本发明涉及多肽类药物领域，具体涉及一类具有镇痛作用的蛇毒C片段多肽以及镇痛药物。
背景技术：
疼痛是多种疾病引起的常见临床症状，缓解疼痛是患者求医问药的主要目的。临床上常用的镇痛药主要为阿片类强效镇痛药和解热镇痛抗炎药。前者以吗啡为代表，是强镇痛药，后者以阿司匹林为代表，是弱镇痛药。阿片类镇痛药是麻醉性镇痛药，临床限于急性锐痛的短期止痛，如外科手术中和术后止痛、骨折和急性内脏绞痛，也用于一些终末期病人无法治疗的顽固性疼痛，如晚期癌症的剧烈疼痛。这类药物的特点是起效快，镇痛作用强。缺点是有成瘾性，快速耐受性(即几次用药后疗效逐渐降低)，引起便秘和呼吸抑制等严重不良发应。解热镇痛药具有抗炎，退热和镇痛作用，临床用途较广。作为镇痛药主要用于慢性疼痛。这类药物的特点是镇痛作用温和，无成瘾性。缺点是镇痛作用强度不够，有比较严重的消化道不良反应，个别药物有心血管方面的副作用、肝脏毒性或过敏反应。慢性疼痛是一个困扰众多病人的共同临床症状之一，影响生活质量和工作，美国每年用于慢性疼痛的医药费用高达260亿美元，目前缺乏作用强但不成瘾，可长期安全服用的镇痛药。
国内外应用眼镜蛇毒缓解恶性肿瘤疼痛、各种神经痛、关节痛已有多年历史。蛇毒镇痛最明显的优点是连续使用不出现耐受及成瘾性，且副作用少，明显有别于吗啡类药物。我国昆明动物所早年从中华眼镜蛇的蛇毒中分离出神经毒素-C，并制成镇痛药克痛宁，后又研制出复方制剂复方克痛宁(含中华眼镜蛇神经毒素、曲马多和布洛芬)。后者目前临床用于癌症等引起的疼痛取得较好的效果。现在临床应用的还有中华眼镜蛇α-neurotoxin制成的科博肽注射液，用于镇痛。
然而，传统的蛇毒类镇痛药物含有一定的神经毒性，从而导致了一定的不良反应的发生，不利于临床使用。
技术实现要素：
基于此，有必要提供一种具有镇痛作用并且有利于临床使用的蛇毒C片段多肽以及镇痛药物。
一种蛇毒C片段多肽，具有如下结构式：
R1-Lys-Xaa1-His-Arg-Xaa2-Xaa3-Arg-Xaa4-Xaa5-Arg-R2；
其中，-R1的结构式为-NR3R4，-R3为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基，-R4为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基；
-R2的结构式为-CONR5R6或-COOR7，-R5为-H或碳原子数量为1～16的烷酰基，-R6为-H或碳原子数量为1～16的烷酰基，-R7为-H或碳原子数量为1～16的烷酰基；
-Xaa1-为Asp残基或Glu残基；
-Xaa2-为Gly残基、Pro残基或D-Pro残基；
-Xaa3-为Thr残基、Ser残基、D-Thr残基、D-Ser残基或-R为碳原子数量为1～4的烷基；
-Xaa4-为Ile残基、Leu残基、Nle残基、Val残基、Abu残基、Ala残基或Aib残基；
-Xaa5-为Asp残基或Glu残基；
在一个实施例中，-R1为-NH2。
在一个实施例中，-R2为-COOH。
在一个实施例中，-R3为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基，-R4为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-R5为-H、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-R6为-H、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-R7为-H、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-Xaa3-为Thr(OCH3)残基、Ser(OCH3)残基或Ser(OnCH3)残基。
一种镇痛药物，包括如上述的蛇毒C片段多肽或所述蛇毒C片段多肽与酸形成的医学上可接受的盐。
在一个实施例中，所述酸包括有机酸和无机酸，所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸，所述有机酸为醋酸、草酸、枸橼酸、富马酸、苹果酸或乳酸。
在一个实施例中，还包括溶剂，所述溶剂为水、乙醇或丙酮。
这种蛇毒C片段多肽是从眼镜蛇神经毒素-C中通过水解、分离、纯化得到的10肽化合物进行改造后得到的，并且通过试验证明这种蛇毒C片段多肽是该神经毒素的镇痛活性中心，具有起效快、作用时间长、无耐受性、无成瘾性等特点。这种蛇毒C片段多肽在具有良好镇痛作用的同时，还去掉了原神经毒素-C所带有的神经毒性，这使得这种蛇毒C片段多肽在保持药效的同时，大大降低了不良反应的发生率，有利于临床使用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对蛇毒C片段多肽以及镇痛药物作进一步详细的说明。
一实施方式的蛇毒C片段多肽，具有如下结构式：
R1-Lys-Xaa1-His-Arg-Xaa2-Xaa3-Arg-Xaa4-Xaa5-Arg-R2。
R1-Lys-、-Xaa1-、-His-、-Arg-、-Xaa2-、-Xaa3、-Arg-、-Xaa4-、-Xaa5-和-Arg-R2均为氨基酸残基。
-R1的结构式为-NR3R4，-R3、-R4为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基。
在一个优选的实施例中，-R3、-R4为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
特别的，-R1为-NH2。
-R2的结构式为-CONR5R6或-COOR7，-R5、-R6、-R7为-H或碳原子数量为1～16的烷酰基。
在一个优选的实施例中，-R5、-R6、-R7为-H、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
特别的，-R2为-COOH。
-Xaa1-为Asp残基或Glu残基。
在一个优选的实施例中，-Xaa1-为Glu残基。
-Xaa2-为Gly残基、Pro残基或D-Pro残基。
-Xaa3-为Thr残基、Ser残基、D-Thr残基、D-Ser残基或R为碳原子数量为1～4的烷基。
在一个优选的实施例中，-Xaa3-为Thr(OCH3)残基、Ser(OCH3)残基或Ser(OnCH3)残基。
特别的，-Xaa3-为Thr残基。
-Xaa4-为Ile残基、Leu残基、Nle残基、Val残基、Abu残基、Ala残基或Aib残基。
在一个优选的实施例中，-Xaa4-为Ile残基。
-Xaa5-为Asp残基或Glu残基。
在一个优选的实施例中，-Xaa5-为Glu残基。
具体的，这种蛇毒C片段多肽的序列可以为如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或SEQ ID No.10所示。
这种蛇毒C片段多肽是从眼镜蛇神经毒素-C中通过水解、分离、纯化得到的10肽化合物进行改造后得到的，并且通过试验证明这种蛇毒C片段多肽是该神经毒素的镇痛活性中心，具有起效快、作用时间长、无耐受性、无成瘾性等特点。这种蛇毒C片段多肽在具有良好镇痛作用的同时，还去掉了原神经毒素-C所带有的神经毒性，这使得这种蛇毒C片段多肽在保持药效的同时，大大降低了不良反应的发生率，有利于临床使用。
这种蛇毒C片段多肽可以用于镇痛，具体的，可以用于癌症疼痛、手术后疼痛、骨伤疼痛、关节炎痛、神经疼痛及其他原因所致的中、重度疼痛的镇痛。
本发明还公开了一种镇痛药物，包括上述的蛇毒C片段多肽或上述蛇毒C片段多肽与酸形成的医学上可接受的盐。
酸包括有机酸和无机酸，无机酸可以为盐酸、硫酸或磷酸，有机酸可以为醋酸、草酸、枸橼酸、富马酸、苹果酸或乳酸。
在其他的实施例中，镇痛药物还包括溶剂。溶剂可以为水、乙醇或丙酮。
以下为具体实施例，实施例中出现的各种仪器和试剂如果没有特别说明，均采用本领域常规仪器或试剂。下面结合具体实施例对蛇毒C片段多肽做进一步的详细说明。
实施例1：化合物1的制备。
化合物(1)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1
(1)取Wang树脂(11mmol，替代度1.0mmol/g)装入固相反应柱中，DMF洗两遍；加入DMF溶胀30min；用DMF溶解Fmoc-Arg(Pbf)-OH、DMAP和HOBt，冰浴10分钟，加入DIC，预活化2～5min，将活化好的溶液加入固相反应柱，搅拌反应5h，抽干，DMF洗6次；DCM洗3次，MeOH收缩三次，干燥后得到Fmoc-Arg(Pbf)-Wang树脂，经检测替代度为0.63mmol/g；合成规模10.0mmol。
(2)加入DMF，使上述树脂完全浸入其中，搅拌30min，抽滤DMF，加入20％DBLK脱保护两次，抽干，用DMF溶解Fmoc-Glu(OtBu)-OH和HOBt，冰浴10分钟，加入DIC,预活化2～5min，将活化好的溶液加入固相反应柱，搅拌反应2h，茚三酮检测呈阴性。抽干，DMF洗3次，20％DBLK脱保护两次DMF洗涤6次；抽干，偶联下一个氨基酸。
(3)参照(2)的步骤，将其余的Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Pbf)-OH八个氨基酸按照肽序列依次缩合,干燥后得到树脂肽。
(4)裂解：冰浴下，将所得肽树脂分批加入到装裂解液(VTFA：VTIS：VH2O＝95：2.5：2.5)的反应器中，搅拌30min，升至室温，搅拌2.5h。抽滤裂解液，使用部分裂解液分两次洗涤树脂，洗涤液并入到裂解液中，将该裂解液滴入到约冷异丙醚中并激烈搅拌，离心，洗涤，干燥得粗肽。
(5)将所得粗品采用反相高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流动相A为0.1％TFA水溶液，流动相B位0.1％TFA的乙腈。梯度程序为：初始状态流动相B位28％,保持10分钟，然后在60分钟内将流动相B比例增至43％，流速30mL/min，检测波长214nm。收集纯度≥98.0％且单杂≤0.5％的馏分，浓缩，冷冻干燥得纯品产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
(6)将所得产物经0.1％HOAc/CH3CN转盐后得到其醋酸盐产物1·HOAc。
(7)将所得产物经0.1％HCl/CH3CN转盐后得到其盐酸盐产物1·HCl。
实施例2：化合物(2)的制备。
化合物(2)中，-R1为-N(Me)2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸(Me)2-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例3：化合物(3)的制备。
化合物(3)中，-R1为-N(Octyl)2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸(Octyl)2-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例4：化合物(4)的制备。
化合物(4)中，-R1为-N(Hexadecyl)2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸(Hexadecyl)2-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例5：化合物(5)的制备。
化合物(5)中，-R1为-NH-Me，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Me-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例6：化合物(6)的制备。
化合物(6)中，-R1为-NH-Octyl，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-(Octyl)-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例7：化合物(7)的制备。
化合物(7)中，-R1为-NH-Hexadecyl，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-(Hexadecyl)-Lys(Boc)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例8：化合物(8)的制备。
化合物(8)中，-R1为-NH2，-R2为-COO-Ac，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在EtOH/DIEA/DMAP作用下得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例9：化合物(9)的制备。
化合物(9)中，-R1为-NH2，-R2为-COO-Octanoyl，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在辛醇/DIC/DMAP作用下得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例10：化合物(10)的制备。
化合物(10)中，-R1为-NH2，-R2为-COO-Pal，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在十六醇/DIC/DMAP作用下得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例11：化合物(11)的制备。
化合物(11)中，-R1为-NH2，-R2为-CONH2，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成Fmoc Rink Amide MBHA。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例12：化合物(12)的制备。
化合物(12)中，-R1为-NH2，-R2为-CONH-Me，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与甲胺盐酸盐反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例13：化合物(13)的制备。
化合物(13)中，-R1为-NH2，-R2为-CONH-Octyl，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与辛胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例14：化合物(14)的制备。
化合物(14)中，-R1为-NH2，-R2为-CONH-Hexadecyl，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与十六胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例15：化合物(15)的制备。
化合物(15)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Me)2，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二甲胺盐酸盐反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例16：化合物(16)的制备。
化合物(16)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Octyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二辛胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例17：化合物(17)的制备。
化合物(17)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Hexadecyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二(十六)胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例18：化合物(18)的制备。
化合物(18)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.1所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa1位的氨基酸为Glu。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点9使用氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例19：化合物(19)的制备。
化合物(19)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.1所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa2位的氨基酸为Pro。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例20：化合物(20)的制备。
化合物(20)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.1所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为Ser。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例21：化合物(21)的制备。
化合物(21)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.1所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Leu。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例22：化合物(22)的制备。
化合物(22)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.1所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa5位的氨基酸为Asp。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例23：化合物(23)的制备。
化合物(23)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.2所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH，位点9使用氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
(6)将所得产物(23)经0.1％HOAc/CH3CN转盐后得到其醋酸盐产物23·HOAc
(7)将所得产物(23)经0.1％HCl/CH3CN转盐后得到其盐酸盐产物23·HCl。
实施例24：化合物(24)的制备。
化合物(24)中，-R1为-NH-Ac，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.2所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用Ac2O/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例25：化合物(25)的制备。
化合物(25)中，-R1为-NH-Octanoyl，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.2所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用辛酸酐/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例26：化合物(26)的制备。
化合物(26)中，-R1为-NH-Pal，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.2所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用棕榈酰氯/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例27：化合物(27)的制备。
化合物(27)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa2位的氨基酸为Pro。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例28：化合物(28)的制备。
化合物(28)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa2位的氨基酸为D-Pro。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-D-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例29：化合物(29)的制备。
化合物(29)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为Ser。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例30：化合物(30)的制备。
化合物(30)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Leu。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例31：化合物(31)的制备。
化合物(31)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为D-Thr。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-D-Thr(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例32：化合物(32)的制备。
化合物(32)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为D-Ser。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-D-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例33：化合物(33)的制备。
化合物(33)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为Ser(OMe)。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例34：化合物(34)的制备。
化合物(34)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为Ser(OnBu)。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例35：化合物(35)的制备。
化合物(35)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Nle。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Nle-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例36：化合物(36)的制备。
化合物(36)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Val。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Val-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例37：化合物(37)的制备。
化合物(37)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Abu。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Abu-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例38：化合物(38)的制备。
化合物(38)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Ala。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Ala-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例39：化合物(39)的制备。
化合物(39)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.2所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa4位的氨基酸为Aib。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Aib-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例40：化合物(40)的制备。
化合物(40)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.3所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH，通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例41：化合物(41)的制备。
化合物(41)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.3所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为D-Thr。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-D-Thr(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例42：化合物(42)的制备。
化合物(42)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.3所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa2位的氨基酸为D-Pro。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-D-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例43：化合物(43)的制备。
化合物(43)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列与SEQ ID No.3所示的序列基本一致，区别点仅在于第Xaa3位的氨基酸为D-Ser。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-D-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例44：化合物(44)的制备。
化合物(44)中，-R1为-NH-Pal，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.3所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用棕榈酰氯/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例45：化合物(45)的制备。
化合物(45)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.4所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH，在固相合成中位点9使用氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例46：化合物(46)的制备。
化合物(46)中，-R1为-NH-Octanoyl，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.4所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用辛酸酐/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例47：化合物(47)的制备。
化合物(47)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.5所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH，在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例48：化合物(48)的制备。
化合物(48)中，-R1为-NH-Ac，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.5所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中氨基酸偶联完后使用Ac2O/DIEA封端。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例49：化合物(49)的制备。
化合物(49)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.6所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH，在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Val-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例50：化合物(50)的制备。
化合物(50)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Me)2，肽链的序列为SEQ ID No.6所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二甲胺盐酸盐反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例51：化合物(51)的制备。
化合物(51)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.7所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例52：化合物(52)的制备。
化合物(52)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Octyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.7所示的序列。
按照实施例1描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二辛胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例53：化合物(53)的制备。
化合物(53)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.8所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Val-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例54：化合物(54)的制备。
化合物(54)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Hexadecyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.8所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二(十六)胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例55：化合物(55)的制备。
化合物(55)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.9所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Val-OH，在固相合成中位点5使用氨基酸Fmoc-Ser(OtBu)-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH，合成中位点9使用氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例56：化合物(56)的制备。
化合物(56)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Octyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.9所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二辛胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例57：化合物(57)的制备。
化合物(57)中，-R1为-NH2，-R2为-COOH，肽链的序列为SEQ ID No.10所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。在固相合成中位点3使用氨基酸Fmoc-Leu-OH，在固相合成中位点6使用氨基酸Fmoc-Pro-OH，合成中位点9使用氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例58：化合物(58)的制备。
化合物(58)中，-R1为-NH2，-R2为-CON(Octyl)2，肽链的序列为SEQ ID No.10所示的序列。
按照实施例23描述进行合成和纯化。固相合成中的树脂载体换成CTC Resin。线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解，在HBTU/DIEA作用下与二辛胺反应得到产物。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例59：镇痛试验
将上述实施例1～58中制得的化合物(1)～化合物(58)分别配制成浓度为0.5mg/mL的溶液备用。
小鼠醋酸扭体试验：选用雄性小鼠590只，实验前禁食10h，只供饮水。随机分为58个组及生理盐水对照组，每组10只。小鼠腹腔内分别注射化合物(1)～化合物(58)，20min后腹腔注射致痛剂0.6％醋酸溶液10mL/kg，5min后开始记录20min内小鼠扭体次数。
按下列公式计算各剂量组的扭体抑制率，得到下表1。
扭体抑制率＝(对照组扭体数-给药组扭体数)/对照组扭体数×100％
表1:各化合物对小鼠扭体抑制率的影响(t/min-1)
由表1可以看出，实施例1～实施例58中制得的化合物(1)～化合物(58)对小鼠扭体抑制作用明显，与生理盐水组具有显著差异，其中化合物(21)对小鼠扭体抑制率可高达75.52％，镇痛效果显著。