专利名称：从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法
技术领域：
本发明涉及药品，特别是植物提取药物的制备方法。
曾有“莲子心水煎液成份可增强离体蛙心收缩力”的报道(霍景文、丘晨肽、张茂绝中国药理学会第二届全国会员代表大会论文摘要集，第二集，1956，8-9)；惜未作进一步单体活性成份的药理学研究。我们在进行莲子心植物化学、药理学研究时，发现提取莲子心脂溶性部位后，莲子心水溶性部位有增强心肌收缩力作用，并从中提取分离出一种新生物碱，经波谱及理化分析证实为洛土辛。离体及在体药理学实验证明洛土辛碱可能为磷酸二酯酶III和/或V型抑制剂。
本发明的目的在于提供一种低成本、高收得率、优质(含量大于90％)、适合于工业化生产的从莲子心中提取纯化洛土辛碱的制备方法。
实现本发明的技术方案即从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法包括1.以莲子心为原料，制取水溶性总生物碱；2.水溶性总生物碱分离；3.分步结晶法分离洛土辛。
具体操作方法是将莲子心生药以甲醇浸泡3次，回收甲醇得总碱浸膏，以1％盐酸水溶液调pH至2-3，过滤，得酸性总碱溶液，以浓氨水调pH至9-10，得碱性总碱沉淀、悬液，以氯仿提取5次，得碱性水层，调pH至2-3，加入饱和雷氏铵盐，充分沉淀，滤取沉淀物，风干，溶于丙酮，滤除不溶物；丙酮液中加入饱和硫酸银液，充分沉淀，滤除沉淀物，回收丙酮，减压浓缩至糖浆状，析晶，得粗品总碱结晶，分别于无水乙醇和水中反复结晶，乙醇中分步结晶，得白色方晶。水溶液中加入饱和氯化钡，滤除沉淀，无水乙醇中重结晶得洛土辛盐酸盐。
附图
为本发明方法的工艺流程图。
下面结合具体实施例对本发明方法作进一步说明。
实施例择净、干燥莲子心8kg，预先用适量3％Na2CO3(约100ml/kg生药)浸润湿，再加入适量(约4000ml/kg)甲醇(或乙醇)于室温下浸泡一周，连续三次。合并甲醇浸泡液，回收甲醇，残留液用3％盐酸调pH至2-3，过滤，滤液用乙醚脱脂，继续以下步骤(1).水溶性总生物碱分离将上述脱脂后酸性溶液，用浓氨水调pH至9左右，用氯仿提取各3次，回收氯仿。水层过滤，滤液用盐酸调pH至2-3，加入饱和雷氏铵盐，立即生成大量沉淀，收集沉淀物，室温下风干后，溶于丙酮，滤除不溶物，适量回收丙酮、浓缩后，加入饱和硫酸银使之充分沉淀，滤除沉淀，滤液为水溶性总碱之硫酸盐溶液，(或滤液经适量减压浓缩后，加入饱和氯化钡，立即生成大量硫酸钡沉淀，充分沉淀后，滤除不溶物)，滤液经减压浓缩至糖浆状，放置析晶，得出粗品结晶8.3g。
(2)分步结晶法分离洛土辛将粗品结晶8.3g分别回流下溶于无水乙醇200ml(或甲醇)及热水浴下溶于水50ml，反复结晶，得水溶性总生物碱结晶6.2g。再于无水乙醇中分步结晶，第一步结晶得针状结晶。过滤分离得母液；母液进行第二步结晶，得白色方晶5.6，经TLC鉴定为洛土辛，再于甲醇与水中反复结晶(依色泽而定，可用活性炭脱色)，得精品洛土辛4.7g。
所得物质——洛土辛碱的确认(理化及波谱鉴定)主要理化常数及波谱数椐洛土辛盐酸盐白色方晶(无水乙醇)，MP213-214℃；洛土辛硫酸盐MP224-225℃。UVλMax95％EtOH229.2nm，283.2nm，UVλmax95％EtOH252.4nm(在碱性(KOH)条件下蓝移)。254nm紫外光照射下不发荧光；IRVmaxKBrcm-13550、3390、3200、1615、1530、1520、1265、1240、1115、915、880、840。MS M/Z314(M+1)、298、206、192、107、73、58、44。NMR(D2O)δ3.02(3H)，3.28(3H，2×N-CH3)，3.33(3H，O-CH3)、4.39(1H，多重峰)，5.57(1H)芳-H 6.72(1H)，6.74(4H)；上述数据与文献[古川宏Yakugaku Zasshi 1965；85(5)472][王嘉陵等中国中药杂志1991；16(11)673-675][王嘉陵等中药材1991；14(6)36-38]相符，故确认为洛土辛碱(Lotusine、莲心季铵碱、莲心单碱)，其化学结构为
中文名为洛土辛碱、莲心季铵碱、莲心单碱英文名Lotusine化学名1-二甲基-6-羟基-7-甲氧基-10-苄基(对-羟基)四氢异喹啉；分于量313.47；分子式C19H23NO3
以本发明方法制取洛土辛碱，具有原料来源丰富、成本低、收得率高、优质——含量大于90％、适合于工业化生产等特点。
洛土辛碱药理作用的实验结果1.在离体和在体标本上，洛土辛及其甲基化衍生物(1-100μmol/L)有明显的正性肌力作用且优于西药氨力农(Amrinone，Am，PDE III抑制剂)和罂粟碱(Papavirine，非选择性PDE抑制剂)，EC50可与西药相当；2.洛土辛轻度延长心肌细胞动作电位时程，增加Ca++电流，对Ca++通道影响的动力学特点不同于Bay K 8644和异丙肾上腺素；3.洛土辛拮抗多种收缩血管药作用，舒张血管作用强度相当于罂粟碱；4.洛土辛舒张阴茎海绵体血管且作用强度略优于罂粟碱和Am。
5.洛土辛抑制PDE，提高血小板内cAMP，cGMP含量。
结论洛土辛为PDE III(表明其有Ca++增敏作用)和/或V型抑制剂。
实验及结果Lot对心肌收缩力的影响1.对豚鼠左心房及乳头状肌收缩力的影响在豚鼠左心房及乳头状肌标本上，Lot 1-300μmol/L可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加19％和84％，使乳头状肌收缩力增加21％和91％。同样实验条件下，Am 1-300μmol/L也浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加9％和58％。表明Lot的作用明显优于Am。
表1洛土辛及氨力农对豚鼠左心房及洛土辛豚鼠乳头状肌收缩力的影响(x±SD)，(n＝7～9)洛土辛(μmol/L)对照 1 31030100 300豚鼠左心房收缩力(mg) 445±95 495±140 530±135 590±105 645±120 771±141 823±199增加(％) 0 11±4 19±5 33±6 45±1473±1884±14GPla(n＝9)豚鼠乳头状肌收缩力(mg) 301±75 340±37 365±31 420±57 470±80 545±78 578±113增加(％) 0 9±4 21±5 39±7 56±1281±1491±15GPC(n＝7)氨力农(μmol/L)
对照 1 3 1030100 300豚鼠左心房收缩力(mg) 421±81 432±89 459±96 501±98 589±101 629±108 657±114增加(％)0 3±39±419±840±9 49±1158±132.对大鼠左心房及猫乳头状肌收缩力的影响在大鼠左心房标本上，洛土辛1-300μmol/L可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加23％和94％。在猫乳头状肌标本上，洛土辛1-300μmol/L同样可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使收缩力增加21％和117％。
表2洛土辛对大鼠左心房(上)及猫乳头状肌(下)收缩力的影响(x±SD)，(n＝6～7)洛土辛(μmol/L)对照 1 310 30 100 300大鼠左心房收缩力(mg)487±98 514±91 602±112 693±154 756±196 875±238 945±243增加(％) 05.5±4 23±542±655±11 80±18 94±12猫乳头状肌增加(％) 0 7±5 13±621±11 47±13 84±22 117±32氨力农(μmol/L)对照 1 310 30 100大鼠左心房收缩力(mg)463±31 471±33 490±45 511±61 562±57 616±64增加(％) 0 2±26±4 11±821±7 33±9Ratln(n＝6)猫乳头状肌收缩力(mg)352±44 363±37 387±43 412±41 472±48 528±61增加(％) 0 3±410±417±734±11 51±12Ratc(n＝6)3.对利血平化豚鼠状肌收缩力的影响在预先经利血平化处理[9](5mg/kg，腹腔注射，24h后制备标本)或未经利血平化处理豚鼠乳头状肌标本上，洛土辛1-100μmol/L均可浓度依赖性地增加收缩力。但与未经利血平化处理组相比较，洛土辛增加利血平化豚鼠状肌收缩力的剂量—效应曲线明显右移并压低；100μmol/L洛土辛增加肌力作用，由未经利血平化处理组的83％降至经利血平化处理组的51％。提示洛土辛正性肌力作用与去甲肾上腺素能神经递质有关。同样实验条件下，罂粟碱1-100μmol/L可双相性地影响未经或经利血平化处理的豚鼠乳头状肌收缩力，使前者的量效应曲线呈现先升高后降低，而使后者呈现先略升而后抑制，甚至低于给药前水平。表3洛土辛对利血平化豚鼠状肌收缩力的影响(x±SD，n＝8)未经利血平化经利血平化药物 收缩力 增加 收缩力 增加(μmol/L) (mg) (Δ％) (mg)(Δ％)洛土辛0 209±48 0 233±56010 270±50 29 252±60830 318±90 52 294±6126100382±63 83 353±7851罂粟碱0 230±56 0 218±40010 274±81 19 224±30330 282±80 23 245±8612186±68 -154.洛土辛正性肌力作用的动物种属选择性比较比较Lot正性肌力作用可见，30μmol/L Lot分别使豚鼠、大鼠及家兔左心房收缩力增加45％、55％和51％；分别使豚鼠、大鼠及猫乳头状肌收缩力增加56％、53％和47％。表明Lot正性肌力作用并无明显地动物种属选择性。
表4洛土辛30(μmol/L)正性肌力作用动物种属选择性比较(n＝5～9，x±SD)标本 肌力增加(％)豚鼠左心房 45±14
大鼠左心房 55±11家兔左心房 51±18豚鼠乳头肌 56±12大鼠乳头肌 53±13猫乳头肌47±135.洛土辛对氨力农、罂粟碱、Lema(Lemakalim，雷马卡林)、异丙肾上腺素正肌作用的影响及与普萘洛尔的相互作用在豚鼠左心房及乳头状肌标本上，氨力农30μmol/L略增加心肌收缩力，在此基础上再给予洛土辛30μmol/L，心肌收缩力的增加明显高与单用氨力农或洛土辛组，提示两者有相加作用。同样，在豚鼠左心房肌标本上，在预先用罂粟碱30μmol/L处理，再给予洛土辛30μmol/L，心肌收缩力明显增高。
在豚鼠左心房标本上，预先用Lama 10μmol/L可使肌力明显下降，再给予洛土辛100μmol/L可翻转Lama的负肌作用为正肌作用。
在豚鼠左心房标本上，预先用洛土辛30μmol/L处理，再给予异丙肾上腺素，制作浓度—效应曲线。洛土辛略使异丙肾上腺素浓度—效应曲线左移，最大反应不变。
在预先用普萘洛尔0.1μmol/L处理的豚鼠左心房标本上，再给予洛土辛，普萘洛尔可显著拮抗或取消洛土辛的正肌作用。表5罂粟碱、氨力农、Lama对洛土辛正肌作用的影响(n＝6～9，x±SD)药物(μmol/L) 收缩力(mg) 增加(％)0431±105 0罂粟碱 30 564±165 31罂粟碱±洛土辛735±175 710420±92 0氨力农 30 589±108 40氨力农+洛土辛 773±139 830413±87 0Lama 30 302±79 -27Lama+洛土辛100528±102 +28
6.刺激频率对洛土辛正肌作用的影响在豚鼠左心房标本上，Bay K 8644 10nmol/L正性肌力作用随刺激频率(0.25-2Hz)的增快而增加，呈频率依赖性[10]。而洛土辛100μmol/L正肌作用仅在低频率刺激时呈上升趋势，高频率刺激时却下降趋势。在豚鼠乳头状肌标本上也可见类似现象。
7.洛土辛对右心房自搏频率的影响在豚鼠及大鼠右心房标本上，洛土辛1-300μmol/L略增快右心房自搏频率，但无显著性意义。Res化豚鼠右心房标本上，Lot仍不增快右心房自搏频率(n＝5，p＞0.05)。表6洛土辛右心房自搏频率的影响(n＝5～7，X±SD)心率(次/分钟)洛土辛(μmol/L 豚鼠 大鼠0192±21179±111188±20177±93187±22177±810190±17178±730193±18180±5100192±18179±10300195±20183±128.洛土辛离体心脏功能的影响在离体工作心脏标本上，经左心房灌流插管，单剂量(10mmol/L，0.2ml)给予洛土辛(终浓度为20μmol/L)，0.5min后，左心室压(LVP)、左心室收缩速率(+dp/dt)及左心室舒张速率(-dp/dt)增加(-dp/dt负值加大)；冠脉流量(CO)及主动脉流量(MAO)略增而心率不变(p＞0.05)。
权利要求
1.一种从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法，包括(1)以莲子心为原料，制取水溶性总生物碱；其特征在于，(2)分离水溶性总生物碱，得粗品总碱结晶；(3)以分步结晶法分离洛土辛碱。
2.根据权利要求1所述的一种从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法，其特征在于所说的以莲子心为原料，制取水溶性总生物碱的方法是将莲子心生药以甲醇浸泡3次，回收甲醇得总碱浸膏，以1％盐酸水溶液调pH至2-3，过滤，得酸性总碱溶液。
3.根据权利要求1所述的一种从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法，其特征在于所说的分离水溶性总生物碱的方法是将所制得的酸性总碱溶液以浓氨水调pH至9-10，得碱性总碱沉淀、悬液，再以氯仿提取5次，保留碱性水层，调pH至2-3，加入饱和雷氏铵盐，充分沉淀，滤取沉淀物，风干，溶于丙酮，滤除不溶物；丙酮液中加入饱和硫酸银液，充分沉淀，滤除沉淀物，回收丙酮，减压浓缩至糖浆状，析晶，得粗品总碱结晶。
4.根据权利要求1所述的一种从莲子心中提取洛土辛碱的制备方法，其特征在于所说的以分步结晶法分离洛土辛碱的方法是将分离水溶性总生物碱制得的粗品总碱结晶分别于无水乙醇和水中反复结晶，乙醇中分步结晶，得白色方晶，水溶液中加入饱和氯化钡，滤除沉淀，无水乙醇中重结晶得洛土辛盐酸盐。
全文摘要
从莲子心中提取洛土辛的制备方法,将莲子心Na
文档编号C07D215/00GK1257069SQ9812170
公开日2000年6月21日 申请日期1998年12月14日 优先权日1998年12月14日
发明者王嘉陵 申请人:同济医科大学