一种用于抗衰老的细胞制剂的制备方法与流程

文档序号:11936642阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于按照如下步骤进行:

步骤(1)、配制骨髓间充质培养液;

步骤(2)、无菌条件下,将抽取的骨髓加入至无菌培养瓶中,培养瓶中加入所述步骤(1)中配置的骨髓间充质培养液,体积比为1:1,用无菌移液器充分吹散骨髓细胞,制得骨髓细胞悬液;

步骤(3)、将所述步骤(2)中得到的骨髓细胞悬液离心后弃上清液,得到骨髓干细胞群;

步骤(4)、取所述步骤(4)中得到的骨髓干细胞群加入所述步骤(1)中配置的培养液中重悬后过滤,将过滤后含有骨髓干细胞群的培养液以1×109个/mL接种于培养皿中培养;

步骤(5)、原代培养24-48h后第一次换液,之后每3d换液一次,第三次换液12-18h后以1:2比例传代培养;

步骤(6)、取所述步骤(5)中培养的第三代骨髓间充质干细胞加入到生理盐水中重悬,制得骨髓间充质干细胞制剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述骨髓间充质培养液为L-DMEM培养基中加入青霉素浓度为100U/mL,加入链霉素浓度为100U/mL。

3.根据权利要求1所述的一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中离心速率为800-1500r/min,离心时间为5-10min。

4.根据权利要求1所述的一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(4)中用70μm无菌尼龙过滤器。

5.根据权利要求1所述的一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于:步骤(4)中将所述培养基置于37℃、CO2饱和湿度培养箱中培养。

6.根据权利要求1所述的一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(6)中骨髓间充质干细胞浓度为(2-5)×107个/mL。

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