专利名称：抑制白细胞介素5产生的抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种对白细胞介素5的产生的抑制剂，该抑制剂含有作为活性成分的红霉素衍生物。
已知白细胞介素5(下文中缩写为IL-5)为刺激嗜伊红性粒细胞分化和生长的重要因子，且后者会加剧过敏性炎症。因此，对IL-5产生的抑制剂对治疗如支气管哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物过敏和嗜伊红性粒细胞肺炎等各种过敏性疾病是有利的。
红霉素是一种抗生素，临床上广泛将它用作由革兰氏阳性菌、一些革兰氏阴性菌和支原体等引起的感染的治疗剂。最近报导了红霉素和罗希红霉素对IL-5的产生有抑制活性[“日本变态反应学杂志”(Japanese Jaumal ofAllergology)，44(3-2)，第424页(1993)]，但是它们对产生IL-5的抑制作用是不足的。
本发明的目的就是提供一种对IL-5的产生具强有力的抑制活性的红霉素衍生物。
本发明的发明者已广泛研究了红霉素衍生物对IL-5的抑制活性，结果发现了以下的红霉素衍生物显示出有强有力的对IL-5的抑制活性，从而完成了本发明。
本发明提供了一种作用于IL-5产生的抑制剂该抑制剂含有作为活性成分的3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂(erythronolide)A11，12-环碳酸酯，3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交酯A，或者其药学上可接受的酸加成盐。
用于本发明的药学上可接受的酸加成盐包括乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、甲酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、乙基琥珀酸盐、乳糖酸盐、葡糖酸盐、葡庚糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐、P-甲苯磺酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、己二酸盐、半胱氨酸盐、盐酸化物、氢溴化物、磷酸盐、硫酸盐、氢碘酸盐、烟酸盐、草酸盐、苦味酸盐、硫代氰酸盐、十一烷酸盐、丙烯酸聚合物的盐和羧基乙烯聚合物的盐。
本发明中所应用的3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯可以根据如WO93/13116中所描述的方法来制备。
本发明中所应用的3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A可以用例如以下方法制备。步骤(1)在一种碱的存在下，将溶于适宜溶剂的5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A和五氟硝基苯反应。适宜的溶剂包括丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氧杂环己烷和其混合物。适宜的碱包括氢化钠、氢氧化钠和氢氧化钾。反应温度在-20℃到50℃范围内变化，优选在0℃到25℃范围内变化。
根据本发明，这些化合物可以以片剂、胶囊、颗粒剂、粉剂、药粉、锭剂、药膏、油膏、乳剂、悬浮剂、栓剂和可注射溶液的形式口服或非口服方式给药。这些剂型可以通过常规方法，如“日本药典”(第12次修订本)所规定的方法制备。根据患者的健康状况和年龄以及治疗目的来选择适宜的剂型。在制备各种剂型中，可以应用普遍使用的载体(如，晶状体蛋白纤维素、淀粉、乳糖和甘露醇)、结合剂(如，羟丙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮)、润滑剂(如，硬脂酸镁和滑石)、崩解剂(如，羧甲基纤维素钙)及其类似物等等。
本发明的化合物的剂量为，例如，成人口服给药每天2-3分剂时在50-2000mg的范围内，同时根据患者的年龄、体重和健康状况可以作适度变化。
根据本发明，这些化合物显示出对IL-5的产生有强有力的抑制活性，并且可用作为人和动物(包括家畜)体内的IL-5产生的抑制剂。因此，本发明的这些化合物对于由IL-5产生所导致的各种疾病是有效的，即对例如支气管哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物过敏和嗜伊红性粒细胞肺炎等各种过敏性疾病是有效的。
现在参考实施例对本发明进行更为详细的说明。
实施例1制备3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯
(1)将11.78g(0.02mol)5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A溶于100ml丙酮，在用冰冷却的条件下向溶液中加入2.27ml(0.024mol)乙酸酐，再于室温下搅拌6小时。在减压下通过蒸发除去丙酮，并用二氯甲烷抽提残余物。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤二氯甲烷层，在无水硫酸镁上干燥，并于减压下蒸发以除去溶剂。从乙醚/正己烷中再结晶残余物，得到12.17g 2′-O-乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交酯A，为白色粉末。熔点158-160℃荷质比(Mass)(FAB)m/z632[MH]+1H-核磁共振(NMR)[200兆赫(MHz)，CDCl3]化学位移&ppm2.07(3H，S)，2.26(6H，S)，2.95(3H，S)，3.26(1H，S)，3.96(1H，S)红外光谱(KBr)，cm-13469，1750，1733，1693(2)将50g(84.8mmol)上述(1)中所得的化合物溶于500ml二氯甲烷，在以冰冷却的条件下向溶液中加入102.6ml(1.27mol)吡啶。在同样温度下向溶液中滴加将25.4ml(212mmol)三氯甲基氯甲酸酯溶于40ml二氯甲烷得到的溶液，然后搅拌5.5小时。向反应混合物中小批量加入冷水和饱和碳酸氢钠水溶液，并用二氯甲烷抽提混合物。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤二氯甲烷层，并将二氯甲烷层于无水硫酸镁上干燥。在减压下蒸发除去溶剂。用硅胶柱色谱法(洗脱液丙酮/正己烷/三乙胺＝6-10∶10∶0.2)纯化残余物，得到41.93g 2＇-O-乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯，为白色泡沫状物。1H-NMR(200MHz，CDCl3)δppm2.05(3H，S)，2.25(6H，S)，2.92(3H，S)，4.57(1H，d，J＝9 Hz)，4.74(1H，S)，4.75(1H，dd，J＝10Hz，9Hz)，5.13(1H，dd，J＝12Hz，2Hz)(3)将1.274g(6mmol)4-联苯乙酸溶于30ml二氯甲烷，向溶液中加入0.84ml(6mmol)三乙胺。在用冰冷却的条件下，向溶液中加入0.75ml(6mmol)三甲基乙酰氯，然后搅拌30分钟。再向溶液中加入将1.65ml(20.4mmol)吡啶和1.31g(2mmol)上述(2)中得到的化合物溶于10ml二氯甲烷得到的溶液。搅拌18小时后，用如以上(1)中的同样方法对反应混合物进行后处理。在减压下蒸发掉溶剂，用硅胶柱色谱法(洗脱液丙酮/正己烷/三乙胺＝4∶10∶0.05)纯化所得的粗产物，得到580mg浅黄色泡沫状物。将所产生的化合物(580mg，0.72mmol)于10ml甲醇中回流加热3小时，在减压下蒸发除去溶剂，得到490mg标题化合物，为浅黄色粉末。1H-NMR(200MHz，CDCl3)δppm2.21(6H，S)，3.01(3H，S)，3.90(1H，d，J＝7Hz)，4.76(1H，S)，5.10(1H，d，J＝11Hz)，7.30-7.49(5H，m)，7.55-7.61(4H，m)。
实施例2制备3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)-苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A向1.178g(2mmol)5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A和4.02ml(10mmol)五氟硝基苯溶于10ml四氢呋喃得到的溶液中加入240mg(6mmol)的60％氢化钠，然后于室温下搅拌2小时。用乙酸乙酯抽提反应混合物，提取物用饱和氯化钠水溶液洗涤，并在无水硫酸镁上干燥。在减压下蒸发掉溶剂，用硅胶柱色谱法(洗脱液氯仿/甲醇/氨水＝19∶1∶0.1)纯化/残余物，得到210mg的标题化合物。荷质比(FAB)m/z783[MH]+1H-NMR(200MHz，CDCl3)δppm2.25(6H，S)，3.05(3H，S)。
实施例3把10g实施例1中制备的化合物、550g乳糖、300g玉米淀粉、100g羧甲基纤维素钙和30g聚乙烯吡咯烷酮充分混合，以常规方法周乙醇粒化，干燥和分粒。将颗粒和10g硬脂酸镁混合，用常规方法将混合物压片，得到每片重100mg的药片。
实施例4根据以下的M.Hikida等人，“免疫学通讯”(Immunology Letters)，第34卷，297-302页(1992)中披露的方法检测对鼠体内IL-5产生的作用。
由ATCC购得鼠Th2克隆(D10.G4.1细胞)。通过将1×10-7个8周龄雌C3H/HeN鼠的脾脏细胞悬浮于5ml RPMI-1640培养基制备产生抗原的细胞，并将它和50μg/ml丝裂霉素C(MMC)一起37摄氏度培养30分钟，然后周3份各50ml的RPMI-1640洗涤。向含有10％牛血清的RPMI-1640中加入0.5单位白细胞介素2(IL-2)(由Genzyme生产)和5×10-5M的2-巯基乙醇来制备用于组织培养的培养基。将试验化合物溶于二甲基亚砜(DMSO)，并用组织培养基稀释至DMSO终浓度为0.1％和具有不同的试验化合物浓度。
在一个96-孔微量滴定板(由Coming Glass Works制造)的每一孔中加入每孔50μl的浓度为4×10-5个细胞/每毫升D10.G4.1细胞，2×106个细胞/每毫升MMC处理过的产生抗原的细胞、400μg/每毫升作为抗原的伴清蛋白，以及溶于组织培养基的试验化合物。再于5％CO2和37℃的条件下培温48小时。培温结束后，收集培养物的上层液体，离心分离细胞。用ENDOGEN生产的的IL-5酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒测定上层液体中的IL-5。用50％抑制的浓度(IC50)来表示试验化合物产生IL-5的抑制作用，见于以下表1。
表1试验化合物 IC50(M)实施例1的化合物 ＜4×10-7实施例2的化合物 ＜1×10-7罗希红霉素9.3×10-7红霉素4.5×10-6实施例5向分成5组的ICR雄鼠经口给药实施例1和实施例2的化合物。在100mg/kg的剂量水平时未观察到死亡，证明这些化合物有高度的安全性。
权利要求
1.一种对白细胞介素5的产生的抑制剂，该抑制剂含有作为活性成分的3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯、3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A或其药学上可接受的酸加成盐。
2.3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯、3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A或其药学上可接受的酸加成盐在制备对白细胞介素5的产生的抑制剂中的应用。
3.一种治疗过敏性疾病的方法，该方法包括给药3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯、3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A或其药学上可接受的酸加成盐。
全文摘要
本发明提供一种对白细胞介素5的产生有强有力的抑制活性的红霉素衍生物，它是一种对白细胞介素5的产生的抑制剂，含有作为活性成分的3-O-(4-联苯基)乙酰基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A11，12-环碳酸酯、3-O-(2-硝基-3，4，5，6-四氟)苯基-5-O-德糖胺基-6-O-甲基赤糖交脂A，或其药学上可接受的酸加成盐。
文档编号C07H17/08GK1159757SQ9519537
公开日1997年9月17日 申请日期1995年8月10日 优先权日1994年8月12日
发明者星野明彦, 村政人, 朝贺俊文, 井上知之, 奥平博一 申请人:大正制药株式会社