二氢青蒿素‑美金刚二联体化合物及其合成方法和用途与流程

二氢青蒿素-美金刚二联体化合物及其合成方法和用途技术领域本发明属于药物化学领域，具体涉及一种二氢青蒿素-美金刚二联体化合物及其合成方法和在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。

背景技术：
神经退行性疾病是通过毁坏维持正常大脑功能的神经元，引起脑损失或躯体功能障碍的一类疾病。临床上主要有阿茨海默症(Alzheimer’sdisease,AD)、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、牛海绵状脑症、克雅二氏症、亨廷顿症、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森症(Parkinson’sdisease，PD)、原发性侧索硬化及脊椎性肌萎缩症等，其中，最为常见、最多发的是AD和PD。神经退行性疾病的病人群主要是老年人，随着人口老年化加剧，发病率将逐年增加，近年来也发现发病人群年轻化的趋势。PD是以运动减少，肌肉强直和震颤为特征的神经退行性疾病，其病理特征为黑质和纹状体多巴胺(dopamine,DA)神经元变性减少，纹状体多巴胺递质、细胞内嗜酸性路易斯小体形成。PD的药物治疗可以分成抗胆碱能药、金刚烷胺、多巴胺替代疗法、多巴胺受体激动剂、单胺氧化酶-B抑制剂、COMT抑制剂六大类。一般来讲，治疗后临床症状有一定的好转，但并不能改善多巴胺能神经元功能和延缓退化，随着服药时间的延长和给药剂量的增加，效果降低，不良反应增大。AD是原发性神经退行性疾病，病变部位主要发生在大脑，由多种因素引起。临床表现为记忆功能障碍、智力减退和行为人格退化等症状。老年痴呆的发病率呈逐年上升趋势，但至今仍缺少理想的治疗药物，对AD的发病机制的研究和新治疗药物的开发仍有待深入的研究。中医药在涉及退行性疾病中的临床应用具有悠久的历史，在治疗和预防方面有独特的优势。

技术实现要素：
本发明的首要目的在于提供一种二氢青蒿素-美金刚二联体化合物。本发明的另一目的在于提供上述的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物的合成方法。本发明的再一目的在于提供上述的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用，尤其是在制备治疗抑郁症药物中的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现：一种二氢青蒿素-美金刚二联体化合物，其结构如式I所示：其中，n＝2-8；标*处(12位)可以是α或β构型。式I中，n＝2、12位为β构型时，式I化合物命名为ZLT-1；n＝4、12位为β构型时，式I化合物命名为ZLT-2；n＝5、12位为β构型时，式I化合物命名为ZLT-3；n＝4、12位为α构型时，式I化合物命名为ZLT-4；n＝5、12位为α构型时，式I化合物命名为ZLT-5；n＝6、12位为β构型时，式I化合物命名为ZLT-6；n＝6、12位为α构型时，式I化合物命名为ZLT-7；n＝3、12位为β构型时，式I化合物命名为ZLT-8。上述的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物的合成方法，以n＝2为例，首先是青蒿素还原得二氢青蒿素，在路易斯酸催化下，二氢青蒿素与2-溴代乙醇发生缩醛化反应，然后与美金刚盐酸盐反应得二氢青蒿素-美金刚二联体化合物。本发明的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物的合成路线如下所示：优选地，上述的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物的合成方法，包括以下步骤：(1)二氢青蒿素的制备：取青蒿素溶于适量溶剂，加入1.0～3.0倍青蒿素摩尔量的还原剂，-20～0℃下搅拌反应1-6小时，随后加入适量有机酸的甲醇溶液，调pH值6～7，并搅拌至不再有气体放出；除去甲醇，加入冷水，搅拌5min，抽滤，冷水洗涤滤饼，将滤饼溶于二氯甲烷(DCM)中，无水硫酸钠干燥，除去溶剂，得白色固体化合物为二氢青蒿素，收率60～95％；(2)溴代醇的制备：取1,n-二醇溶于适量溶剂中，加入1.0～3.0倍摩尔量的溴化氢，搅拌回流2～40小时，反应结束后，旋蒸除去溶剂，色谱分离得到溴代醇，收率10-100％；(3)12-O-溴烷基二氢青蒿素的制备：取二氢青蒿素溶于适量溶剂，加入催化量经活化的分子筛，冰浴条件下预冷5min，加入0.01-0.1倍二氢青蒿素摩尔量的路易斯酸，再加入1-3倍二氢青蒿素摩尔量的溴代醇，冰浴下反应30min，再在室温下反应20～40小时；反应结束后，往反应釜中加入冰水，DCM萃取，色谱分离，得纯的12-O-溴烷基二氢青蒿素；收率90～100％；(4)二氢青蒿素-美金刚二联体化合物的制备：取12-O-溴烷基二氢青蒿素，溶于适量溶剂，加入1.0～3.0倍12-O-溴烷基二氢青蒿素摩尔量的美金刚盐酸盐和1.0～3.0倍12-O-溴烷基二氢青蒿素摩尔量的碱，50～100℃下搅拌反应5～20小时，反应结束，旋蒸除去溶剂，加入适量水，乙醚萃取，干燥，色谱分离纯化，得二氢青蒿素-美金刚二联体化合物，收率40-90％；步骤(1)所述的溶剂为甲醇、四氢呋喃或二氯甲烷中的一种以上，优选甲醇；步骤(1)所述的还原剂为硼氢化钠、氰基硼氢化钠或锂铝氢中的一种，优选硼氢化钠；步骤(1)所述的有机酸为甲酸、醋酸、三氟醋酸或柠檬酸中的一种，优选醋酸；步骤(2)所述的溶剂为苯、甲苯、氯甲苯或环己烷，优选苯或甲苯；步骤(3)所述的溶剂为二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃、甲苯或苯中的一种，优选DCM；步骤(3)所述的路易斯酸优选对甲苯磺酸、三氟硼酸或钨磷酸中的一种，特别优选钨磷酸；步骤(4)所述的溶剂为四氢呋喃(THF)、1,6-二氧六环或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的一种，优选DMF；步骤(4)所述的碱为碳酸钾、氢氧化钾、磷酸钾或醋酸钾中的一种，优选碳酸钾。本发明利用以下实验证明上述的化合物具有神经退行性疾病治疗效果：将PC12细胞按6×103/孔接种于96孔板中，于培养箱中孵育24h后，弃掉培养基，分别加入10、5、2.5、1.25μM四个浓度的上述化合物预处理3h，后弃去药液，采用PBS洗涤一次后，加入400μM的皮质酮(Cort)作用24h。结果显示，2.5μMZLT-1和5.0μMZLT-8均呈现一定的神经保护作用。美金刚于此模型上无明显的保护作用，而青蒿素于12.5μM左右呈现一定的保护作用，但在2.5和5.0μM浓度下，前体药物青蒿素、美金刚及其联合药(青蒿素:美金刚＝1:1)实验组均未呈现神经毒性保护作用。因此，上述的二氢青蒿素-美金刚二联体化合物可用于制备治疗神经退行性疾病的药物，尤其可用于制备治疗抑郁症的药物；还可用于制备治疗皮质酮代谢紊乱所导致的疾病的药物。本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：本发明的化合物为首次报道，其对神经退行性疾病有治疗效果，可用于制备治疗神经退行性疾病的药物。相比于其它现有技术，本发明的化合物制备工艺简单、疗效优于美金刚。附图说明图1为皮质酮对PC12细胞的半抑制浓度结果图。图2为ZLT-1～ZLT-8对Cort诱导的神经损伤的保护作用结果图。图3为同等浓度下单体化合物、联合给药、二联体化合物神经保护作用比较示意图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例112-β-12-O-(2-美金刚氨基)乙基二氢青蒿素(ZLT-1)的合成，包括以下三个步骤：(1)二氢青蒿素的制备：将青蒿素(565mg,2.0mmol)溶于50mL甲醇中,冰浴条件下预冷5min后，分批加入NaBH4(151mg,4.0mmol)，冰浴条件下继续反应3h。反应结束后，冰浴条件下用50％AcOH/MeOH中和过量的NaBH4，调pH值为6-7直至不再产生气泡。除去甲醇，加入冷水，搅拌15min后，抽滤,水洗滤饼。将产物溶于DCM中，无水硫酸钠干燥,得絮状白色固体482mg，收率85％。产物的分析数据如下：1HNMR(300MHz,CDCl3)δ:0.91-0.95(m,12H),1.22-1.25(m,1H),1.25-1.29(m,2H),1.29-1.32(m,1H),1.41(d,J＝3.0Hz,6H),1.45-1.52(m,3H),1.63-1.68(m,2H),1.68-1.91(m,10H),1.96-2.05(m,2H),2.21-2.44(m,4H),2.55-2.63(m,1H),4.73(d,J＝9.3Hz,1H),5.27(d,J＝3.6Hz,1H),5.37(s,1H),5.58(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:12.92,13.33,20.38,20.51,22.20,24.63,24.78,24.83,25.96,26.12,30.93,34.33,34.85,34.89,36.40,36.48,37.45,37.54,44.50,45.58,51.65,52.61,80.56,81.31,87.80,91.35,94.85,96.33,104.22,104.54.。上述数据证实该化合物为二氢青蒿素。(2)12-β-O-(2-溴乙基)二氢青蒿素的制备：将(310mg,1.1mmol)双氢青蒿素溶于20mL干燥DCM中,加入少量活化后的分子筛,冰浴条件下预冷5min后,加入磷钨酸(160mg，0.05equiv),活化10min后,加入2-溴乙醇(206.2mg,1.65mmol),冰浴条件下反应0.5h后,室温(15℃)反应26h,TLC跟踪反应,反应结束后,加入水,DCM萃取,干燥，柱色谱分离[V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝40:1],得白色固体。白色固体的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.87(d,J＝7.5Hz,3H),0.92(d,J＝6.3Hz,3H),1.17-1.26(m,2H),1.40(s,3H),1.57-1.63(m,1H),1.66-1.75(m,2H),1.79-1.90(m,1H),1.95-2.02(m,1H),2.02-2.11(m,2H),2.33(td,J＝13.5HZ,3.9Hz,3H),2.54-2.65(m,1H),3.41-3.49(m,3H),3.92-4.00(m,1H),4.77(d,J＝3.3Hz,1H),5.39(s,1H)；ESI-MS(m/z):413.2[M+Na]+.上述数据证实该化合物为12-β-O-(2-溴乙基)二氢青蒿素。(3)12-β-O-(2-美金刚氨基)乙基二氢青蒿素(ZLT-1)的制备：称取12-β-O-(2-溴乙基)二氢青蒿素(86.1mg,0.22mmol)用10mLDMF溶解,加入美金刚盐酸盐(79.37mg,0.37mmol)和K2CO3(30.64mg,0.22mmol)，75℃下反应9h.反应完毕,70℃下旋蒸除去DMF,加入水,Et2O萃取,干燥,柱色谱分离[V(氯仿):V(甲醇):V(三乙胺)＝25:1:0.5％],[V(氯仿):V(甲醇)＝15:1]进行监测,得淡黄色油状物,收率78.5％。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.74(s,6H),0.81(d,J＝7.5Hz,3H),0.85(d,J＝6.0Hz,3H),0.98-1.04(d,J＝5.1Hz,2H),1.05-1.23(m,12H),1.32(s,3H),1.33-1.46(m,4H),1.47-1.57(m,1H),1.59-1.70(m,2H),1.71-1.83(m,1H),1.93(ddd,J＝14.4Hz,4.5Hz,3Hz,1H)，2.00-2.08(m,1H),2.25(td,J＝15.0Hz,3.0Hz,1H),2.48-2.56(m,1H),2.62-2.69(m,2H),3.40-3.48(m,1H),3.76-3.87(m,1H),4.68-4.71(d,J＝3.6Hz,1H),5.27-5.31(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:13.12,20.33,24.53,24.67,26.02,30.17,30.26,30.90,32.37(2),34.58,36.36,37.46,40.16,40.78,42.88,44.29,48.45,48.55,50.04(2),50.82,52.37,52.49,67.74,81.08,87.91,101.86,104.24；MS-ESIm/z:490.5[M+H]+；HRMScalcdforC29H47NO5[M+H]+490.3527,found490.3523。上述数据证实该化合物为12-β-O-(2-美金刚氨基)乙基二氢青蒿素(ZLT-1)，结构如下所示：实施例212-β-12-O-(4-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-2)的合成，包括以下四个步骤：(1)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例1步骤(1)；(2)4-溴丁醇的制备：将1,4-丁二醇(1.8g,20mmol)溶于60mL苯中,加入HBr(2.4mL,20mmol),回流2h。反应结束后,旋蒸除去苯层中的苯。所得物质进行柱色谱分离[V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝5:1],得0.3g无色油状物。收率10％.产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:1.56-1.68(m,2H),1.80-1.92(m,2H),3.37(t,J＝6.9Hz,2H),3.57(t,J＝6.6Hz,2H),3.98(s,1H)。以上数据证明该化合物为4-溴丁醇；(3)12-β-O-(4-溴正丁基)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例1步骤(2)，得无色油状液体。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.84(d,J＝7.5Hz,3H),0.88(d,J＝6.3Hz,3H),1.08-1.22(m,2H),1.24-1.31(m,1H),1.31-1.37(m,2H),1.38(s,3H),1.39-1.45(m,2H),1.45-1.62(m,2H),1.63-1.72(m,2H),1.73-1.88(m,2H),1.97(ddd,J＝14.4Hz,4.5Hz,3.0Hz,1H),2.30(td,J＝13.5Hz,3.9Hz,1H),2.50-2.61(m,1H),3.22-3.45(m,4H),4.62(d,J＝3.3Hz,1H),5.32(s,1H).上述数据证实该化合物为12-β-O-(4-溴丁基)二氢青蒿素。(4)12-β-12-O-(4-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-2)的制备：步骤同实施例1步骤(3)。将12-β-O-(2-溴乙基)二氢青蒿素(86.1mg,0.22mmol)替换为12-β-O-(4-溴正丁基)二氢青蒿素(92.3mg,0.22mmol)。得淡黄色油状物,收率76.7％。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.79(s,6H),0.84(d,7.2Hz,3H),0.89(d,J＝6.3Hz,3H),1.06(s,2H),1.16-1.34(m,12H),1.38(s,3H),1.40-1.44(m,1H),1.44-1.64(m,8H),1.65-1.74(m,2H),1.79-1.87(m,1H),1.97(ddd,J＝14.4Hz,4.2Hz,3.0Hz,1H),2.06-2.11(m,1H),2.31(td,J＝14.1Hz,3.9Hz,1H),2.52-2.62(m,3H),3.28-3.36(m,1H),3.75-3.83(m,1H),4.71(d,J＝3.9Hz,1H),5.33(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:13.24,20.51,24.65,24.81,26.36,27.55,27.88,30.33,30.41(2),31.04,32.54(3),34.77,36.57,37.56,40.63,40.78,43.00(3),44.59,48.39,50.94,52.70,68.43,81.26,88.01,102.14,104.18；MS-ESIm/z:518.7[M+H]+；HRMS(m/z)calcdforC31H51NO5[M+H]+518.3840,found518.3847。以上数据证明化合物为12-β-12-O-(4-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-2)，结构如下所示：实施例312-β-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-3)的合成，包括以下四个步骤：(1)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例1步骤(1)。(2)5-溴正戊醇的制备：将(300mg，2mmol)1,5-戊二醇溶于10mL甲苯中,加入HBr(0.3mL,2.4mmol)，回流36h.旋干甲苯层,得无色油状液体体.产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:1.32-1.50(m,4H),1.69-1.81(m,2H),3.30(t,J＝6.6Hz,2H),3.48(t,J＝6.3Hz,2H),4.21(s,1H)。以上数据证明该化合物为5-溴正戊醇。(3)12-β-O-(5-溴正戊基)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例1步骤(2)，得无色油状液体。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.82(d,J＝7.2Hz,3H),0.88(d,J＝6.0Hz,3H),1.07-1.21(m,2H),1.22-1.29(m,1H),1.33-1.37(m,4H),1.37-1.49(m,2H),1.52-1.60(m,1H),1.62-1.70(m,4H),1.73-1.91(m,4H),1.92-2.00(m,1H),2.28(td,J＝13.8Hz,3.6Hz,1H),2.48-2.60(m,1H),3.31-3.39(m,3H),3.75-3.85(m,1H),4.70(d,J＝3.3Hz,1H),5.30(s,1H)。上述数据证实该化合物为12-β-O-(5-溴正戊基)二氢青蒿素。(4)12-β-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-3)的制备：步骤同实施例1步骤(3)。得淡黄色油状物,收率80.2％。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.82(s,6H),0.87(d,J＝7.2Hz,3H),0.93(d,J＝6.0Hz,3H),1.06-1.11(m,2H),1.20-1.29(m,11H),1.30-1.34(m,2H),1.42(s,3H),1.43-1.66(m,10H),1.70-1.78(m,2H),1.82-1.88(m,1H),2.01(ddd,J＝14.4Hz,4.5HZ,3.0Hz,1H),2.08-2.14(m,1H),2.35(ddd,J＝17.7Hz,13.5Hz,3.9Hz,1H),2.51-2.64(m,3H),3.30-3.38(m,1H),3.76-3.85(m,1H),4.75(d,J＝3.3Hz,1H),5.36(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:13.00,20.35,24.09,24.38,24.60,26.13,29.50,30.15,30.30(3),30.51,30.82,32.27(3),34.59,36.35,37.36,40.45,41.00,42.93(2),44.38,48.69,50.87,52.33,52.48,68.16,80.94,87.73,101.81,103.85；MS-ESI(m/z):532.7[M+H]+；HRMS(m/z):calcdforC32H53NO5[M+H]+532.3997,found532.3998。以上数据证明该化合物为12-β-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-3)，结构如下：实施例412-α-12-O-(4-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-4)的合成，包括以下四个步骤：(1)步骤同实施例2步骤(1)。(2)步骤同实施例2步骤(2)。(3)12-α-O-(4-溴正丁基)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例2步骤(3)，得无色油状液体。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.91(d,J＝5.7HZ,3H),1.15(d,J＝7.5HZ,3H),1.19-1.25(m,3H),1.38(s,3H),1.44-1.55(m,2H),1.57-1.65(m,3H),1.66-1.78(m,3H),1.88-2.03(m,4H),2.27(td,J＝13.2HZ,3.6HZ,1H),3.42(t,J＝6.9HZ,2H),3.45-3.52(m,1H),3.83-3.92(m,1H),4.93(d,J＝5.4HZ,1H),5.40(s,1H)。以上数据证实化合物为12-α-O-(4-溴正丁基)二氢青蒿素。(4)12-α-12-O-(5-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-4)的制备：步骤同实施例2步骤(4)。得淡黄色油状物，收率68.4％。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.79(s,6H),0.89(d,J＝6Hz,2H),1.06(s,2H),1.13(d,J＝7.2Hz,3H),1.16-1.32(m,12H),1.37(s,3H),1.38-1.41(m,1H),1.42-1.47(m,3H),1.47-1.63(m,7H),1.63-1.72(m,1H),1.79-1.89(m,1H),1.97(ddd,J＝14.4Hz,4.2Hz,3Hz,1H),2.05-2.14(m,1H),2.25(ddd,J＝14.4Hz,13.2Hz,3.6Hz,1H),2.57(t,J＝7.5Hz,2H),3.38-3.47(m,1H),3.78-3.87(m,1H),4.90(d,J＝4.8Hz,1H),5.38(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:19.73,20.24,24.82,26.14,27.68,27.84,30.38(2),30.47,31.75,32.53(3),34.58,36.66,37.42,39.89,40.63,41.07,43.10(3),46.61,48.72,51.04,52.04,68.76,81.75,89.15,102.98,103.16；MS-ESI(m/z):518.6[M+H]+；HRMS(m/z):calcdforC31H51NO5[M+H]+518.3840,found518.3841.以上数据证明该化合物为12-α-12-O-(5-美金刚氨基)正丁基二氢青蒿素(ZLT-4)，其化学结构如下所示。实施例512-α-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-5)的合成，包括以下四个步骤：(1)步骤同实施例3步骤(1)。(2)步骤同实施例3步骤(2)。(3)12-α-O-(5-溴正戊基)二氢青蒿素的制备：步骤同实施例3步骤(3)，得无色油状液体。产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.92(d,J＝6.0Hz,3H),1.16(d,J＝7.2Hz,3H),1.22-1.25(m,3H),1.40(s,3H),1.41-1.43(m,1H),1.46-1.50(m,2H),1.51-1.55(m,2H),1.58-1.60(m,2H),1.61-1.64(m,2H),1.79-1.93(m,4H),1.97-2.03(m,1H),2.28(td,J＝13.5Hz,3.9Hz,1H),3.39(t,J＝6.9Hz,2H),3.45-3.48(m,1H),3.82-3.90(m,1H),4.93(d,J＝5.1Hz,1H),5.42(s,1H).。以上数据证明化合物为12-α-O-(5-溴正戊基)二氢青蒿素。(4)12-α-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-5)的制备：步骤同实施例3步骤(4)，得淡黄色油状物,收率71.2％.产物的分析数据如下：1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:0.78(s,6H),0.82(d,J＝7.2Hz,3H),0.90(d,J＝6.0Hz,3H),0.93-1.02(m,1H),1.02-1.07(m,2H),1.15-1.26(m,12H),1.27-1.34(m,2H),1.38(s,3H),1.39-1.48(m,5H),1.50-1.57(m,2H),1.58-1.74(m,3H),1.78-1.87(m,1H),1.96(ddd,J＝15.3Hz,4.8Hz,3.3Hz,1H),2.03-2.09(m,1H),2.25-2.37(m,2H),2.51(t,J＝7.2Hz,2H),2.29-2.39(m,1H),3.85-3.95(m,1H),4.35(d,J＝9.3Hz,1H),5.27(s,1H)；13CNMR(75MHz,CDCl3)δ:12.79,20.43,22.33,24.03,24.83,26.20,29.57,30.39(2),30.49,30.93,32.48(3),32.76,34.37,36.45,37.48,40.68,41.31,43.16(2),45.44,49.00,51.10,51.78,52.39,69.12,80.46,91.29,100.22,104.34；MS-ESI(m/z):532.5[M+H]+；HRMS(m/z):calcdforC32H53NO5[M+H]+532.3997,found532.4002.以上数据证明该化合物为12-α-12-O-(5-美金刚氨基)正戊基二氢青蒿素(ZLT-5)，其化学结构如下所示：实施例6化合物ZLT-1～ZLT-8对皮质酮诱导的PC12神经细胞损伤的保护作用本实施例中，(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞购自中国科学院上海细胞库(上海，中国)；高糖培养基(DMEM)购自Invitrogen公司(美国)；胎牛血清(FBS)购自BiologicalIndustries公司(以色列)；胰蛋白酶购自美国Gibco公司；磷酸盐缓冲液(PBS)购自武汉博士德公司；噻唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司。实验步骤：将对数期生长的PC12细胞经过胰酶消化后，离心，用完全培养基(含10％FBS的DMEM)制成细胞悬液，计数，调整细胞浓度为6×104/mL。将细胞接种于96孔细胞培养板，100μL/孔，将96孔板置于37℃，5％CO2的培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，弃去旧培养基，加入不同浓度的药物。每孔加入14μL的MTT(5mg/mL，溶剂为PBS)，于细胞培养箱中孵育2～4h；弃上层液体，每孔加入150μLDMSO，振摇10min，使板底部的紫色结晶充分溶解；使用酶标仪(ThermoMK3,USA)检测570nm出的吸光度值，记录结果，计算细胞增长抑制率，每次实验至少重复三次。计算公式：细胞存活率(％)＝(药物组-空白对照组)/(正常组-空白组)×100％；细胞增殖抑制率(％)＝[1-(药物组-空白对照组)/(正常组-空白组)]×100％。将PC12细胞按6×103/孔接种于96孔板中，于培养箱中孵育24h后，弃去旧培养基，分别加入不同浓度的皮质酮(Cort)处理24h，结果如图1。从图1中可以看出，Cort的半抑制浓度IC50＝402.3μM。因此，选择400μM的Cort作为评估待测药物神经保护作用的浓度。将PC12细胞按6×103/孔接种于96孔板中，于培养箱中孵育24h后，弃去旧培养基，分别加入10，5，2.5，1.25μM四个浓度的药物预处理3h，后弃去药液，采用PBS洗涤一次后，加入400μM的皮质酮(Cort)作用24h。结果如图2所示。可以看到，化合物ZLT-1在浓度5μM时神经保护作用最强，在浓度2.5μM时仍有神经保护作用；而ZLT-8在高浓度20μM时也有神经保护作用，在浓度5μM时神经保护作用最强。利用相同方法比较单体化合物二氢青蒿素(ArteorA)、美金刚(MemaorM)、1:1A/M联合给药、二联体化合物对Cort诱导的神经损伤保护作用的差异，结果如图3。结果揭示，M在高达50μM的浓度下没有显示神经保护作用；A在较高浓度12.5μM下显示保护作用；而ZLT-1和ZLT-8分别在2.5μM和5μM下显示保护作用。初步说明二联体的协同效果。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。