一种基于LED技术的调节黑素细胞色素合成的方法与流程

文档序号:12097323阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于LED技术的调节黑素细胞色素合成的方法,其特征在于,其包括,采用特定波长的LED黄光,和特定照射剂量,连续照射分离,培养,纯化的人黑素细胞,调节黑素细胞色素合成,同时不影响黑素细胞的增殖凋亡;

所述的LED黄光其波长为585±5nm;其照射剂量为20J/cm2以内。

2.按权利要求1所述的方法,其特征在于,其包括步骤:

1)分离、培养、纯化人正常原代黑素细胞:

按改良郑氏法制备黑素细胞单细胞悬液,接种于培养瓶中,通过两次传代,得纯化的黑素细胞;

2)LED光安全性筛选:

(1)LED光干预:分别使用单波谱、高纯度的红光、黄光,蓝光,不同能量梯度连续照射培养获得的黑素细胞;

(2)筛选LED光对黑素细胞增殖和凋亡无影响的波谱及能量范围:

使用光学显微镜观察细胞形态,CCK-8法、流式细胞仪法测定黑素细胞的增殖和凋亡,评价不同波谱LED光照射对体外培养的黑素细胞活性的影响,筛选出对黑素细胞增殖和凋亡无影响的波谱及能量范围;

3)根据步骤2)的筛选结果,进一步筛选:

进行LED黄光和蓝光不同能量值与调节色素合成相关性的实验:LED黄光,585±5nm,18mw/cm2,0J、5J、10J、20J;LED蓝光,420±5nm,75mw/cm2,0J、5J、10J;分别连续照射黑素细胞5天,通过透射电子显微镜对黑素细胞黑素小体数量及成熟度的变化进行观察、数据统计,再采用PCR、western blot对黑素细胞色素合成相关蛋白MITF、TYR、TRP-1进行测定,筛选确定有效调节黑素细胞色素减少的LED光及能量值范围。

3.按权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤2)(1)中:连续照射培养获得的黑素细胞5天。

4.按权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤2)(1)中:分别使用的单波谱、高纯度的红光为,635±5nm,115mw/cm2,0-103J;黄光为,585±5nm,18mw/cm2,0-40J;蓝光为,420±5nm,75mw/cm2,0-30J。

5.按权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤2)(2)中:筛选的对黑素细胞增殖和凋亡无影响的波谱及能量范围的LED光为:LED黄光,585±5nm,0-20J/cm2;LED蓝光,420±5nm,0-10J/cm2

6.按权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤3)中进一步筛选确定有效调节黑素细胞色素减少的LED光及能量值范围为LED黄光585±5nm,20J/cm2以内。

7.权利要求1所述的基于LED技术的调节黑素细胞色素合成的方法在用于制备黑素细胞的体外研究模型中的用途。

8.权利要求1所述的基于LED技术的调节黑素细胞色素合成的方法在用于制订治疗与辅助治疗色素障碍性疾病的干预措施中的用途。

9.权利要求1所述的基于LED技术的调节黑素细胞色素合成的方法在用于制订非剥脱医疗美容干预措施中的用途。

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