技术总结
本发明公开了一种基于耐热DNA聚合酶和连接酶的体外快速无缝组装DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明在需要组装构建的目标片段两末端引入同源臂序列，采用热循环进行变性‑退火‑切割‑连接的方式，实现快速体外DNA组装构建。在2h内一次可以实现2‑6个片段的高效快速的无缝组装。此外，可通过在引物中引入兼并突变序列实现PCR扩增后获得含有不同突变区域的DNA片段，进而通过本组装方法实现对基因DNA的组装突变构建。本发明可用于常规的DNA重组构建，并实现高通量操作，特别适合于对酶基因和合成途径的体外高效进化改造上，引入丰富的组合突变多样性，进行快速定向进化和合成生物学操作。
技术研发人员：康振;陈坚;金鹏;堵国成;丁雯雯;
受保护的技术使用者：江南大学;
文档号码：201610214900
技术研发日：2016.04.07
技术公布日：2016.07.27