技术领域本发明属于生物医学技术领域，提供一种鲍特菌选择性培养基及其应用。
背景技术：
鲍特菌主要包括百日咳鲍特菌和副百日咳鲍特菌，是儿科领域非常重要的呼吸道感染病原菌，百日咳鲍特菌引起的疾病称为百日咳，属于国家法定的乙类传染病。副百日咳鲍特菌感染引起的疾病为百日咳综合征，不属于传染病范畴。近年来，百日咳在很多发达国家的发病率大幅度上升，成为全球儿童感染领域的热点问题。我国儿童基数庞大，儿科百日咳样咳嗽的患儿数量大，季节性明显，但因检测手段有限，细菌培养困难，导致临床上百日咳的病原诊断非常困难，很多可能的百日咳患儿被笼统诊断为百日咳综合征，严重影响百日咳患儿的治疗和防控。细菌培养是感染性疾病病原诊断的金标准，目前国内无该培养该菌的培养基成品。国外有可用于百日咳杆菌培养的碳琼脂培养基干粉(OXOIDCompany,England)，成分含牛肉浸粉、蛋白胨、淀粉、细菌学木炭、氯化钠、烟酸和琼脂粉，使用的选择性鲍特菌培养基添加物为头孢氨苄，加入5％脱纤维马血可配制成鲍特菌选择性培养皿。但根据该配方配制的培养基因对其他细菌的抑制效果不理想，导致百日咳鲍特菌等细菌的分离率很低。而且，上述碳琼脂培养基干粉和添加物在中国未经注册，因此在中国境内的医院无法合规采购和使用。
技术实现要素：
本发明的一个目的是针对国内目前尚无鲍特菌选择培养基、且国外现有选择性鲍特菌培养基配方对百日咳杆菌等鲍特菌选择性欠佳的现状，提供一种培养效率较高的鲍特菌选择性培养基平皿成品。本发明鲍特菌选择性培养基配方按照质量百分比计算，包括：含蒸馏水85.7～87﹪、脱纤维羊血8.6～9.5﹪、琼脂粉1.0～1.2﹪、牛肉浸粉0.85～0.95﹪、蛋白胨0.85～0.95﹪、淀粉0.85～0.95﹪、氯化钠0.43～0.48﹪、细菌学木炭0.34～0.39﹪、烟酸7.5×10-5～9.5×10-5﹪和万古霉素1×10-3～2×10-3﹪。本发明的另一个目的是上述鲍特菌选择性培养基在儿童呼吸道感染病原检测试剂盒中的应用，优选在百日咳检测试剂盒中的应用。本发明的有益效果如下：使用本发明的选择性培养基平皿能有效培养出百日咳鲍特菌、副百日咳鲍特菌、支气管败血性鲍特菌等鲍特菌属的所有细菌，特别是在百日咳的诊断中起金标准作用。附图说明图1为百日咳患儿冯某同时采集的鼻咽拭子接种在现有对比鲍特菌选择性培养基和本发明培养基上百日咳鲍特菌的生长情况比较。图2为百日咳患儿蒋某同时采集的鼻咽拭子接种在现有对比鲍特菌选择性培养基和本发明培养基上百日咳鲍特菌的生长情况比较。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的分析。以下实施例所采用的脱纤维羊血购买自杭州康裕贸易有限公司，细菌学琼脂粉和牛肉浸粉为青岛海博生物技术有限公司产品，蛋白胨购自英国OXOID公司，马铃薯淀粉自制，细菌学木炭为定制木炭自行磨碎成粉末，氯化钠为市售化学纯产品，烟酸为北京四环生物制药有限公司产品，万古霉素为礼来公司产品；现有对比鲍特菌选择性培养基是国外配方，成分包括碳琼脂培养基干粉(OXOIDCompany,England)、添加物头孢氨苄、5％脱纤维马血，其中这里所指代的碳琼脂培养基干粉成分含牛肉浸粉、蛋白胨、淀粉、细菌学木炭、氯化钠、烟酸和琼脂粉。实施例1-1：鲍特菌选择性培养基平皿的配制(以配制1000ml为例)(一)碳粉培养基基础悬液的准备：将琼脂粉10～12g、牛肉浸粉8.5～9.5g、蛋白胨8.5～9.5g、马铃薯淀粉8.5～9.5g、氯化钠4.3～4.8g、细菌学木炭3.4～3.9g、烟酸0.00075～0.00095g混合，加入857～870g水混合摇匀。(二)培养基平皿的配制步骤(1)、将上述配好的混悬液置于121℃高温、0.11mpa高压灭菌15分钟，然后凉至50℃；步骤(2)、在无菌操作环境，将100ml脱纤维羊血(100g)缓慢加入步骤(1)制备得到的培养基中，轻轻混匀；步骤(3)、取万古霉素1支(0.5g)，以10ml生理盐水溶解后，取0.4～0.8ml，加入冷却至50℃的上述步骤(2)制备得到的备用培养基，轻轻混匀后以每一平皿18～20ml的量倾注于9cm无菌平皿，培养基冷却凝固后将平皿包装冷藏备用。实施例1-2：鲍特菌选择性培养基平皿的配制(以配制1000ml为例)(一)碳粉培养基基础悬液的准备：将琼脂粉10g、牛肉浸粉9.5g、蛋白胨9.5g、马铃薯淀粉9.5g、氯化钠4.8g、细菌学木炭3.9g、烟酸0.00095g混合，加入857g水混合摇匀。(二)培养基平皿的配制步骤(1)、将上述配好的混悬液置于121℃高温、0.11mpa高压灭菌15分钟，然后凉至50℃；步骤(2)、在无菌操作环境，将95ml脱纤维羊血(95g)缓慢加入步骤(1)制备得到的培养基中，轻轻混匀；步骤(3)、取万古霉素1支(0.5g)，以10ml生理盐水溶解后，取0.4ml，加入冷却至50℃的上述步骤(2)制备得到的备用培养基，轻轻混匀后以每一平皿18～20ml的量倾注于9cm无菌平皿，培养基冷却凝固后将平皿包装冷藏备用。实施例1-3：鲍特菌选择性培养基平皿的配制(以配制1000ml为例)(一)碳粉培养基基础悬液的准备：将琼脂粉10.7g、牛肉浸粉8.5g、蛋白胨8.5g、马铃薯淀粉8.5g、氯化钠4.3g、细菌学木炭3.4g、烟酸0.00075g混合，加入870g水混合摇匀。(二)培养基平皿的配制步骤(1)、将上述配好的混悬液置于121℃高温、0.11mpa高压灭菌15分钟，然后凉至50℃；步骤(2)、在无菌操作环境，将86ml脱纤维羊血(86g)缓慢加入步骤(1)制备得到的培养基中，轻轻混匀；步骤(3)、取万古霉素1支(0.5g)，以10ml生理盐水溶解后，取0.2ml，加入冷却至50℃的上述步骤(2)制备得到的备用培养基，轻轻混匀后以每一平皿18～20ml的量倾注于9cm无菌平皿，培养基冷却凝固后将平皿包装冷藏备用。实施例1-4：鲍特菌选择性培养基平皿的配制(以配制1000ml为例)(一)碳粉培养基基础悬液的准备：将琼脂粉12g、牛肉浸粉9g、蛋白胨9g、马铃薯淀粉9g、氯化钠4.5g、细菌学木炭3.5g、烟酸0.0008g混合，加入863g水混合摇匀。(二)培养基平皿的配制步骤(1)、将上述配好的混悬液置于121℃高温、0.11mpa高压灭菌15分钟，然后凉至50℃；步骤(2)、在无菌操作环境，将90ml脱纤维羊血(90g)缓慢加入步骤(1)制备得到的培养基中，轻轻混匀；步骤(3)、取万古霉素1支(0.5g)，以10ml生理盐水溶解后，取0.3ml，加入冷却至50℃的上述步骤(2)制备得到的备用培养基，轻轻混匀后以每一平皿18～20ml的量倾注于9cm无菌平皿，培养基冷却凝固后将平皿包装冷藏备用。实施例2：临床试验2016年3月通过对浙江省某儿童医院呼吸内科某病区48例有百日咳样咳嗽的患儿的进行鼻咽拭子采集。每次标本采集时分别经左右鼻孔采集2份鼻咽拭子，然后再分别接种于本发明的鲍特菌选择性培养基和按照现有对比鲍特菌选择性培养基进行培养，结果发现，用本发明的培养基，对百日咳鲍特菌的检出率为20.8﹪，用国外传统配方检出的阳性率为12.5﹪。而且在本发明培养基平皿上百日咳鲍特菌生长较传统培养基平皿上更为茂盛，见图1。图1(a)为百日咳患儿冯某鼻咽拭子在现有对比鲍特菌选择性培养基上的生长情况，图中可见平板上其他种类的细菌生长较多，仅4区可见零星生长的鲍特菌，可见是因为其他细菌的存在抑制鲍特菌的生长。图1(b)为该患儿同时采集的鼻咽拭子在本发明培养基上的生长情况，可见除少许大菌落的杂菌外，百日咳鲍特菌大量生长，说明本发明的培养基平皿对鲍特菌的选择性很好。图2(a)为百日咳患儿蒋某鼻咽拭子在现有对比鲍特菌选择性培养基上的生长情况，图中可见平板上其他种类的细菌生长较多，2区3区可见鲍特菌生长，1区以杂菌为主，提示其他细菌在1区抑制鲍特菌的生长。图2(b)为该患儿同时采集的鼻咽拭子在本发明培养基上的生长情况，可见除少许大菌落的杂菌外，百日咳鲍特菌密集生长，菌落纯长，菌落细小因细菌密集所致，色差主要与光线有关。图2(b)缺损处为取用做药敏后留下的空白。该患儿病情危重，因痉咳后反复青紫和血氧饱和度下降住重症监护室治疗。上述实施例并非是对于本发明的限制，本发明并非仅限于上述实施例，只要符合本发明要求，均属于本发明的保护范围。