专利名称：除去交联透明质酸中交联剂1,2,7,8-二环氧辛烷的方法
技术领域：
本发明涉及一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷的方法，特别指的是用高压蒸汽法去除交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DE0)。
背景技术：
开发能应用与临床的皮肤填充剂，就必须对透明质酸进行一系列的化学修饰和处理过程。如果采用非交联的透明质酸作为皮肤填充剂，那么，在皮肤中天然存在的透明质酸酶与自由基就会一个一个的切断聚合起来的透明质酸分子，快速降解非交联的透明质酸。结果使得透明质酸在组织内的半衰期只有一天到两天，然后经过水的稀释，在肝脏内逐步降解为水和二氧化碳。这样，产品在注射的部位就会很快的失去效用(在一周内)，结果使得非交联的透明质酸在皮肤中的滞留时间受到了很大的限制。因此，非交联的透明质酸起不到一个作为皮肤填充剂应该起到的疗效。所以，采用1，2，7，8- 二环氧辛烷作为透明质酸的交联剂，将透明质酸的羟基和羧基都交联起来，提高了透明质酸分子的稳定性，有效地防止了透明质酸酶和自由基对透明质酸的降解作用，明显地提高了透明质酸在皮肤内的停留时间，具有量好的作为皮肤填充剂应有的疗效。但是，依据化学材料安全评估报告(Material Safety Data Sheets,简称MSDS)，1，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)对皮肤具有刺激性甚至毒性。在透明质酸交联反应完全结束后，此交联剂必须被清除，以免残留的交联剂对皮肤造成不良的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷的方法，采用高压蒸汽空法去除交联透明质酸中1，2，7，8_ 二环氧辛烷，去除大部分残留于交联透明质酸中的1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)，而达到安全的含量范围内。可以确保交联透明质酸产品的安全性。本发明提供的一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8-二环氧辛烷的方法包括如下步骤I)将交联透明质酸水凝胶用酸调整pH值至7-8，放置滚床上滚动18_24h，至达到透明质酸吸水平衡。2)用透气非透菌纸封住瓶口，置于高压灭菌锅中，加热至沸腾后，关掉高压灭菌锅上的放气阀门。3)当气压升至0. 12MPa，温度升至105°C时，打开放气阀放气，至压力降至0. IMPa,温度降至100°c时关掉放气阀门。4)重复步骤3)，让温度压力上升至之前的读数，如此反复4-5次，即可达到去除交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)的目的。
所述的水凝胶浓度为15-35mg/mL。步骤3)至步骤4)的高压时间为25_35min,优选30min。
本发明中使用的交联透明质酸，其交联剂选用的是1，2，7，8- 二环氧辛烷，其中交联剂加入量与透明质酸的质量比为0.01-1，实验中可选择交联剂与透明质酸的质量比为
I Io本发明是采用高温下通过水蒸气将交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷汽化至上层蒸汽中，汽化后的1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)蒸汽进入到外层的水蒸气中，并随着灭菌高压锅的放气口随水蒸气放出。当达到一定压强(0. 12MPa)与一定温度(105°C )时，放去高压锅中的高压蒸汽，反复4-5次来回放气的过程，可通过气相色谱测得交联透明质酸中的1，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)的残留量。本发明提供了一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷的方法，采用高压蒸汽空法去除交联透明质酸中1，2，7，8_ 二环氧辛烷，去除大部分残留于交联透明质酸中的1，2，7，8- 二环氧辛烷(DEO)，达到安全的含量范围内，可以确保交联透明质酸产品的安全性。本发明方法简单，容易操作，成本低廉，安全可靠。
图I为1，2，7，8- 二环氧辛烷(DEO)标准样的顶空法气相色谱图。图2为经本发明高压蒸汽后交联透明质酸的顶空法气相色谱图。
具体实施例方式实施例I :I、交联剂透明质酸水凝胶的制备将0. 5g氢氧化钠溶解于20ml水中，加入5g透明质酸钠(山东福瑞达生物技术有限公司出品)，搅拌12-14h，搅拌至透明质酸钠完全溶解后，再向反应体系中加入5g 1,2,7，8_ 二环氧辛烷(DEO)，迅速搅拌均匀，在25°C下反应24小时。反应用2mol/L盐酸终止，调至pH = 5左右，同时在40°C, 13. 3Kpa的真空度条件下蒸懼去除反应体系中的水，当蒸懼出的水达到50mL时停止减压蒸馏。分3次用200mL pH = 8-9的含30%乙醇的氢氧化钠溶液浸泡，中和凝胶的盐酸。将中和后的凝胶转入真空干燥箱中，于60°C，40Kpa的条件下干燥IOh使凝胶固化定型，凝胶吸水率为45倍。所得凝胶在90°C，13. 3Kpa真空干燥至衡重，得交联透明质酸微颗粒。2、将透明质酸水凝胶进行高压蒸汽去除1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)将交联透明质酸微颗粒按照25mg/mL的浓度配成水凝胶，用0. 05mol/L盐酸调整pH值至7-8，放置滚床上滚动20h，至达到透明质酸吸水平衡。用透气非透菌纸封住瓶口，置于高压灭菌锅(实验室用高压灭菌锅，合肥华泰医疗设备有限公司，型号YX-280D)中，加热至沸腾后，关掉高压灭菌锅上的放气阀门，当气压升至0. 12MPa，温度升至105°C时，打开放气阀放气，至压力降至0. IMPa，温度降至100°C时关掉放气阀门，让温度压力上升至之前的水平，如此反复放气4-5次，高压时间在30min左右，即可达到去除交联透明质酸中交联剂1，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)的目的。实施例2
气相色谱顶空法对比1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)标准样与实施例I高压蒸汽法处理后的交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷(DEO)的残留量(采用岛津公司GC-9A型气相色谱仪作为检测仪器，采用顶空法作为实验方法)。用微量注射器抽取L 1，2，7，8_ 二环氧辛烷置于顶空瓶中，加IOmL纯化水溶解作为储备液。密封后顶空瓶于95°C恒温40分钟后，取顶空气体lmL，进样检测，得到色谱图
I。积分得到标准样峰面积。精密称取经高压蒸汽法处理过的样品2mL左右，置于顶空瓶中，加水8mL。密封后顶空瓶于95°C恒温40分钟后，取顶空气体lmL，进样检测，得到色谱图2。积分得到样品峰面积。结果处理用外标法计算1，2，7，8_ 二环氧辛烷的残留量1，2，7，8_ 二环氧辛烷残留量=(样品峰面积X标准样浓度)+标准样峰面积。对比结果如附图所示。通过附图I可以看出，1，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)标准样在850. Is处出现了一个 很强的吸收峰，而去除了 1，2，7，8_二环氧辛烷(DEO)的交联透明质酸样品则没有在该处出现吸收峰，图2，说明该样品中的1，2，7，8_二环氧辛烷(DEO)含量已经低于气相色谱的最低检出限，即低于0. lppm，保证了该交联透明质酸样品的安全性，证明了高压蒸汽法去除交联透明质酸中I，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)的有效性。
权利要求
1.一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷的方法，其特征在于它包括如下步骤 1)将交联透明质酸水凝胶用酸PH值调整至7-8，放置滚床上滚动18-24h，至达到透明质酸吸水平衡； 2)用透气非透菌纸封住瓶口，置于高压灭菌锅中，加热至沸腾后，关掉高压灭菌锅上的放气阀门； 3)当气压升至0.12MPa，温度升至105°C时，打开放气阀放气，至压力降至0. IMPa，温度降至100°C时关掉放气阀门； 4)重复步骤3)，让温度压力上升至之前的读数，如此反复4-5次，即可去除交联透明质酸中交联剂1，2，7，8_ 二环氧辛烷。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述的水凝胶浓度为15-35mg/mL。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述的水凝胶浓度为25mg/mL。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤3)至步骤4)的高压时间为25_35min0
5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤3)至步骤4)的高压时间为30min。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述的交联透明质酸是用1，2，7，8-二环氧辛烷作为透明质酸的交联剂合成。
全文摘要
本发明涉及一种除去交联透明质酸中交联剂1，2，7，8-二环氧辛烷的方法，方法是将交联透明质酸水凝胶整pH值7-8，放置滚床上滚动18-24h，置于高压灭菌锅中，加热至沸腾后，当气压升至0.12MPa，温度升至105℃时，打开放气阀放气，至压力降至0.1MPa，温度降至100℃时关掉放气阀门；如此反复4-5次。本发明可以去除大部分残留于交联透明质酸中的1，2，7，8-二环氧辛烷，达到安全的含量范围内，可以确保交联透明质酸产品的安全性。本发明方法简单，容易操作，成本低廉，安全可靠。
文档编号C08L5/08GK102643440SQ20111039262
公开日2012年8月22日 申请日期2011年12月1日 优先权日2011年12月1日
发明者李睿智, 简军 申请人:北京爱美客生物科技有限公司