本发明属于新药设计与合成领域，具体涉及一类新型不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐及其抗肿瘤应用。
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：斑蝥，也写作斑蟊，俗称班苗、西班牙苍蝇等，在我国现存最早的中药学专著《本草纲目》、《神农本草经》等中都曾有记载。斑蝥是芫菁科昆虫南方大斑蟊或黄黑小斑蟊的干燥体，属鞘翅目芫菁科昆虫，是我国最早发现的具有抗癌作用的药材之一。斑蝥性辛，热，具有很强的肾毒性，同时具有破血逐瘀、去除淤积，消肿以及攻毒蚀疮的功效，临床常用于恶疮，顽癣，狂犬病及癌症肿痛等的治疗。而后的研究表明，斑蝥的体内含有一种倍半萜类衍生物，称之为斑蝥素(cantharidin，C10H12O4)，具有较高的抗癌活性，具有非常高的药用价值。斑蝥素为无色结晶，不溶于冷水，微溶于热水，溶于丙酮和氯仿。斑蝥素主要存在于多种昆虫中，能使人体皮肤起疱，斑蝥素及其衍生物抗肿瘤的机制主要是抑制蛋白质与酸的合成，增强机体对肿瘤细胞的杀伤力而达到治疗目的。斑蝥素及其类似物对肝癌，卵巢癌，食道癌等有良好的疗效，它是通过改变蛋白质的活性，抗肿瘤侵袭转移，引起细胞周期阻滞，抑制肿瘤生长，从而使得其死亡。其抗肿瘤的机制为通过减少癌细胞对氨基酸的摄取，抑制蛋白质的合成，刺激淋巴细胞、巨噬细胞、多形核细胞产生白细胞介素，从而提高机体免疫力，同时杀伤肿瘤细胞而达到治疗目的，与其他的抗肿瘤药物相比，斑蝥素及其衍生物有许多优点：其在抑制肿瘤的同时，不仅没有免疫抑制的副作用，还能提升机体白细胞等。但斑蝥素对泌尿系统和肠胃系统有较大的毒副作用，斑蝥素既是抗肿瘤的活性成分，同时也是毒性的主要成分。对其进行恰当的结构修饰，会在保留其抗肿瘤活性的基础上，大大减低对机体的毒副作用，以去甲斑蝥素衍生物的合成为例。去甲斑蝥素不但保留了其较强的抗肿瘤活性和升高白细胞的作用，还消除了其对泌尿系统的副作用，后来，以去甲斑蝥素为先导化合物进行结构改造成为了研究的热点。这种优势在抗肿瘤药物中还是少见的，所以引起了广泛的关注，陆续合成了许多减少其毒副作用但同时又保留其活性的同类药物，开发更新高效低毒的衍生物是一个很好的研究方向。对斑蝥素进行结构修饰后用于治疗癌症的衍生物近年来陆续的出现，并开始运用于临床治疗。如去甲斑蝥素，它比斑蝥素少了两个甲基，其毒性明显减低，而治疗作用却优于斑蟊素。目前，斑蝥素和去甲斑蝥素都已经应用在临床中，这两个药物都各具有临床特点，但不足之处是：这两个药物的水溶性都较差，生物利用度不高。从化学结构中看出，斑蝥素和去甲斑蝥素的结构中均包含了分子内酸酐结构。而斑蝥酸即斑蝥素化合物的酸酐水解后得到的二元羧酸化合物；斑蝥酸还未被开发成为药物，仅仅是报道了其结构式。此外，临床上还研究了斑蝥素钠，去甲斑蝥素钠，甲基斑蝥胺等，这些结构改造均将斑蝥素及去甲斑蝥素的内酸酐环打开，以开环方式存在，从化学结构上看；对应的开环化合物其相应的溶解度较大，其体内生物利用度也高。对斑蝥素的结构进行修饰，寻找高效低毒的斑蝥素抗肿瘤药物，具有重要的工业应用价值和广泛的市场前景。申请号为ZL201410163619.4、ZL201410163711.0、ZL201410163705.5的中国专利公开了制备去甲基斑蝥素酸盐的方法，迄今，尚未有报道设计并合成不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐结构。技术实现要素：为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新型不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐、其合成方法及其抗肿瘤应用。为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一方面，本发明提供了一种新型的不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐，其结构式如式I所示，另一方面，本发明提供了如上所述的不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I(或作化合物I)的合成方法，包括步骤：1)、化合物A与乙醇反应得到化合物B，2)、化合物B与氢氧化钡反应得到不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I；合成路线为：上述化合物I的合成方法中，优选地，所述步骤1)添加有机胺，更优选4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为有机碱助剂。上述化合物I的合成方法，优选地，所述步骤1)的反应温度为10℃-50℃；优选为室温。上述化合物I的合成方法，优选地，所述步骤1)的反应温度为10℃-50℃；优选为室温。此外，本发明的各步骤反应，可用色谱法、液质连用谱来监控反应进程。色谱法中，可适用薄层色谱TLC，也可用气相色谱法或液相色谱法如HPLC代替等。活性测试证明，本发明设计并合成得到的不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I对肝癌细胞具有良好的抑制活性。因此，本发明的第三方面提供了不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I用于制备抗肝癌药物中的用途。术语本文中缩写具有以下含义：室温也指常温，温度范围包括四季的室温，即10℃-35℃之间。小时缩写为h，分钟缩写为min；4-二甲氨基吡啶缩写为DMAP，二甲基亚砜缩写为DMSO，在合成实施例中M代表mol/L。具体实施方式以下将通过具体实施例进一步阐述本发明，但并不用于限制本发明的保护范围。在不脱离本发明构思的前提下，本领域技术人员可在权利要求范围内对制备方法和使用仪器作出改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。本发明中使用的试剂来自上海国药集团；而反应溶剂来自遵义双巨化工有限公司。除特别说明外，所用试剂及溶剂均为化学纯。实施例1.化合物A的制备从试剂瓶中取出一定量的顺丁烯二酸酐，置于干燥的研体中研细，再用电子天平称取研细的顺丁烯二酸酐12.021g，置于干燥的三口烧瓶中，塞上塞子，再加乙醚搅拌，在乙醚量为90mL时顺丁烯二酸酐完全溶解。待顺丁烯二酸酐完全溶解后，用滴液漏斗缓慢加入13mL呋喃，用时13min。控制温度在38℃开始反应。反应1h后溶液出现白色固体，且时间越长白色固体越多。反应至24h后抽滤，得白色固体的化合物A。干燥称重为17.46g，收率85.8％。熔点：122～123℃，比移值Rf：0.52(展开剂为石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)；1HNMR(CDCl3)：δ:3.18(s，2H)，5.47(s，2H)，6.58(s，2H)。实施例2.化合物D的制备称取化合物A5g(30mmol)，溶于30ml二氯甲烷中，加入苯甲醇4.7ml，4-二甲氨基吡啶367mg，室温下(25℃)搅拌过夜；反应结束后，抽滤，收集滤饼上的无色固体，干燥，得到固体无色产物的化合物D4.067g，收率50.1％。1HNMR(DMSO-d6)：δ：7.32-7.35(m，5H)，6.44(d，J＝36Hz，2H)，4.95-5.10(m，4H)，2.76(t，J＝8Hz，2H)。13CNMR(DMSO-d6)：δ：173.07，171.93，137.15，136.97，128.79，128.40，80.49，80.16，66.31，47.14，46.41，40.57，40.36，39.52，39.31。实施例3.化合物I的制备将化合物D624mg(2.27mmol)溶于25ml甲醇中，加入氢氧化钡八水合物315mg(1.91mmol)，室温下搅拌反应，反应结束后，减压除去溶剂，以甲醇为洗脱液过硅胶柱，点板，收集显色样品，旋蒸干燥，得到固体产物的化合物I(即不饱和去甲斑蝥素乙酯钡盐I)339mg，收率43.7％。1HNMR(CD3OD)：δ：7.30-7.39(m,5H),6.45(dd,J＝4Hz,4Hz,2H),5.25(dd,J＝12Hz,8Hz,2H),4.90(d,J＝4Hz,2H),2.7-2.89(m,2H).13CNMR(CD3OD):δ：179.86，177.28，136.45，134.92，128.13，127.92，127.86，126.83，126.56，81.23，79.93，61.67.51，63.79，52.20，49.64，45.98.实验例4.不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I的抗肿瘤活性测试细胞株和溶剂人肝癌细胞HEPG2，人胃癌细胞BGC803，人结肠癌细胞SW480，细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI1640中培养基，溶剂：二甲亚砜(简称为DMSO)。CCK-8染色法检测细胞抗肿瘤活性实施方案本试验按照SRB方法，以斑蟊素为阳性对照，DMSO溶剂为空白对照，进行了浓度为50nnmol/mL的不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I对肝癌细胞HEPG2、人胃癌细胞BGC803和结肠癌细胞SW480的三种肿瘤细胞的抑制活性测试。具体测试方案为：选用待测肿瘤活细胞比例达90％以上的细胞进行实验。细胞增殖抑制试验采用EnoGeneCellTMCountingKit-8(简称为CCK-8)细胞活力检测试剂盒。细胞消化、计数、制成浓度为1×105个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100μL细胞悬液(每孔1×104个细胞)；96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时；每孔加入100μL相应的含药物的培养基，作用浓度为50μMol/L(即：微摩尔/升)，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组(阳性对照分别选用斑蝥素和喜树碱)，每组5复孔；96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养72小时后；每孔加入10μLCCK-8溶液，将培养板在培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光值(简称OD值)，计算各个化合物对人肝癌细胞HEPG2、人胃癌细胞BGC803和结肠癌细胞SW480的抑制率。实验结果详见表1。表1、不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I对于三种肿瘤细胞的抑制活性测试样品HEPG2斑蟊素(阳性对照)70.4％DMSO溶剂(空白对照)99.9％化合物I40.8％由表1可知，在50nmol/L(换算成0.05μmol/L)的低浓度下，不饱和去甲斑蝥素苄酯钡盐I对人肝癌细胞HEPG2具有一定的抑制效果，可将其用于制备抗肝癌候选药物。当前第1页1 2 3