白质、以及核酸特异性标记。本发明所述荧光探针荧光稳定性及强度好，不仅可以对多糖、肽、蛋白质以及核酸进行定性定量分析，更可以以此建立一种快速、简便示踪的方法来对上述物质在生物体内代谢动力学进行研究。
[0007]本发明的具体技术方案如下:
一种具有如式I所不的新型疏基突光探针:
【权利要求】
1.一种具有如式I所不的新型疏基突光探针:
2.一种如权利要求1所述新型巯基荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤: (1)将硫氢化钠与氯乙醛反应得到巯基乙醛； (2)将步骤(1)制得的巯基乙醛与2-氨基苯甲酰胺或2-氨基苯甲酰胺经催化剂催化反应得到2- (2-巯基乙基氨基)苯甲酰胺二聚体； (3)将步骤(2)制得的2-(2-巯基乙基氨基)苯甲酰胺二聚体用还原剂还原得到2- (2-巯基乙基氨基)苯甲酰胺； 或者，(4)将步骤(1)制得的巯基乙醛与2-氨基苯甲酰酸经催化剂催化反应得到2- (2-巯基乙基氨基)苯甲酸二聚体； (5)将步骤(4)制得的2-(2-巯基乙基氨基)苯甲酸二聚体用还原剂还原得到2-(2-巯基乙基氨基)苯甲酸。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤(1)反应温度为0-4°C，反应溶剂为水或水与有机溶剂的混合溶液，溶液为碱性。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤(2)或步骤(4)催化剂为氯化锌和/或硼氢氰化钠。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤(2)或步骤(4)还可进一步使用脱水剂。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述脱水剂为3A分子筛。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤(3)或步骤(5)还原剂为二硫苏糖醇。
8.如权利要求1所述的巯基荧光探针在多糖、肽、蛋白质以及核酸的定量分析或定位示踪中的应用。
【文档编号】C07C323/25GK103788941SQ201410028685
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年1月22日 优先权日:2014年1月22日
【发明者】陈依军, 王宗强, 史少波 申请人:中国药科大学