1.一种乳房炎的快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)待检测基因组DNA的提取;
(2)设置多重PCR反应体系:由TaqDNA聚合酶1U/25μL、金黄色葡萄球菌DNA模板150ng/25μL、无乳链球菌DNA模板150ng/25μL、大肠杆菌DNA模板150ng/25μL、牛支原体DNA模板150ng/25μL、dNTP 200μmol/L、Mg2+1.5mmol/L、1×PCR缓冲液组成;
(3)多重PCR扩增反应:将设计好的引物组加入到多重PCR反应体系中进行多重PCR扩增反应,反应程序为94℃预变性5min;94℃变性45s,57℃退火30s,72℃延伸90s,32个循环;72℃延伸10min,得到多重PCR扩增产物;
(4)结果检测:将上述多重PCR扩增产物进行凝胶电泳,根据待检测样品所出现的电泳条带,判断待检测样品是否为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、牛支原体的单一或混合感染。
2.根据权利要求1所述的乳房炎的快速检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中,引物组为:
A、菌种:金黄色葡萄球菌;上/下游引物:GGACGACATTAGACGAATCA CGGGCACCTATTTTCTATCT,如SEQ ID NO:1所示;扩增片段:1319bp;
B、菌种:无乳链球菌;上/下游引物:CGACCTTTTGGACAAGTAGTAAGATACC GGAGTTGTCACTTGATCAGCATGTAC,如SEQ ID NO:2所示;扩增片段:199bp;
C、菌种:大肠杆菌;上/下游引物:GCTTGACACTGAACATTGAG GCACTTATCTCTTCCGCATT,如SEQ ID NO:3所示;扩增片段:663bp;
D、菌种:牛支原体;上/下游引物:CCAGCTCACCCTTATACATGAGCGC TGACTCACCAATTAGACCGACTATTTCAC,如SEQ ID NO:4所示;扩增片段:442bp。
3.根据权利要求1所述的乳房炎的快速检测方法,其特征在于,所述引物组中各引物的用量为0.1~0.4μmol/L。
4.根据权利要求1所述的乳房炎的快速检测方法,其特征在于,所述引物组的用量为0.4μmol/L,各引物的摩尔数均为0.1μmol/L。