一种达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯化方法与流程

本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯化方法。

背景技术：

达比加群酯甲磺酸盐(化合物A，英文名为Pradaxa)由德国勃林格殷格翰公司开发，目前已在全球80个国家上市销售。达比加群酯甲磺酸盐可显著降低卒中风险和全身性栓塞达35％以上，且显著降低缺血性卒中风险24％，同时血管性死亡、颅内出血、致死性出血风险也显著降低。本品的上市，是抗凝血治疗领域和潜在致死性血栓预防领域的一项重大进展，具有里程碑意义。

N-[[2-[[[(4-(氨基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯的盐(化合物B)为达比加群酯甲磺酸盐的关键中间体，由于达比加群酯甲磺酸盐(化合物A)难以精制除杂，该中间体的未知单一杂质个数的多少、纯度的高低决定着达比加群酯产品的质量。

德国勃林格殷格翰公司的化合物专利CN1248251对化合物B(N-[[2-[[[(4-(氨基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯)的合成实例中仅仅为毫克级操作，分离采用柱层析，完全不适合工业化操作，其缺陷非常明显。

西班牙MEDICHEM SA公司的专利WO2012152855制备化合物A中采用的工艺为制备化合物B的对甲苯磺酸盐，即本发明达比加群酯甲磺酸盐中间体，该工艺适合工业化大规模生产，但是文献中达比加群酯甲磺酸盐中间体的HPLC为83％，使用达比加群酯甲磺酸盐中间体继续制备达比加群酯甲磺酸盐(化合物A)得到的HPLC仅仅为98.8％，远远没有达到德国勃林格殷格翰公司在中国CFDA申报质量标准的要求。

因此，需要研究出一种重结晶技术，对达比加群酯甲磺酸盐中间体进行精制出纯度更高、单杂更少更低，作为原料制备出合格的最终产物—达比加群酯甲磺酸盐。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯化方法，使得达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯度大于95％，其他未知单一杂质小于0.15％，该中间体可以制备出符合原研药厂质量要求的达比加群酯甲磺酸盐产品。

为解决以上技术问题，本发明采取的一种技术方案是：

一种具有式Ⅰ结构的达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯化方法，

在良性溶剂中通过控制梯度结晶对达比加群酯甲磺酸盐中间体进行纯化，梯度结晶包括以下步骤：

(1)控制搅拌速度为5～50转/分钟，降温速度为1～10℃/分钟至开始析出固体，停止降温，保温5～40分钟；

(2)继续控制降温速度为1～10℃/分钟，搅拌速度为5～50转/分钟，同时以1～10mL/分钟的速度滴加不良溶剂，滴加完毕后停止降温，保温时间为5～40分钟；

(3)继续控制降温速度为1～10℃/分钟，搅拌速度为5～50转/分钟，内温为5～8℃时停止降温，保温5～40分钟；

(4)过滤、对滤饼洗涤，干燥，即得纯化的目标产物。

达比加群酯甲磺酸盐中间体N-[[2-[[[(4-(氨基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯对甲苯磺酸盐由3-[[[2-[[(4-氰基苯基)氨基]甲基]-1-甲基-H-苯并咪唑-5-基]羰基]吡啶-2-基氨基]丙酸乙酯草酸盐通过氯化氢乙醇溶液、氨气的Pinner脒反应制备得到。

优选地，良性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃，或其与水的混合物。

进一步优选地，良性溶剂为乙醇与水的混合物，乙醇与水的重量比为1:1。

优选地，不良溶剂为水。

优选地，梯度结晶过程的搅拌速度为20～30转/分钟，降温速度为4～6℃/分钟。

优选地，梯度结晶过程的滴加不良溶剂的速度为5～7mL/分钟。

优选地，梯度结晶过程的达比加群酯甲磺酸盐中间体与良性溶剂的质量体积比为1:8～1:10。

优选地，梯度结晶的温度范围设定为5℃至良性溶剂的回流温度。

由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明纯化方法可以使得达比加群酯甲磺酸盐中间体的纯度大于95％，其他未知单一杂质小于0.15％，该中间体可以制备出符合原研药厂质量要求的达比加群酯甲磺酸盐产品。

附图说明

图1为本发明实施例1的高效液相色谱图；

图2为本发明实施例2的高效液相色谱图；

图3为本发明实施例3的高效液相色谱图；

图4为本发明实施例4的高效液相色谱图；

图5为本发明实施例5的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下结合附图及具体实施例对本发明做进一步详细说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明的基本原理、主要特征和优点，而本发明不受以下实施例的范围限制。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。

实例中所使用的高效液相色谱(HPLC)分析方法及其条件：

分析方法1：

色谱柱：Kromasil 100-5C18，5um，4.6×250nm；

检测器：UV加测器；检测波长：240nm；柱温：25℃；

流动相：乙腈：甲醇：缓冲液＝1:1:3(V/V)；流速：1.0mL/min；

缓冲液：50mmol/L甲酸溶液，用氨水调节pH值至3.8；

样品配置：取样品20mg溶解在70mL流动相中；进样量：20uL。

分析方法2：

色谱柱：Kromasil 100-5C18，5um，4.6×250nm；

检测器：UV加测器；检测波长：317nm；柱温：25℃；

流动相：乙腈：缓冲液＝45:55(V/V)；流速：1.0mL/min；

缓冲液：50mmol/L甲酸溶液，用氨水调节pH值至3.8；

样品配置：取样品20mg溶解在70mL流动相中；进样量：20uL。

实施例1

达比加群酯甲磺酸盐中间体(N-[[2-[[[(4-(氨基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯对甲苯磺酸盐)的制备

参考文献WO2012152855实施例1，g步操作制备达比加群酯甲磺酸盐中间体。

向1000mL的玻璃反应瓶中，依次加入47.7g化合物C(3-[[[2-[[(4-氰基苯基)氨基]甲基]-1-甲基-H-苯并咪唑-5-基]羰基]吡啶-2-基氨基]丙酸乙酯草酸盐)，21.8g对甲苯磺酸和10mol/L氯化氢乙醇溶液142g。反应液在室温保温反应24小时，加入乙醇400mL，降温至0℃,在0℃缓慢通入氨气至沉淀完全，后缓慢升温至10℃保温2小时，升温至室温保温过夜。减压蒸馏除去溶剂，加入乙醇400Ml,搅拌下滴加水400mL，加入氢氧化钠2.3g，升温至55℃保温45分钟。保温结束，降温至10℃搅拌1小时，过滤，滤液加压蒸馏除去乙醇，析出固体过滤，水200mL洗涤，丙酮100mL×2洗涤，55℃鼓风干燥烘干得到类白色固体34.6g达比加群酯甲磺酸盐中间体。文献HPLC为83％，实际分析HPLC为84.1％(结果如附图1所示，采用分析方法1，面积归一法)。

实施例2

达比加群酯甲磺酸盐中间体(N-[[2-[[[(4-(氨基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯对甲苯磺酸盐)的纯化

通过实施例1中制备的中间体为34.0g加入1000mL的玻璃反应瓶中，依次加入乙醇150ml，水200mL，反应液水浴升温至80～100℃保温30分钟，热过滤，滤饼弃去。滤液转入1000mL的玻璃反应瓶中，升温至固体全部溶解，进行梯度结晶操作：控制转速20～30转/分钟，控制降温速度为5℃/分钟，降温至开始析出固体(初始析晶)时停止降温，搅拌20分钟；控制降温速度为5℃/分钟，同时滴加水200mL，滴加速度为5mL/分钟，滴加完水时同时停止降温(中途养晶)，搅拌5分钟；然后继续控制降温速度为5℃/分钟，内温为5～8℃时停止降温，保温30分钟(终点保晶)；过滤，滤饼用冷43％(体积比)乙醇20mL洗涤，55℃鼓风干燥烘干得到类白色固体32.9g目标产物，HPLC分析为95.6％，包含对甲苯磺酸HPLC为96.36％(结果如附图2所示，采用分析方法1，面积归一法)。

附图2中，RT＝2.411min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；RT＝3.340min为对甲苯磺酸，在制备最终产品中可以除去；RT＝10.154min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；RT＝16.164min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；其他未知单一杂质＜0.10％。

实施例3

达比加群酯甲磺酸盐中间体(N-[[2-[[[(4-(氨结果如附图2所示，采用分析方法1，面积归一法基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯对甲苯磺酸盐)的纯化

通过实施例1中制备的中间体为34.0g加入1000mL的玻璃反应瓶中，依次加入甲醇150ml，水150mL，反应液水浴升温至75～100℃保温30分钟，热过滤，滤饼弃去。滤液转入1000mL的玻璃反应瓶中，升温至固体全部溶解，进行梯度结晶操作：控制转速20～30转/分钟，控制降温速度为5℃/分钟，降温至开始析出固体(初始析晶)时停止降温，搅拌20分钟；控制降温速度为5℃/分钟，同时滴加水200mL，滴加速度为5mL/分钟，滴加完水时同时停止降温(中途养晶)，搅拌5分钟；然后继续控制降温速度为5℃/分钟，内温为5～8℃时停止降温，保温30分钟(终点保晶)；过滤，滤饼用冷50％(体积比)甲醇20mL洗涤，55℃鼓风干燥烘干得到类白色固体30.6g目标产物，HPLC分析为96.12％，包含对甲苯磺酸HPLC为96.86％(结果如附图3所示，采用分析方法1，面积归一法)。

附图3中，RT＝2.368min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；RT＝3.169min为对甲苯磺酸，在制备最终产品中可以除去；RT＝16.005min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；其他未知单一杂质＜0.15％。

实施例4

达比加群酯甲磺酸盐中间体(N-[[2-[[[(4-(氨结果如附图2所示，采用分析方法1，面积归一法基亚胺甲基)苯基]胺基]甲基]-1-甲基-1H-5-苯并咪唑]羰基]-N-2-吡啶基-β-丙氨酸乙酯对甲苯磺酸盐)的纯化

通过实施例1中制备的中间体为34.0g加入1000mL的玻璃反应瓶中，依次加入异丙醇200ml，水150mL，反应液水浴升温至80～100℃保温30分钟，热过滤，滤饼弃去。滤液转入1000mL的玻璃反应瓶中，升温至固体全部溶解，进行梯度结晶操作：控制转速20～30转/分钟，控制降温速度为5℃/分钟，降温至开始析出固体(初始析晶)时停止降温，搅拌20分钟；控制降温速度为5℃/分钟，同时滴加水200mL，滴加速度为5mL/分钟，滴加完水时同时停止降温(中途养晶)，搅拌5分钟；然后继续控制降温速度为5℃/分钟，内温为5～8℃时停止降温，保温30分钟(终点保晶)；过滤，滤饼用冷57％(体积比)异丙醇20mL洗涤，55℃鼓风干燥烘干得到类白色固体31.3g目标产物，HPLC分析为98.257％，包含对甲苯磺酸HPLC为98.343％(结果如附图4所示，采用分析方法1，面积归一法)。

附图4中，RT＝3.610min为对甲苯磺酸，在制备最终产品中可以除去；RT＝16.295min为已知杂质，在制备最终产品中可以除去；其他未知单一杂质＜0.10％。

实施例5

达比加群酯甲磺酸盐(3-[(2-{[4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基)-苯基氨基]-甲基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-羰基)-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯甲磺酸盐)(化合物A)的制备

参考文献WO2012152855实施例2，h步操作制备化合物A。

通过实施例2～4中制备的目标产物为40g加入3000mL的玻璃反应瓶中，依次加入碳酸钾33.0g，水220mL，丙酮350mL，搅拌降温至5℃，继续搅拌10分钟，缓慢滴加氯甲酸正己酯16.0g，滴加完后继续5℃搅拌1小时，向反应液中加入二氯甲烷1600mL，升温至28℃提取有机层，用饱和食盐水1600mL洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，真空浓缩溶剂得到浅黄色液体。用二氯甲烷80mL溶解浓缩残留液体，加入1000mL反应烧瓶中，降温至0℃，在0℃缓慢滴加用丙酮640mL溶解的甲磺酸7.7g混合液，滴加完成后升温至室温搅拌1小时，过滤，二氯甲烷320mL洗涤，在40℃真空干燥5小时，得到35.1g类白色化合物A，HPLC分析为99.789％(结果如附图5所示，采用分析方法2，面积归一法)，图5中单一杂质＜0.05％，所有杂质总和＜0.3％。

以上对本发明做了详尽的描述，实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。